CN101903396A

CN101903396A - 新的细胞周期关卡调节剂和它们与关卡激酶抑制剂的联合应用

Info

Publication number: CN101903396A
Application number: CN2008801213756A
Authority: CN
Inventors: T·J·古奇; D·A·派瑞; M·A·拉伯里; M·P·德耶; K·帕契; K·E·罗斯诺; 沈瑞超; J·波普维琪-慕勒
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 2007-11-07
Filing date: 2008-11-05
Publication date: 2010-12-01
Also published as: WO2009061781A1; TW200927130A; EP2217611A1; CL2008003309A1; US8603998B2; CA2705092A1; PE20091195A1; MX2010005095A; EP2217611B1; AR069198A1; JP2011503084A; US20110183933A1

Abstract

在本发明的众多实施方案中，提供了一类新的具有式(V)的嘧啶类似物，作为基于靶向机制的细胞周期关卡调节剂。可以通过给予本发明的细胞周期关卡调节剂来治疗癌症和/或恶性肿瘤。还讨论了用于协同地使癌细胞凋亡的适合的细胞周期关卡调节剂与关卡激酶抑制剂的联合。本发明包括通过给予细胞周期关卡调节剂和关卡激酶抑制剂的联合来治疗癌症的方法、包括所述活性剂的药物组合物、以及所述联合和药包。

Description

新的细胞周期关卡调节剂和它们与关卡激酶抑制剂的联合应用

技术领域

本发明涉及可用作基于靶向机制的细胞周期关卡(特别是关卡激酶1(″Chk1″))调节剂的某些嘧啶类似物、包含所述化合物的药物组合物、以及使用所述化合物和组合物治疗疾病的治疗方法，所述疾病诸如例如癌症、炎症、关节炎、病毒病、神经变性疾病诸如阿尔茨海默病、心血管疾病和真菌病。本发明还涉及通过给予细胞周期关卡调节剂和至少一种关卡激酶抑制剂的联合来治疗癌症的方法、在这些方法中所使用的包括所述药物联合的药物组合物、以及药包。

背景技术

仅在美国，每年有几十万人死于癌症，并且每年确诊多得多的癌症病例。尽管在某些形式的癌症的治疗(包括手术、放疗和化疗)方面有所进展，但是许多类型的癌症实质上是不可医治的。即使对于某些癌症有有效的治疗，但是这种治疗的副作用经常是严重的并且可能导致生活质量显著降低。

尽管癌症有许多形式，但是所有的癌症都以不适当的细胞增殖为特征。有多个关卡被构建在细胞增殖循环的机构中，在所述关卡处，细胞受命开始并精确地调节DNA合成以修复DNA损伤或经历细胞死亡。与正常细胞不同，癌细胞缺失了关卡控制并具有不受控制的增殖动力。在人的一生中有大约10¹⁶次细胞增殖，以及伴随发生的不可避免的DNA复制错误和接触紫外线和诱变剂，强调了对于关卡功能的需要。主要的关卡出现在G1/S期和G2/M期转变，其中细胞受命修复DNA或经历凋亡。通常认为细胞在DNA损伤不可修复时经历凋亡(Li，C J等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：13369-13374)。

关卡激酶(例如，Chk1、Chk2等)作为细胞周期进展的关卡起重要作用。关卡预防在不适当的时间发生细胞周期进展(诸如响应于DNA损伤)，并在细胞受到抑制时保持细胞的代谢平衡，并且在有些情况下在对关卡的需求没有得到满足时可以诱导凋亡(程序性细胞死亡)。关卡控制可以发生在G1期(在DNA合成之前)、在S期过程中(复制关卡)、和在G2期，在进入有丝分裂之前。

另一个重要的细胞关卡是DNA复制关卡，也是由CHK1介导的，CHK1是一种必要的丝氨酸-苏氨酸激酶，其在DNA合成过程中是活性的并起到协调细胞周期进展的作用。在其它重要的功能之中，复制关卡确保对DNA聚合酶进展的适当控制，命令复制起点激发和对有丝分裂的抑制。在存在足以使复制叉进展停滞的复制应力时，复制关卡对于保持存活力、起作用来稳定化和保持复制叉复合物方面是关键的。活性复制叉的瓦解引起快速发生双链DNA破坏和细胞死亡。复制叉瓦解对于细胞而言是不能恢复的和灾难性的事件。

DNA抗代谢物药物诸如阿糖胞苷和吉西他滨的主要的作用机制是抑制DNA合成。这总是与复制叉停滞、复制关卡活化和CHK 1有关。CHK1活性对于在接触抗代谢物过程中抑制DNA损伤是必不可少的。缺乏CHK1的细胞不能恢复DNA合成，并随后经历凋亡。参见，例如，Cho等人，Cell Cycle，4：1，131-139(2005)；

等人，Mol.CellBiol.，25(9)：3553-62(2005)。

一般而言，调节细胞周期关卡的治疗剂在本文中一般称为“关卡调节剂”。活化细胞周期关卡的治疗剂在本文中一般称为“关卡激酶活化剂”。活化名称为“Chk1”(称为关卡1)的关卡激酶的治疗剂在本文中称为“Chk1活化剂”。活化名称为“Chk2”的关卡激酶的治疗剂在本文中称为“Chk2活化剂”。这种关卡激酶的抑制剂总体地和具体地在本文中称为“关卡激酶抑制剂”、“Chk1抑制剂”和“Chk2抑制剂”等。因此，预期对各种DNA损伤和复制关卡的抑制作用有助于阻止细胞对治疗诱导的DNA损伤进行修复或抑制复制叉瓦解(和复制关卡活化的其它下游后果)并由此使靶细胞对这种治疗剂敏化。预期这种敏化又提高这些治疗的治疗指数。

对癌细胞中关卡控制的选择性操纵可以在癌症化疗和放疗方案中提供广泛的应用，并且另外可以提供要被用作癌细胞破坏的选择性基础的人癌症“基因组不稳定性”的通用标志。有许多因素使Chk1成为DNA损坏和复制关卡控制的关键靶标。对于Chk1和功能相关激酶诸如CDS1/Chk2(最近发现的一种与Chk1协作来调节S期进展的激酶，参见Zeng等人，Nature，395，507-510(1998)；Matsuoka，Science，282，1893-1897(1998))的抑制剂的阐明可以提供用于癌症治疗的有价值的新的治疗用实体。

对于调节关卡控制的治疗剂的鉴定可以改善癌症治疗。实际上，新的报告建议，细胞周期关卡的活化可以代表癌症治疗的重要的新的模式(参见，例如，Y.Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2003)，100(5)，2674-8)。已经发现作用于G1/S期转变的细胞周期关卡活化剂β-拉帕醌在体外和在动物研究中表现出针对多种肿瘤类型的显著的抗肿瘤活性，同时表现出有利的副作用特征，导致开始进行人临床试验。另外，已经有报道说β-拉帕醌通过诱导半胱天冬酶而诱导人乳腺癌细胞坏死和卵巢、结肠和胰腺癌细胞凋亡(Li，YZ等人，MolecularMedicine(1999)5：232-239)。

还有报道说β-拉帕醌在与中等剂量的

(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Co.，New York，New York)联合时在裸鼠中的人卵巢、前列腺和乳腺癌异种移植模型中具有有效的抗肿瘤活性。没有观察到对小鼠有毒性的迹象，并且在治疗之后的后续两个月过程中没有记录到体重减轻(期间没有重新出现肿瘤)(参见Li，C J等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1999)96：13369-13374)。认为Taxol作用于细胞周期的G2/M期转变。

关卡激酶抑制剂是已知的。例如，共同转让的US 2007/0083044和US 2007/0082900(都是在2007年4月12日公开的)描述了几种吡唑并嘧啶化合物作为蛋白激酶抑制剂(包括关卡激酶抑制剂)及其用法。另外，2007年5月24日公开的共同转让的US 2007/0117804描述了几种咪唑并吡嗪作为蛋白激酶抑制剂(包括关卡激酶抑制剂)及其用法。另外，S.Ashwell等人，Expert Opin.Investig.Drugs(2008)17(9)：1331-1340描述了几种关卡激酶抑制剂，特别是处于开发阶段的那些。

许多常规的化疗剂对癌细胞和非癌细胞同样造成损伤。尽管这种广谱的活性允许化学治疗杀死许多不同类型的癌症，但是其经常还导致正常细胞受损。这种化合物的治疗指数(治疗在正常细胞和癌细胞之间加以区分的能力的量度)可能是相当低；经常地，有效杀死癌细胞的化疗药物剂量也会杀死正常细胞，特别是经历频繁细胞分裂的那些正常细胞(诸如上皮细胞)。在正常细胞受到所述治疗的影响时，可以出现诸如毛发损失、造血抑制、和恶心的副作用。

癌症化疗药物的最新进展使得开发了设计用于影响主要与癌细胞有关的生物学靶标而不影响正常细胞的新的“靶向”抗癌药。这种药物的实例包括伊马替尼(在美国由Novartis以商品名销售)、吉非替尼(由Astra Zeneca开发，商品名

)、和埃罗替尼(由Genentech、OSI、和Roche以的名称销售)。尽管这些药物可能是对于预定的细胞靶标相当有效，并且可能具有与常规化疗相比更低的副作用比例，但是靶向治疗设计上仅针对表达生物学靶标的细胞是有效的。不表达这个特异性靶标的癌细胞、或表达该靶标的突变形式的癌细胞可能以较低的程度受靶向剂的影响。因此，这些药物的应用有限。研究人员已知在寻找改善的药物。

例如，吉西他滨(式I；2′，2′-二氟-2′-脱氧胞苷；dFdC)是一种在多种实体瘤中表现出活性的嘧啶类似物，

包括非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、头和颈的鳞状上皮细胞癌、生殖细胞肿瘤、淋巴瘤(皮肤T细胞和霍奇金病)、间皮瘤，和膀胱、乳房、卵巢、子宫颈、胰腺、和胆道的肿瘤，以及一些血液学恶性肿瘤。该化合物由Lilly Research Laboratories，Eli Lilly and Co.；Indianapolis，Ind.Hertel等人，Cancer Res.50，4417-4422(1990)；U.S.4,808,614和5,464,826)第一次报告并由Lilly以商品名销售。吉西他滨是与阿糖胞苷结构相似的一种脱氧胞苷类似物

吉西他滨被核苷激酶细胞内代谢为活性的二磷酸(式II；dFdCDP)和三磷酸(式III；dFdCTP)核苷酸代谢产物。

吉西他滨的细胞毒作用通常是归因于二磷酸和三磷酸核苷酸的作用，所述二磷酸和三磷酸核苷酸导致DNA合成的抑制。二磷酸吉西他滨(dFdCDP)抑制核糖核苷酸还原酶(RNR)，所述核糖核苷酸还原酶对于DNA合成来说是必需的并且负责催化生成用于DNA合成的三磷酸脱氧核苷酸的反应。RNR被二磷酸核苷酸抑制引起包括三磷酸脱氧胞苷(dCTP)在内的脱氧核苷酸的浓度降低。三磷酸吉西他滨(dFdCTP)与dCTP竞争结合到DNA中。细胞内dCTP浓度的降低(在二磷酸化物的作用下)进一步提高了三磷酸吉西他滨到DNA中的结合，这是一种被称为自我增强的过程。在吉西他滨核苷酸被结合到DNA中之后，只有一个另外的核苷酸被添加给正在生长的DNA链。进一步的DNA合成被抑制，因为DNA聚合酶ε不能除去吉西他滨核苷酸和修复正在生长的DNA链，导致所谓的被掩蔽的链终止(masked chain termination)。吉西他滨在细胞周期中诱导S期阻抑，并在人白血病细胞和实体瘤二者中都引发凋亡。Tolis等人，Eur.J.Cancer，35，797-808(1999)。除了其细胞毒作用之外，吉西他滨是有效的放射致敏剂。已经将吉西他滨作为啮齿动物和人肿瘤细胞的放射致敏剂加以研究，包括在胰腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、乳房癌和宫颈癌中发现的那些肿瘤细胞。Pauwels等人，Oncologist 10(1)，34-51(2005)。

另一个已知的RNR抑制剂是羟基脲(HU)或羟基氨基甲酰胺(式IV；商标名称包括得自Bristol-Myers Squibb的

)：

是一种用于血液学恶性肿瘤的抗肿瘤药。其作用机制被认为是基于其通过清除酪氨酰基自由基而对酶核糖核苷酸还原酶的抑制作用。

过去公开了CHK-1活化剂与CHK-1抑制剂的联合。参见，例如，S.Cho等人，Cell Cycle，Vol.4(1)，131-139(2005年1月)；和R.Syljuasen等人，Molecular and Cellular Biology，Vol.25(9)，3553-3562(2005)。

尽管到目前为止在寻找新的抗肿瘤治疗方面已经有所进展，但是仍需要新的癌治疗方法。

在一个方面中，本发明提供用于治疗癌和癌症前期病况的新的化合物和药物组合物。

在另一个方面中，本发明提供使用本发明的化合物来治疗癌症前期病况或癌症的方法。

在另一个方面中，本发明提供了使用与抑制关卡激酶的试剂相联合的调节细胞周期关卡的化合物来治疗癌症前期病况或癌症的方法。

在另一个方面中，本发明提供了使用与抑制关卡激酶的试剂相联合的活化关卡激酶的化合物来治疗癌症前期病况或癌症的方法。

本发明的这些和/或其它目的中的任一个可以容易地从对以下发明详述的回顾来发现。

发明内容

在一个方面中，本发明提供化合物及其可药用的盐、溶剂合物、酯、和前体药物，所述化合物由式V表示：

其中：

G是H或卤素；

X选自H，F，OR²和烷基；

Y选自H，F，OR²和烷基；

Z选自O，NR²，S，CR²R³和SO₂；

R选自-烷基，-烯基，-环烷基，-芳基，

-烷基芳基，-杂芳基，-烷基杂芳基，杂环基，-烷基杂环基，

-烷基-C(O)R²和-烷基-C(O)NR²R³，其中每个所述烷基，芳基，杂芳基和杂环基可以是未被取代的或任选地独立地被一个或多个可为相同或不同的基团所取代，每个取代基独立地选自卤素，氰基，烷基，烯基，炔基，羟基，烷氧基，芳基氧基，烷硫基，芳硫基，芳基，杂芳基，杂环基，杂环烯基(heterocyclenyl)，环烷基，环烯基，-OR²，-NR²R³，-C(O)R²，-C(O)OR²和C(O)NR²R³；

R²选自H，-烷基，-芳基和-杂芳基，其中每个所述烷基，芳基和杂芳基可以是未被取代的或任选地独立地被一个或多个基团所取代，所述基团可以是相同或不同的且独立地选自卤素，氰基，烷基，烯基，炔基，羟基，烷氧基，芳基氧基，烷硫基，芳硫基，芳基，杂芳基，杂环基，杂环烯基，环烷基，环烯基，-OR²，-NR²R³，C(O)R²和C(O)NR²R³；和

R³选自-烷基，-芳基和-杂芳基，其中每个所述烷基，芳基和杂芳基可以是未被取代的或任选地独立地被一个或多个基团所取代，所述基团可以是相同或不同的且独立地选自卤素，氰基，烷基，烯基，炔基，羟基，烷氧基，芳基氧基，烷硫基，芳硫基，芳基，杂芳基，杂环基，杂环烯基，环烷基，环烯基，-OR²，-NR²R³，C(O)R²和C(O)NR²R³，或

NR²R³或-C(O)NR²R³中的R²和R³可以连接于所述NR²R³的N以形成包含1-3个杂原子的5-8元的杂环基环，所述杂原子包括所述N在内。

在另一个方面中，本发明提供包括至少一种式V的化合物的组合物。

在另一个方面中，本发明提供包括至少一种式V的化合物和至少一种可药用载体的药物组合物。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的至少一种式V的化合物来调节细胞周期关卡的方法。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的至少一种式V的化合物来活化关卡激酶的方法。

在另一个方面中，本发明提供包括至少一种式V的化合物和至少一种关卡激酶抑制剂的组合物。

在另一个方面中，本发明提供包括至少一种式V的化合物和至少一种关卡激酶1抑制剂的组合物。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的至少一种式V的化合物来抑制RNR的方法。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的至少一种式V的化合物来抑制DNA合成的方法。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的组合物来抑制RNR的方法，所述组合物包括至少一种式V的化合物和至少一种关卡激酶1抑制剂。

在另一个方面中，本发明提供使用治疗有效量的组合物来抑制DNA合成的方法，所述组合物包括至少一种式V的化合物和至少一种关卡激酶1抑制剂。

附图说明

通过以下附图进一步描述本发明。

发明详述

在一个实施方案中，本发明公开了式V的化合物或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物。

在另一个实施方案中，G为H。

在另一个实施方案中，G为卤素。

在另一个实施方案中，G为Br。

在另一个实施方案中，X为H。

在另一个实施方案中，X为F。

在另一个实施方案中，X为-OR²。

在另一个实施方案中，X为烷基。

在另一个实施方案中，X为烷氧基-。

在另一个实施方案中，X为芳基氧基-。

在另一个实施方案中，X为杂芳基氧基-。

在另一个实施方案中，Y为H。

在另一个实施方案中，Y为F。

在另一个实施方案中，Y为-OR²。

在另一个实施方案中，Y为烷基。

在另一个实施方案中，Y为烷氧基-。

在另一个实施方案中，Y为芳基氧基-。

在另一个实施方案中，Y为杂芳基氧基-。

在另一个实施方案中，Z为-O-。

在另一个实施方案中，Z为-NH-。

在另一个实施方案中，Z为-N(R²)-。

在另一个实施方案中，Z为-S-。

在另一个实施方案中，Z为-C(R²R³)-。

在另一个实施方案中，Z为-SO₂-。

在另一个实施方案中，R为烷基。

在另一个实施方案中，R为芳基。

在另一个实施方案中，R为杂芳基。

在另一个实施方案中，R为-烷基芳基。

在另一个实施方案中，R为-烷基杂芳基。

在另一个实施方案中，R为杂环基。

在另一个实施方案中，R为-烷基杂环基。

在另一个实施方案中，R为-烷基-C(O)R²。

在另一个实施方案中，R为-烷基-NR²R³。

在另一个实施方案中，R为-烷基-NR²R³，其中R²和R³都是烷基基团。

在另一个实施方案中，R为二乙基氨基烷基-。

在另一个实施方案中，R为-NR²R³，其中-NR²R³中的R²和R³连接于所述NR²R³的N，以形成包含1-3个杂原子的5-8元的杂环基环，所述杂原子包括所述N在内。

在另一个实施方案中，R为-烷基-C(O)NR²R³。

在另一个实施方案中，R为-烷基-C(O)NR²R³，其中R²和R³都是烷基基团。

在另一个实施方案中，R为-C(O)NR²R³，其中-C(O)NR²R³中的R²和R³连接于所述NR²R³的N，以形成包含1-3个杂原子的5-8元的杂环基环，所述杂原子包括所述N在内。

在另一个实施方案中，R为-烷基(吡咯烷酮)。

在另一个实施方案中，R为-烷基(吡咯烷-2-酮)。

在另一个实施方案中，R为-烷基-OR²。

在另一个实施方案中，R为羟基烷基。

在另一个实施方案中，R为杂芳基。

在另一个实施方案中，R为烷氧基烷基-。

在另一个实施方案中，R²为H。

在另一个实施方案中，R²为烷基。

在另一个实施方案中，R²为芳基。

在另一个实施方案中，R²为杂芳基。

在另一个实施方案中，R³为烷基。

在另一个实施方案中，R³为芳基。

在另一个实施方案中，R³为杂芳基。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为烷氧基烷基-。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为烷氧基烷基-。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为烷硫基烷基-。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为烷硫基烷基-。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为酰氨基烷基。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为酰氨基烷基。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为杂芳基。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为杂芳基。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为杂环基烷基。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为杂环基烷基。

在另一个实施方案中，Z为NR²且R为四氢呋喃基烷基。

在另一个实施方案中，Z为NH且R为四氢呋喃基烷基。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为烷氧基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为烷氧基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为烷硫基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为烷硫基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为酰氨基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为酰氨基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为杂环基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为杂环基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为四氢呋喃基烷基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为四氢呋喃基烷基-.

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²，且R为甲氧基甲基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为甲氧基乙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²，且R为甲硫基乙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为甲硫基乙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²，且R为-CH₂-C(O)NH₂。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为-CH₂-C(O)NH₂.

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²，且R为四氢呋喃-2-基甲基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为四氢呋喃-2-基甲基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为羟基乙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为二甲氨基乙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为(吡咯烷酮-2-基)丙基-。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NR²且R为：

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为：

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝H，X＝Y＝F，Z为NH且R为正丁基。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝卤素，X＝Y＝F，Z为NH且R为正丁基。

在另一个实施方案中，G，X，Y，Z和R，R²和R³是独立地加以选择的，其中G＝Br，X＝Y＝F，Z为NH且R为正丁基。

如上所述，在上述式V的化合物的几个可供选择的实施方案中，部分(moiety)G，X，Y，Z，R，R²，R³和R⁴是独立地加以选择的。

式V的化合物的非限制性实例如下所示：

本发明的另外的化合物如下所示：

如上述和贯穿本公开使用的，除非另有说明，以下术语应这些理解为具有以下含义：

“患者”包括人和动物。

“哺乳动物”是指人和其它哺乳动物。

“烷基”是指脂肪族烃基，其可以是直链或支链的且在链中包括约1到约20个碳原子。优选的烷基基团在链中包含约1到约12个碳原子。更优选的烷基基团在链中包含约1到约6个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基基团诸如甲基、乙基或丙基连接于直链烷基链。低级烷基是指在链中具有约1到约6个碳原子的基团，可以是直链或支链的。烷基可以是未被取代的或任选地被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自卤素，烷基，芳基，环烷基，氰基，羟基，烷氧基，烷硫基，氨基，肟(例如，＝N-OH)，-NH(烷基)，-NH(环烷基)，-N(烷基)2，-O-C(O)-烷基，-O-C(O)-芳基，-O-C(O)-环烷基，羧基和-C(O)O-烷基。适合的烷基基团的非限制性实例包括甲基，乙基，正丙基，异丙基和叔丁基。

“烯基”是指包含至少一个碳-碳双键的脂肪族烃基，其可以是直链或支链的且在链中包括约2到约15个碳原子。优选的烯基基团在链中具有约2到约12个碳原子；更优选在链中具有约2到约6个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基基团诸如甲基、乙基或丙基连接于直链烯基链。低级烯基是指在链中具有约2到约6个碳原子的基团，可以是直链或支链的。烯基可以是未被取代的或任选地被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自卤素，烷基，芳基，环烷基，氰基，烷氧基和-S(烷基)。适合的烯基基团的非限制性实例包括乙烯基，丙烯基，正丁烯基，3-甲基丁-2-烯基，正戊烯基，辛烯基和癸烯基。

“亚烷基”是指通过从上述定义的烷基基团去掉一个氢原子所得到的双官能基团。亚烷基的非限制性实例包括亚甲基，亚乙基和亚丙基。

“炔基”是指包含至少一个碳-碳三键的脂肪族烃基，其可以是直链或支链的且在链中包括约2到约15个碳原子。优选的炔基基团在链中具有约2到约12个碳原子；更优选在链中具有约2到约4个碳原子。支链是指一个或多个低级烷基基团诸如甲基、乙基或丙基连接于直链炔基链。低级炔基是指在链中具有约2到约6个碳原子，可以是直链或支链的。适合的炔基基团的非限制性实例包括乙炔基，丙炔基，2-丁炔基和3-甲基丁炔基。炔基可以是未被取代的或任选地被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自烷基，芳基和环烷基。

“芳基”是指包括约6到约14个碳原子、优选约6到约10个碳原子的芳香族单环或多环环系。芳基基团可以任选地被一个或多个可相同或不同的“环系统取代基”取代，并且如本文中定义的。适合的芳基基团的非限制性实例包括苯基和萘基。

“杂芳基”是指包括约5到约14个环原子、优选约5到约10个环原子的芳香族单环或多环环系，其中一个或多个环原子，单独地或联合地，是不同于碳的元素，例如氮、氧或硫。优选的杂芳基包含约5到约6个环原子。“杂芳基”可以任选地被一个或多个可相同或不同的“环系统取代基”取代，并且如本文中定义的。在杂芳基词根名前面的前缀氮杂、氧杂或硫杂是指分别存在至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。杂芳基的氮原子可以任选地被氧化为相应的N-氧化物。“杂芳基”还可以包括稠合于上述定义的芳基的上述定义的杂芳基。适合的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、2，3-二氮杂萘基、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并嘧啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语“杂芳基”还指部分饱和的杂芳基部分，诸如例如，四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。

“芳烷基”或“芳基烷基”是指芳基-烷基-基团，其中的芳基和烷基如前述描述的。优选芳烷基包括低级烷基基团。适合的芳烷基基团的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基和萘基甲基。对母体部分的结合是通过烷基进行的。

“烷基芳基”是指烷基-芳基-基团，其中的烷基和芳基如前述描述的。优选烷基芳基包括低级烷基基团。适合的烷基芳基基团的的非限制性实例是甲苯基。对母体部分的结合是通过芳基进行的。

“环烷基”是指包括约3到约10个碳原子、优选约5到约10个碳原子的非芳香族单环或多环环系。优选的环烷基环包含约5到约7个环原子。环烷基可以任选地被一个或多个可相同或不同的“环系统取代基”取代，并且如本文中上述定义的。适合的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基，环戊基，环己基，环庚基等。适合的多环环烷基的非限制性实例包括1-十氢化萘基，降冰片基、金刚烷基等。

“环烷基烷基”是指通过烷基部分(上述已有定义)连接于母体核的上述定义的环烷基部分。适合的环烷基烷基的非限制性实例包括环己基甲基、金刚烷基甲基等。

“环烯基”是指包含至少一个碳-碳双键的包括约3到约10个碳原子、优选约5到约10个碳原子的非芳香族单环或多环环系。优选的环烯基环包含约5到约7个环原子。环烯基可以任选地被一个或多个可相同或不同的“环系统取代基”取代，并且如本文中上述定义的。适合的单环环烯基的非限制性实例包括环戊烯基，环己烯基，环庚-1，3-二烯基等。适合的多环环烯基的非限制性实例是降冰片烯基。

“环烯基烷基”是指通过烷基部分(上述已有定义)连接于母体核的上述定义的环烯基部分。适合的环烯基烷基的非限制性实例包括环戊烯基甲基、环己烯基甲基等。

“卤素”是指氟、氯、溴或碘。优选氟、氯和溴。

“环系统取代基”是指连接于芳香族或非芳香族环系的取代基，所述取代基例如代替环系上的一个可用氢。环系统取代基可以是相同或不同的，各自独立地选自烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，芳烷基，烷基芳基，杂芳烷基，杂芳基烯基，杂芳基炔基，烷基杂芳基，羟基，羟基烷基，烷氧基，芳基氧基，芳烷氧基，酰基，芳酰基，卤素，硝基，氰基，羧基，烷氧基羰基，芳基氧基羰基，芳烷氧基羰基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，杂芳基磺酰基，烷硫基，芳硫基，杂芳硫基，芳烷硫基，杂芳烷硫基，环烷基，杂环基，-O-C(O)-烷基，-O-C(O)-芳基，-O-C(O)-环烷基，-C(＝N-CN)-NH₂，-C(＝NH)-NH₂，-C(＝NH)-NH(烷基)，肟(例如，＝N-OH)，Y₁Y₂N-，Y₁Y₂N-烷基-，Y₁Y₂NC(O)-，Y₁Y₂NSO₂-和-SO₂NY₁Y₂，其中Y₁和Y₂可以是相同或不同的且各自独立地选自氢，烷基，芳基，环烷基，和芳烷基。“环系统取代基”还可以是指同时代替环系统上两个相邻碳原子上的两个可用氢(每个碳上的一个H)的单个部分。这种部分的实例是亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH₃)₂-等，其形成诸如例如以下的部分：

“杂芳基烷基”是指通过烷基部分(上述已有定义)连接于母体核的上述定义的杂芳基部分。适合的杂芳基的非限制性实例包括2-吡啶基甲基、喹啉基甲基等。

“杂环基”是指包括约3到约10个环原子、优选约5到约10个环原子的非芳香族饱和单环或多环环系，其中环系中的一个或多个原子，单独地或联合地，是不同于碳的元素，例如氮、氧或硫。在环系中没有相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环基包含约5到约6个环原子。在杂环基词根名前面的前缀氮杂、氧杂或硫杂是指分别存在至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。杂环基环中的任何-NH可以以被保护形式存在，诸如例如，作为-N(Boc)，-N(CBz)，-N(Tos)基团等；这种保护也被认为是本发明的一部分。“杂芳基”可以任选地被一个或多个可相同或不同的“环系统取代基”取代，并且如本文中定义的。杂环基的氮或硫原子可以任选地被氧化为相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。适合的单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基，吡咯烷基，哌嗪基，吗啉基，硫代吗啉基，噻唑烷基，1，4-二氧杂环己基，四氢呋喃基，四氢噻吩基，内酰胺，内酯等。“杂环基”还可以是指同时代替环系统上同一碳原子上的两个可用氢的单个部分(例如，羰基)。这种部分的实例是吡咯烷酮：

“杂环基烷基”是指通过烷基部分(上述定义的)连接于母核的如上述定义的杂环基部分。适当的杂环基烷基的非限制性实例包括哌啶基甲基、哌嗪基甲基等。

“杂环烯基”是指包括约3到约10个环原子、优选约5到约10个环原子且包含至少一个碳-碳双键或碳-氮双键的非芳香族的单环或多环环系，其中环系中的一个或多个原子单独地或组合地是不同于碳的元素，例如氮、氧或硫原子。在环系中不能存在有相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环烯基环包含约5到约6个环原子。在杂环烯基词根名前面的前缀氮杂、氧杂或硫杂意思是分别存在有至少一个氮、氧或硫原子作为环原子。所述杂环烯基可以任选地被一个或多个环系统取代基取代，其中“环系统取代基”如上述定义的。杂环烯基的氮或硫原子可以任选地被氧化为相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。适合的杂环烯基基团的非限制性实例包括1，2，3，4-四氢吡啶基，1，2-二氢吡啶基，1，4-二氢吡啶基，1，2，3，6-四氢吡啶基，1，4，5，6-四氢嘧啶基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，2-咪唑啉基，2-吡唑啉基，二氢咪唑基，二氢噁唑基，二氢噁二唑基，二氢噻唑基，3，4-二氢-2H-吡喃基，二氢呋喃基，氟二氢呋喃基，7-氧杂双环[2.2.1]庚烯基，二氢噻吩基，二氢噻喃基等。“杂环烯基”还可以表示同时代替环系统上同一碳原子上的两个可用氢的单个部分(例如，羰基)。这种部分的实例是吡咯烷酮：

“杂环烯基烷基”是指通过烷基部分(上述定义的)连接于母核的如上述定义的杂环烯基部分。

需要指出的是，在本发明的包含杂原子的环系统中，在邻近N、O或S的碳原子上没有羟基基团，以及在邻近另一个杂原子的碳上没有N或S基团。因此，例如，在以下环中：

没有-OH直接连接于标记为2和5的碳。

还需要指出的是，互变异构形式，诸如例如，以下的部分：

在本发明的某些实施方案中被认为是等价物。

“炔基烷基”是指炔基-烷基-基团，其中的炔基和烷基如前所述。优选的炔基烷基包含低级炔基和低级烷基基团。对母体部分的结合是通过烷基进行的。适合的炔基烷基基团的非限制性实例包括丙炔基甲基。

“杂芳烷基”是指杂芳基-烷基-基团，其中的杂芳基和烷基如前所述。优选的杂芳烷基包含低级烷基基团。适合的芳烷基基团的非限制性实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。对母体部分的结合是通过烷基进行的。

“羟基烷基”是指HO-烷基-基团，其中烷基如前述定义的。优选的羟基烷基包含低级烷基。适合的羟基烷基基团的非限制性实例包括羟基甲基和2-羟基乙基。

“酰基”是指H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中各个基团如前所述。对母体部分的结合是通过羰基进行的。优选的酰基包含低级烷基。适合的酰基基团的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基和丙酰基。

“芳酰基”是指芳基-C(O)-基团，其中芳基基团如前所述。对母体部分的结合是通过羰基进行的。适合的基团的非限制性实例包括苯甲酰基和1-萘甲酰基。

“烷氧基”是指烷基-O-基团，其中烷基基团如前所述。适合的烷氧基基团的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和正丁氧基。对母体部分的结合是通过醚氧进行的。

“烷氧基烷基-”是指烷基-O-烷基-基团，其中烷基基团如前所述。适合的烷氧基烷基基团的非限制性实例包括甲氧基甲基、乙氧基甲基、正丙氧基乙基、异丙氧基乙基、和正丁氧基甲基。对母体部分的结合是通过烷基-进行的。

“芳基氧基”是指芳基-O-基团，其中芳基基团如前所述。适合的芳基氧基基团的非限制性实例包括苯氧基和萘氧基。对母体部分的结合是通过醚氧进行的。

“芳基氧基烷基-”是指芳基-O-烷基-基团，其中芳基和芳基基团如前所述。适合的芳基氧基烷基基团的非限制性实例包括苯氧基甲基和萘氧基乙基。对母体部分的结合是通过烷基进行的。

“芳烷基氧基”是指芳烷基-O-基团，其中芳烷基基团如前所述。适合的芳烷基氧基基团的非限制性实例包括苄氧基和1-或2-萘甲氧基。对母体部分的结合是通过醚氧进行的。

“烷硫基”是指烷基-S-基团，其中烷基基团如前所述。适合的烷硫基基团的非限制性实例包括甲硫基和乙硫基。对母体部分的结合是通过硫进行的。

“烷硫基烷基-”是指烷基-S-烷基-基团，其中烷基基团如前所述。适合的烷硫基烷基基团的非限制性实例包括甲硫基乙基和乙硫基甲基。对母体部分的结合是通过烷基-进行的。

“芳硫基”是指芳基-S-基团，其中芳基基团如前所述。适合的芳硫基基团的非限制性实例包括苯硫基和萘硫基。对母体部分的结合是通过硫进行的。

“芳硫基烷基-”是指芳基-S-烷基-基团，其中芳基基团如前所述。适合的芳硫基烷基基团的非限制性实例包括苯硫基乙基和苯硫基甲基。对母体部分的结合是通过烷基-进行的。

“芳烷硫基”是指芳烷基-S-基团，其中芳烷基基团如前所述。适合的芳烷硫基基团的非限制性实例是苯甲硫基。对母体部分的结合是通过硫进行的。

“烷氧基羰基”是指烷基-O-CO-基团。适合的烷氧基羰基基团的非限制性实例包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。对母体部分的结合是通过羰基进行的。

“芳基氧基羰基”是指芳基-O-C(O)-基团。适合的芳基氧基羰基基团的非限制性实例包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。对母体部分的结合是通过羰基进行的。

“芳烷氧基羰基”是指芳烷基-O-C(O)-基团。适合的芳烷氧基羰基基团的非限制性实例是苄基氧基羰基。对母体部分的结合是通过羰基进行的。

“烷基磺酰基”是指烷基-S(O₂)-基团。优选的基团是其中烷基基团是低级烷基的那些。对母体部分的结合是通过磺酰基进行的。

″芳基磺酰基″是指芳基-S(O₂)-基团。对母体部分的结合是通过磺酰基进行的。

术语“被取代的”是指指定原子上的一个或多个氢被来自指定组的选择所代替，条件是没有超过所述指定原子在现有情况下的正常化合价，且所述取代产生稳定的化合物。取代基和/或变量的组合可被允许，只要这种组合获得稳定的化合物即可。“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指化合物足够稳固，能够经受住从反应混合物分离为有用的纯度，并且配制为有效的治疗剂。

术语“任选地被取代的”是指任选地被所述指定的基团、自由基或部分取代。

用于化合物的术语“纯化的”、“经过纯化的形式”或“经过分离和纯化的形式”是指所述化合物在从合成过程(例如从反应混合物)、或天然来源或其组合分离之后的物理状态。因此，用于化合物的术语“纯化的”、“经过纯化的形式”或“经过分离和纯化的形式”是指所述化合物以可通过本文中所述的或本领域技术人员公知的标准分析技术来表征的足够纯度从本文中所述的或本领域技术人员公知的一种或多种纯化方法(例如，色谱法、重结晶等)得到之后的物理状态。

还需要指出的是，在正文、反应路线、实施例和表中的具有未得到满足的化合价的任何碳原子以及杂原子被假定具有足够数目的氢原子以满足所述化合价。

在化合物中的官能团被描述为“被保护的”时，这是指该基团处于被修饰的形式，以防止在化合物进行反应时在被保护位置发生不期望的副反应。适合的保护基是本领域技术人员已知的，以及参考标准教科书诸如例如，T.W.Greene等人，Protective Groups in organicSynthesis(1991)，Wiley，New York。

在任何变量(例如，芳基，杂环，R²等)在任何构成或在式V中出现超过一次时，其在每次情况时的定义与其在所有其它情况中的定义是无关的。

本文中使用的，术语“组合物”意在包括指定量的指定成分的产物，以及从指定量的指定成分的组合直接或间接得到的任何产物。

本发明化合物的前体药物和溶剂合物也被本文考虑在内。关于前体药物的讨论提供在T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel DeliverySystems(1987)14，the A.C.S.Symposium Series，以及在BioreversibleCarriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche，编者，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press中。术语“前体药物”是指在体内转化以得到式V的化合物或该化合物的可药用的盐、水合物或溶剂合物的化合物(例如药物前体)。所述转化可以通过多种机制发生(例如，通过代谢处理或化学加工)，诸如例如，通过在血液中水解。关于前体药物的使用的讨论由T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugs as NovelDelivery Systems，”the A.C.S.Symposium Series，卷14，以及在Bioreversible Carriers in Drug Design，编者Edward B.Roche，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供。

例如，如果式V的化合物或该化合物的可药用的盐、水合物或溶剂合物包含羧酸官能团，则前体药物可以包括通过用以下的基团代替酸基的氢原子所形成的酯，所述基团诸如例如(C₁-C₈)烷基，(C₂-C₁₂)烷酰基氧基甲基，具有4到9个碳原子的1-(烷酰基氧基)乙基，具有5到10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧基)-乙基，具有3到6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基，具有4到7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基，具有5到8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基，具有3到9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基，具有4到10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基，3-酞基，4-巴豆酸内酯基，γ-丁内酯-4-基，二-N，N-(C₁-C₂)烷基氨基(C₂-C₃)烷基(诸如β-二甲氨基乙基)，氨基甲酰基-(C₁-C₂)烷基，N，N-二(C₁-C₂)烷基氨基甲酰基-(C₁-C₂)烷基和哌啶子基、吡咯烷基或4-吗啉基(C₂-C₃)烷基等。

类似地，如果式V的化合物包含醇官能团，则可以通过用以下基团代替醇基团的氢原子来形成前体药物，所述基团诸如例如，(C₁-C₆)烷酰基氧基甲基，1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基，1-甲基-1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基，(C₁-C₆)烷氧基羰基氧基甲基，N-(C₁-C₆)烷氧基羰基氨基甲基，琥珀酰基(succinoyl)，(C₁-C₆)烷酰基，α-氨基(C₁-C₄)烷基，芳基酰基和α-氨基酰基，或-氨基酰基-α-氨基酰基，其中每个α-氨基酰基基团独立地选自天然存在的L-氨基酸，P(O)(OH)₂，-P(O)(O(C₁-C₆)烷基)₂或糖基(从半缩醛式的碳水化合物除去一个羟基基团得到的自由基)等。

如果式V的化合物包含胺官能团，则可以通过用以下基团来替换胺基团的氢来形成前体药物，所述基团诸如例如，R-羰基，RO-羰基，NRR’-羰基，其中R和R’各自独立地为(C₁-C₁₀)烷基，(C₃-C₇)环烷基，苄基，或R-羰基是天然的α-氨基酰基或天然的α-氨基酰基，-C(OH)C(O)OY¹(其中Y¹为H，(C₁-C₆)烷基或苄基)，-C(OY²)Y³(其中Y²为(C₁-C₄)烷基和Y³为(C₁-C₆)烷基，羧基(C₁-C₆)烷基，氨基(C₁-C₄)烷基或单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷基氨基烷基)，-C(Y⁴)Y⁵(其中Y⁴为H或甲基和Y⁵为单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷基氨基吗啉子基、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基)等。

本发明的一种或多种化合物可以作为未溶剂化的形式以及作为与可药用的溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式存在，并且意在溶剂化和未溶剂化的形式都被包括在本发明内。“溶剂合物”是指本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理结合。这种物理结合涉及不同程度的离子键和共价键，包括氢键。在某些情况中，溶剂合物能够分离，例如在一个或多个溶剂分子并入到结晶固体的晶格中的情况中。“溶剂合物”包括溶液相溶剂合物和可分离的溶剂合物。适合的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇合物、甲醇合物等。“水合物”是其中溶剂分子是H₂O的溶剂合物。

本发明的一种或多种化合物可以任选地被转化为溶剂合物。溶剂合物的制备通常是已知的。因此，例如，M.Caira等人，J.PharmaceuticalSci.，93(3)，601-611(2004)描述了在乙酸乙酯中制备以及从水制备抗真菌药氟康唑的溶剂合物。溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的类似制备方法由E.C.van Tonder等人，AAPS PharmSciTech.，5(1)，文章12(2004)；和A.L.Bingham等人，Chem.Commun.，603-604(2001)描述。典型的非限制性方法涉及在高于环境温度的温度用期望量的期望的溶剂(有机溶剂或水或其混合物)溶解本发明化合物，并以足以形成晶体的速率冷却溶液，然后通过标准方法分离晶体。分析技术，诸如例如，I.R.光谱学，显示作为溶剂合物(或水合物)的晶体中溶剂(或水)的存在。

除非另有说明，本文中使用的术语“有效的”用于描述化合物或组合物的量，所述量在上下文中用于产生或引起预期结果，而无论所述结果涉及治疗包括致癌肿瘤在内的肿瘤或其它癌症还是治疗癌前病变或在细胞表面表达异常或外来的蛋白质或免疫原的其它细胞。相对于抗癌作用，所述作用可以是如下的一种或多种：抑制肿瘤或癌细胞的进一步生长、降低转移的可能性或消除转移或引起肿瘤或癌细胞的细胞死亡、引起肿瘤收缩或癌细胞数目减少、或在患者的肿瘤或癌症减轻之后预防肿瘤或癌症的再生长。

在本说明书中使用的术语“癌症”是指引起癌性或恶性赘生物形成和生长的病理过程，即，由于细胞增殖生长的异常组织，所述生长经常比正常生长更快且在引发新的生长的刺激停止之后继续生长。恶性赘生物表现出部分的或完全的缺乏结构组织和与正常组织的功能协同，且大多数侵害周围组织，转移到几个位置，并可能在尝试除去之后复发和引起患者死亡，除非得到充分治疗。如本文中使用的，术语肿瘤形成用于描述所有的癌性疾病状态且包含或包括与恶性血原性瘤、腹水瘤和实体瘤有关的病理过程。代表性的癌症包括例如尤其是胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑/CNS癌、头颈癌、喉癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、黑素瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、尤因氏肉瘤、小细胞肺癌、绒膜癌、横纹肌肉瘤、维尔姆斯瘤、神经母细胞瘤、毛细胞白血病、口/咽癌癌、食管癌、喉癌、肾癌和淋巴瘤，其可以通过本发明的一种或多种化合物来治疗。

术语“肿瘤”用于描述恶性的或良性的生长或肿胀。

术语“癌症前期的”是指其中细胞以不受控制的方式生长且所述生长尚未发展成为癌性生长的状态。式V的化合物可以形成盐，所述盐也在本发明范围内。应该理解，在本文中描述式V的化合物时也包括描述其盐，除非另有说明。如本文中使用的，术语“盐”表示与无机酸和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机碱和/或有机碱形成的碱性盐。另外，在式V的化合物同时包含碱性部分(诸如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(诸如但不限于羧酸)时，可以形成两性离子(“内盐”)，其也在如本文中使用的术语“盐”的范围内。优选可药用的(即，无毒的、生理学可接受的)盐，但是其它盐也是有用的。式V的化合物的盐可以如下形成：例如使式V的化合物与一定量(诸如一当量)的酸或碱在诸如盐在其中沉淀的介质中反应或者含水介质中反应并随后进行冷冻干燥。

示例性酸加成盐包括醋酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(又称为甲苯磺酸盐)等。另外，通常认为适合于从碱性药用化合物形成药学有用盐的酸由例如P.Stahl等人，Camille G.(编者)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich：Wiley-VCH；S.Berge等人，Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.ofPharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人，The Practice of MedicinalChemistry(1996)，Academic Press，New York；以及在The OrangeBook(Food & Drug Administration，Washington，D.C.在其网站上)进行了讨论。这些公开被并入本文作为参考。

示例性碱性盐包括铵盐；碱金属盐，诸如钠、锂、和钾的盐；碱土金属盐，诸如钙和镁的盐；与有机碱(例如，有机胺)形成的盐，诸如二环己基胺、叔丁基胺的盐；以及与氨基酸形成的盐，诸如精氨酸、赖氨酸等的盐。包含碱性氮的基团可以用诸如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如，二甲基、二乙基、和二丁基的硫酸盐)、长链卤化物(例如，癸基、十二烷基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基溴化物和苯乙基溴化物)、和其它的试剂进行季铵化。

意在所有这种酸性盐和碱性盐都是本发明范围内的可药用盐，且对于本发明的目的而言，所有的酸性盐和碱性盐都被考虑为等价于相应化合物的游离形式。

本发明化合物的可药用的酯包括以下组：(1)通过羟基基团的酯化得到的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分选自直链或支链的烷基(例如，乙酰基、正丙基、叔丁基、或正丁基)、烷氧基烷基(例如，甲氧基甲基)、芳烷基(例如，苄基)、芳基氧基烷基(例如，苯氧基甲基)，芳基(例如，任选地被例如卤素，C_1-4烷基，或C_1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯，诸如烷基-或芳烷基磺酰基(例如，甲烷磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如，L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)膦酸酯和(5)单、二或三磷酸酯。磷酸酯可以进一步被酯化，例如用C_1-20醇或其反应性衍生物，或用2，3-二(C_6-24)酰基甘油。

式V的化合物及其盐、溶剂合物、酯和前体药物可以以其互变异构形式存在(例如，作为酰胺或亚氨醚)。在本文中，所有这种互变异构形式都被考虑为本发明的一部分。

式V的化合物可以包含不对称中心或手性中心，并由此以不同的立体异构形式存在。意在式V的化合物的所有立体异构形式及其混合物，包括外消旋混合物，形成本发明的一部分。另外，本发明包含所有的几何异构体和位置异构体。例如，如果式V的化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式以及混合物形式都被包括在本发明范围内。

可以基于其物理化学差异通过本领域技术人员公知的方法将非对映体混合物分离为单独的非对映体，诸如例如通过色谱法和/或分级结晶。可以如下分离对映异构体：通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂，诸如手性的醇或Mosher′s酰氯)反应将对映异构体混合物转化为非对映体混合物，分离非对映体并且将单独的非对映体转化(例如，水解)为相应的纯的对映异构体。另外，一些式V的化合物可以是阻转异构体(例如，被取代的联芳基)并且被认为是本发明的一部分。对映异构体还可以通过使用手性的HPLC柱来分离。

还有可能的是，式V的化合物可以以不同的互变异构形式存在，且所有这种形式都被包括在本发明范围内。另外，在本发明中包括该化合物的所有的酮-烯醇和亚胺-烯胺形式。

本发明化合物(包括该化合物的盐、溶剂合物、酯和前体药物，以及前体药物的盐、溶剂合物和酯)的所有的立体异构体(例如，几何异构体、光学异构体等)，诸如可以由于不同取代基上的不对称碳而存在的那些(包括对映体形式(其甚至可以在没有不对称碳的情况下存在)、旋转异构形式、阻转异构体、和非对映形式)，都被考虑在本发明范围内，位置异构体也是一样(诸如例如，4-吡啶基和3-吡啶基)。(例如，如果式V的化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式以及混合物形式都被包括在本发明范围内。另外，例如，在本发明中包括该化合物的所有的酮-烯醇和亚胺-烯胺形式。)本发明化合物的单独的立体异构体可以例如，基本上不含其它异构体，或者可以是混合的，例如，作为外消旋物或与所有其它立体异构体或其它选定立体异构体混合。本发明的手性中心可以具有如IUPAC 1974 Recommendations所定义的S或R构型。对于术语“盐”、“溶剂合物”、“酯”、“前体药物”等的使用意在同样地适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋物或前体药物的盐、溶剂合物、酯和前体药物。

本发明还包含同位素标记的本发明化合物，其与本文中列举的化合物相同，不同之处在于一个或多个原子被具有原子质量或质量数与通常在自然界中发现的原子质量或质量数不同的原子所代替。可以被并入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为诸如²H，³H，¹³C，¹⁴C，¹⁵N，¹⁸O，¹⁷O，³¹P，³²P，³⁵S，¹⁸F，和³⁶Cl。

某些同位素标记的式V的化合物(例如，用³H和¹⁴C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布试验。氚化(即，³H)和碳-14(即，¹⁴C)同位素由于容易制备和可检测性是特别优选的。另外，用较重同位素诸如氘(即，²H)置换可以实现由更大代谢稳定性所带来的某些治疗利益(例如，延长体内半衰期或降低剂量需要)并因此在一些情况中可能是优选的。同位素标记的式V的化合物通常可以通过与以下反应路线和/或实施例中公开的那些相类似的方法来制备，用适当的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂。

式V的化合物以及式V的化合物的盐、溶剂合物、酯和前体药物的多晶型形式意在包括在本发明范围内。

本发明的化合物具有药理学性质，特别是，式V的化合物可用作基于靶向机制的关卡调节剂。式V的化合物可用作基于靶向机制的关卡激酶活化剂，所述关卡激酶诸如例如，关卡激酶1(“Chk1”)、关卡激酶2(“Chk2”)等。特别地，它们是基于靶向机制的Chk1活化剂。

本发明的化合物具有RNR抑制剂的期望特征，诸如例如，CHK-1的基于机制的活化、与CHK-1抑制剂协同作用等。

作为关卡调节剂，本发明的化合物具有药理学用途。因此，本发明包括通过对患者给予治疗有效量的至少一种式V的化合物以基于机制的途径调节所述患者的细胞周期关卡的方法。

作为关卡活化剂，本发明的化合物具有药理学用途。因此，本发明包括通过对患者给予治疗有效量的至少一种式V的化合物以基于机制的途径活化所述患者的关卡激酶(例如，Chk1、Chk2等)的方法。

本发明还包括通过对患者给予至少一种式V的化合物来治疗所述患者的癌症的方法。

本发明还包括通过给予至少一种式V的化合物活化患者中的关卡激酶(例如，Chk1)来治疗所述患者的癌症的方法。

本发明包括组合物，例如，包括至少一种式V的化合物的药物组合物。对于从本发明所述的化合物制备药物组合物，惰性的、可药用的载体可以是固体或液体。固体形式制备物包括粉剂、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以包括约5到约95％的活性成分。适合的固体载体是本领域中已知的，例如，碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。可以将片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊用作适合于口服给药的固体剂型。其它载体包括Poloxamer、Povidone K17、Povidone K12、Tween80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400丙二醇、Trappsol、α环糊精或其类似物、β环糊精或其类似物、或γ环糊精或其类似物。可药用的载体的实例以及生产各种组合物的方法可以在A.Gennaro(编者)，Remington’s Pharmaceutical Sciences，18^th Edition，(1990)，MackPublishing Co.，Easton，Pennsylvania中找到。

本发明的治疗剂优选配制为药物组合物，然后根据本发明的方法，将药物组合物以适合于所选给药途径的各种形式对受试者诸如人受试者给药。例如，治疗剂可以配制为用于静脉内给药。然而，制剂可以包括适合于经口、直肠、阴道、局部、经鼻、经眼、或其它非肠道给药(包括皮下、肌肉内、鞘内、腹膜内、和瘤内)给药的那些。

适合于非肠道给药的制剂方便地包括活性剂的无菌含水制备物、或活性剂的无菌粉末分散体，并优选与接受者的血液是等渗的。治疗剂的非肠道给药(例如，通过I.V.滴注)是另一种给药形式。可以包括在液体制备物中的等渗剂包括糖、缓冲剂和氯化钠。可以在水中制备活性剂的溶液，任选地与无毒的表面活性剂相混合。可以在水、乙醇、多元醇(诸如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、甘油酯、及其混合物中来制备活性剂的分散体。最终的剂型是无菌的、流体的、并在生产和储存条件下是稳定的。必要的流动性可以例如通过使用脂质体、在分散体的情况中采用适当的粒径、或使用表面活性剂来实现。液体制备物的灭菌可以通过保持活性剂的生物活性的任何便利方法来实现，优选通过过滤器灭菌实现。制备粉剂的优选方法包括将无菌的可注射溶液真空干燥和冷冻干燥。可以使用各种抗微生物剂来预防随后的微生物污染，例如，抗菌剂、抗病毒剂和抗真菌药，包括对羟基苯甲酸酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。可以通过包括用于延迟的试剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现活性剂在延长时间段内的吸收。

适合于口服给药的本发明的制剂可以作为离散的单元存在，诸如片剂、刻痕片、胶囊、锭剂、糯米纸囊剂或扁囊剂，各自包含预定量的活性成分作为粉末或颗粒存在，作为包含第一和/或第二治疗剂的脂质体存在，或作为在含水液体或非水液体中的溶液或悬浮液存在，诸如糖浆剂、酏剂、乳剂、或饮剂(draught)。这种组合物和制备物可以包含至少约0.1重量％的活性剂。治疗剂的量应该使得剂量水平对于在受试者体内产生期望的结果是有效的。

鼻喷雾制剂包括活性剂与防腐剂和等渗剂的纯化水溶液。优选将这种制剂调节到与鼻粘膜相容的pH和等渗状态。用于直肠或阴道给药的制剂可以作为栓剂存在，使用适合的载体诸如可可脂、或氢化的脂肪或气化的脂肪羧酸。眼科制剂可以通过与鼻喷雾类似的方法来制备，不同之处在于优选将pH和等渗因子调节为与眼睛相匹配。局部用制剂包括溶解或悬浮在一种或多种介质(诸如，矿物油、石油、多元醇、或用于局部药物制剂的其它基质)中的活性剂。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可以包含以下的一种或多种：粘合剂，诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖、或阿斯巴甜；和天然的或合成的调味剂。在单位剂型是胶囊时，它可以另外包含液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。可以存在有多种其它物质作为包衣，和用于以其它方式修饰固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂、或胶囊可以用明胶、蜡、虫胶、糖等来包衣。糖浆剂或酏剂可以包含以下的一种或多种：甜味剂；防腐剂，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；延迟糖结晶化的试剂；提高任何其它成分的溶解度的试剂，诸如多元醇，例如甘油或山梨醇；染料；和调味剂。用于制备任何单位剂型的材料在所用量是基本上无毒的。可以将活性剂并入到持续释放制备物和装置中。

优选地，将化合物经口给药、腹膜内给药、或静脉内或鞘内给药、或以一些适合的联合形式给药。

将小分子治疗剂如吉西他滨给药的方法是本领域中公知的。抗肿瘤剂的剂量计算由例如Gurney H.，J.Clin.Oncol.，14，2590-2611举例说明。将在小鼠和其它动物中的有效剂量外推到人用的方法也是本领域中已知的，例如参见美国专利4,938,949。还可以由本领域技术人员容易地从文献来确定用于单独的治疗剂的剂量计算。例如，吉西他滨以及许多其它药物的剂量和临床研究可以在美国食品和药品管理中心的药物评价和研究网址(the U.S.Food and Drug Administration Center for DrugEvaluation and Research)找到，以及从伴随市售治疗剂的资料中找到，诸如

(Eli Lilly and Company)的产品资料、市售的吉西他滨HCL可注射形式(PV 4046 AMP；Eli Lilly and Company，2005)。

可以将在本发明中描述的治疗剂单独或与本文中所述的其它活性剂一起(共同给药，任选地但非必需地，在单一的制剂中)对受试者给药，并且优选用可药用的缓冲液给药。可以将治疗剂与用于对受试者给药的多种生理学可接受的载体、添加剂组合在一起，包括本领域技术人员已知的各种稀释剂或赋形剂。例如，对于非肠道给药而言，优选等渗盐水。对于局部给药而言，可以使用霜剂，其包括诸如二甲基亚砜(DMSO)的载体、或典型地在局部用霜剂中发现的不阻断或抑制肽活性的其它试剂。其它适合的载体包括但不限于醇、磷酸盐缓冲盐水、和其它平衡盐溶液。

制剂可以方便地作为单位剂型存在并且可以通过药剂学领域中的任何公知方法来制备。优选地，这种方法包括使治疗剂(即，活性剂)与构成一种或多种辅助剂的载体相结合的步骤。通常，如下制备制剂：将活性剂与液体或细分散的固体载体或其两者均匀并密切地结合，且如有必要，然后将产品成形为期望的制剂。本发明的方法包括以有效产生预期效果的量对受试者给予治疗剂。治疗剂可以作为单个剂量或多剂量给药。可以通过将活性剂在动物模型中的体外活性和体内活性相比较来确定有用的活性剂剂量。

所使用的实际剂量可以取决于患者的需要和所治疗的病况的严重程度而变化。对于特定情况的适当的给药方案的确定在本领域技术人员的能力范围内。为了方便起见，可以根据需要将总的日剂量分开并且在一天中作为多个部分给药。

根据现场的临床医师的判断来调节本发明的化合物和/或其可药用的盐的给药量和给药频率，并考虑到诸如年龄、病况和患者大小以及所治疗症状的严重程度等因素。用于口服给药的典型的推荐日剂量方案可以为约1mg/天到约500mg/天，优选1mg/天到200mg/天，分为2-4个分剂量。

本发明的另一个方面是试剂盒，所述试剂盒包括治疗有效量的至少一种式V的化合物或所述化合物的可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物，以及可药用的载体、媒介物或稀释剂。

在其中给药第一治疗剂来提高受体表达和给药第二治疗剂来靶向受体的实施方案中，可以将第一治疗剂和第二以单剂量或以多剂量共同或分别给药。在给药第一治疗剂之后的给药第二治疗剂提供了使第一治疗剂有时间增强癌细胞中受体表达从而促进第二治疗剂靶向癌症的利益。第二治疗剂可以在第一治疗剂给药之后的多达2周时给药，或者仅在其后的2天或甚至更短，诸如第一治疗剂给药之后的24小时。在优选实施方案中，第二治疗剂在第一治疗剂给药之后的约3-6天时给药。

此外，通过给药第一治疗剂和第二治疗剂来治疗罹患癌症或癌症前期病况的受试者可能导致相加作用。更优选地，通过给药第一治疗剂和第二治疗剂进行治疗引起协同治疗作用。如本文中定义的，在结合使用第一治疗剂和第二治疗剂进行治疗时引起的肿瘤负载减小或生长延迟大于在使用本发明的第一治疗剂和第二治疗剂分别进行治疗时的效果加在一起时所观察到的肿瘤负载减小或生长延迟时，则认为发生了协同作用，其中在分别使用或在联合使用时，剂量和治疗时间表的其它方面是相同的。如果存在协同作用，则将联合治疗与加在一起的单独治疗的效果相比较得到大于1的比值(即，大于100％)。优选地，通过本发明的方法提供的协同作用具有至少为2的比值(即，至少200％)，且更优选所述协同作用具有至少为3的比值(即，至少300％)。

本发明的又一个方面是组合物，例如，药物组合物，包括与至少一种关卡激酶抑制剂(诸如，Chk1抑制剂、Chk2抑制剂等)或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物相联合的至少一种式V的化合物或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物。优选地，所述药物组合物包括与至少一种Chk1抑制剂或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物联合的至少一种式V的化合物或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物。用于这种联合的适合的Chk1抑制剂公开在前述的US 2007/0083044，US2007/0082900，US 2007/0105864和US 2007/0117804中，所述文献被并入本文作为参考。其它适合的关卡激酶抑制剂包括例如UCN-01(KW-24101；7-羟基十字孢碱；得自Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd.，Tokyo，Japan和Keryx Biopharmaceuticals，Inc.，New York，New York)，Lilly/ICOS IC83/LY2603618(得自Eli Lilly，Indianapolis，Indiana)，XL-844(EXEL-9844，来自Exelixis)，AZD7762(得自Astra Zeneca)，PF-394691(得自Pfizer)，PF-473336(得自Pfizer)等。

适合于根据本发明的一个方面作为联合用试剂的优选Chk1抑制剂的非限制性实例是吡唑并嘧啶化合物或咪唑并吡嗪化合物或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物。适合的吡唑并嘧啶的非限制性实例公开在US 2007/0072881，US 7,161,003，US 7,119,200，US 7,196,078，US7,067,661，US 7,205,308，US 2007/0072880，US 7,078,525，US 7,196,092，US 2007/0072882，US 7,084,271，和US 7,074,924中，所述文献被并入本文作为参考。适合的咪唑并吡嗪的非限制性实例公开在US 6,919,341，US 2006/0106023，US 2007/0105864，US 2007/0117804，US 7,186,740，美国专利申请11/758,243(2007年6月5日提交)，美国临时专利申请60/858,244(2006年11月8日提交)和美国临时专利申请60/943,999(2007年6月14日提交)中，所述文献被并入本文作为参考。

根据本发明的一个方面适合作为联合用试剂的优选的吡唑并嘧啶化合物的非限制性实例是以下化合物：

或其可药用的盐、酯或前体药物。

根据本发明的一个方面适合于作为联合用试剂的更优选的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物的非限制性实例是以下化合物或其可药用的盐、酯或前体药物：

根据本发明的一个方面适合作为联合用试剂的优选的咪唑并吡嗪化合物的非限制性实例是以下化合物：

或其可药用的盐、溶剂合物或酯。

优选适合的咪唑并吡嗪化合物的非限制性实例如下所示：

或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物。

前述的US 2007/0072881，US 7,161,003，US 7,119,200，US 7,196,078，US 7,067,661，US 7,205,308，US 2007/0072880，US 7,078,525，US7,196,092，US 2007/0072882，US 7,084,271，和US 7,074,924，US6,919,341，US 2006/0106023，US 2007/0083044，US 2007/0082900，US2007/0105864，US 2007/0117804，US 7,186,740，美国专利申请11/758,243(2007年6月5日提交)，美国临时专利申请60/858,244(2006年11月8日提交)和美国临时专利申请60/943,999(2007年6月14日提交)描述了可以用作这种CHK-1抑制剂的联合用试剂用于治疗各种疾病的各种另外的治疗剂(“抗癌试剂”)。这些公开被认为是以其整体并入本发明，并由此其中的这种联合用试剂应该也被认为是在考虑使用本发明的化合物进行治疗时可用作另外的联合用试剂。

在另一个实施方案中，本发明涉及通过对受试者给予至少一种式V的细胞周期关卡调节剂或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物来治疗受试者的炎症、关节炎、病毒病、神经变性疾病诸如阿尔茨海默病、心血管疾病、和真菌病的方法。

在另一个实施方案中，本发明涉及通过对受试者给予与适合的第二种试剂联合的至少一种式V的细胞周期关卡调节剂或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物来治疗受试者的炎症、关节炎、病毒病、神经变性疾病诸如阿尔茨海默病、心血管疾病、和真菌病的方法，所述第二种药物诸如抗炎药、抗感染药、抗真菌药、抗微生物药、心血管或中枢神经系统用药。

在另一个实施方案中，本发明涉及通过在使得癌症得到治疗的情况下给予受试者治疗有效量的至少一种式V的细胞周期关卡调节剂或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物以及关卡激酶抑制剂(例如，Chk1抑制剂/Chk2抑制剂等)或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物来治疗受试者的癌症的方法。在一个实施方案中，所述关卡激酶抑制剂是Chk1抑制剂。在另一个实施方案中，癌症选自多发性骨髓瘤、慢性髓细胞性白血病、胰腺癌、非小细胞肺癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、非黑素瘤皮肤癌、血液学肿瘤、血液学肿瘤、血液学恶性肿瘤、儿童期白血病、儿童期淋巴瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病、淋巴细胞起源的淋巴瘤、皮肤起源的淋巴瘤、急性白血病、慢性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、浆细胞赘生物、淋巴样赘生物和与AIDS有关的癌症。癌症的非限制性实例包括：膀胱肿瘤、乳癌(包括BRCA突变的乳腺癌)、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、食管癌、膀胱癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特淋巴瘤；

慢性淋巴细胞性白血病(“CLL”)，

急性和慢性髓细胞性白血病、脊髓发育异常综合征和早幼粒细胞白血病；

纤维肉瘤、横纹肌肉瘤；

头颈癌、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤；

星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、恶性神经胶质肿瘤、星形细胞瘤、肝细胞癌、胃肠基质肿瘤(“GIST”)和神经鞘瘤；

黑素瘤、多发性骨髓瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、色素性干皮病、角化棘细胞瘤(keratoctanthoma)、甲状腺毛囊癌症、和卡波西肉瘤。

上述描述相当概括地阐述了本发明的更重要的特征，以便可以更好地理解随后的发明详述以及更好地理解本发明对现有技术的贡献。本发明的其它目的和特征可以通过以下实施例并结合附图而变得显而易见。然而，应该理解，所述附图只用于说明的目的，而非作为本发明范围的定义，对于本发明的定义应该参考权利要求。

本发明化合物的药理学性质可以通过许多药理学试验来证实。已经对本发明的化合物和它们的盐、溶剂合物、酯或前体药物进行了本文中以下所述的示例性药理学试验。

通过以下制备和实施例来举例说明本文中公开的本发明，不应将其理解为限制本公开的范围。可供选择的机械途径和类似结构对于本领域技术人员来说是显而易见的。

在操作和反应路线中使用以下缩写：

ACN 乙腈

AcOH 乙酸

Aq 含水的

BINAP 2，2′-双(二苯膦基)-1，1′-联萘

BOC 叔丁氧基羰基

BOC-ON [2-(叔丁氧基羰基氧基亚胺基)-2-苯基乙腈]

BOC₂O BOC酸酐

Bz 苯甲酰基

C 摄氏温度

Calcd 计算的

CBZCl 氯甲酸苄基酯

CDI 羰基二咪唑

dba 二苄叉丙酮

DBU 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯

DCE 1，2-二氯乙烷

DCM 二氯甲烷

DEAD 偶氮二甲酸二乙酯

(DHQ)2PHAL 氢化奎宁1，4-酞嗪二基二醚

DIAD 偶氮二甲酸二异丙基酯

DIPEA 二异丙基乙基胺

DMA N，N-二甲基乙酰胺

DMAP 4-二甲氨基吡啶

DME 二甲氧基乙烷

DMF 二甲基甲酰胺

DMFDMA N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛

DMPU 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1h)-嘧啶酮

DMSO 二甲基亚砜

dppf 1，1′-双(二苯膦基)二茂铁

EDCI 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

EI 电子电离

Eq 当量

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

F-TEDA 1-氯甲基-4-氟-1，4-重氮双环[2，2，2]辛烷双(四氟硼酸

盐)

g 克

h. 小时

¹H 质子

HATU N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟

磷酸盐

HCl 氯化氢

Hex 己烷

HOBT 1-羟基苯并三唑

HPLC 高压液相色谱法

LAH 氢化铝锂

LCMS 液相色谱-质谱

LDA 二异丙基氨基锂

LHMDS 六甲基二甲硅烷基氨基锂

M 摩尔浓度

mmol 毫摩尔

mCPBA 间氯过苯甲酸

Me 甲基

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

min 分钟

mg 毫克

MHZ 兆赫

mL 毫升

MPLC 中压液相色谱法

MsO 甲磺酸盐/酯(甲烷磺酸盐/酯)

Ms 甲烷磺酰基

MS 质谱

N 当量(normal)

NaHCO₃ 碳酸氢钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

NMR 核磁共振

NBS N-溴琥珀酰亚胺

NCS N-氯琥珀酰亚胺

NIS N-碘琥珀酰亚胺

nm 纳米

NMM N-甲基吗啉

NsO 对硝基苯磺酸盐

Obsd 实测的

ON 过夜

PCC 吡啶鎓氯甲酸盐

Ph 苯基

PTLC 制备性薄层色谱法

PyBop (苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐

PyBrOP 溴-三-吡咯烷基-磷鎓六氟磷酸盐

Pyr 吡啶

RT 室温

Satd 饱和的

SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基

sgc 硅胶60色谱法

soln 溶液

tBOC 叔丁氧基羰基

TBAF 四丁基氟化铵

TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TIPS 三异丙基甲硅烷基

TLC 薄层色谱法

TMS 三甲基甲硅烷基

Ts 对甲苯磺酰基

TsO 对甲苯磺酸盐(对甲苯磺酸酯)

t_R 保留时间

UV_254nm 254nm的紫外光

在以下仪器上获得NMR谱：400MHZ NMR(Bruker)，500MHZNMR(Bruker)，400MHz NMR(Varian)，300MHZ NMR(Varian)，使用CD₃OD，CDCl₃或DMSO-d₆作为溶剂。使用PESciex API 150EX四极质谱仪以电喷雾离子化模式获得LC-MS数据。在提供LC/MS数据时，使用以下条件进行分析：Applied Biosystems API-100质谱仪和ShimadzuSCL-10A LC柱：Altech铂C18，3微米，33mmx7mm ID；梯度流动：0分钟-10％ CH₃CN，5分钟-95％ CH₃CN，7分钟-95％ CH₃CN，7.5分钟-10％ CH₃CN，9分钟-停止。给出了保留时间和观察到的母体离子。

使用C18反相柱通过反相色谱法(Gilson)进行纯化，使用(0.1％甲酸)5∶95到90∶10乙腈∶水的梯度，流速为14mL/min。使用UV检测收集样品。或者使用ISCO Companion，采用(0.1％甲酸)5∶95到95∶5乙腈∶水，流速＝10-55mL/min。

正相硅胶色谱法在Biotage仪器上进行，使用

12/M，25/M，或40/M快速滤筒(flash cartridge)；或在Jones Flash Master Personal仪器上进行，使用Isolute flash SI 5g，10g，20g，50g，或70g滤筒；或在ISCOCombiFlash Rf系统上进行，使用RediSep Rf硅胶、碱性氧化铝或胺柱。

实施例

制备例10：

在25℃将盐酸吉西他滨(Gemcitibine-hydrochloride，3.00g，10.01mmol)的DMF(20.1mL)溶液用咪唑(2.04g，3.00当量)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.66g，1.10当量)处理。将溶液在25℃搅拌15小时。将溶剂蒸发并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含10-40％MeOH的梯度。MH⁺＝378。

制备例20：

将得自制备例10的甲硅烷基醚(3.52g，9.32mmol)的吡啶(47mL)溶液在25℃依次用4-二甲氨基吡啶(1.71g，1.50当量)和苯甲酰氯(2.71mL，2.50当量)处理。将溶液在25℃搅拌15小时。将溶液浓缩并将残余物溶解于CH₂Cl₂(100ml)。有机层用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)，饱和NaCl水溶液(50mL)，和水(100mL)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物使用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含10-50％丙酮的梯度。MH⁺＝586。

制备例30：

将得自制备例20的甲硅烷基醚(4.64g，7.92mmol)在1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(30.6mL，3.86当量)中的溶液在25℃用乙酸(3.06mL，6.74当量)处理。将溶液在25℃搅拌3小时。将溶液浓缩并将残余物在水(100mL)和CH₂Cl₂(50mL)之间分配。水层进一步用CH₂Cl₂提取(2x50mL)。合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物使用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含25-50％丙酮的梯度。MH⁺＝472。

制备例40：

将得自制备例30的醇(3.73g，7.91mmol)的吡啶(79mL)溶液在0℃依次用对甲苯磺酰氯(6.03g，4.00当量)和三乙胺(2.20mL，2.00当量)处理。将溶液在0℃搅拌3小时，去掉冰浴并继续在25℃搅拌15小时。将溶液浓缩并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含0-25％丙酮的梯度。

实施例50：

将得自制备例40的甲苯磺酸酯(0.15g，0.17mmol)和2-甲氧基乙胺(0.073mL，5当量)的DMF(0.67mL)溶液在密封管中在100℃加热3小时。将溶液冷却到室温并减压浓缩。残余物使用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含0-40％MeOH的梯度。得到白色固体(0.011g，20％)。¹HNMR(CD₃OD)δ7.67(d，J＝7.3Hz，1H)，6.19(t，J＝8.8Hz，1H)，5.91(d，J＝7.3Hz，1H)，4.06-4.14(m，1H)，3.92-3.97(m，1H)，3.50(t，J＝5.1Hz，2H)，3.35(s，3H)，3.05(dd，J＝2.9Hz，J＝13.0Hz，1H)，2.97(dd，J＝2.9Hz，J＝13.0Hz，1H)，2.82-2.85(m，2H)；MH⁺＝321。

实施例60-170：

根据实施例50中所述的操作，使用或不使用DMF作为溶剂，仅使用在表10的第一列中的亲核试剂，制备在表10的第二列中的化合物。

表10

制备例180：

将得自制备例40的甲苯磺酸酯(0.11g，0.17mmol)和N，N-二甲基乙二胺(0.38mL，20当量)的溶液在密封管中在100℃加热12小时。将溶液冷却到室温并减压浓缩。残余物使用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中的10％7N NH₃-MeOH溶液。得到白色固体(0.010g，14.2％)。¹H NMR(CD₃OD)δ7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，6.18(t，J＝8.7Hz，1H)，5.88(d，J＝8.0Hz，1H)，4.07-4.15(m，1H)，3.92-3.98(m，1H)，3.50-3.55(m，2H)，3.31(s，6H)，3.04(dd，J＝3.7Hz，J＝13.2Hz，1H)，2.95(dd，J＝7.3Hz，J＝13.2Hz，1H)，2.77-2.81(m，2H)，2.50-2.58(m，4H)，2.29-2.30(m，12H)；MH⁺＝405。进一步的洗脱得到表XX中的实施例100。

制备例190：

将得自制备例40的甲苯磺酸酯(2.06g，3.29mmol)在含7N NH₃的MeOH溶液(100mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。将溶液浓缩并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在CH₂Cl₂中含10-30％MeOH的梯度。得到白色固体(0.80g，58％)。用在CH₂Cl₂中含30-80％MeOH的梯度进一步洗脱得到吉西他滨。

实施例200：

将得自制备例190的甲苯磺酸酯(0.250g，0.599mmol)，正丁基胺(1.78mL，30当量)的溶液在密封的1打兰小瓶中在40℃加热20小时。将溶液冷却到25℃并浓缩。残余物通过制备性色谱法进行纯化使用含20％7N NH₃-MeOH/CH₂Cl₂作为洗脱剂。得到白色固体(0.160g，83.9％)。¹H NMR(CD₃OD)δ7.66(d，J＝7.3Hz，1H)，6.16(t，J＝8.0Hz，1H)，5.91(d，J＝7.3Hz，1H)，4.07-4.15(m，1H)，3.94-3.98(m，1H)，2.95-3.07(m，2H)，2.68(t，J＝7.3Hz，2H)，1.48-1.55(m，2H)，1.32-1.41(m，2H)，0.94(t，J＝7.3Hz，3H)；MH⁺＝319。

实施例210-350：

根据在实施例200中所述的操作，在使用或不使用DMF作为溶剂的情况下，仅使用在表20的第一列中的不同的亲核试剂，制备表20的第二列中的化合物。

表20

实施例360：

将得自制备例190的甲苯磺酸酯(0.050g，0.120mmo1)，2-甲氧基苯胺(0.27mL，20当量)的溶液在密封的1打兰小瓶中在90℃加热10小时。将溶液冷却到25℃。残余物通过制备性色谱法进行纯化，使用含10％MeOH的CH₂C1₂作为洗脱剂。得到固体(0.006g，13.4％)。¹HNMR(CD₃OD)δ7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，6.75-6.84(m，4H)，6.64-6.67(m，1H)，6.17(t，J＝8.0Hz，1H)，5.81(d，J＝7.3Hz，1H)，4.13-4.21(m，1H)，4.04-4.19(m，1H)，3.86(s，3H)，3.68(dd，J＝2.9Hz，J＝14.6Hz，1H)，3.52(dd，J＝4.4Hz，J＝15.4Hz，1H)；MH⁺＝369。

实施例370：

根据实施例360中所述的操作，仅使用在表30的第一列中的亲核试剂，制备表30的第二列中的化合物。

表30。

制备例380：

将起始原料(2.00g，4.50mmol)在无水吡啶(15mL)中的溶液在25℃依次用苯甲酰氯(1.90g，13.5mmol)和DMAP(0.41g，3.37mmol)处理。将混合物在25℃搅拌20小时，倾倒在NaHCO₃饱和水溶液(100mL)中并用CH₂Cl₂提取(3x30mL)。合并的提取物用Na₂SO₄干燥过滤并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用3∶1 CH₂Cl₂/EtOAc作为洗脱剂。得到1.64g(67％)的产物，为白色固体。MH⁺＝550。

制备例390：

将乙酸(1.20g，20.0mmol)加入到搅拌的得自制备例1000的产物(1.60g，2.91mmol)和四丁基氟化铵(1.0M，在THF中，11.4mL)的混合物中。将混合物在25℃搅拌1.5小时，蒸发溶剂并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用25∶1 CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到1.20g(95％)的产物，为白色固体。MH⁺＝436。

制备例400：

在25℃将三乙胺(255mg，2.53mmol)加入到得自制备例1010的产物(500mg，1.15mmol)和TsCl(877mg，4.60mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌24小时，倾倒在NaHCO₃饱和水溶液(150mL)中并用CH₂Cl₂提取(2x30mL)。合并的提取物用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用3∶1 CH₂Cl₂/EtOAc作为洗脱剂。得到504mg(75％)的产物，为略带橙色的固体。MH⁺＝590。

制备例410：

将起始原料(452mg，1.00mmol)和TsCl(200mg，1.05mmol)在无水吡啶(6mL)中的溶液在25℃搅拌24小时。将混合物倾倒在NaHCO₃饱和水溶液(100mL)中并用CH₂Cl₂提取(3x20mL)。合并的提取物用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用3∶1CH₂Cl₂/EtOAc作为洗脱剂。得到350mg(58％)的产物，为略带橙色的固体。MH⁺＝607。

制备例420A和420B：

通过与制备例1021中所述基本上相同的操作制备标题化合物，并通过硅胶色谱法进行分离，使用20∶1 CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。分离得到期望的较大极性的产物1022A，为无色的固体。MH⁺＝516。

制备例430：

将得自制备例1020的产物(160mg，0.27mmol)和2-甲氧基乙基胺(0.20mL，2.24mmol)在无水DMF(1.0mL)中的溶液在密闭烧瓶中在25℃搅拌72小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用4∶1CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到62mg(59％)的产物，为白色固体。MH⁺＝389。

制备例440：

将得自制备例1030的产物(30mg，0.077mmol)，含7N NH₃的MeOH(1.0mL)和二氧杂环己烷(0.3mL)的溶液在密闭的压力容器中在25℃搅拌20小时。蒸发溶剂并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用3∶1CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到6mg(27％)的产物，为无色的固体。MH⁺＝285。

制备例450：

将得自制备例1021的产物(100mg，0.165mmol)和2-甲氧基乙基胺(0.20mL，2.24mmol)在无水DMF(0.6mL)中的溶液在密闭烧瓶中在25℃搅拌24小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用4∶1CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到8mg(16％)的产物，为无色的固体。MH⁺＝302。

制备例460：

得自制备例1022A的产物(27mg，0.066mmol)和2-甲氧基乙基胺(0.10mL，1.12mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在密闭烧瓶中在25℃搅拌72小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用8∶1CH₂C1₂/7N NH₃(在MeOH中)作为洗脱剂。得到11mg(53％)的产物，为无色的固体。MH⁺＝315。

制备例470：

在25℃将1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基-二硅氧烷(1.70mL，5.50mmol)加入到起始原料(1.22g，5.00mmol)在无水吡啶(20mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌2小时，蒸发并将残余物在H₂O(100mL)和CH₂Cl₂(50mL)之间分配。水相部分用CH₂Cl₂提取(2x50mL)并将合并的提取物用MgSO₄干燥，过滤，蒸发溶剂然后向残余物加入PhCH₃(2x100mL)并将其蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用15∶1 CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到1.70g(70％)的产物，为白色固体。MH⁺＝486。

制备例480：

将得自制备例1050的产物(1.60g，3.30mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在25℃用苯甲酰氯(1.16g，8.25mmol)处理。将混合物在25℃搅拌20小时，倾倒在NaHCO₃饱和水溶液(100mL)中并用CH₂Cl₂提取(3x30mL)。合并的提取物用MgSO₄干燥，过滤并蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用2∶1 CH₂Cl₂/EtOAc作为洗脱剂。得到2.08g(91％)的产物，为白色固体。MH⁺＝694。

制备例490：

将得自制备例1051的产物(0.50g，0.72mmol)和四丁基氟化铵(1.0M，在THF中，3.0mL)的混合物在25℃搅拌1.5小时，蒸发溶剂并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用20∶1 CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到定量收率的产物(白色固体)。MH⁺＝452。

制备例500：

得自制备例1052的产物(350mg，0.77mmol)和TsCl(152mg，0.80mmol)在无水吡啶(5mL)中的溶液在25℃搅拌48小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用40∶1 CH₂Cl₂/MeOH作为洗脱剂。得到190mg(41％)的产物，为白色固体。MH⁺＝606。

制备例510：

得自制备例1053的产物(100mg，0.17mmol)和2-甲氧基乙基胺(0.15mL，1.68mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在密闭烧瓶中在25℃搅拌72小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用4∶1CH₂Cl₂/含7N NH₃的MeOH作为洗脱剂。得到12mg(24％)的产物，为白色固体。MH⁺＝301。

制备例520：

得自制备例1053的产物(40mg，0.066mmol)和正丁基胺(0.10mL)在无水DMF(0.2mL)中的溶液在密闭烧瓶中在25℃搅拌72小时，然后加入另外的正丁基胺(0.10mL)并将混合物在密闭烧瓶中在25℃搅拌额外的24小时。将溶剂蒸发并将残余物通过硅胶色谱法纯化，使用4∶1CH₂Cl₂/含7N NH₃的MeOH作为洗脱剂。得到11mg(56％)的产物，为白色固体。MH⁺＝299。

如下所述或以与之相似的方式制备以下化合物。

实施例600：

部分A：

在氩气气氛下向圆底烧瓶添加化合物30(0.78g，1.65mmol)，吡啶(30mL)和三乙胺(1.2mL，8.25mmol)随后加入甲烷磺酰氯(0.26mL，3.3mmol)。将反应混合物室温搅拌2小时并浓缩。残余物用二氯甲烷(3X30mL)和1 N HCl(10mL)稀释，并将分离的水层用DCM提取(3X30mL)。合并的有机层用NaHCO₃饱和水溶液(2X20mL)，盐水(2X30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO₂，10％甲醇/DCM)，得到600A(0.86g；95％)，为白色固体。HPLC-MS t_R＝2.12分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₄H₂₁F₂N₃O₈S 549.10，实测值，LCMS m/z550.0(M+H)。

部分B：

向密封的耐压瓶中加入化合物600A(0.86g，1.57mmol)和含7M氨的甲醇(54mL)。非均质混合物在30分钟之后变得澄清，将其保持室温搅拌2小时。将溶液浓缩并通过柱色谱法纯化(SiO₂，25％甲醇/DCM)，得到600B(0.52g；96％)，为白色固体；HPLC-MS t_R＝0.22分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₁₀H₁₃F₂N₃O₆S 341.05，实测值，LCMS m/z 342.1(M+H)。

部分C：

在4ml小瓶中用2-氨基-丙醇(0.57mL，7.32mmol)处理在DMF(0.2mL)中的化合物600B(0.1g，0.29mmol)，并加热到60℃过夜。将混合物浓缩并通过柱色谱法纯化(RediSep胺柱，15％甲醇/DCM)，随后冷冻干燥，得到600(53.5mg；57％)，为白色固体；HPLC-MS t_R＝0.71分钟(UV₂₅₄nm，10min)；质量的计算值C₁₂H₁₈F₂N₄O₄ 320.13，实测值，LCMSm/z 321.1(M+H)。化合物600：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.70(dd，J＝2.4Hz，1.6Hz，1H)，6.21(t，J＝8.4Hz，1H)，5.93(d，J＝7.6Hz，1H)，4.12(m，1H)，3.96(m，1H)，3.53(m，1H)，3.38(m，1H)，3.07(m，1H)，2.85(m，1H)，1.05(d，J＝5.2Hz，3H)。

实施例605：

部分A：

根据对文献操作(Chou.T.S，等人Synthesis 1992，565)的改进，将内酯605A(10.0g，26.6mmol)在干燥乙醚(80mL)和干燥THF(30mL)中的溶液在氩气气氛下，室温搅拌10分钟。然后将三叔丁氧基氢化铝(8.25g，32.4mmol)分为三个部分加入。将混合物室温搅拌1小时，然后缓慢地用甲醇(20mL)猝灭，随后用1N HCl溶液(100mL)猝灭。分离水层，用DCM提取(3X50mL)，并将合并的有机层用NaHCO₃饱和溶液(50mL)和盐水(2X50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO₂，30％乙酸乙酯/己烷)，得到605B(7.64g；76％)，为油状物。HPLC-MS t_R＝1.92分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₉H₁₆F₂O₆378.09，实测值，LCMS m/z 401.0(M+Na)和361.0(M-OH，氧鎓离子)。

部分B：

在氩气气氛下向圆底烧瓶加入内半缩醛605B(5.10g，13.5mmol)，无水DCM(30mL)和三乙胺(2.63mL，18.9mmol)，随后加入甲烷磺酰氯(1.25mL，16.2mmol)。在室温搅拌2小时之后，反应混合物用1 N HCl溶液(20mL)，NaHCO₃饱和溶液(20mL)和盐水(2X30mL)洗涤。将溶液用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到605C(5.84g；95％)，为黄色油状物，其不经进一步纯化使用；HPLC-MS t_R＝2.12分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₂₀H₁₈F₂O₈S 456.07，实测值，LCMS m/z 479.0(M+Na)。

部分C：

根据对文献操作(Kotra，L.P，等人J.Med.Chem.1997，40，3635)的改进，将5-氟胞嘧啶(1.42g，10.9mmol)在氩气下在硫酸铵(50mg)的存在下用过量的六甲基二硅氮烷(35mL，167.8mmol)处理并在125℃回流4小时。将反应混合物浓缩以除去过量的溶剂，并将得到的残余物溶解于干燥DCE(20mL)。加入化合物605C(2.50g，5.48mmol)的DCE溶液(20mL)，并将反应混合物在氩气下搅拌10分钟。然后缓慢地向混合物加入三甲基甲硅烷基三氟甲烷硫酸酯(1.98mL，10.9mmol)，并将反应在氩气下在90-100℃加热过夜。将反应混合物冷却到室温并用NaHCO₃饱和溶液(2X40mL)和盐水(2X40mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(chiralpak AD，5cm，20微米，3/7己烷/乙醇；50mL/min)，得到605D(0.82g；32％)，为白色固体。HPLC-MS t_R＝1.90分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₂₃H₁₈F₃N₃O₆ 489.11，实测值，LCMS m/z490.1(M+H)。

部分D：

根据对文献操作(Kotra，L.P，等人J.Med.Chem.1997，40，3635)的改进，将化合物605D(0.68g，1.4mmol)在室温用在甲醇(20ml)中的甲基胺(40％的水溶液，1.1ml，14mmol)处理2.5小时。将反应混合物浓缩并通过柱色谱法纯化(SiO₂，20-25％甲醇/DCM)，得到600E(0.37g；94％)，为白色固体。HPLC-MS t_R＝0.35分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₉H₁₀F₃N₃O₄ 281.06，实测值，LCMS m/z 282.1(M+H)。

部分E：

使用前述操作从605E制备化合物605F；HPLC-MS t_R＝1.75分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₁₅H₂₄F₃N₃O₄Si 395.15，实测值，LCMS m/z396.1(M+H)。

部分F：

使用前述操作从605F制备化合物605G；HPLC-MS t_R＝2.52分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₂₉H₃₂F₃N₃O₆Si 603.20，实测值，LCMS m/z604.2(M+H)。

部分G：

使用前述操作从605G制备化合物605H；HPLC-MS t_R＝1.90分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₂₃H₁₈F₃N₃O₆ 489.11，实测值，LCMS m/z490.1(M+H)。

部分H：

使用前述操作从605H制备化合物605I；HPLC-MS t_R＝2.12分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₂₄H₂₀F₃N₃O₈S 567.09，实测值，LCMS m/z568.1(M+H)。

部分I：

使用前述操作从605I制备化合物605J；HPLC-MS t_R＝0.78分钟(UV₂₅₄nm)；质量的计算值C₁₀H₁₂F₃N₃O₆S 359.04，实测值，LCMS m/z360.0(M+H)。

部分J：

使用前述操作从605J制备化合物605；HPLC-MS t_R＝0.28分钟(UV_254nm，10min)；质量的计算值C₁₃H₁₉F₃N₄O₃ 336.14，实测值，LCMSm/z 337.1(M+H)。

实施例606：

在圆底烧瓶中将化合物30(0.5g；1.06mmol)，吡啶(8mL)和对硝基苯磺酰氯(0.47g，2.12mmol)分两个部分加入并将混合物室温搅拌过夜，这时LC-MS指示中间体606B是混合物的主要组分，并仅少量的中间体606A。然后加入对硝基苯磺酰氯(0.12g，0.5eq.)并将反应混合物室温搅拌1小时并浓缩。得到的粗制物质在室温用含7 M氨的甲醇(30mL)处理4小时，然后浓缩。将残余物用MeOH研制并将不溶解的固体过滤掉(吡啶盐酸盐)。将滤液浓缩并通过柱色谱法纯化(SiO₂，10-15％甲醇/DCM)，得到606：对硝基苯磺酸(115mg)的1.66∶1混合物，其随后通过柱色谱法纯化(RediSep胺柱，10％甲醇/DCM)，得到606，为白色固体(68mg；23％)；HPLC-MS t_R＝0.71分钟(UV_254nm，10min)；质量的计算值C₉H₁₀ClF₂N₃O₃ 281.04，实测值，LCMS m/z 282.1(M+H)。

实施例701：

将化合物605B(8.0g，21.2mmol)溶解于无水DCM(100mL)。在0℃向这个溶液加入2，6-二甲基吡啶(ludine)(2.7mL，23.3mmol)，随后滴加三异丙基甲硅烷基三氟甲烷甲磺酸酯(6.0mL，23.3mmol)。将溶液在0℃搅拌1小时。真空除去溶剂并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在己烷中含0-20％EtOAc的梯度，得到701(9.6g，85％)。¹HNMR(CDCl₃)δ8.07(d，J＝8.0Hz，2H)，7.98(d，J＝8.0Hz，2H)，7.60(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.51(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.46(dd，J＝8.0，7.5Hz，2H)，7.33(dd，J＝8.0，7.5Hz，2H)，5.79(m，1H)，5.33(d，J＝6.9Hz，1H)，4.68(m，1H)，4.51(2H，m)，1.07(m，21H)。

实施例702：

将化合物701(9.6g，18.0mmol)溶解于甲醇(100mL)。加入水(20mL)和三乙胺(20mL)。将溶液在23℃搅拌17小时。真空除去溶剂并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在己烷中含0-40％EtOAc的梯度，得到702(3.3g，56％)和703(2.5g，32％)。

702：¹H NMR(CDCl₃)δ5.22(m，1H)，4.54(m，0.5H)，4.17(m，0.5H)，3.97(m，1H)，3.87-3.68(m，2H)，1.08(m，21H)；

703：¹H NMR(CDCl₃)δ8.05(d，J＝8.0Hz，2H)，7.57(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.43(dd，J＝8.0，7.5Hz，2H)，5.24(d，J＝7.2Hz，1H)，4.60(m，1H)，4.48(m，1H)，4.40(m，1H)，4.13(m，1H)，1.08(m，21H)。

实施例704：

将化合物702(16.2g，49.8mmol)溶解于无水吡啶(230mL)。在0℃在45分钟内通过加料漏斗向这个溶液中滴加p-TsCl(12.3g，64.7mmol)的无水DCM(110mL)溶液。使得到的溶液缓慢回温到23℃并搅拌16小时。将溶液用冰冷的水猝灭，用DCM提取。将将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在己烷中含0-40％EtOAc的梯度，得到704(14.2g，59％)。HPLC-MS t_R＝2.69分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₁H₃₄F₂O₆SSi 480.18，实测值，LCMS m/z481.1(M+H)。

实施例705：

将化合物704(7.0g，14.6mmol)溶解于无水THF(60mL)。在23℃向这个溶液加入2，4，6-三甲基苯甲酰氯(4.3mL，25.5mmol)，随后滴加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂的THF溶液(1.0M，25.5mL)。将溶液在23℃搅拌3小时，用水猝灭，用Et₂O提取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在己烷中含0-20％EtOAc的梯度，得到705(7.0g，69％)。HPLC-MS t_R＝2.93分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₃₁H₄₄F₂O₇SSi 626.25，实测值，LCMS m/z 649.2(M+Na)。

实施例706：

将化合物705(3.1g，5.0mmol)溶解于无水DMF(20mL)。加入叠氮化钠(4.4g，67.2mmol)。将混合物在70℃搅拌3小时，用水猝灭，用二氯甲烷提取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在己烷中含0-10％EtOAc的梯度，得到706(1.85g，75％)。¹H NMR(CDCl₃)δ6.88(s，2H)，5.61(m，1H)，5.28(m，1H)，4.16(m，1H)，3.62(m，2H)，2.32(s，6H)，2.29(s，3H)，1.11(m，21H)。

实施例707：

将化合物706(671mg，1.35mmol)溶解于无水THF(7.0mL)。滴加TBAF的THF溶液(1.0M，1.4mL)。将溶液在23℃搅拌30分钟，用水猝灭并用EtOAc提取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在己烷中含0-30％EtOAc的梯度，得到707(417mg，91％)。¹H NMR(CDCl₃)δ6.87(s，2H)，5.44(t，J＝5.8Hz，1H)，5.32(dd，J＝16.4，5.3Hz，1H)，4.53(m，1H)，3.68(1H，m)，3.57(1H，m)，2.99(1H，J＝5.3Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.28(3H，s)。

实施例708：

将化合物707(420mg，1.23mmol)溶解于无水DCM(10mL)。加入Et₃N(186mg，1.85mmol)和MsCl(149mg，1.29mmol)。将溶液在23℃搅拌1小时并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用100％DCM，得到708(525mg，100％)。¹H NMR(CDCl₃)δ6.89(s，2H)，6.08(d，J＝5.7Hz，0.5H)，5.97(d，J＝6.2Hz，0.5H)，5.75(m，0.5H)，5.37(dd，J＝17.4，4.6Hz，0.5H)，4.58(m，0.5H)，4.35(m，0.5H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.19(s，1.5H)，3.12(s，1.5H)，2.30(m，9H)。

实施例709：

部分A：

N⁴-乙酰基胞嘧啶(1.5g，9.6mmol)，(NH₄)₂SO₄(6.3mg，0.05mmol)和六甲基二硅氮烷(15mL)在130℃加热3小时并真空浓缩。向残余物加入化合物708(1.3g，3.1mmol)的DCE(16mL)溶液，随后加入三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(2.1g，9.6mmol)。将溶液在95℃加热15小时。将反应混合物冷却下来，用水猝灭并用EtOAc提取。将有机层合并，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩，得到粗品708A。HPLC-MS t_R＝1.85分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₁H₂₂F₂N₆O₅ 476.16，实测值，LCMS m/z 477.1(M+H)。

部分B：

将粗产物708A溶解于MeOH(5mL)并加入氨的MeOH溶液(7N，10mL)。将溶液在23℃搅拌3小时，过滤，并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用含0-30％MeOH的DCM，得到709(1.3g，97％)。HPLC-MS t_R＝1.75分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₉H₂₀F₂N₆O₄ 434.15，实测值，LCMS m/z 435.1(M+H)。

实施例710：

部分A：

将化合物709(1.35g，3.11mmol)溶解于无水吡啶(15mL)。向这个溶液中滴加DMAP(3.6mg，0.03mmol)和BzCl(1.0mL，8.4mmol)。将溶液在23℃搅拌2小时，用5％NaHCO₃猝灭，用EtOAc提取，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，用含0-50％EtOAc的己烷，得到710和711的混合物(989mg，59％)。HPLC-MS t_R＝2.26分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₆H₂₄F₂N₆O₅ 538.18，实测值，LCMS m/z539.2(M+H)。

部分B：

使用Chiralcel OD柱(5cmx50cm)用100％MeOH分离从部分A得到的混合物(50mL/min，UV_254nm)，得到化合物710(t_R＝43分钟，206mg)和711(t_R＝36分钟，600mg)。

710：¹H NMR(CDCl₃)δ8.97(br s，1H)，7.93(br s，3H)，7.72(br s，1H)，7.64(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.54(dd，J＝8.0，7.5Hz，2H)，6.90(s，2H)，6.46(t，J＝8.2Hz，1H)，5.56(m，1H)，4.34(m，1H)，3，92(dd，J＝13.8，3.2Hz，1H)，3,72(dd，J＝13.8，3.8Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.30(s，3H)；

711：¹H NMR(CDCl₃)δ8.87(br s，1H)，7.90(br d，J＝6.5Hz，2H)，7.70(d，J＝7.4Hz，1H)，7.63(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.58(br s，1H)，7.52(dd，J＝8.0，7.5Hz，2H)，6.88(s，2H)，6.66(dd，J＝8.0，6.9Hz，1H)，5.76(m，1H)，4.60(m，1H)，3.73(m，2H)，2.29(s，3H)，2.28(s，6H)。

实施例712：

将化合物710(45mg，0.084mmol)溶解于0.8mL的THF/H₂O(6/1)中。向混合物滴加Me₃P的THF溶液(0.66M，0.19mL)。将溶液在23℃搅拌30分钟并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用含5-10％MeOH的DCM，得到712(29mg，67％)。HPLC-MS t_R＝1.52分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₆H₂₆F₂N₄O₅ 512.19，实测值，LCMS m/z 513.2(M+H)。

实施例713：

部分A：

将化合物712(10mg，0.02mmol)溶解于无水THF(0.5mL)。向溶液加入异氰酸-1-戊基酯(6.8mg，0.06mmol)。将溶液在23℃搅拌2小时。真空浓缩，得到粗品712A。HPLC-MS t_R＝2.16分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₃₂H₃₇F₂N₅O₆ 625.27，实测值，LCMS m/z 626.2(M+H)。

部分B：

将粗产物712A溶解于MeOH(0.4mL)。加入KOH水溶液(5M，0.08mL)。将溶液在23℃搅拌19小时并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用含20％MeOH的DCM，得到713(3.8mg，51％)。HPLC-MSt_R＝1.01分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₅H₂₃F₂N₅O₄ 375.17，实测值，LCMS m/z 376.1(M+H)。

实施例714：

根据在实施例713中描述的操作制备化合物714。HPLC-MS t_R＝1.14分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₃H₁₉F₂N₅O₄ 347.14，实测值，LCMS m/z348.1(M+H)。

实施例715：

部分A：

将化合物712(17mg，0.033mmol)溶解于无水THF(0.5mL)。向溶液加入TEA(5.0mg，0.05mmol)和1-丙烷磺酰氯(4.7mg，0.033mmol)。将溶液在23℃搅拌40分钟，用EtOAc稀释并过滤通过硅胶短柱。将滤液真空浓缩，得到粗品712B。HPLC-MS t_R＝1.99分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₉H₃₂F₂N₄O₇S 618.20，实测值，LCMS m/z 619.2(M+H)。

部分B：

将粗产物712B溶解于MeOH(0.5mL)。加入KOH水溶液(5M，0.14mL)。将溶液在23℃搅拌17小时并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，用含10-15％MeOH的DCM，得到715(4.5mg，37％)。HPLC-MSt_R＝0.72分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₂H₁₈F₂N₄O₅S 368.10，实测值，LCMS m/z 369.1(M+H)。

实施例720：

部分A：

将化合物30(305mg，0.65mmol)溶解于无水DCM(5.4mL)。向溶液加入Dess-Martin Periodinane的DCM溶液(0.3M，2.4mL)。将溶液在23℃搅拌1小时并加载到12G硅胶柱上。用0-100％EtOAc的DCM纯化，得到346mg的产物719。HPLC-MS t_R＝1.48分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₃H₁₉F₂N₃O₇ 487.12，实测值，LCMS m/z 488.0(M+H)。

部分B：

将产物719溶解于无水DCM(5.0mL)。在0℃向这个溶液中加入烯丙基三甲基甲硅烷(0.52mL，3.25mmol)和三氟化硼·乙醚(0.41mL，3.25mmol)。溶液在0℃搅拌3小时，用5％NaHCO₃猝灭，用DCM(1x)和EtOAc(2x)提取。将有机层合并，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在DCM中含0-100％EtOAc的梯度，得到720(221mg，67％)。HPLC-MS t_R＝2.08分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₆H₂₃F₂N₃O₆ 511.16，实测值，LCMS m/z 512.0(M+H)。

实施例721：

向化合物720(26mg，0.051mmol)加入氨的MeOH溶液(7N，1.0mL)。将溶液在23℃搅拌4小时并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用在DCM中含0-20％MeOH的梯度，得到721(15mg，97％)。HPLC-MS t_R＝0.73分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₂H₁₅F₂N₃O₄ 303.10，实测值，LCMS m/z 304.1(M+H)。

实施例722：

将化合物720(221mg，0.43mmol)溶解于无水DCM(5.4mL)。向溶液加入TEA(0.12mL，0.86mmol)和MsCl(60mg，0.52mmol)。将溶液在23℃搅拌1.5小时并加载在12G硅胶柱上。使用在己烷中含0-50％EtOAc的梯度纯化，得到722(232mg，92％)。HPLC-MS t_R＝2.15分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₇H₂₅F₂N₃O₈S 589.13，实测值，LCMS m/z 590.0(M+H)。

实施例723：

将化合物722(232mg，0.39mmol)溶解于无水DMF(4mL)。向溶液加入NaN₃(520mg，8.0mmol)并将混合物在75℃加热3小时。将反应冷却到室温，用EtOAc稀释并过滤。将滤液浓缩并将残余物用硅胶色谱法进行纯化，使用在己烷含0-50％EtOAc的梯度，得到723(133mg，64％)。HPLC-MS t_R＝2.17分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₆H₂₂F₂N₆O₅ 536.16，实测值，LCMS m/z 537.1(M+H)。

实施例724：

部分A：

将化合物723(133mg，0.25mmol)溶解于5mL的THF/H₂O(6/1)。向混合物滴加Me₃P的THF溶液(0.66M，0.57mL)。将溶液在23℃搅拌45分钟并真空浓缩。使用硅胶色谱法纯化残余物，使用含0-10％MeOH的DCM，得到胺产物723A(81mg，64％)。HPLC-MS t_R＝1.49分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₂₆H₂₄F₂N₄O₅ 510.17，实测值，LCMS m/z 511.1(M+H)。

部分B：

使用前述实施例721的操作制备化合物724。HPLC-MS t_R＝0.42分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₂H₁₆F₂N₄O₃ 302.12，实测值，LCMS m/z303.1(M+H)。

实施例725：

部分A：

根据在实施例721中描述的操作制备化合物726。HPLC-MS t_R＝1.02分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₃H₁₇F₂N₃O₆S 381.08，实测值，LCMS m/z382.1(M+H)。

部分B：

将化合物726(15mg，0.039mmol)溶解于MeOH(15mL)。将溶液在H-Cube氢化器中在40℃用Pd/C和氢(30bar)处理30分钟。蒸发溶剂，得到产物727(12mg，80％)。HPLC-MS t_R＝0.90分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₃H₁₉F₂N₃O₆S 383.10，实测值，LCMS m/z 384.1(M+H)。

部分C：

根据在实施例723中描述的操作制备化合物728。HPLC-MS t_R＝1.10分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₂H₁₆F₂N₆O₃ 330.13，实测值，LCMS m/z331.1(M+H)。

部分D：

根据在实施例723A中描述的操作制备化合物725。HPLC-MSt_R＝0.55分钟(UV_254nm)；质量的计算值C₁₂H₁₈F₂N₄O₃ 304.13，实测值，LCMS m/z 305.2(M+H)。

试验：

基于Phospho-H2A.X(ser139)细胞的试验

试验的目的是要确定已经共同接触本发明化合物和Chk1抑制剂的U20S细胞中的phospho-H2AX水平。用于这个试验中的本发明化合物如以下表2中所示。

用于试验的Chk1抑制剂是如下所示的吡唑并嘧啶化合物：

材料

·U2OS细胞(每周两次以1∶6分裂)

·Dulbecco′s改进的Eagle培养基(DMEM)，含4.5g/L葡萄糖和L-谷氨酰胺，Cellgro，Cat#10-013-CV

·胎牛血清(FBS)，HyClone，Cat#SH30071.03

·Hepes缓冲溶液(1M)，Gibco，Cat# 15630-080

·MEM非必需氨基酸(NEAA)混合物(100X)，BioWhittaker，Cat#13-114E

·青霉素/链霉素L-谷氨酰胺混合物，25,000U青霉素/mL，25,000μg链霉素/mL(4.5mL/瓶)BioWhittaker，Cat#17-718R

·96孔Black TC板，Perkin Elmer，Cat#6005182

·异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的抗磷酸化组蛋白H2A.X(ser139)，Upstate cat#16-202-A

·碘化丙锭，Biocarta，Part#638

·20X TBST(800mL Tris-HCl pH 7.4，1200mL 5M NaCl，40mLTween 20)

·70％乙醇(ETOH)

·封闭缓冲液-含3％BSA的DPBS

·DABCO封固剂(2.33％1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)Sigma，Cat#D2522，90％甘油，20mM Tris-HCl，pH 8)

试验

1.以1X10⁴细胞/孔铺板在96孔Black TC板上，培养24小时

2.使细胞接触本发明化合物滴定过夜。第二天向A-D行添加1μMChk1抑制剂(500nM最终浓度)和向E-H行添加培养基。

化合物的稀释

本发明化合物的稀释

a.500μM开始：将10μl的100mM化合物加入到2000μlDMEM+1％NEAA+1％hepes缓冲剂+1％青霉素(pen)/链霉素(strep)+10％FBS(完全的DMEM)中^***保持DMS0浓度恒定

和在完全的DMEM+DMSO中进行9次1∶2系列稀释

b.每孔添加100μl的在完全DMEM中稀释的化合物

(8孔/浓度)

Chk1抑制剂的稀释

a.500nM Chk1抑制剂＝使3μl 5mM Chk1抑制剂+15mL完全DMEM稀释两倍

b.每孔添加在培养基中稀释的100μl Chk1抑制剂(每种浓度4孔)并添加100μL的完全DMEM+DMSO

3.用于免疫荧光的细胞固定和染色

a.吸出培养基

b.在4℃用100μL/孔的冰冷的70％ETOH固定30分钟到1小时

c.吸出70％ETOH

d.添加100μL/孔的封闭缓冲液，在室温在定轨振荡器上保温1小时。

e.吸出封闭缓冲液

f.添加200μL/孔的在封闭缓冲液中稀释的0.34μg/mL FITC-缀合的抗磷酸化-组蛋白H2A.X(ser 139)，在定轨振荡器上在4℃保温过夜。无抗体对照是仅封闭缓冲液。

g.在定轨振荡器上在室温用1X TBST洗涤2次，每次5分钟

h.加入100μL的碘化丙锭(PI)染剂(每孔0.5μl的250μg/ml PI+100μL 1X TBST)，在定轨振荡器上保温5分钟

i.在定轨振荡器上在室温用1X TBST洗涤1次，进行5分钟

j.加入50μL的DABCO封固剂

k.在装备免疫荧光的显微镜上观察载玻片并将FITC阳性核量化为PI阳性的总细胞核数的百分数。

根据上述方法进行测定IC₅₀值且IC₅₀在0.001-10μM范围内的本发明的一些说明性化合物如下表2中所示：

表2

如上述试验数值所证实，本发明的化合物表现出期望的性质。

尽管已经结合上述的特定实施方案描述了本发明，但是其许多备选方案、改进和其它变体对于本领域技术人员来说是显而易见的。意在所有这种备选方案、改进和变体都落入本发明的主旨和范围内。

Claims

1.化合物或其可药用的盐、溶剂合物、酯或前体药物，所述化合物为下式：

其中：

G为H，卤素或烷基；

X选自H，F，OR²和烷基；

Y选自H，F，OR²和烷基；

Z选自O，NR²，S，CR²R³和SO₂；

R选自-烷基，-烯基，-环烷基，-芳基，

-烷基芳基，-杂芳基，-烷基杂芳基，杂环基，-烷基杂环基，-烷基-C(O)R²和-烷基-C(O)NR²R³，其中每个所述烷基，芳基，杂芳基和杂环基可以是未被取代的或任选地独立地被一个或多个可为相同或不同的基团取代，每个取代基独立地选自卤素，氰基，烷基，烯基，炔基，羟基，烷氧基，芳基氧基，烷硫基，芳硫基，芳基，杂芳基，杂环基，杂环烯基，环烷基，环烯基，-OR²，-NR²R³，-C(O)R²，-C(O)OR²和C(O)NR²R³；