CN101918374A - 用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物 - Google Patents

用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物 Download PDF

Info

Publication number
CN101918374A
CN101918374A CN2008801248191A CN200880124819A CN101918374A CN 101918374 A CN101918374 A CN 101918374A CN 2008801248191 A CN2008801248191 A CN 2008801248191A CN 200880124819 A CN200880124819 A CN 200880124819A CN 101918374 A CN101918374 A CN 101918374A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nrc
formula
quinazoline
quinazoline derivant
erb
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2008801248191A
Other languages
English (en)
Inventor
拉马纳达·乔蒂·普拉萨德
布詹拉·拉奥·阿迪巴特拉·卡利·萨蒂亚
博勒帕里·纳格什瓦拉·拉奥
南纳帕内尼·文卡伊亚·乔杜里
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Natco Pharma Ltd
Original Assignee
Natco Pharma Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Natco Pharma Ltd filed Critical Natco Pharma Ltd
Publication of CN101918374A publication Critical patent/CN101918374A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
    • C07D239/86—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in position 4
    • C07D239/94—Nitrogen atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

鉴于喹唑啉类化合物所提供的巨大潜力，我们开始合成并筛选了大量的具有新结构特征的新化学实体。已经令人惊奇地和出人意料地发现在第4位处具有3-乙炔基苯胺基并且在6和7位中被特别地取代的烷氧基的喹唑啉，当与喹唑啉类药物的其他杰出成员相比时，具有较强的和特殊的抗增殖特性。此外，令人惊奇地，本发明的化合物的毒性较低，并且其安全性非常有益于治疗性应用。本发明中所述的新化学实体表示为通式结构(I)并且以前从未被合成，且其治疗性益处和安全性也从未被研究过。当结构为(A)时，化合物(I)为NRC-2694。
Figure 200880124819.1_AB_0
Figure 200880124819.1_AB_1
且R2＝OCH3(A)

Description

用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物
本发明涉及6，7-二烷氧基喹唑啉衍生物，或其药学可接受的盐，其具有抗癌活性，并且因此能用于人的治疗方法中。本发明还涉及制备所述喹唑啉衍生物的方法，以及含有该喹唑啉衍生物的药物组合物。
过去对于细胞增殖疾病诸如银屑病和癌症的大多数治疗方案利用了抑制DNA合成的化合物。这些化合物对细胞有毒性，并且仅当它们对迅速分裂的肿瘤细胞显示选择性时才可以得到它们的有益效果。
近年来，已经发现细胞可能因为其DNA的一部分转化为癌基因而变成癌性的，即，所述癌基因是在激活时导致恶性肿瘤细胞形成的基因(Bradshas，Mutagenesis(诱变)，1986，1：91)。几种癌基因编码酪氨酸激酶并且某些生长因子受体也是酪氨酸激酶(Larsen等，Ann.Reports in Med.Chem.(医学与化学年度评论)1989，第13章)。
受体酪氨酸激酶在启动细胞复制的生物化学信号的传递中很重要。它们拥有细胞外结合结构域和细胞内部分，所述细胞外结合结构域针对生长因子诸如表皮生长因子，所述细胞内部分作为蛋白中的磷酸化酪氨酸氨基酸并且因此影响细胞增殖的激酶起作用。还已知这些激酶经常存在于常见的人类癌症诸如乳腺癌(Saimbury等，Brit，J.Cancer(英国癌症杂志)，1988，58：458)，胃肠道癌症诸如结肠癌、直肠癌和胃癌(Bolen等，Oncogene Res.(癌基因研究)，1987，1：149)中。发现在酪氨酸激酶活性(TK活性)在恶性细胞中比在正常细胞中可更为常见地被检测到(Hunter，Cell(细胞)，1987，50：823)。
近年来，已经显示具有TK活性的表皮生长因子受体(EGFR)在许多人类癌症中过度表达，所述癌症诸如脑癌、肺鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、乳腺癌、头颈部癌、食管癌、甲状腺癌等(W.J.Gullick，Brit.Med.Bull.(英国医学通报)1991，47：87)。表皮生长因子受体(EGFR)，是受体酪氨酸激酶(RTK)家族的成员，其包括四种受体Erbl/HER1，Erb/HER2，Erb/HER3和Erb/HER4。
抑制EGFR-TK活性的重要策略已经开发了小的合成分子(Arteaga CL，Exp.Cell Res.(实验细胞研究)，2003，284：122-130)。已经广泛地研究了某些喹唑啉衍生物如吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙TM(IressaTM)，阿斯利康(Astra Zeneca))，厄洛替尼(erlotinib)(OSI-774，特罗凯TM(TarcevaTM))，PD-183805，PKI-166，EKB-569，PD-168393，CGP-59362对几种类型癌症的可能治疗选择(Baselga等，Oncology(肿瘤学)2002，63：6-16，Cohen RB.，(临床结直肠癌)，2003，2：246-251)。欧洲专利申请，即EP 0566226，EP0602851A1，EP 0635507A1，EP 0635498A1，EO 0520722A1公开了由于其TK抑制特性而具有抗癌活性的某些喹唑啉衍生物。
美国专利US 5475001，US 5457105，US 5616582，US 5770599，US5747498，US 6900221等涉及具有如下结构特征的喹唑啉衍生物，所述结构特征诸如在喹唑啉核中在4位中具有诸如取代的苯胺基结构部分并且在6位和7位中具有各种官能化烷基。
具体地，US 5457105，US 5616582涉及N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(吉非替尼)，以及US 5747498和US 690221涉及N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺(厄洛替尼)。WO 20005/070909，WO 2007/060691A2和WO 06/090413涉及这两种极性抗癌药的合成或多晶型中的变化。
鉴于所述喹唑啉类化合物所提供的巨大潜力，我们开始合成并筛选了大量的具有新结构特征的新化学实体。已经令人惊奇地和出人意料地发现在第4位处具有3-乙炔基苯胺基并且在6和7位中被特别地取代的烷氧基的喹唑啉，当与喹唑啉类药物的其他杰出成员相比时，其具有较强的和特殊的抗增殖特性。此外，令人惊奇地，本发明的化合物的毒性较低，并且其安全性非常有益于治疗性应用。本发明中所述的新化学实体表示为通式结构(I)并且以前从未被合成，且其治疗性益处和安全性也从未被研究过。
Figure BPA00001183532200031
且R2＝OCH3.OC2H5
化合物(I)是NRC-2694，当
Figure BPA00001183532200032
且R2＝OCH3时
NRC-2694的单盐酸盐是NRC-2694A。NRC-2694的二盐酸盐是NRC-2694B。本发明的新化合物尤其是NRC-2694与此类的杰出药物相比，具有如下所详述的出人意料的优良的抗癌/抗增殖特性，并且提供其他的治疗益处：
1)较低的抑制浓度：在MTT增殖测定法中的抑制浓度(IC50)表明该值的范围为40-90ng/ml(100-200nm)，而厄洛替尼盐酸盐的值为836ng/ml(1945nm)。通过western印迹分析和基质胶侵袭性实验(Matrigel invasion assay)已经证实了相同的结果。
2)完全的肿瘤消退：通过在植入A549人肺肿瘤细胞的裸鼠中以10mg/Kg的剂量施用所述化合物观察到完全的肿瘤消退。在对比研究中，甚至以100mg/Kg剂量，厄洛替尼盐酸盐都不能诱导完全的肿瘤消退。植入A549的小鼠的肺组织的肉眼检查和萤光素酶表达试验均证实了相同的观察结果。
3)药物功效：有效剂量的评价表明本发明的典型化合物，即，NRC-2694的值(ED50)为6.3mg/Kg，相比使用厄洛替尼盐酸盐获得的值为22mg/Kg。
使用NRC-2694观察到100％的疗效，而在厄洛替尼盐酸盐的情况下仅为50-60％。
4)其他独特的指征：本发明的化合物，典型地为NRC-2694，显示其他的指征，如下调ErbB2，ErbB3，ErbB4和VEGFR受体的表达水平。此特殊的、非常有前途的和令人惊奇的结果完全是出人意料的，并且使用厄洛替尼盐酸盐未发现此结果。
5)安全性：本发明的化合物，典型地为NRC-2694，其安全性是十分有前途的，出人意料地很宽，并且是非常有益的。因此，NRC-2694显示的最大耐受剂量(MTD)为500mg/Kg，相比厄洛替尼盐酸盐为2000mg/Kg。
NRC-2694所提供的宽治疗窗由其LD0值证明，其LD0值为2000mg/Kg，相比厄洛替尼盐酸盐为500mg/Kg。对NRC-2694的LD50值不能精确地获得，而对厄洛替尼盐酸盐测定其值为805mg/Kg。
下面的实施例的给出是为了说明制备本发明的化合物的方法及其优良的生物学功效，因此其不应该被认为限制本发明的范围或精神。(路线图-1)
Figure BPA00001183532200041
路线图-1
实施例-1
N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(I，NRC-2694)的制备
i)4-氯-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基-4-喹唑啉胺(IIIa)的制备
向清洁的和干燥的装配有机械搅拌器、回流冷凝器、均压滴液漏斗和温度计插座的5升四颈圆底烧瓶中装入氯仿(3000ml)，二甲基甲酰胺(30ml)，然后加入根据公开为WO.2005/070909A1的PCT国际申请的实施例1中所给出的方法获得的7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)-3，4-二氢-喹唑啉-4-酮(IIa)(150g)。缓慢地加入草酰氯(120g)，并将反应物质加热至回流温度，并且在回流温度下保持约5小时。通过HPLC试验发现反应结束。通过施加低真空蒸馏掉溶剂氯仿和过量的草酰氯。反应物质冷却至约40℃并加入氯仿(300ml)，并且再次施加低真空蒸馏出溶剂。反应混合物冷却至室温，并且加入乙腈(3000ml)，搅拌10-15分钟，在氮气气氛中保持以继续进行下一步骤。
ii)N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(I，NRC-2694)的制备
向含有来自上述步骤(i)的乙腈中的含氯化合物的装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座的5升四颈圆底烧瓶中在约10-15分钟内缓慢地加入3-乙炔基苯胺(69g)，将反应物质加热至回流温度，并且在回流温度下保持约4小时。通过HPLC试验发现反应结束。然后反应物质冷却至25-35℃并过滤，用乙腈(500ml)洗涤滤饼并使滤饼干燥。
将上述干燥的粗制化合物加入至另一5升圆底烧瓶中，并加入水(2500ml)，并且使温度缓慢地升至60-65℃，用稀氢氧化钠溶液将反应物质的pH调节至10-12。将分离的固体产物过滤，并用水洗涤，在70-75℃下干燥得到173.0g为灰白色固体的N-(3-乙炔基苯基)-6-(3-吗啉丙氧基)-7-甲氧基-4-喹唑啉胺。
iii)从甲苯重结晶制备N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺。
向装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座的5升四颈圆底烧瓶中加入甲苯(3750ml)，然后加入通过上面给出的实施例(1)中所述的方法获得的N-(3-乙炔基苯基)-6-(3-吗啉代丙氧基)-7-甲氧基-4-喹唑啉胺(50g)。将反应混合物加热至90-95℃，使得固体完全溶解。然后进行碳处理并过滤。滤液冷却至25-35℃，保持约1小时并过滤，将物质干燥得到40.15g为白色结晶固体的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺。
mp：185-187℃
纯度：99.72％(HPLC)
IR(KBr)(cm-1)：3280.9，2954.6，2810.3，1620.1，1604.2，1572.1，1527.7，1505.2，1484，1430.5，1388.2，1247.5，1211.2，1140.3，1110.4，1010.3，953.4，859.6，784.2Cm-1
1HNMR(300MHz；DMSO-d6)：9.57(s，1H)；8.48(s，1H)；7.99(s，1H)；7.86-7.92(d，2H)；7.34-7.44(t，1H)7.18-7.21(s，2H)；4.15-4.21(t，4H)；3.92(s，3H)3.5-3.6(t，4H)；2.4-2.52(m，5H)；1.95-2.01(m，2H).
质量：419.4(M+1)
实施例-2
从乙腈中重结晶N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺
向装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座的2升三颈圆底烧瓶中加入乙腈(1000ml)，然后加入由上面给出的实施例(1)中所述的方法获得的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(25g)。反应物质缓慢地加热至65-70℃，使得固体物质完全溶解并且进行碳处理和过滤反应物质。将滤液转移至另一圆底烧瓶中并缓慢地冷却至10-15℃，并且在该温度下保持30分钟。将物质过滤，用冷乙腈洗涤滤饼并干燥后得到20.50g为白色结晶固体的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺。
mp：186-187℃
纯度：99.68％(HPLC)
实施例-3
从乙酸乙酯中重结晶N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺
向装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座的3升三颈圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(2000ml)，然后加入由上面给出的实施例(1)中所述的方法获得的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(25g)。反应物质缓慢地加热至65-70℃，使得固体物质完全溶解并且进行碳处理和过滤反应物质。将滤液转移至另一圆底烧瓶中并缓慢地冷却至10-15℃，并且在该温度下保持30分钟。将结晶物质过滤，用冷乙酸乙酯洗涤滤饼并干燥后得到20.95g为白色结晶固体的N-(3-乙炔基苯基)-6-(3-吗啉代丙氧基)-7-甲氧基-4-喹唑啉胺。
mp：185-187℃
纯度：99.7％(HPLC)
实施例-4
N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺单盐酸盐(NRC-2694A)的制备
向装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座等的500ml三颈圆底烧瓶中加入异丙醇(250ml)，然后加入由实施例1中给出的方法获得的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(5g)。反应物质的温度升高至65-70℃，使得固体物质溶解并且进行碳处理和过滤。将滤液冷却至约55-60℃，并且当向其加入1摩尔当量的溶解在异丙醇溶液中的HCl-gas时析出单盐酸盐。反应物质在回流温度下保持约2小时，然后冷却至室温，过滤和干燥得到5.1g为白色结晶物质的N-(3-乙炔基苯基)-6-(3-吗啉代丙氧基)-7-甲氧基-4-喹唑啉胺单盐酸盐。
纯度：99.8％(HPLC)
HCl含量
(化学)：8.19％(理论值：8.01％)
IR(KBr)(cm-1)3407，3305，3259.5，2934，2619，1625.9，1593.8，1579.9，1530.8，1512，1476.9，1392.2，1356.8，1282.1，1242.1，1207.9，1141.3，1100.8，1076.1，1042.1，1026.5，1011.5，957.7，941.5，922.1，857.3，852，838.1，796，782.4
实施例-5
N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺二盐酸盐(NRC-2694B)的制备
向装配有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计插座等的500ml三颈圆底烧瓶中加入异丙醇(250ml)，然后加入由实施例1中给出的方法获得的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺(5g)。反应物质的温度升高至65-70℃，使得所有固体物质溶解。进行碳处理并过滤。将滤液冷却至约55-60℃，并且当向其加入2摩尔当量的溶解在异丙醇溶液中的HCl-gas时析出二盐酸盐。反应物质在回流温度下保持约2小时，然后冷却至室温，过滤和干燥得到5.5g为白色结晶物质的N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉胺二盐酸盐。
纯度：99.78％(HPLC)
HCl含量
(化学)：14.9％(理论值：14.83％)
IR(KBr)(cm-1)：3406.8，3194.1，2942.7，2681.9，2623.6，1633.7，1566.2，1528.6，1512.5，1438.6，1359.6，1282.3，1218.3，1157.1，1132.7，1105.9，1075.6，1001.9，942.1，875.3，816.1，787.2
实施例-6
最大耐受剂量(MTD)和急性毒性评价(表1&2)：
在雄性和雌性Swiss Albino小鼠(重量20-25gm)中进行MTD早期引用研究(early citation study)。
根据OECD准则420条进行研究，研究在9am-5pm之间进行以避免昼夜节律周期，化合物厄洛替尼和NRC-2694用2％阿拉伯树胶悬浮，化合物以5，50，300和2000mg/Kg的剂量(po)口服给药。根据死亡率施用中间剂量。每小时观察动物的总行为变化直至药物施用后6小时。如果有的话，进一步观察动物直至72小时的死亡率。将存活的动物尸检以评估化合物通过胃肠道的吸收。
厄洛替尼和NRC-2694的急性毒性在雄性和雌性小鼠中进行。口服施用500，750，1000和2000mg/Kg的剂量。每组由5只小鼠组成。观察动物的死亡率持续至化合物给药后14天。将存活的动物尸检以评估化合物通过胃肠道的吸收。
使用Litchfield和Wilcoxon(J.Pharmacol.Exp.Ther.(药理学和实验治疗学杂志)1949，96：99-113)测定LD50。
毒性研究的结果制成表-1&2。发现厄洛替尼盐酸盐的最大耐受剂量(MTD)为500mg/Kg(po)，而对于NRC-2694，为2000mg/Kg(po)。类似地，发现厄洛替尼盐酸盐的LD0为500mg/Kg(po)，NRC-2694为2000mg/Kg。因此，已经确定了NRC-2694的出人意料和令人惊奇的超过厄洛替尼盐酸盐的低毒性和安全性。
表-1
厄洛替尼盐酸盐和NRC-2694(小鼠)早期引用研究的比较(mtd)
  化合物   MTD mg/Kg(po)
  厄洛替尼盐酸盐   500
  NRC2694   2000
表-2
小鼠中的急性LD 50 研究(单剂量7天观察结果)
  化合物   LD0mg/Kg(po)*   LD50mg/Kg po)
  厄洛替尼盐酸盐   500   805
  NRC2694   2000   -
*LD0：在7天结束时没有观察到死亡。
实施例-7
体外和体内评价研究以及治疗功效的评价
样品：使用厄洛替尼作为对照参考药物，与作为阳性对照的此药物比较，检测本发明的新化合物的生物学活性。
i)MTT增殖测定：
MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴鎓]测定法，首先由Mosmann在1983年描述，该测定基于来自活细胞的线粒体脱氢酶裂解淡黄色MTT的四唑鎓环并且形成主要对细胞膜不通透的深蓝色甲
Figure BPA00001183532200101
晶体的能力，由此导致其在健康细胞内的积累。通过加入去垢剂溶解细胞使晶体释放，使该晶体溶解。存活细胞的数目与生成的甲
Figure BPA00001183532200102
产物的水平直接成正比。然后可使用简单的比色测定法对颜色进行定量。使用0-1000ng/ml浓度的厄洛替尼和测试化合物在A549和H1299细胞中完成此测定。试验方案基于ATCC并且根据生产厂商的使用说明书(目录编号：30-1010K)。
从MTT增殖测定，确定本发明的化合物的抑制浓度(IC50)为40-90ng/ml(100-200nm)，而用作阳性对照的“厄洛替尼盐酸盐”的值高达836ng/ml(1945nm)。因此得出结论，本发明的新化合物的效力为厄洛替尼盐酸盐的至少10倍。
ii)Western印迹分析：(图-1)
使用从MTT增殖测定中确定的理想药物浓度来处理在适当的培养基中的1x106H1299或A549细胞72hr，然后提取细胞溶胞产物，并在10％SDS PAGE凝胶上在还原条件下分级。凝胶点样在经处理的尼龙膜(Biorad)上，并免疫探测EGFR，P13K和AKT。
观察到EGFR表达以剂量依赖方式的显著变化。80ng(190nm)浓度的NRC-2694导致的EGFR表达的抑制与800ng(1860nm)浓度的厄洛替尼盐酸盐相当。因此，显然NRC-2694有10倍水平的效力。
iii)基质胶侵袭性测定：(图-2)
在各种浓度的NRC化合物(如通过MTT测定所确定)的存在下使用改良的Boyden小室测定(Boyden chamber assay)来评估H1299和A549细胞的体外侵袭性。细胞用这些化合物处理48小时。1x106细胞悬浮在600μl补充了0.2％BSA的无血清培养基中并放置在包被以基质胶(0.7mg/ml)的transwell小室(Corning Costar Fisher Scientific cat#07-200-158，匹兹堡，PA)的上室中。小室的下室充以200μl血清培养基，并使细胞迁移24h。温育后，将细胞固定并用Hema-3染色，如前所述进行定量(Mohanam等，1993)。将迁移的细胞定量为侵袭性百分比。化合物NRC-2694显示以剂量依赖的方式显著地减少侵袭性。
iv)裸鼠中皮下肺肿瘤的体内评价(图-3)：
在裸鼠的右后肢侧面植入2x106A549细胞。在观察到肿瘤(＞2mm)后，小鼠口服或经腹膜内给予测试化合物治疗，包括用作阳性对照的厄洛替尼盐酸盐。100mg/Kg剂量的厄洛替尼盐酸盐被鉴定为基线剂量。
测量肿瘤尺寸，并且在使用10mg/Kg剂量NRC-2694治疗的小鼠中观察到肿瘤的完全消退。然而在类似地用即使以100mg/Kg剂量水平的厄洛替尼盐酸盐治疗的对照组中肿瘤仍然存在。因此已经确定本发明的化合物(NRC-2694)具有10倍的功效优越性。
v)治疗后从裸鼠获得的肺组织的评价：(图-4)
检验从用各种浓度的厄洛替尼盐酸盐和NRC-2694经口服/腹膜内途径治疗的植入A549萤光素酶表达细胞的裸鼠获得的肺中的残余肿瘤。
在NRC-2694治疗组中观察的肿瘤的完全消退，而在厄洛替尼盐酸盐治疗组中肿瘤仍然存在，由此确定了本发明的化合物的出人意料的和令人惊奇的优良功效。
vi)肺组织中肿瘤肉眼检查：(图-5)
通过肺内注射A549细胞而植入至裸鼠中。小鼠使用厄洛替尼盐酸盐和NRC 2694以2.5和20mg/Kg的剂量经口服/腹膜内途径治疗。每天药物治疗后30天，将小鼠处死，并获取肺。肺组织固定在10％缓冲的甲醛中，石蜡包埋并切片。将切片根据法定试验方案进行H&E染色以观察实体或弥漫性肿瘤。
在所有剂量水平上NRC 2694治疗组均表现得好于厄洛替尼盐酸盐处理组，因此确定NRC 2694的优良功效。
vii)使用A549萤光素酶表达细胞植入的裸鼠：(图6&7)
观察用各种浓度的厄洛替尼盐酸盐和NRC 2694通过口服和腹膜内途径治疗用A549萤光素酶表达细胞植入的裸鼠的肿瘤，并且图像观察结果在图6和图7中给出。观察到NRC 2694治疗组表现得远好于厄洛替尼盐酸盐治疗组。在用NRC 2694治疗42天结束时没有观察到肿瘤，而在厄洛替尼盐酸盐治疗组中残余肿瘤仍然存在，两者均通过口服和腹膜内途径治疗。
viii)来自裸鼠体内研究的疗效：
对作为治愈的动物数目与研究中使用的动物数目的比率的疗效制表，并且显示在表3中。
表-3：NRC-2694和厄洛替尼盐酸盐对肺癌的疗效
  药物   浓度Mg/Kg   治愈比
  厄洛替尼腹膜内   2.551020   1/52/52/53/5
  厄洛替尼口服   2.551020   2/50/51/52/5
  NRC 2694腹膜内   2.551020   1/51/53/55/5(100％)
  NRC 2694口服   2.551020   1/52/53/53/5
可以看出在NRC 2694时该比率接近100％，而在厄洛替尼盐酸盐的研究组时该比率为40-60％。
ix)ED50的评价：
基于肺切片和肿瘤消退研究评价ED50值。通过口服途径对NRC 2694计算的值为6.3mg/Kg，而对厄洛替尼盐酸盐获得的值为22mg/Kg。因此确定了本发明的化合物的优良功效。
x)其他受体诸如HER-1，HER-2，HER-3，HER-4和VEGFR的体外研究(图-8)：
为了确定NRC 2694对EGFR家族(Erb/HER)的各种其他的受体的作用，人肺癌细胞A549用各种浓度的NRC 2694以及厄洛替尼盐酸盐处理以进行并排比较。通过western印迹分析测定Erb-1，Erb-2，Erb-3，Erb-4和VEGFR的水平。
观察到NRC 2694有效地下调Erb B2，Erb B3，Erb B4和VEGFR的水平，而厄洛替尼盐酸盐没有此指征。上面提及的受体表达水平的额外的抑制指征清楚地证明了本发明的主要分子，即NRC 2694，的出人意料和令人惊奇的特性。
xi)结论：
因此，在上面的试验中与厄洛替尼盐酸盐的比较，确定了本发明的化合物的出人意料的，令人惊奇的和优良的抗肿瘤特性和额外的治疗潜力。
实施例-8
下列是用于人类预防性治疗应用的含有式NRC-2694的化合物或其药学可接受的盐的说明性的代表性药物剂型：
 片剂   mg/片
 化合物NRC-2694   50
 无水乳糖(USP)   156
 微晶纤维素(Avicel pH102)   15
 十二烷基硫酸钠   5
 羟基乙酸淀粉钠(Sodium starch glycolite)   10
 聚维酮K-30   3
 羟丙基纤维素(LH-11)   10
 硬脂酸镁   1

Claims (20)

1.一种式(I)的喹唑啉衍生物，其中
Figure FPA00001183532100011
或其药学可接受的盐。
2.如权利要求1所述的式(I)的喹唑啉衍生物，其中
Figure FPA00001183532100012
且R2＝OCH3(NRC-2694)或其药学可接受的盐。
3.如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物，其中所述药学可接受的盐是单盐酸盐(NRC-2694A)。
4.如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物，其中所述药学可接受的盐是二盐酸盐(NRC-2694B)。
5.一种在温血动物中产生针对EGF型受体酪氨酸激酶的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求1-4所述的式(I)的喹唑啉衍生物或其药学可接受的盐。
6.一种在温血动物中产生针对如Erb-2、Erb-3、Erb-4的Erb族受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求1-4所述的式(I)的喹唑啉衍生物或其药学可接受的盐。
7.一种在温血动物中产生针对EGF型受体酪氨酸激酶的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物NRC-2694或其药学可接受的盐。
8.一种在温血动物中产生针对如Erb-2、Erb-3、Erb-4的Erb族受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物NRC-2694或其药学可接受的盐。
9.一种在温血动物中产生针对VEGF型受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物NRC-2694或其药学可接受的盐。
10.一种在温血动物中产生针对EGF型受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求3和4所述的喹唑啉衍生物NRC-2694A和NRC-2694B。
11.一种在温血动物中产生针对如Erb-2、Erb-3、Erb-4的Erb族受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求3和4所述的喹唑啉衍生物NRC-2694A和NRC-2694B。
12.一种在温血动物中产生针对VEGF型受体酪氨酸激酶敏感性癌症的抑制作用的方法，包括向所述动物施用有效量的如权利要求3和4所述的喹唑啉衍生物NRC-2694A和NRC-2694B。
13.一种制备如权利要求1所述的式(I)的喹唑啉衍生物或其药学可接受的盐的方法，包括
a)式II的喹唑啉
Figure FPA00001183532100021
与磷酰氯或草酰氯反应得到式(III)的4-氯喹唑啉
Figure FPA00001183532100031
b)上面式III的4-氯喹唑啉与3-乙炔基苯胺缩合反应得到式(I)的喹唑啉衍生物
Figure FPA00001183532100032
且R2＝OCH3，OC2H5
14.一种制备如权利要求2所述的式(I)的喹唑啉衍生物或其药学可接受的盐的方法，包括：
a)式(IIa)的喹唑啉
Figure FPA00001183532100033
与磷酰氯或草酰氯反应得到相应的式(IIIa)的4-氯喹唑啉
Figure FPA00001183532100041
b)上面式(IIIa)的4-氯喹唑啉与3-乙炔基苯胺缩合反应得到喹唑啉衍生物NRC-2694。
Figure FPA00001183532100042
15.一种制备喹唑啉衍生物NRC-2694的方法，所述方法基本上如上面引用的实施例1-3中所描述。
16.一种制备NRC-2694A单盐酸盐的方法，所述方法基本上如上面引用的实施例4中所描述。
17.一种制备NRC-2694B二盐酸盐的方法，所述方法基本上如上面引用的实施例5中所描述。
18.一种评价如权利要求1所述的式(I)的喹唑啉衍生物的最大耐受剂量(MTD)和急性毒性的方法，所述方法基本上如上面引用的实施例6中所描述。
19.一种评价如权利要求1所述的式(I)的喹唑啉衍生物的体外、体内和治疗效果的方法，所述方法基本上如上面引用的实施例7中所描述。
20.一种药物组合物，包括如上面权利要求1-19中任意一项所述的式(I)的喹唑啉衍生物，或其药学可接受的盐。
CN2008801248191A 2008-01-18 2008-01-18 用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物 Pending CN101918374A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IN2008/000036 WO2009090661A1 (en) 2008-01-18 2008-01-18 6.7-dialkoxy ouinazoline derivatives useful for treatment of cancer related disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101918374A true CN101918374A (zh) 2010-12-15

Family

ID=39769348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801248191A Pending CN101918374A (zh) 2008-01-18 2008-01-18 用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物

Country Status (27)

Country Link
US (5) US8143250B2 (zh)
EP (2) EP2229369B1 (zh)
JP (1) JP2011509995A (zh)
KR (2) KR101640161B1 (zh)
CN (1) CN101918374A (zh)
AP (1) AP2886A (zh)
AU (1) AU2008347940A1 (zh)
BR (1) BRPI0822012A2 (zh)
CA (1) CA2711737C (zh)
CY (1) CY1118193T1 (zh)
DK (2) DK3012251T3 (zh)
EA (1) EA018514B1 (zh)
ES (2) ES2642159T3 (zh)
HR (1) HRP20161522T1 (zh)
HU (1) HUE030640T2 (zh)
IL (1) IL207046A (zh)
LT (1) LT2229369T (zh)
MA (1) MA32081B1 (zh)
MX (1) MX2010007852A (zh)
NZ (1) NZ586946A (zh)
PL (1) PL2229369T3 (zh)
PT (1) PT2229369T (zh)
SG (1) SG187490A1 (zh)
SI (1) SI2229369T1 (zh)
UA (1) UA101010C2 (zh)
WO (1) WO2009090661A1 (zh)
ZA (1) ZA201005116B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013091507A1 (zh) * 2011-12-20 2013-06-27 Qian Wei 杂环胺基烷氧基取代的喹唑啉衍生物及其用途
CN117545476A (zh) * 2021-06-10 2024-02-09 纳科制药有限公司 用于治疗头颈癌的egfr抑制剂

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101640161B1 (ko) * 2008-01-18 2016-07-15 낫코 파마 리미티드 암과 관련된 질환의 치료에 유용한 6,7-디알콕시 퀴나졸린 유도체
US9050341B2 (en) * 2009-07-14 2015-06-09 Natco Pharma Limited Methods of treating drug resistant and other tumors by administering 6,7-dialkoxy quinazoline derivatives
CN101857618B (zh) * 2010-06-13 2015-11-25 中国海洋大学 作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的一系列喹唑啉糖衍生物，其制备方法和应用
US9388160B2 (en) * 2011-10-12 2016-07-12 Teligene Ltd Quinazoline derivatives as kinases inhibitors and methods of use thereof
AR092289A1 (es) * 2011-11-14 2015-04-15 Sunshine Lake Pharma Co Ltd Derivados de aminoquinazolina y sus sales y metodos de uso
WO2013142817A2 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Dennis Brown Compositions and methods to improve the therapeutic benefit of indirubin and analogs thereof, including meisoindigo
WO2015077375A1 (en) 2013-11-20 2015-05-28 Signalchem Lifesciences Corp. Quinazoline derivatives as tam family kinase inhibitors
WO2017062500A2 (en) 2015-10-05 2017-04-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Activators of autophagic flux and phospholipase d and clearance of protein aggregates including tau and treatment of proteinopathies
ES2899145T3 (es) 2017-04-15 2022-03-10 Natco Pharma Ltd Un proceso mejorado para la preparación de diclorhidrato de N-(3-etinilfenil)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina
CN111499577A (zh) * 2019-01-30 2020-08-07 华东师范大学 邻二苯基取代五元含氮芳杂环类类化合物及其应用
IL309181A (en) 2021-06-10 2024-02-01 Natco Pharma Ltd EGFR inhibitor for the treatment of head and neck cancer
CN115518071B (zh) * 2021-06-24 2024-03-19 中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院 一种化合物在制备抗食管癌的药物中的应用
WO2024121861A1 (en) * 2022-12-08 2024-06-13 Natco Pharma Limited Egfr inhibitor for the treatment of head and neck cancer

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US690221A (en) 1901-06-20 1901-12-31 Frederik Christian Viggo Arp Stand for cycles.
US5332671A (en) 1989-05-12 1994-07-26 Genetech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
NZ243082A (en) 1991-06-28 1995-02-24 Ici Plc 4-anilino-quinazoline derivatives; pharmaceutical compositions, preparatory processes, and use thereof
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
US5811098A (en) 1992-11-24 1998-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to HER4, human receptor tyrosine kinase
GB9323290D0 (en) 1992-12-10 1994-01-05 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9314884D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Tricyclic derivatives
JP3088018B2 (ja) 1995-03-30 2000-09-18 ファイザー・インコーポレーテッド キナゾリン誘導体
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) * 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US6706721B1 (en) * 1998-04-29 2004-03-16 Osi Pharmaceuticals, Inc. N-(3-ethynylphenylamino)-6,7-bis(2-methoxyethoxy)-4-quinazolinamine mesylate anhydrate and monohydrate
UA74803C2 (uk) * 1999-11-11 2006-02-15 Осі Фармасьютікалз, Інк. Стійкий поліморф гідрохлориду n-(3-етинілфеніл)-6,7-біс(2-метоксіетокси)-4-хіназолінаміну, спосіб його одержання (варіанти) та фармацевтичне застосування
WO2005070909A1 (en) 2004-01-22 2005-08-04 Natco Pharma Limited An improved process for the preparation of gefitinib
WO2006090413A1 (en) 2005-02-23 2006-08-31 Natco Pharma Limited Novel crystalline form of gefitinib and a process for its preparation
PE20070207A1 (es) * 2005-07-22 2007-03-09 Genentech Inc Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her
US7960545B2 (en) 2005-11-23 2011-06-14 Natco Pharma Limited Process for the prepartion of erlotinib
KR101640161B1 (ko) * 2008-01-18 2016-07-15 낫코 파마 리미티드 암과 관련된 질환의 치료에 유용한 6,7-디알콕시 퀴나졸린 유도체

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013091507A1 (zh) * 2011-12-20 2013-06-27 Qian Wei 杂环胺基烷氧基取代的喹唑啉衍生物及其用途
CN117545476A (zh) * 2021-06-10 2024-02-09 纳科制药有限公司 用于治疗头颈癌的egfr抑制剂

Also Published As

Publication number Publication date
AP2886A (en) 2014-05-31
MA32081B1 (fr) 2011-02-01
WO2009090661A9 (en) 2010-06-17
DK3012251T3 (en) 2017-10-09
SI2229369T1 (sl) 2016-11-30
EA201001173A1 (ru) 2011-04-29
SG187490A1 (en) 2013-02-28
KR101640161B1 (ko) 2016-07-15
PT2229369T (pt) 2016-11-24
US20110034459A1 (en) 2011-02-10
CA2711737C (en) 2015-03-31
CY1118193T1 (el) 2017-06-28
AU2008347940A1 (en) 2009-07-23
US20170079983A1 (en) 2017-03-23
EA018514B1 (ru) 2013-08-30
ZA201005116B (en) 2011-03-30
PL2229369T3 (pl) 2017-01-31
EP2229369B1 (en) 2016-08-17
EP2229369A1 (en) 2010-09-22
EP3012251B1 (en) 2017-08-30
IL207046A (en) 2015-09-24
WO2009090661A1 (en) 2009-07-23
KR20100121468A (ko) 2010-11-17
US8921362B2 (en) 2014-12-30
BRPI0822012A2 (pt) 2015-07-21
NZ586946A (en) 2012-06-29
ES2642159T3 (es) 2017-11-15
KR20160086969A (ko) 2016-07-20
US20150141421A1 (en) 2015-05-21
EP3012251A1 (en) 2016-04-27
US20190201408A1 (en) 2019-07-04
UA101010C2 (ru) 2013-02-25
KR101762306B1 (ko) 2017-07-27
US8143250B2 (en) 2012-03-27
IL207046A0 (en) 2010-12-30
JP2011509995A (ja) 2011-03-31
US9481655B2 (en) 2016-11-01
HUE030640T2 (en) 2017-06-28
HRP20161522T1 (hr) 2017-02-10
ES2593321T3 (es) 2016-12-07
DK2229369T3 (en) 2016-12-12
AP2010005357A0 (en) 2010-08-31
CA2711737A1 (en) 2009-07-23
LT2229369T (lt) 2016-09-26
MX2010007852A (es) 2010-11-30
US20110039844A1 (en) 2011-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101918374A (zh) 用于治疗癌症相关病症的6.7-二烷氧基喹唑啉衍生物
CN107176954B (zh) 一种egfr抑制剂的药用盐及其晶型、制备方法和应用
US10882845B2 (en) Crystal form of deuterated AZD9291, preparation method therefor, and use thereof
CN105832740A (zh) 芳胺基嘌呤衍生物及其制备方法和在医药上的用途
Zhang et al. Structure-activity study of quinazoline derivatives leading to the discovery of potent EGFR-T790M inhibitors
AU2016272057A1 (en) Use of pteridinone derivative serving as EGFR inhibitor
EP4205746A1 (en) Compound for inhibiting mutant egfr and use thereof
EP4324833A1 (en) Alkynylphenylbenzamide compound and use thereof
WO2021121146A1 (zh) 氨基嘧啶类化合物甲磺酸盐的晶型a及其制备方法和应用
CN111499583B (zh) 喹唑啉衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用
EP4371983A1 (en) Novel pyrimidine-2,4-diamine derivatives, preparation method therefor, and pharmaceutical composition containing same as active ingredient for prevention or treatment of cancer
CN111362924B (zh) 氘代的嘧啶衍生物及其用途
US20220194959A1 (en) Crystal form of egfr inhibitor and preparation method thereof
Cui et al. Structure optimization and discovery of novel compound for the treatment of insertion mutations within exon 20 of EGFR and HER2
CN103772371B (zh) 6-呋喃基喹唑啉-4-胺化合物及其制备方法和用途
CN114634453A (zh) 喹唑啉衍生物制备方法及其应用
Hedgethorne et al. Dacomitinib

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1150834

Country of ref document: HK

C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20101215

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1150834

Country of ref document: HK