JPH053796A - 低分子揮発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するための装置およびスクリーニング方法 - Google Patents
低分子揮発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するための装置およびスクリーニング方法Info
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- JPH053796A JPH053796A JP3271168A JP27116891A JPH053796A JP H053796 A JPH053796 A JP H053796A JP 3271168 A JP3271168 A JP 3271168A JP 27116891 A JP27116891 A JP 27116891A JP H053796 A JPH053796 A JP H053796A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 薄膜フィルター上に、物質交替生成物に対し
て透過性の半透過性フィルター、および吸着板を重ね
て、低分子物質交替生成物を確認する装置とする。 【効果】 微生物学的プロセスにおいて、放射性標識を
付した基質から放射性標識を付した低分子の揮発性物質
交替生成物を生産する微生物を確認するためのスクリー
ニングが容易に行なえる。
て透過性の半透過性フィルター、および吸着板を重ね
て、低分子物質交替生成物を確認する装置とする。 【効果】 微生物学的プロセスにおいて、放射性標識を
付した基質から放射性標識を付した低分子の揮発性物質
交替生成物を生産する微生物を確認するためのスクリー
ニングが容易に行なえる。
Description
【０００１】本発明は、微生物学的プロセスにより放射
性標識を付した物質から放射性標識を付した低分子の揮
発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するため
の、新規な装置および新規なスクリーニング方法に関す
る。 本発明により、微生物が放射性標識を付した基質
を所望の生成物に変換し、その結果として、放射性標識
に付した低分子の揮発性交替生成物が与えられたことが
確認される。
性標識を付した物質から放射性標識を付した低分子の揮
発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するため
の、新規な装置および新規なスクリーニング方法に関す
る。 本発明により、微生物が放射性標識を付した基質
を所望の生成物に変換し、その結果として、放射性標識
に付した低分子の揮発性交替生成物が与えられたことが
確認される。
【０００２】一般的に、放射性標識を付した化合物を細
胞分散液に加え、全体を一定時間培養し、次いで細胞を
分離した後、生産された放射性標識を付した物質交替生
成物を、たとえば液体シンチレーション測定することに
より、微生物学的ないし生物化学的過程をへて生産され
た物質交替生成物を確認できることが知られている
〔Ｊ．Ｌ．フィルミンおよびＤ．Ｏ．グレイ，Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｊ．，１９７６，１５８，２２３〜２２９
頁〕。
胞分散液に加え、全体を一定時間培養し、次いで細胞を
分離した後、生産された放射性標識を付した物質交替生
成物を、たとえば液体シンチレーション測定することに
より、微生物学的ないし生物化学的過程をへて生産され
た物質交替生成物を確認できることが知られている
〔Ｊ．Ｌ．フィルミンおよびＤ．Ｏ．グレイ，Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｊ．，１９７６，１５８，２２３〜２２９
頁〕。
【０００３】この一般的に行なわれている確認方法の大
きな欠点は、一方では、経費と時間がかかることであ
る。 他方では、この方法は分子量に関係なく生産され
たすべての放射性標識を付した物質交替生成物が確認さ
れるので、特定の物質交替性能を有する微生物の選択に
は適していないことである。
きな欠点は、一方では、経費と時間がかかることであ
る。 他方では、この方法は分子量に関係なく生産され
たすべての放射性標識を付した物質交替生成物が確認さ
れるので、特定の物質交替性能を有する微生物の選択に
は適していないことである。
【０００４】さらに、ＥＰ−Ａ１２４２８５からは、医
学的に検査すべき試料における微生物の確認方法が知ら
れている。 この方法にも、分子量に関係なく、不特定
の、放射性標識を付したすべての物質交替生成物が確認
されるという欠点がある。したがって、この方法も特定
の物質交替生成物による微生物のスクリーニング方法を
示してはいない。
学的に検査すべき試料における微生物の確認方法が知ら
れている。 この方法にも、分子量に関係なく、不特定
の、放射性標識を付したすべての物質交替生成物が確認
されるという欠点がある。したがって、この方法も特定
の物質交替生成物による微生物のスクリーニング方法を
示してはいない。
【０００５】本発明の目的は、特定の基質から低分子の
揮発性物質交替生成物を生産するすべての微生物を定量
的に確認できる、微生物の鋭敏なスクリーニング方法を
提供することである。
揮発性物質交替生成物を生産するすべての微生物を定量
的に確認できる、微生物の鋭敏なスクリーニング方法を
提供することである。
【０００６】この目的は、新規な装置およびそれを使用
する新規なスクリーニング方法により達成される。 図
１に本発明の装置を示す。 このスクリーニング方法で
は、微生物学的過程で物質交替生成物を生産する微生物
を確認し、その確認は、放射性標識を付した基質を微生
物により放射性標識を付した物質交替生成物に変換し、
その放射性標識を付した物質交替生成物を放射能測定に
より確認することにより行なう。
する新規なスクリーニング方法により達成される。 図
１に本発明の装置を示す。 このスクリーニング方法で
は、微生物学的過程で物質交替生成物を生産する微生物
を確認し、その確認は、放射性標識を付した基質を微生
物により放射性標識を付した物質交替生成物に変換し、
その放射性標識を付した物質交替生成物を放射能測定に
より確認することにより行なう。
【０００７】放射性標識を付した物質交替生成物とし
て、低分子の揮発性物質交替生成物を確認する。 低分
子物質交替生成物とは、分子量が５００を超えない物質
交替生成物を指す。 好ましくは、物質交替生成物の分
子量は２５０以下である。
て、低分子の揮発性物質交替生成物を確認する。 低分
子物質交替生成物とは、分子量が５００を超えない物質
交替生成物を指す。 好ましくは、物質交替生成物の分
子量は２５０以下である。
【０００８】基質としては、たとえば同位元素14Ｃ，3
Ｈ，35Ｓおよび32Ｐ、または他の、生物に関連のある同
位元素により放射性標識を付した基質を使用する。 好
ましくは、基質は3Ｈおよび14Ｃで標識を付する。 放
射性標識を付した基質の比放射能は、通常、１mCi／mmo
l〜２０Ci／mmolの範囲内にある。
Ｈ，35Ｓおよび32Ｐ、または他の、生物に関連のある同
位元素により放射性標識を付した基質を使用する。 好
ましくは、基質は3Ｈおよび14Ｃで標識を付する。 放
射性標識を付した基質の比放射能は、通常、１mCi／mmo
l〜２０Ci／mmolの範囲内にある。
【０００９】低分子の揮発性物質交替生成物として、3
Ｈで標識を付した、または14Ｃで標識を付した物質交替
生成物、たとえば3Ｈで標識を付した水、14Ｃで標識を
付した二酸化炭素、エタノール、乳酸、酢酸、ギ酸、ア
セトン、ブタノール、ブタンジオール、アセトイン、そ
の他の物質交替生成物が生産されるように、基質に放射
性標識を付するのが有利である。 とくに、3Ｈで標識
を付した水が生産されるように3Ｈで標識を付した基質
を使用し、14ＣＯ2が生産されるように14Ｃで標識を付
した基質を使用する。
Ｈで標識を付した、または14Ｃで標識を付した物質交替
生成物、たとえば3Ｈで標識を付した水、14Ｃで標識を
付した二酸化炭素、エタノール、乳酸、酢酸、ギ酸、ア
セトン、ブタノール、ブタンジオール、アセトイン、そ
の他の物質交替生成物が生産されるように、基質に放射
性標識を付するのが有利である。 とくに、3Ｈで標識
を付した水が生産されるように3Ｈで標識を付した基質
を使用し、14ＣＯ2が生産されるように14Ｃで標識を付
した基質を使用する。
【００１０】放射性標識を付した揮発性物質交替生成物
は、この専門分野で通常の方法、たとえばオートラジオ
グラフィー、液体シンチレーション測定等により確認で
きるが、好ましくは物質交替生成物はオートラジオグラ
フィーにより確認する。
は、この専門分野で通常の方法、たとえばオートラジオ
グラフィー、液体シンチレーション測定等により確認で
きるが、好ましくは物質交替生成物はオートラジオグラ
フィーにより確認する。
【００１１】スクリーニング方法は図１の装置で行なう
が、これは、成長する微生物（２）を支えている薄膜フ
ィルター（１）、その上にある揮発性物質交替生成物に
対して透過性の半透過性フィルター（３）および吸着板
（４）からなる。
が、これは、成長する微生物（２）を支えている薄膜フ
ィルター（１）、その上にある揮発性物質交替生成物に
対して透過性の半透過性フィルター（３）および吸着板
（４）からなる。
【００１２】微生物コロニー（２）は、たとえばプレー
ト−カウント−アガー（ディフコラボラトリーズ社、Ｕ
ＳＡ）のような標準寒天培地上に載せた薄膜フィルター
（１）上で成長させるのが有利である。
ト−カウント−アガー（ディフコラボラトリーズ社、Ｕ
ＳＡ）のような標準寒天培地上に載せた薄膜フィルター
（１）上で成長させるのが有利である。
【００１３】微生物コロニーが直径０．１〜５mm、好ま
しくは０．５〜２mmに達した時に、その上に、放射性標
識を付した基質を含む培養液の層を重ねる。 培養液内
の対流を最小に押さえるために、寒天のような増粘剤を
加えるとよい。 好ましくは薄膜フィルター（１）とし
て、孔径０．０１〜２μｍの親水性無菌フィルターを使
用する。 たとえば、硝酸セルロース、酢酸セルロー
ス、再生セルロース、ナイロン製の無菌フィルター、ま
たは他の標準無菌フィルターを使用することができる。
しくは０．５〜２mmに達した時に、その上に、放射性標
識を付した基質を含む培養液の層を重ねる。 培養液内
の対流を最小に押さえるために、寒天のような増粘剤を
加えるとよい。 好ましくは薄膜フィルター（１）とし
て、孔径０．０１〜２μｍの親水性無菌フィルターを使
用する。 たとえば、硝酸セルロース、酢酸セルロー
ス、再生セルロース、ナイロン製の無菌フィルター、ま
たは他の標準無菌フィルターを使用することができる。
【００１４】3Ｈ2Ｏを確認する際、3Ｈ2Ｏが過度に希釈
されるのを防ぐために、菌が密集した薄膜フィルターを
培養前に、固くなった栄養培地から取り外して移すのが
有利である。
されるのを防ぐために、菌が密集した薄膜フィルターを
培養前に、固くなった栄養培地から取り外して移すのが
有利である。
【００１５】微生物に培養液の層を重ねた後、好ましく
は孔径０．０２〜２μｍの、とくに好ましくは０．０２
〜０．２μｍの、物質交替生成物に対して透過性がある
半透過性の、疎水性または疎水化したフィルター（３）
を載せる。 好ましくは、この半透過性フィルター
（３）用の材料として、ゴアテックスＲ（ポリエステル
支持織物上に孔径０．２〜０．０２μｍのポリテトラフ
ルオロエチレンＰＴＦＥを被せたもの）、または疎水化
したガラス繊維フィルター、とくにシラン処理したガラ
スフィルター、または層厚０．１〜１mmのシリコン薄膜
を使用する。
は孔径０．０２〜２μｍの、とくに好ましくは０．０２
〜０．２μｍの、物質交替生成物に対して透過性がある
半透過性の、疎水性または疎水化したフィルター（３）
を載せる。 好ましくは、この半透過性フィルター
（３）用の材料として、ゴアテックスＲ（ポリエステル
支持織物上に孔径０．２〜０．０２μｍのポリテトラフ
ルオロエチレンＰＴＦＥを被せたもの）、または疎水化
したガラス繊維フィルター、とくにシラン処理したガラ
スフィルター、または層厚０．１〜１mmのシリコン薄膜
を使用する。
【００１６】また、たとえばアエロジルＲ９７２（デグ
サ社、ＢＲＤ）のような疎水化した粉状材料から半透過
性の層を形成してもよい。
サ社、ＢＲＤ）のような疎水化した粉状材料から半透過
性の層を形成してもよい。
【００１７】コロニーの混合を防ぐために、薄膜フィル
ター（１）と半透過性フィルター（３）との間に、支持
織物（５）を置くのも有利である。 支持織物として
は、たとえば木綿織物またはガーゼのような網を使用す
ることができる。 また、別の薄膜フィルターをおいて
もよい。
ター（１）と半透過性フィルター（３）との間に、支持
織物（５）を置くのも有利である。 支持織物として
は、たとえば木綿織物またはガーゼのような網を使用す
ることができる。 また、別の薄膜フィルターをおいて
もよい。
【００１８】次いで、半透過性フィルター（３）の上に
吸着板（４）を載せるが、その際、好ましくは、3Ｈ2Ｏ
を確認するために吸着板として分子フルイまたはシリカ
ゲルの層を施したガラス板を使用する。 14ＣＯ2を確
認するためには、好ましくは石灰の層を施したガラス板
を使用する。 とくに、ガラス板に孔径３〜４Ａの分子
フルイ、またはシリカゲルの層を施すが、その際、層厚
は０．１〜５mmにする。 しかし、吸着板用の材料とし
て、他の吸着材、たとえば石膏または酸化アルミニウム
も適している。
吸着板（４）を載せるが、その際、好ましくは、3Ｈ2Ｏ
を確認するために吸着板として分子フルイまたはシリカ
ゲルの層を施したガラス板を使用する。 14ＣＯ2を確
認するためには、好ましくは石灰の層を施したガラス板
を使用する。 とくに、ガラス板に孔径３〜４Ａの分子
フルイ、またはシリカゲルの層を施すが、その際、層厚
は０．１〜５mmにする。 しかし、吸着板用の材料とし
て、他の吸着材、たとえば石膏または酸化アルミニウム
も適している。
【００１９】吸着板を堅くするために、たとえば誘導体
化したセルロース、澱粉、セメント、水ガラス、ガラス
繊維、その他の薄層クロマトグラフィー板の調製に通常
使用する結合剤を使用するのが有利である。 その後、
装置全体を半透過性フィルター（３）の材料に応じて１
〜１２時間、５〜１１０℃の好適な温度で培養するが、
その際、この専門分野で通常の培養基を使用することが
できる。 荷重をかけることにより、この装置をたとえ
ば５mmに圧縮する。 装置の長さは、たとえば５cmでよ
い。 半透過性フィルター（３）としてシリコン薄膜を
使用する場合は、好ましくはこの装置を３時間まで培養
し、ゴアテックスまたは疎水化したガラス繊維フィルタ
ーを使用する場合は、１時間まで培養する。 通常、培
養温度は微生物の温度特性により異なる。 たとえば中
温性微生物を確認する場合は、培養温度は好ましくは３
０〜３７℃である。
化したセルロース、澱粉、セメント、水ガラス、ガラス
繊維、その他の薄層クロマトグラフィー板の調製に通常
使用する結合剤を使用するのが有利である。 その後、
装置全体を半透過性フィルター（３）の材料に応じて１
〜１２時間、５〜１１０℃の好適な温度で培養するが、
その際、この専門分野で通常の培養基を使用することが
できる。 荷重をかけることにより、この装置をたとえ
ば５mmに圧縮する。 装置の長さは、たとえば５cmでよ
い。 半透過性フィルター（３）としてシリコン薄膜を
使用する場合は、好ましくはこの装置を３時間まで培養
し、ゴアテックスまたは疎水化したガラス繊維フィルタ
ーを使用する場合は、１時間まで培養する。 通常、培
養温度は微生物の温度特性により異なる。 たとえば中
温性微生物を確認する場合は、培養温度は好ましくは３
０〜３７℃である。
【００２０】培養の間、微生物は放射性標識を付した基
質を所望の生成物に変換し、それによって放射性標識を
付した低分子の揮発性交替生成物が形成される。 この
揮発性交替生成物は半透過性フィルター（３）中を拡散
し、吸着板（５）に吸着される。
質を所望の生成物に変換し、それによって放射性標識を
付した低分子の揮発性交替生成物が形成される。 この
揮発性交替生成物は半透過性フィルター（３）中を拡散
し、吸着板（５）に吸着される。
【００２１】培養後、吸着板を取り除き、揮発性の物質
交替生成物の確認を、たとえばエンハーンスＲ（デュポ
ン社、ＵＳＡ）のような、この専門分野で一般的なシン
チレーターにより処理することができる。 しかし、他
のシンチレーション溶液またはＢ．Ｒ．ボクナーおよび
Ｂ．Ｎ．アーネスによりＡｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１
３１，５１０〜５１５頁（１９８４）に記載されている
溶液を使用することも可能である。
交替生成物の確認を、たとえばエンハーンスＲ（デュポ
ン社、ＵＳＡ）のような、この専門分野で一般的なシン
チレーターにより処理することができる。 しかし、他
のシンチレーション溶液またはＢ．Ｒ．ボクナーおよび
Ｂ．Ｎ．アーネスによりＡｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１
３１，５１０〜５１５頁（１９８４）に記載されている
溶液を使用することも可能である。
【００２２】本発明の方法は、放射性標識を付した基質
を望ましい生成物に交換し、それによって放射性標識を
付した低分子の揮発性交替生成物を与える微生物を確認
するための鋭敏な方法である。 それらの微生物は、こ
の確認方法により、より効果的に選択することができ
る。 従来の方法と異なり、この方法は、固化した栄養
培地の表面上で成長する微生物のコロニーでも機能し、
そのために能力が著しく高くなる。
を望ましい生成物に交換し、それによって放射性標識を
付した低分子の揮発性交替生成物を与える微生物を確認
するための鋭敏な方法である。 それらの微生物は、こ
の確認方法により、より効果的に選択することができ
る。 従来の方法と異なり、この方法は、固化した栄養
培地の表面上で成長する微生物のコロニーでも機能し、
そのために能力が著しく高くなる。
【００２３】本装置は、低分子物質交替生成物を生産す
る微生物の確認、とくに化合物中のメチル基を相当する
アルコール、アルデヒドまたは相当するカルボン酸に変
換する能力がある微生物の確認に使用できる。 たとえ
ば本装置は、５−メチル−２−クロロピリジンのメチル
基を相当する酸に酸化し、生成した３Ｈ2Ｏを吸着板上
で確認することによって、そのような能力がある微生物
を確認することに利用できる。
る微生物の確認、とくに化合物中のメチル基を相当する
アルコール、アルデヒドまたは相当するカルボン酸に変
換する能力がある微生物の確認に使用できる。 たとえ
ば本装置は、５−メチル−２−クロロピリジンのメチル
基を相当する酸に酸化し、生成した３Ｈ2Ｏを吸着板上
で確認することによって、そのような能力がある微生物
を確認することに利用できる。
【００２４】実施例１アルカリゲネス・エントロ フス
（ＤＳＭ ４２８）およ
びシュードモナ ス・エルギノサ（ＤＳＭ ５００７１）
を別々にＮｕｔｒｉｅｎｔ−Ｂｒｏｔｈ（オキソイド
社、ＵＳＡ）中、３０℃で一晩、振とう機上で培養し
た。 次いで、シュードモナス培養菌１部をアルカリゲ
ネス培養菌９９９部と混合し、この混合物０．１mlを１
０-4希釈で、プレート−カウント−アガー（ＰＣＡ、デ
ィフコ社、ＵＳＡ）上に位置する、孔径０．２μｍ、直
径５cmの硝酸セルロースフィルター（１）上に載せた。
細胞は一晩で、直径０．５〜１mmの約１０００個のコ
ロニーに成長した。 これらのコロニーを載せたフィル
ターをＰＣＭ培地（ＰＣＡ、ディフコ社、ＵＳＡ）から
取り外し、コロニーを上向きにしてペトリ皿上に載せ
た。 このフィルター（１）をコロニーとともに、下記
の組成の放射性溶液０．１８mlに浸漬した。
びシュードモナ ス・エルギノサ（ＤＳＭ ５００７１）
を別々にＮｕｔｒｉｅｎｔ−Ｂｒｏｔｈ（オキソイド
社、ＵＳＡ）中、３０℃で一晩、振とう機上で培養し
た。 次いで、シュードモナス培養菌１部をアルカリゲ
ネス培養菌９９９部と混合し、この混合物０．１mlを１
０-4希釈で、プレート−カウント−アガー（ＰＣＡ、デ
ィフコ社、ＵＳＡ）上に位置する、孔径０．２μｍ、直
径５cmの硝酸セルロースフィルター（１）上に載せた。
細胞は一晩で、直径０．５〜１mmの約１０００個のコ
ロニーに成長した。 これらのコロニーを載せたフィル
ターをＰＣＭ培地（ＰＣＡ、ディフコ社、ＵＳＡ）から
取り外し、コロニーを上向きにしてペトリ皿上に載せ
た。 このフィルター（１）をコロニーとともに、下記
の組成の放射性溶液０．１８mlに浸漬した。
【００２５】５ｇ／ｌ 寒天
５ｇ／ｌ トリプトン（ディフコ社、ＵＳＡ）
２．５ｇ／ｌ 酵母抽出物（ディフコ社、ＵＳＡ）
２mM Ｄ−〔６−3Ｈ（Ｎ）〕−グルコース
０．１Ci／mmol（ＮＥＮ／デュポン社、ＵＳＡ） 直ちに、第二の、プレート−カウント−アガー上に載せ
て湿らせた硝酸セルロースフィルターを、コロニー上に
載せた。 その上に直ちに孔径０．２μｍ、直径８cmの
疎水性ＴＥ３５−フィルター（３）（ポリエステル上Ｐ
ＴＦＥ、シュライヤー＆シュエル社、ＢＲＤ）を載せ
た。 すぐに、下記のようにして調製した水特異性吸着
板（４）を、その吸着層を下にして載せた。
０．１Ci／mmol（ＮＥＮ／デュポン社、ＵＳＡ） 直ちに、第二の、プレート−カウント−アガー上に載せ
て湿らせた硝酸セルロースフィルターを、コロニー上に
載せた。 その上に直ちに孔径０．２μｍ、直径８cmの
疎水性ＴＥ３５−フィルター（３）（ポリエステル上Ｐ
ＴＦＥ、シュライヤー＆シュエル社、ＢＲＤ）を載せ
た。 すぐに、下記のようにして調製した水特異性吸着
板（４）を、その吸着層を下にして載せた。
【００２６】８ｇの粉末状（粒径２〜３μｍ）の分子フ
ルイ４Ａ（アルドリッヒ社、ＢＲＤ）を７mlの水に分散
させ、０．１ｇのガラス繊維を加えた。 このガラス繊
維は小さくすりつぶしたＧＦ／Ｄ−フィルター（ＧＦ／
Ｄ：ホワットマン社、ＵＳＡのガラス繊維フィルターＤ
等級）からなる。 その後、真空にして脱気した。この
かゆ状の材料を６×６cm大の、表面を粗くしたガラス板
上に流し、７０℃で１時間乾燥させ、次いで１５０℃で
４時間高真空中で活性化した。 得られた層厚は約２mm
であった。 これらの板は五酸化リン上で保管した。
ルイ４Ａ（アルドリッヒ社、ＢＲＤ）を７mlの水に分散
させ、０．１ｇのガラス繊維を加えた。 このガラス繊
維は小さくすりつぶしたＧＦ／Ｄ−フィルター（ＧＦ／
Ｄ：ホワットマン社、ＵＳＡのガラス繊維フィルターＤ
等級）からなる。 その後、真空にして脱気した。この
かゆ状の材料を６×６cm大の、表面を粗くしたガラス板
上に流し、７０℃で１時間乾燥させ、次いで１５０℃で
４時間高真空中で活性化した。 得られた層厚は約２mm
であった。 これらの板は五酸化リン上で保管した。
【００２７】この装置全体に４５０ｇの荷重をかけて約
５mmに圧縮した後、３０℃で１時間培養した。 その
後、分子フルイを取り去り、直ちにエンハーンスＲ（デ
ュポン社、ＵＳＡ）を吹き付けた。 続いて規定どおり
に（Ｒ．Ａ．ラスキー、「蛍光写真法および増大スクリ
ーンによる放射性同位元素検出」アメルシャム社、Ｕ
Ｋ、リビュー２３、１９８４）オートラジオグラフィー
を調製した（露光２日間）。離れ離れに生じたシュード
モナスのコロニーは直径５mmの黒色斑点として写し出さ
れたのに対し、大部分を占めるアルカリゲネスのコロニ
ーの背景は目に見えなかった。 シュードモナスはトリ
チウム化したグルコースを吸収して3Ｈ2Ｏを生産するの
に対し、アルカリゲネスはグルコースを物質交替させる
ことができない。
５mmに圧縮した後、３０℃で１時間培養した。 その
後、分子フルイを取り去り、直ちにエンハーンスＲ（デ
ュポン社、ＵＳＡ）を吹き付けた。 続いて規定どおり
に（Ｒ．Ａ．ラスキー、「蛍光写真法および増大スクリ
ーンによる放射性同位元素検出」アメルシャム社、Ｕ
Ｋ、リビュー２３、１９８４）オートラジオグラフィー
を調製した（露光２日間）。離れ離れに生じたシュード
モナスのコロニーは直径５mmの黒色斑点として写し出さ
れたのに対し、大部分を占めるアルカリゲネスのコロニ
ーの背景は目に見えなかった。 シュードモナスはトリ
チウム化したグルコースを吸収して3Ｈ2Ｏを生産するの
に対し、アルカリゲネスはグルコースを物質交替させる
ことができない。
【００２８】実施例２
下記のように変形して実施例１を行なった。 放射性培
養基は、3Ｈ−グルコースの代わりに、Ｄ−〔14Ｃ
（Ｕ）〕−グルコース（ＮＥＮ／デュポン社、ＵＳＡ）
（３Ci／mol)を使用した。
養基は、3Ｈ−グルコースの代わりに、Ｄ−〔14Ｃ
（Ｕ）〕−グルコース（ＮＥＮ／デュポン社、ＵＳＡ）
（３Ci／mol)を使用した。
【００２９】疎水性フィルター（３）としてガラス繊維
フィルターＧＦ／Ａ（ホワットマン社、ＵＳＡ）を１６
０℃で加熱して乾燥させ、レペル−シラン（ＬＫＢ社、
スエーデン）で疎水化した。 得られた孔径は１．４μ
ｍで、層厚は０．２７mmであった。 ＣＯ2特異性吸着
板は、次のようにして調製した。 アテムカルク顆粒
（ドレーガー社、スイス）を小さくすりつぶし、水と混
合して柔らかくしてガラス板６×６cm上に層厚約２mmに
塗布し、デシケーター中、ＮａＯＨ顆粒上で数日間乾燥
させた。 その他は実施例１と同様である。 グルコー
スを吸収するシュードモナスのコロニーが14ＣＯ2を生
産し、直径５mmの黒色斑点として写し出されるが、グル
コースに対して不活性のアルカリゲネスのコロニーは見
ることができない。
フィルターＧＦ／Ａ（ホワットマン社、ＵＳＡ）を１６
０℃で加熱して乾燥させ、レペル−シラン（ＬＫＢ社、
スエーデン）で疎水化した。 得られた孔径は１．４μ
ｍで、層厚は０．２７mmであった。 ＣＯ2特異性吸着
板は、次のようにして調製した。 アテムカルク顆粒
（ドレーガー社、スイス）を小さくすりつぶし、水と混
合して柔らかくしてガラス板６×６cm上に層厚約２mmに
塗布し、デシケーター中、ＮａＯＨ顆粒上で数日間乾燥
させた。 その他は実施例１と同様である。 グルコー
スを吸収するシュードモナスのコロニーが14ＣＯ2を生
産し、直径５mmの黒色斑点として写し出されるが、グル
コースに対して不活性のアルカリゲネスのコロニーは見
ることができない。
【００３０】実施例３
下記のように変形して実施例１を行なった。 寒天培養
基はプレート−カウント−アガーではなく、炭素を含ま
ない鉱物培養基にした（Ｈ．クラら，Ａｒｃｈ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．１３５，１〜７頁（１９８３））。 そ
の上に載せる薄膜フィルター（１）は再生セルロース製
（サルトリウス社、ＢＲＤ）で、浄化装置の空気処理工
程から得たバイオマスを直接塗り付けて接種した。 炭
素源およびエネルギー源として、デシケーター中で気相
で供給するキシレンを使用した。１週間後、直径１〜２
mmのコロニーが見られる。
基はプレート−カウント−アガーではなく、炭素を含ま
ない鉱物培養基にした（Ｈ．クラら，Ａｒｃｈ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．１３５，１〜７頁（１９８３））。 そ
の上に載せる薄膜フィルター（１）は再生セルロース製
（サルトリウス社、ＢＲＤ）で、浄化装置の空気処理工
程から得たバイオマスを直接塗り付けて接種した。 炭
素源およびエネルギー源として、デシケーター中で気相
で供給するキシレンを使用した。１週間後、直径１〜２
mmのコロニーが見られる。
【００３１】放射性培養液：上記の鉱物培養基＋０．５
％寒天（溶解） ５mMの２−Ｃｌ−５−（メチル−3Ｈ）−ピリジン（１
０Ci／mmol） 疎水性フィルター（３）：シルガード１８６（ダウ コ
ーニング社、ＵＳＡ）から調製した、層厚０．１７mmの
シリコン薄膜。 コロニーとシリコン薄膜との間に支持
織物（５）として市販の医療用ガーゼの層を配置した。
％寒天（溶解） ５mMの２−Ｃｌ−５−（メチル−3Ｈ）−ピリジン（１
０Ci／mmol） 疎水性フィルター（３）：シルガード１８６（ダウ コ
ーニング社、ＵＳＡ）から調製した、層厚０．１７mmの
シリコン薄膜。 コロニーとシリコン薄膜との間に支持
織物（５）として市販の医療用ガーゼの層を配置した。
【００３２】培養期間：３時間
水特異性吸着板（４）：ＰＳＣ−完成板シリカゲル６０
蛍光指示剤なし、層厚２mm（メルク社、ＢＲＤ）。 そ
の他は実施例１と同様である。 ２−クロロ−５−メチ
ル−ピリミジン中のメチル基を酸化することができるコ
ロニーは黒色の斑点として写し出され、従来の微生物学
的方法によりセルロースフィルターから分離することが
できる。
蛍光指示剤なし、層厚２mm（メルク社、ＢＲＤ）。 そ
の他は実施例１と同様である。 ２−クロロ−５−メチ
ル−ピリミジン中のメチル基を酸化することができるコ
ロニーは黒色の斑点として写し出され、従来の微生物学
的方法によりセルロースフィルターから分離することが
できる。
【図１】 本発明の装置の構成を示す展開断面図。
１ 薄膜フィルター
２ 微生物コロニー
３ 半透過性フィルター
４ 吸着板
５ 支持織物
Claims (11)
- 【請求項１】 微生物学的プロセスにより物質交替生成
物を生産する微生物を確認するための装置において、そ
の装置が、成長する微生物（２）を支えている薄膜フィ
ルター（１）、その上に配置した、物質交替生成物に対
して透過性の半透過性フィルター（３）および吸着板
（４）からなることを特徴とする装置。 - 【請求項２】 薄膜フィルター（１）として、孔径が
０．０１〜２μｍの親水性無菌フィルターを使用するこ
とを特徴とする請求項１の装置。 - 【請求項３】 半透過性フィルター（３）として、孔径
が０．０２〜２μｍの疎水性または疎水化した材料を使
用することを特徴とする請求項１または２の装置。 - 【請求項４】 半透過性フィルター（３）として、孔径
が０．０２〜０．２μｍの疎水性または疎水化した材料
を使用することを特徴とする請求項３の装置。 - 【請求項５】 薄膜フィルター（１）と半透過性フィル
ター（３）との間に支持織物（５）を配置することを特
徴とする請求項１〜４のいずれかの装置。 - 【請求項６】 吸着板（４）用の材料として、分子フル
イ、シリカゲル、石灰、石膏または酸化アルミニウムを
使用することを特徴とする請求項１〜５のいずれかの装
置。 - 【請求項７】 低分子の物質交替生成物を生産する微生
物を確認するための、請求項１〜６のいずれかの装置の
使用。 - 【請求項８】 メチル化した化合物を、相当するアルコ
ール、アルデヒドまたは相当するカルボン酸に変換する
ことができる微生物を確認するための、請求項７の装置
の使用。 - 【請求項９】 微生物を確認するためのスクリーニング
方法において、請求項１〜６のいずれかの装置により、
微生物学的過程で揮発性物質交替生成物を生産する微生
物を確認し、その際、確認を、放射性標識を付した基質
を微生物により放射性標識を付した低分子で揮発性の物
質交替生成物に変換し、次いでその放射性標識を付した
低分子の物質交替生成物を確認することにより行なうこ
とを特徴とする方法。 - 【請求項１０】 物質交替生成物として、3Ｈで標識を
付した、または14Ｃで標識を付した物質交替生成物を確
認することを特徴とする請求項９の方法。 - 【請求項１１】 物質交替生成物をオートラジオグラフ
ィーで確認することを特徴とする請求項９または１０の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH339190 | 1990-10-23 | ||
| CH3391/90-8 | 1990-10-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH053796A true JPH053796A (ja) | 1993-01-14 |
Family
ID=4254968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3271168A Withdrawn JPH053796A (ja) | 1990-10-23 | 1991-10-18 | 低分子揮発性物質交替生成物を生産する微生物を確認するための装置およびスクリーニング方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5348861A (ja) |
| EP (1) | EP0482619B1 (ja) |
| JP (1) | JPH053796A (ja) |
| AT (1) | ATE123312T1 (ja) |
| CZ (1) | CZ278186B6 (ja) |
| DE (1) | DE59105619D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012530249A (ja) * | 2009-06-16 | 2012-11-29 | ザトーリウス ステディム ビオテーク ゲーエムベーハー | センサアダプタを有する容器 |
| CN102958584A (zh) * | 2010-06-30 | 2013-03-06 | 3M创新有限公司 | 具有吸水过滤器组件的滤板制品 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6306347B1 (en) | 1998-01-21 | 2001-10-23 | Bayer Corporation | Optical sensor and method of operation |
| US6455007B1 (en) * | 2000-06-13 | 2002-09-24 | Symyx Technologies, Inc. | Apparatus and method for testing compositions in contact with a porous medium |
| WO2009108229A2 (en) | 2007-11-20 | 2009-09-03 | 3M Innovative Properties Company | Environmental sampling articles and methods |
| JP5420566B2 (ja) | 2007-12-21 | 2014-02-19 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 微生物系及び流体試料分析の方法 |
| US8518663B2 (en) | 2009-04-27 | 2013-08-27 | The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. | Rapid detection of volatile organic compounds for identification of Mycobacterium tuberculosis in a sample |
| US8753834B2 (en) | 2009-12-30 | 2014-06-17 | 3M Innovative Properties Company | Microbial detection article |
| WO2012092242A2 (en) | 2010-12-29 | 2012-07-05 | 3M Innovative Properties Company | Microbial detection article having a water-absorbent filter assembly |
| DE102014116050B3 (de) * | 2014-11-04 | 2016-02-25 | Universität Potsdam | Vorrichtung und Verfahren zur Identifizierung von Mikroorganismen |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2308087A1 (de) * | 1973-02-19 | 1974-08-22 | Kellner Maximilian Dipl Braur | Fermentationsverfahren |
| DE2932694C2 (de) * | 1979-08-11 | 1982-11-04 | Eberhard Dr. 4930 Detmold Breuker | Vorrichtung zum Erkennen von Mikroorganismen |
| EP0138938A1 (en) * | 1983-03-31 | 1985-05-02 | Robert Edward Silman | Method and device for detecting microorganisms |
-
1991
- 1991-10-18 JP JP3271168A patent/JPH053796A/ja not_active Withdrawn
- 1991-10-18 US US07/781,023 patent/US5348861A/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-22 CZ CS913197A patent/CZ278186B6/cs unknown
- 1991-10-23 DE DE59105619T patent/DE59105619D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-23 AT AT91118092T patent/ATE123312T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-10-23 EP EP91118092A patent/EP0482619B1/de not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-08-04 US US08/101,931 patent/US5348884A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012530249A (ja) * | 2009-06-16 | 2012-11-29 | ザトーリウス ステディム ビオテーク ゲーエムベーハー | センサアダプタを有する容器 |
| CN102958584A (zh) * | 2010-06-30 | 2013-03-06 | 3M创新有限公司 | 具有吸水过滤器组件的滤板制品 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ278186B6 (en) | 1993-09-15 |
| DE59105619D1 (de) | 1995-07-06 |
| US5348861A (en) | 1994-09-20 |
| EP0482619B1 (de) | 1995-05-31 |
| US5348884A (en) | 1994-09-20 |
| CS319791A3 (en) | 1992-05-13 |
| ATE123312T1 (de) | 1995-06-15 |
| EP0482619A1 (de) | 1992-04-29 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
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