CN101874208B - 微型薄片及血液观测装置 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种微型薄片及采用该微型薄片的血液观测装置，所述微型薄片的内部包括：第一流路，流入第一液体，所述第一液体从全血、富含血小板的血浆或它们的药剂处理液中选择；第二流路，与第一流路连接，流入第二液体，所述第二液体包含有能与所述第一液体发生反应的药剂；以及合流流路，从所述第一流路和所述第二流路的连接部开始延伸设置；所述微型薄片的特征在于，在所述合流流路上设置有搅拌部，所述搅拌部具有混合所述第一液体和所述第二液体的搅拌件。

Description

微型薄片及血液观测装置
技术领域
本发明涉及一种用于有效地将微量血液和药剂进行混合来检查血液的反应性能或性状的薄片，更具体地说，涉及一种用于观察血液凝固能力或血小板功能等血液观测的微型薄片、以及采用该微型薄片的血液观测装置。
背景技术
心肌梗塞等动脉粥样硬化(粉瘤)血栓症是在动脉硬化部位上粥样斑块破溃，血小板粘着在暴露于血流中的包含有组织因子的胶原上，血小板再凝聚，复合性地引起血液凝固系统的活化，从而生成闭塞性的严重血栓。在日本，心肌梗塞等心脏疾病所导致的死亡占全部死因中的第二位，因而是严重的疾病。
但是，心肌梗塞等仅在动脉硬化区域中不断生成血栓，并不存在极端地在全身不断生成血栓的倾向。试管内的试验不适合于评价这种血栓症的血栓倾向、以及监测抗血栓疗法的抗血栓效果，在存在有血流的状态下，综合性地评价凝固和血小板(粘着、凝聚)是十分重要的。
以往，评价血液凝固能力是通过采用血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血活酶时间(PT)来进行观测。APTT主要反映内因系凝固，PT主要反映外因系凝固。作为血小板的观测也可以采用富含血小板的血浆，并添加腺苷二磷酸(ADP)、胶原等血小板活化物质，利用透过度的变化等来评价血小板的凝聚能力。此外，利用全血凝固时间、钙再添加全血凝固时间等对全血的凝固时间进行测定。
此外，作为采用全血的观测系统，利用血栓弹性图来监测凝固成分的活化和血小板的凝聚等。
但是，由于相对于在生物体内、血流状态下的血栓成长，上述观测方法等是在封闭试管内进行测定，所以不能观察血栓在生物体内的成长状态。
作为解决上述问题的方案，专利文献1、非专利文献1、2公开了一种监测方法：使投入了需要评价的抗血栓药的血液在胶原细胞上经过，通过对血小板进行荧光标记，利用共聚焦显微镜装置监测血小板的粘着、凝聚。
但是，由于上述文献记载的发明是在存在有抗凝固药的状态下来进行观测，所以没有生成由凝固系引起的血小板的粘着、凝聚所导致的血栓，或者是通过观测血小板的形态变化来评价血栓生成能力的降低，而并没有反映出与凝固系连动的血小板活化。因此，虽然是适用于评价抗血小板药的药效的发明，但是并不能监测血栓本身或整个血栓生成过程。
此外，专利文献2公开了一种血栓观测装置，该血栓观测装置使抗凝固处理后的血液在模拟血管的流路内流动，并且进行解除抗凝固处理或促进血液凝固，来观测血栓的生成，该血栓观测装置的特征在于包括：血栓生成室，在该血栓生成室内部的至少一部分上设置有诱发血栓生成的血栓诱发材料；流入管，与该血栓生成室连接，使血液流入到所述血栓生成室内；以及药剂管，与该流入管连接，向所述流入管内投入解除抗凝固处理的药剂或促进血液凝固的药剂。利用该装置，虽然可以使用微量的血液样本进行血液观测，但是有时血液与抗凝固解除剂或凝固促进剂难以混合，还具有改进的空间。
此外，根据专利文献1、非专利文献1、2的方法，在由奎纳克林将血小板染色的情况下，白血球也同时被染色，不能选择性地仅对血小板的功能进行评价。而且，存在有荧光色素的褪色或装置价格高等很多不适合于观测的问题。
此外，由于以往对纤溶功能的评价是仅测定纤维蛋白的溶解，所以并不存在能够测定溶解实际动脉中生成的白色血栓的溶解效果的方法。
通过在基板上开设所希望的流路的槽，并与盖板贴合而形成微型流体薄片，该微型流体薄片用于毛细血管的电泳动、PCR(聚合酶链式反应)和其他各种观测等。微型薄片内的液体由于雷诺数非常大而形成层流，所以难以使微型薄片内的液体自然地混合。为了解决这种问题，进行了各种研究。
例如，专利文献3提出了一种由柱状突起物构成的搅拌件，专利文献4提出了一种利用压电效应进行振动的搅拌件，专利文献5提出了一种利用光的压力进行转动的搅拌件。但是，如果采用以上提出的这些搅拌件在微型薄片内对包含有全血、富含血小板的血浆和它们的药剂处理液等液体进行搅拌，则有时会引起活化从而发生血液凝固等，例如，在观测血液凝固或血小板功能等情况下，难以准确地进行观测。此外，虽然可以考虑通过使流路变长，以使微型薄片内的液体自然混合，但是这会导致微型薄片变大。而且，为了防止微型薄片变大，如果使流路多次弯折成弯弯曲曲的形状，则在液体滞留的区域等产生活化，从而发生血液凝固等现象，不能准确地进行观测。
专利文献1：日本专利公开公报特开2004-251630号
专利文献2：国际公开文本第2007/046450号
专利文献3：日本专利公开公报特开2007-24522号
专利文献4：日本专利公开公报特开2006-205080号
专利文献5：日本专利公开公报特开2001-252897号
非专利文献1：Blood.1990；75：390-398
非专利文献2：Blood.1999 Aug 1；94(3)：968-75.
发明内容
鉴于上述问题，本发明的目的在于提供一种使用微量的全血或富含血小板的血浆(在本说明书中，有时将它们统称为“血液”)，可以在与血流同等环境下有效且准确地评价由血液凝固和血小板引起的血栓生成的装置和方法。
为了解决所述课题，本发明提供一种微型薄片，在其内部包括：第一流路，流入第一液体，所述第一液体从全血、富含血小板的血浆或它们的药剂处理液中选择；第二流路，与第一流路连接，流入第二液体，所述第二液体包含有能与所述第一液体发生反应的药剂；以及合流流路，从所述第一流路和所述第二流路的连接部开始延伸设置；所述微型薄片的特征在于，在所述合流流路上设置有搅拌部，所述搅拌部具有混合所述第一液体和所述第二液体的搅拌件。
优选的是，所述搅拌件的表面进行了凝固抑制处理。其中，所述凝固抑制处理并无特别限定，只要是不使凝固系的接触层活化的处理即可，但优选的是用肝素、聚乙酰内脂或聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤至少形成所述搅拌件的表面。
本发明的微型薄片优选的是，所述搅拌部的宽度比所述合流流路宽，而且优选的是，所述搅拌部的宽度朝向下游逐渐变窄。
此外，优选的是，所述搅拌部的深度比所述合流流路深，而且优选的是，所述搅拌部的深度朝向下游逐渐变浅。
本发明的微型薄片优选的是，所述合流流路的深度为50μm～200μm。
本发明的微型薄片优选的是，在第一基板的表面上开设有构成所述第一流路、第二流路和合流流路的槽，在第二基板的表面上开设有作为所述搅拌部的孔，所述第一基板和所述第二基板层叠，并使所述槽和孔的开口部位于内侧。其中，优选所述第一基板和第二基板的贴合强度为0.5～50kgf，且血液在内部流动时的耐压性为100kPa。
本发明的微型薄片优选的是，在所述搅拌部的下游具有血栓生成室，在所述血栓生成室内部的至少一部分上设置有诱发血栓生成的血栓生成诱发材料。其中，血栓生成诱发材料优选胶原、或者胶原与组织因子的混合物。
此外，本发明提供一种血栓形成的测定方法，所述测定方法采用上述记载的任意一种微型薄片，其特征在于，分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使解除抗凝固处理的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，在血栓生成室内测定血栓形成。其中，所述抗凝固处理后的血液优选的是利用柠檬酸进行抗凝固处理后的血液，解除所述抗凝固处理的试剂是含有钙的溶液。
此外，本发明提供一种血栓形成和血栓溶解能力的测定方法，所述测定方法采用上述记载的任意一种微型薄片，其特征在于，分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使解除抗凝固处理的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，在血栓生成室内测定血栓形成，再使血栓溶解物质从所述第二流路流入，溶解生成的血栓。其中，所述血栓溶解物质优选的是选自由血纤维蛋白溶酶、尿激酶和组织型纤溶酶原激活剂构成的组中的一种以上的物质。
此外，本发明提供一种血小板功能的测定方法，所述测定方法采用上述记载的任意一种微型薄片，其特征在于，分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使血小板活化的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，流经血栓生成室，来测定血小板功能。其中，优选的是，所述抗凝固处理后血液是利用柠檬酸或肝素进行抗凝固处理后血液，所述使血小板活化的试剂是ADP、胶原、瑞斯托菌素或花生四烯酸。
在所述各方法中，优选的是，从第一流路流入的抗凝固处理后血液和从第二流路流入的试剂的容量比为10∶2～100∶1。而且，优选的是，在所述搅拌部内，对从第一流路流入的血液和从第二流路流入的试剂的混合液搅拌5秒～3分钟。此外，优选的是，所述搅拌件的转动速度为30～300转/分钟。
此外，本发明提供一种血液观测装置，所述血液观测装置采用上述任意一种微型薄片。在本发明的血液观测装置中，优选的是，微型薄片设置成使所述第一流路和所述第二流路位于下方，并且使所述合流流路位于上方。
此外，本发明的血液观测装置优选的是包括压力传感器，所述压力传感器用于测定所述第一流路、所述第二流路和所述合流流路中至少一个流路内的压力。
此外，本发明的血液观测装置优选的是包括摄像机，所述摄像机用于观察所述合流流路的内部。
摄像机优选的是，具有每隔一定时间自动地拍摄流路内的静止图像或运动图像的功能。更优选的是，通过每隔一定时间对整个流路拍摄全景照片或静止图像，利用连续的静止图像，也可以视觉确认进行测定后的流路的堵塞状况。
此外，本发明提供一种采用本发明微型薄片进行观测的血液观测方法，该血液观测方法的特征在于，在流路内对抗凝固处理后的全血或富含血小板的血浆、解除抗凝固处理的药剂、使血小板活化的药剂或血栓溶解剂进行搅拌，并使它们混合，一边使它们在流路内流动一边进行观测。其中，血栓溶解剂优选从尿激酶、血纤维蛋白溶酶和组织型纤溶酶原激活剂(tPA)中选择一种以上。作为血液观测方法优选的是，血液凝固或血小板功能的测定方法。此外，使血小板活化的药剂优选从腺苷二磷酸(ADP)、胶原、凝血酶和瑞斯托菌素中选择一种以上。此外，本发明的血液观测方法优选用于对血液凝固或血小板功能进行观测。
按照权利要求1所述的本发明的微型薄片，由于在所述合流流路内具有用于使第一液体和第二液体混合的搅拌件，所以在微型薄片混合部内，可以对第一液体和第二液体进行搅拌，使它们均匀地混合，抑制血液凝固活化的产生从而防止产生血液凝固块等，因此，例如在观测血液凝固或血小板功能等情况下，在微型薄片内适合使用含有全血、富含血小板的血浆和它们的药剂处理液等液体。
按照权利要求2和3所述的本发明的微型薄片，如果抑制第一液体和第二液体合流后液体凝固的凝固抑制处理是用肝素、聚乙酰内脂或聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤至少形成搅拌件的表面，则由于可以通过将搅拌件浸渍在溶解树脂中来进行覆盖，或利用注塑成型等树脂加工来进行制作，所以可以高效地制作微型薄片。
按照权利要求4所述的本发明的微型薄片，由于搅拌部的宽度比所述合流流路宽，所以可以使第一液体和第二液体合流后的液体在搅拌部中的滞留时间变长，从而可以充分地进行搅拌。
按照权利要求5所述的本发明的微型薄片，由于搅拌部的宽度朝向下游逐渐变窄，所以搅拌后的混合液顺畅地流向下游的合流流路，不会在搅拌部的出口引起液体活化而发生血液凝固等现象。而且，搅拌部的空气容易流出，空气不会残留在搅拌部内。
按照权利要求6所述的本发明的微型薄片，由于所述搅拌部的深度比所述合流流路深，所以可以使第一液体和第二液体合流后的液体在搅拌部内的滞留时间变长，从而可以充分地进行搅拌。
按照权利要求7所述的本发明的微型薄片，由于所述搅拌部的深度朝向下游逐渐变浅，所以搅拌后的血液混合液顺畅地流向下游的合流流路，不会在搅拌部的出口引起液体活化而发生血液凝固等现象。而且，搅拌部的空气容易流出，空气不会残留在搅拌部内。
按照权利要求8所述的本发明的微型薄片，由于所述合流流路的深度为50μm～200μm，所以可以利用少量的样品和试剂进行解析，是优选的。
按照权利要求9所述的本发明的微型薄片，由于在第一基板的表面上开设有构成所述第一流路、第二流路和合流流路的槽，在第二基板的表面上开设有作为所述搅拌部的孔，对所述第一基板和第二基板进行层叠，使所述槽和孔的开口部位于内侧，从而可以得到微型薄片，所以可以简便地制作微型薄片。
按照权利要求10所述的本发明的微型薄片，由于所述第一基板和第二基板的贴合强度为0.5～50kgf，所以当测定血栓形成后，可以揭下两个基板来进行解析，是优选的。
此外，按照权利要求11所述的本发明的微型薄片，由于所述微型薄片在所述搅拌部的下游具有血栓生成室，在所述血栓生成室内部的至少一部分上设置有诱发血栓生成的血栓生成诱发材料，所以搅拌后的混合液经过血栓生成室时诱发血栓生成，从而可以因血液凝固能力或血小板而生成血栓。
按照权利要求12所述的本发明的微型薄片，由于血栓生成诱发材料是胶原、或者胶原与组织因子的混合物，所以可以有效地生成血栓。
按照权利要求13所述的本发明的测定方法，通过分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使解除抗凝固处理的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，在血栓生成室内测定血栓形成，由于有效地使血液和试剂混合并到达血栓生成室内，所以可以有效地测定血栓形成。
按照权利要求14所述的本发明的测定方法，由于所述抗凝固处理后的血液是利用柠檬酸进行抗凝固处理后的血液，解除所述抗凝固处理的试剂是含有钙的溶液，所以能以低成本进行抗凝固处理，是优选的。
按照权利要求15所述的本发明的测定方法，通过分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使解除抗凝固处理的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，在血栓生成室内测定血栓形成，再使血栓溶解物质从所述第二流路流入，溶解生成的血栓，所以可以测定血栓形成和血栓溶解能力。
按照权利要求16所述的本发明的测定方法，由于所述血栓溶解物质是选自由血纤维蛋白溶酶、尿激酶和组织型纤溶酶原激活剂构成的组中的一种以上的物质，所以可以有效地使血栓溶解。
按照采用本发明微型薄片的权利要求17所述的测定方法，通过分别使抗凝固处理后的血液从所述第一流路流入到搅拌部内、使活化血小板的试剂从所述第二流路流入到搅拌部内，在所述搅拌部内进行混合后，流经血栓生成室，从而可以测定血小板功能。
按照权利要求18所述的本发明的测定方法，由于所述抗凝固处理后的血液是利用柠檬酸或肝素进行抗凝固处理后血液，所述活化血小板的试剂是ADP、胶原、瑞斯托菌素或花生四烯酸，所以可以有效地使血小板活化。
按照权利要求19所述的本发明的测定方法，由于从第一流路流入的抗凝固处理后血液和从第二流路流入的试剂的容量比为10∶2～100∶1，所以可以利用少量的试剂，有效地引起血栓生成、血栓溶解或血小板活化。
按照权利要求20所述的本发明的测定方法，由于在所述搅拌部内，对从第一流路流入的血液和从第二流路流入的试剂的混合液搅拌5秒～3分钟，所以可以均匀地混合血液和试剂。
按照权利要求21所述的本发明的测定方法，由于所述搅拌件的转动速度为30～300转/分钟，所以可以在缓慢的条件下进行搅拌。
由于本发明的血液观测装置包含有本发明的微型薄片，所以利用微量的血液样本，就可以有效地进行血液观测，因此减少了被检查者的负担。
此外，在本发明的血液观测装置中，如果将微型薄片设置成使所述第一流路和所述第二流路位于下方，并且使所述合流流路位于上方，则在流路或搅拌部中产生气泡的情况下，气泡自然地向上方排出，可以不受气泡影响，稳定且均匀地进行搅拌、混合，从而可以更准确地进行血液观测。
此外，如果将第一流路、第二流路和合流流路设置在上部，将包含有搅拌件的搅拌槽设置在下部，则气泡不会滞留在搅拌部内，可以均匀地进行搅拌、混合，从而可以更准确地进行血液观测。
此外，本发明的血液观测装置如果包括压力传感器，所述压力传感器用于测定所述第一流路、所述第二流路和所述合流流路中至少一个流路内的压力，则可以数值化血栓生成程度或血栓溶解程度，从而能够定量性地进行评价。
此外，本发明的血液观测装置由于包括用于观察所述合流流路内部的摄像机，所以可以观察血栓生成或血栓溶解状况的影像。
优选的是，本发明血液观测装置所设置的摄像机能够拍摄静止图像和运动图像。如果每隔一定时间自动地拍摄流路内部的运动图像和静止图像并进行保存，则当测定后，可以通过视觉来评价经过一定时间的血栓形成状态，所以是优选的。如果可以对整个流路内拍摄全景照片或连续静止图像，则容易保存和进行客观比较，所以是更优选的。当拍摄静止图像、运动图像时，如果设置透过型光源，即，在与摄像机相反一侧设置光源来进行拍摄，则能够拍摄到更鲜明的图像。
在测定后，通过将微型薄片内出现的生成血栓取出，再利用电子显微镜或荧光染色进行显微镜观察，根据电泳动等目的详细地观察血栓的形状、组成等，能够进一步详细地进行检查。如果可以容易地用手揭下涂布有血栓诱发材料的区域的薄片，则可以在测定后从流路内部将血栓取出，所以是优选的。
本发明的血液观测方法采用本发明的微型薄片，所述血液观测方法的特征在于，在流路内对抗凝固处理后的全血或富含血小板的血浆与解除抗凝固处理的药剂、使血小板活化的药剂或血栓溶解剂进行搅拌，并使它们混合，一边使它们在流路内流动一边进行观测，所以能够在与人体内接近的环境下观测抗血栓药等的药效，或者能够测定血小板的粘着、凝聚等血小板功能、能够进行确认血栓大小变化的血栓溶解观测等。
如果所述血栓溶解剂是从尿激酶、血纤维蛋白溶酶和tPA中选择出的一种以上，则可以有效地观测在与生理状态接近的环境状态下形成的血栓的血栓溶解。此外，如果所述使血小板活化的药剂是从ADP、胶原、凝血酶和瑞斯托菌素中选择出的一种以上，则可以有效地使血小板活化。
并且，如果所述方法用于检查血液凝固能力或血小板功能，则可以测定抗血栓药的药效或血液中的血小板的功能，所以是优选的。
附图说明
图1是表示本发明第一实施方式的微型薄片1主要部分的示意图。
(A)表示微型薄片1的第一基板，(B)表示微型薄片1的第二基板，(C)表示制作完成后的微型薄片1的俯视图，(D)表示制作完成后的微型薄片1的主视图(省略搅拌件)。
图2是表示本发明第二实施方式的微型薄片2主要部分的示意图。(A)表示微型薄片2的第一基板，(B)表示微型薄片2的第二基板，(C)表示微型薄片2的第三基板，(D)表示制作完成后的微型薄片2的俯视图，(E)表示制作完成后的微型薄片2的主视图(省略搅拌件)。
图3是表示本发明第三实施方式的微型薄片3主要部分的示意图。(A)表示微型薄片3的第一基板，(B)表示微型薄片3的第二基板，(C)表示制作完成后的微型薄片3的俯视图，(D)表示制作完成后的微型薄片3的主视图(省略搅拌件)。
图4是表示本发明第一实施方式的血液观测装置A的示意图。
图5是表示本发明第二实施方式的血液观测装置B的示意图。
图6是表示垂直直立设置本发明第二实施方式血液观测装置B的状态的示意图。
图7是使用本发明的血液观测装置A时的流量-压力曲线图。(A)表示从第一泵流入添加了总量十分之一的3.2％柠檬酸钠的25μg/ml从玉米中提取出的胰蛋白酶抑制剂的全血、从第二泵流入0.2M CaCl2、从第三泵流入0.5M EDTA pH10时的结果。(B)表示从第一泵流入添加了总量十分之一的3.2％柠檬酸钠的全血、从第二泵流入0.1μM ADP溶液时的结果。
图8是表示使用本发明的血液观测装置B观察到的血栓状况的图(照片)。
图9是将图8的结果数值化后的曲线图。
图10是表示本发明第四实施方式的微型薄片4主要部分的示意图。
(A)表示微型薄片4的第一基板，(B)表示微型薄片4的第二基板，(C)表示制作完成后的微型薄片4的主视图。
图11是表示本发明血栓观测装置C的载物台的示意图。
图12是本发明血栓观测装置C的示意图。
图13是使用本发明的血液观测装置C时的流量-压力曲线图。(a)表示对照标准(实施例7)，(b)表示8000单位/ml tPA制剂(实施例10)，(c)表示0.5单位/ml低分子肝素(实施例9)。
图14是利用本发明血栓观测装置C的CCD摄像机，在各位置每经过一段时间拍摄静止图像，再合成后的图(中间色调图像)。
图15是血栓的扫描电子显微镜照片。(A)是揭下本发明血栓观测装置C的微型薄片来观察白色血栓的图。(B)是在对象的静置环境下形成的血饼。
附图标记说明
1、2、3、4...微型薄片
40...载物台
100、200、300、400...第一基板
110、210、310、410...第二基板
220...第三基板
101、201、301、401...第一流路
102、202、302、402...第二流路
103、203、303、403...合流流路
104、304...废液贮存部
105、205、305...狭窄部
111、211、311、411...第一流入口
112、212、312、412...第二流入口
113、213、313、413...搅拌部
114、214、314、414...排出口
115、215、315、415...诱发材料设置部(血栓生成室)
117、217、317、417...搅拌件
306、406...第三流路
318、418...第三流入口
320、420...第一输液泵(第一泵)
321、421...第二输液泵(第二泵)
322、422...第三输液泵(第三泵)
323...固定用孔
324、44...摄像机
325、425...图像解析装置
326...微型薄片固定用销
327、427...加热器
328...观测用间隙
329、429...搅拌器
330...微型薄片设置用载物台
331、431...照明
432...压力传感器
433...血液贮存器、434...废液容器
435...第一连接喷嘴、436...第二连接喷嘴、437...废液管
A...血液观测装置、B...血液观测装置、C...血液观测装置
具体实施方式
首先，参照附图对本发明的微型薄片进行说明。
图1是表示本发明微型薄片的第一实施方式的示意图。下面基于图1对第一实施方式进行说明。
图1(A)是在表面开设有作为微型薄片流路的槽的第一基板100的俯视图。图1(B)是在背面开设有作为微型薄片搅拌件收纳部的孔的第二基板110的俯视图。图1(C)和图1(D)是使这些槽或孔的开口部位于内侧、将第一基板100和第二基板110进行层叠后的第一实施方式微型薄片1的俯视图和主视图。虚线表示槽或孔等存在于微型薄片1的内部。
在图1(A)中，在第一基板100上设置有一个连续的槽，该槽作为第一流路101和合流流路103。在该槽的中间具有宽度变窄的狭窄部105，在狭窄部105的上游设置有与该槽的宽度宽的部分连接的作为第二流路102的槽。这些槽的剖面形状为凹形、U形、V形等任意形状。此外，在合流流路103下游的终止端上，设置有作为废液贮存部104的孔。孔的开口形状为圆形、四方形等任意形状，孔的底面可以是平面也可以是曲面。而且，在对本说明书附图进行的说明中，“上游”是指图的左侧，“下游”是指图的右侧。
在图1(B)中，在第二基板110上，分别在当第二基板110与第一基板100层叠时相当于第一流路101上游起始端的位置上，开设有作为第一流入口111的贯通孔；在相当于第一基板100上的第二流路102上游起始端的位置上，开设有作为第二流入口112的贯通孔；在相当于第一基板100上的废液贮存部104的位置上，开设有作为排出口114的贯通孔；以及在相当于第一基板100上的第一流路101和第二流路102的连接部的位置上，开设有作为搅拌部113的圆筒形孔。孔的底面可以是平面也可以是曲面。此外，在被从第一基板100上的狭窄部105到下游的合流流路103所覆盖的第二基板110的背面上，涂布有胶原等血栓生成诱发材料。具体地说，如图1C所示，为了保险起见，将血栓生成诱发材料大范围地涂布在诱发材料设置部115内。经过诱发材料设置部115内的合流流路103成为血栓生成室。
作为血栓生成诱发材料可以例举胶原或vWF(von Willebrand因子、血管性血友病因子)、预先制作的血栓、丝线或棉等纤维基材等。可以单独使用其中一种，或者组合多种来使用。在上述血栓生成诱发材料中，由于容易得到且使用方便、并且模式与实际血管相似，所以特别优选的是胶原，也可以是包含有胶原和组织凝血活酶的材料。将胶原或vWF等血栓生成诱发材料以高粘着强度涂布在诱发材料设置部115上，以使血栓生成诱发材料不会因血流而流出。例如可以如日本专利公开公报特开平05-260950号或Blood.1995 Apr 1；85(7)：1826-35.中所记载的那样对胶原进行涂布，将胶原溶解在酸性溶液中，并将具有亲水性的玻璃或聚苯乙烯基板浸渍在该溶解后溶液中，通过清洗、干燥等方法，能够简便且高粘着强度地进行涂布。
在对疏水性的树脂等进行涂布的情况下，通过对树脂表面进行等离子处理等使其亲水化后，在所希望的区域内涂布胶原溶液，通过自然干燥或在减压条件下进行干燥，可以进行涂布。
此外，纤维基材或预先制作的血栓等血栓生成诱发材料的状态优选的是，将它们固定在作为血栓生成室的诱发材料设置部115内的合流流路103内部。通过将胶原浸在薄吸湿性纤维基材内，例如棉、无纺布或织布等内，并进行干燥，能够得到血栓生成诱发能力更高的血栓生成诱发材料。而且，如果将这些基材浸渍在包含有组织凝血活酶的胶原溶液中并进行干燥，则可以进一步提高血栓生成诱发能力。
在把胶原作为血栓生成诱发材料进行涂布的情况下，如果至少使第二基板110成为诱发材料设置部115的部位的基材为平滑的玻璃或塑料，则对胶原的密封性良好，所以是优选的。在采用塑料作为基材的情况下，可以通过等离子处理等使其亲水化，利用吸管或注射器等分液器将胶原溶液涂布在所希望的区域内，并通过自然干燥或在减压条件下进行干燥，能够将胶原或包含有组织凝血活酶的胶原容易地进行涂布。
而且，狭窄部105也是血栓生成诱发材料，有时也仅把狭窄部105用作血栓生成诱发材料。如本实施方式那样，如果预先设置有狭窄部105，则可以观测到高应力引起的血小板凝聚，由于可以再现动脉粥样硬化血栓症的血栓生成，所以是优选的。
如图1(C)和图1(D)所示，通过以下方式得到第一实施方式的微型薄片1：将第二基板110紧密粘着在第一基板100上来进行层叠，以使设置在第二基板110上的诱发材料设置部115位于内侧，并且使各流路和搅拌部117被封闭。
微型薄片的材质优选的是金属、玻璃或塑料、硅等。而且，从用于进行血液观测(特别是图像解析)的角度来说，优选的是透明材质。此外，从形成电路的角度来说，优选的是塑料，特别优选的是透明塑料。在材质为PDMS(聚二甲基硅氧烷)等硅制材料的情况下，虽然由于基板之间的紧密粘着性良好，即使不利用粘着剂等对第一基板100和第二基板110进行粘着而通过压接就可以进行层叠，但在对微型薄片1的内部施加高压的情况下，优选的是使用粘着剂。在采用聚苯乙烯制基板的情况下，由于可以利用聚乙酰内脂(PVLA)来简便且高粘着强度地对流路内进行涂布，所以在采用没有进行抗凝固处理的血液的情况下，能够在不打算使血液凝固的部位抑制血液凝固。此外，利用聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤(PMEA)也能够简便且有效地在不打算使血液凝固的部位抑制血液凝固。而且，虽然可以利用刀具或激光来开设设置在微型薄片1的基板上的槽或孔，但是在微型薄片1的材质是塑料的情况下，可以通过注塑成型来形成槽或孔。如果通过注塑成型来形成槽或孔，则由于可以高效地制作具有一定品质的微型薄片1，所以是优选的。
基于图1(C)和图1(D)对采用本实施方式微型薄片1进行血液观测的一个例子进行说明。第一流入口111和第二流入口112与未图示的管连接，并通过管与未图示的输液泵、真空采血管或注射器连接。利用所连接的泵、真空采血管或注射器，分别将血液和药剂导入到微型薄片1内的第一流路101和第二流路102中。而且，在采用没有进行抗凝固处理的血液的情况下，与微型薄片连接的注射器或真空采血管等容器也优选采用肝素涂布后的容器或由聚乙酰内脂(PVLA)、聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤(PMEA)等具有血液凝固抑制性的材料进行涂布后的容器。
作为第一液体的血液从第一流入口111导入，并经过第一流路101，包含有能够与血液发生反应的药剂的第二液体从第二流入口112导入，并经过第二流路102，第一液体和第二液体在第一流路101与第二流路102的连接部分处合流，到达搅拌部113。在搅拌部113内利用搅拌件117使血液和药剂均匀地混合，搅拌混合后的混合液中血液和药剂一边发生反应，一边流向合流流路103。搅拌混合后的混合液通过流经合流流路103的狭窄部105或诱发材料设置部115，诱发血栓的生成。而且，在狭窄部105中通过对流经合流流路103的混合液的流速或性状进行观测，可以进行以观测血液的反应性能等为目的的观测。供观测的血液贮存到设置在合流流路103终止端的废液贮存部104内，根据需要从排出口114排出。而且，也可以不设置废液贮存部104，而直接从排出口114排出。
优选的是，从微型薄片的外部把未图示的电动机的转动力利用磁性传递给搅拌件117从而使其能够转动。对搅拌件117进行了抑制第一液体和第二液体合流后的液体凝固的凝固抑制处理。作为凝固抑制处理可以是通过浸渍到溶解树脂中，来将肝素、聚乙酰内脂(PVLA)或聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤(PMEA)等覆盖在磁性件的表面上，或者是采用模内装饰镶嵌注塑技术(IMD)等的树脂加工，来形成搅拌件的表面。
图2是表示本发明微型薄片的第二实施方式的示意图。下面基于图2对第二实施方式进行说明。本实施方式与第一实施方式的不同点是采用三块基板来构成微型薄片2。与第一实施方式相同部分省略了说明。
图2(A)是在背面上开设有作为微型薄片流路的槽，并且开设有与这些槽连接、作为流入口或排出口的贯通孔的第一基板200的俯视图。
图2(B)是开设有作为微型薄片搅拌件收纳部的贯通孔的第二基板210的俯视图。图2(C)是作为搅拌件的收纳部底部的第三基板220的俯视图。图2(D)和图2(E)是将上述三块基板进行层叠后的第二实施方式微型薄片2的俯视图和主视图。
在图2(B)中，在第二基板210上开设有当层叠后作为搅拌部213的贯通孔。该贯通孔的形状为宽度朝向下游逐渐变窄、深度朝向下游逐渐变浅。在本实施方式中，在第二基板210的表面上设置有血栓生成诱发材料。
如图2(D)和图2(E)所示，通过如下方式得到第二实施方式的微型薄片2：将第二基板210紧密粘着在第一基板200的下表面来进行层叠，以使各流路被封闭，再将第三基板220紧密粘着在第二基板210的下表面来进行层叠，以便使第三基板220成为设置在第二基板210上的搅拌部213的底部。
图3是表示本发明微型薄片的第三实施方式的示意图。下面基于图3对第三实施方式进行说明。本实施方式与第一实施方式的不同点是设置有第三流路来构成微型薄片3。与第一实施方式相同部分省略了说明。
图3(A)是在表面上开设有作为微型薄片流路的槽的第一基板300的俯视图。图3(B)是在背面上开设有作为微型薄片搅拌件收纳部的孔的第二基板310的俯视图。图3(C)和图3(D)是使这些槽或孔的开口部位于内侧，并将基板300和基板310进行层叠后的第三实施方式的微型薄片3的俯视图和主视图。
在图3(A)中，在狭窄部305下游、且在废液贮存部304上游的第一基板300表面上，开设有作为第三流路306的槽，使该槽的一端与合流流路303连接。
在图3(B)中，在第二基板310上，在当与第一基板300层叠后相当于第一基板300上的第三流路306另一端的位置上，开设有作为第三流入口318的贯通孔。搅拌部313与第二实施方式的微型薄片2的搅拌部213相同。
图3(C)和图3(D)所示的第三实施方式的本发明微型薄片3与第一实施方式相同，也是通过紧密粘着来进行层叠而得到的。
而且，第三实施方式的微型薄片3是把未图示的管与第三流入口318连接，通过管与未图示的输液泵或注射器连接，将用于抑制混合液凝固的抗凝固处理剂导入第三流路306内。通过导入该抗凝固处理剂，由于不会发生供观测的混合液凝固而使微型薄片内的流路堵塞的情况，所以能够稳定地进行观测。作为抗凝固处理剂将在后面进行叙述，例如可例举乙二胺四乙酸(EDTA)溶液等。
接着，对采用本发明微型薄片的本发明血液观测装置进行说明。
图4是对由透明基板构成的第三实施方式的微型薄片3进行组装后的、作为本发明血液观测装置的第一实施方式的血液观测装置A的示意图。下面基于图4对血液观测装置的第一实施方式进行说明。
微型薄片3的第一流入口311通过管与提供抗凝固处理后的血液的第一输液泵320连接。第一输液泵320与未图示的压力传感器连接。
第二流入口312通过管与提供抗凝固解除剂的第二输液泵321连接。抗凝固解除剂是解除抗凝固处理后的血液的抗凝固处理的药剂。
第三流入口318通过管与提供血液凝固防止剂的第三输液泵322连接。
在微型薄片3内，从第一输液泵320挤压出的抗凝固处理后的血液与从第二输液泵321注入的抗凝固解除剂在合流流路内合流，在搅拌部313内利用搅拌件317进行搅拌而混合后，从合流流路流出，到达涂布有血栓生成诱发材料的诱发材料设置部315内。
通过目视或利用未图示的摄像机，来观察血栓生成室中血栓的生成，从而可以进行血液观测，该血栓生成室作为诱发材料设置部315的合流流路。或者通过利用与第一输液泵320连接的压力传感器来测定流路内的压力，从而能够进行定量的血液观测。
流经血栓生成室的血液混合液和从第三输液泵322导入的血液凝固防止剂混合，从排出口314顺畅地排出，该第三输液泵322通过管与第三流入口318连接。
图5和图6是对由透明基板构成的第三实施方式的微型薄片3进行组装后的、作为本发明血液观测装置的第二实施方式的血液观测装置B的示意图。下面基于图5对血液观测装置的第二实施方式进行说明。本实施方式与第一实施方式的不同点在于装置被系统化。与第一实施方式相同部分省略了说明。
血液观测装置B所使用的微型薄片3的第二流入口312通过管与提供血小板活化剂的第二输液泵321连接，除此以外，与第一实施方式结构相同。血小板活化剂是使血小板活化的药剂。由于血液观测装置B在血液观测装置A的基础上，还附加设置有用于观察血栓生成室的CCD摄像机324、图像解析装置325、加热器327、照明331和未图示的计算机，所以血液观测装置B作为一个系统，可以将血栓生成的状况图像化、或者可以监测或控制微型薄片内的压力。
在微型薄片3上设置有两个固定用的孔323，通过使薄片固定用销326嵌入所述孔323中，可以在固定的状态下对微型薄片3进行测定，该薄片固定用销326配置在用于设置微型薄片3的载物台330上。在载物台330上的微型薄片正下方的位置上设置有加热器327，通过加温到37℃，可以在与生物体内接近的条件下进行测定。
下面对采用该血液观测装置B的本发明血液观测方法进行简要说明。
在搅拌部313内，搅拌件利用磁力搅拌器329而转动，利用该搅拌件使从第一输液泵320流入的抗凝固处理后的血液和从第二输液泵321流入的使血小板活化的药剂混合，并在流动的同时在诱发材料设置部315的血栓生成室内生成血栓。在载物台330的相当于血栓生成室的部位上，设置有照明用的间隙328，利用光源331对血栓生成室进行照明，并利用摄像机324对血栓生成状况进行拍摄，通过图像解析装置325进行解析。
在该血液观测装置B中，通过图像解析，可以更详细地掌握血栓生成的状况。特别是在利用奎纳克林等对血小板、白血球进行荧光标记，来观测它们在胶原上的粘着和凝聚的情况下，通过图像解析来观测由荧光发光产生的单位面积的辉度，可以将观测结果数值化并得到数据。由于在血流状态下生成的血栓是富含血小板、白血球的白色血栓，在抗凝固状态下使血小板活化而得到的血栓也因血小板而为白色血栓，所以通过利用本装置观测血液由红色逐渐变成白色的状况、或者红色和白色的比例、面积，能够容易地解析血栓的生成过程。并且，通过图像解析和测定对第一输液泵320施加的压力的变化，可以综合性地观测血栓生成的状况。
图6是垂直直立设置血液观测装置B，以使微型薄片3的第一流路和第二流路位于下方、且使合流流路位于上方，即，使第一流入口311和第二流入口312位于下方、且使排出口314位于上方。如果如图5所示水平放倒设置微型薄片3，则搅拌部313向上方凸出，由此，即使血液流入到搅拌部313内，有时会残留少量空气。但如果这样垂直直立设置血液观测装置B，则当在搅拌部内进行混合时，虽然产生气泡，也可以自然地向上方释放气泡，从而可以不受气泡影响、稳定且均匀地进行搅拌混合。
下面对本发明第四实施方式的微型薄片4和采用该微型薄片4的血栓观测装置C进行说明。
图10是表示本发明第四实施方式的微型薄片4的示意图。图10(A)表示第一基板400，图10(B)表示第二基板410，图10(C)表示制作完成后的图。
将基板400和基板410进行贴合而形成微型薄片4。在基板400上开设有相当于第一流入口411的贯通孔，此外，还开设有相当于第一流路401、第二流路402、合流流路403和第三流路406的槽。
在基板410上开设有相当于第二流入口412、第三流入口418和排出口414的贯通孔，此外，还开设有相当于搅拌部413的孔，并在相当于血栓生成室415的部位上涂布有血栓诱发材料。
图10(C)是将基板400和基板410进行贴合而形成微型薄片4时的图。当把基板410放置在下方时，第一流入口411向上开口，第二流入口412、第三流入口418和排出口414向下开口。以使基板400的相当于第一流路401、第二流路402和合流流路403的槽与基板410的相当于搅拌部413的槽和血栓诱发材料涂布部分相对的方式，并且在将搅拌件收容于搅拌部内的状态下，将基板400和基板410进行贴合。基板410的第二流入口412、第三流入口418分别与基板400的第二流路402的左端部、第三流路406的右端部连接。基板410的排出口414与基板400的合流流路403的右端部连接。
图11是表示载置微型薄片4的载物台40。
在载物台40上设置有第一连接喷嘴435、第二连接喷嘴436，它们分别与微型薄片4的第二流入口412、第三流入口418连接。这些喷嘴由不锈钢或硬质塑料制成，从下方与微型薄片4的各流入口连接。通过以这种方式进行连接，这些喷嘴将微型薄片4准确地引导到载物台40上的规定位置上，并具有使微型薄片4与摄像机等观测设备或驱动搅拌件的磁力搅拌器的位置位于最佳位置的功能。第一和第二连接喷嘴分别通过管与第二泵421和第三泵422连接。
用于解除抗凝固处理的药剂(例如氯化钙)、使血小板活化的试剂(例如ADP)或纤溶药(例如tPA)等，从第一连接喷嘴435通过第二流入口412流入到第二流路402内。为了防止血液不断凝固从而使比血栓诱发材料涂布区域415更靠向下游的合流流路403和排出管437堵塞，使血液凝固防止剂从第二连接喷嘴436通过第三流入口418流入到第三流路406内。
从第二流入口412流入的解除抗凝固处理药剂的量与从第三流入口418流入的血液凝固防止剂相比，更为少量且需要进行精密的流量控制。因此，优选设计成使第一连接喷嘴435的直径比第二连接喷嘴436的直径小。如果设计成第一连接喷嘴435的直径较小，则即使在流入少量液体的情况下，由于喷嘴前端的死区容积很小，所以能够精密且稳定地送出液体。
第一连接喷嘴和第二连接喷嘴的外径设计成使它们能够与第二流入口412、第三流入口418的孔连接成不会泄漏液体。例如，优选的是，第一连接喷嘴的外径为0.5～1.5mm，第二连接喷嘴的外径为1～3mm，第二流入口的孔直径为0.5～1.5mm，第三流入口的孔直径为1～3mm左右。
第一、第二连接喷嘴435、436还具有对磁力搅拌器429进行定位的功能，该磁力搅拌器429对收纳在搅拌部413内的搅拌件进行驱动，微型薄片4与第一连接喷嘴435和第二连接喷嘴436连接，位置被固定，在微型薄片4的搅拌部413正下方设置有磁力搅拌器429。合流流路403的下方是透明的加热器427，加热器427控制微型薄片4的温度，并且利用合流流路403下方的照明431，照射合流流路403的血栓诱发材料设置部415上的血栓。与微型薄片4的排出口414的位置相对应，在载物台40上开设有排出废液用的孔，该孔通过废液管437与废液容器434连接。废液容器434内为负压，从排出口414吸引废液。
图12是本发明血栓观测装置C的示意图。在血栓观测装置C的载物台40上设置微型薄片4，并在上部设置与第一泵420和压力传感器432连接的血液贮存器433、以及与图像解析装置425连接的CCD摄像机424。
抗凝固处理后的血液流向第一流入口411。抗凝固处理后的血液贮存在血液贮存器433内，血液贮存器433与第一泵420连接。将矿物油从第一泵420注入到血液贮存器433内，被注入的矿物油挤压，血液流入到微型薄片4内。利用压力传感器432测量血液的流入压力。
在合流流路403的涂布有血栓诱发剂的区域415的上部，设置有CCD摄像机424。CCD摄像机424能够沿合流流路移动，按照程序定时地拍摄合流流路403的静止图像。CCD摄像机424一边以一定距离移动，一边摄取静止图像，能够连续地摄取整个合流流路403的静止图像。
但是，在采用第一实施方式的微型薄片1的情况下，如果也水平放倒设置微型薄片1，则由于搅拌部向上方凸出，所以优选如血液观测装置B那样直立设置微型薄片1。另一方面，在采用第二实施方式的微型薄片2的情况下，即使水平放倒设置微型薄片2，由于搅拌部向下方凹陷，所以既可以采用水平放倒设置方式，也可以采用直立设置方式。
另外，微型薄片1或微型薄片3与微型薄片2结构不同的理由是：在注塑成型微型薄片的情况下，由于以往仅使槽成形，再根据需要开设流入口或排出口，所以不存在使槽和孔一次成形的模具。虽然第二实施方式的微型薄片2的第一基板200上并存有槽和孔，但孔是注塑成型后开设的。因此，如果制造了使槽和孔一次成形的模具，则可以使微型薄片1或微型薄片3的搅拌部向下方凹陷。
下面对采用血液观测装置B的本发明血液观测方法进行详细说明。
首先，基于图5、且关于微型薄片3的详细部分参照图3，对采用本发明微型薄片3的本发明血液观测方法的第一实施方式进行说明。
未图示的注射器倒立连接在第一流入口311上，该注射器收容在第一输液泵320和管之间进行了抗凝固处理后的血液。在第一输液泵320内填充有不与血液混合、且比重比血液小的液体，将该液体压入收容有血液的注射器内，重叠在血液的上方，通过比重比血液小的液体，把血液挤压到微型薄片3内。
作为第一输液泵320的血液压送用的比重比血液小的液体可以例举流动石蜡、矿物油或硅油等各种油脂、生理盐水等。如上所述，通过间接地挤压出血液，能够防止输液泵或压力传感器被血液污染。
而且，作为泵，虽然可以采用市场出售的普通的泵，但是也可以采用注射器泵，利用一定的空气压力进行挤压，或者使注射器倒立以使柱塞位于上方，对柱塞施加重量。
作为抑制血液凝固的抗凝固处理所使用的抗凝固处理剂可以例举柠檬酸钠或柠檬酸钾、草酸钠或草酸钾、ACD(Acid Citrate Dextrose枸橼酸葡萄糖)和乙二胺四乙酸(EDTA)盐等。这些抗凝固处理剂可以作为粉末、冷冻干燥品和水溶液等溶液来使用。在这些抗凝固处理剂中，一般来说优选能容易得到的3.2％的柠檬酸钠。在这种情况下，优选血液与该抗凝固处理剂的容量比为9∶1。
作为其他抗凝固处理剂能够使用肝素、水蛭素、水蛭肽(水蛭素C末端区域肽)、抑肽酶、抗凝血酶抗体、凝血酶适体和从玉米中提取出的胰蛋白酶抑制剂(1977.J.Biol.Chem 252.8105)等。而且，也可以采用多种抗凝固处理剂。
作为对测定用样本进行采血的方法是在注射器或真空采血管中预先加入上述抗凝固处理剂来进行采血，或者是在刚采血后的血液中迅速地加入抗凝固处理剂等，利用上述方法可以得到抗凝固处理后的血液。
此外，在利用包含有肝素的真空采血管等进行采血后，加入肝素酶和适用于观测目的的抗凝固处理剂，利用肝素酶分解肝素，也能够与适用于测定目的的抗凝固处理剂进行替换。同样地，利用包含有柠檬酸的真空采血管进行采血，通过加入氯化钙、以及从玉米中提取出的胰蛋白酶抑制剂或凝血酶适体等适用于观测目的的凝固因子阻碍剂，能够配合观测目的，采集抗凝固处理后的血液。
第二流入口312与第二泵321连接，第二泵321与填充有抗凝固解除剂的未图示的药剂管连接。
作为抗凝固解除剂，在利用如柠檬酸那样的螯合剂来解除抗凝固处理的情况下，可以例举氯化钙、溴化钙、碘化钙等卤化钙、磷酸钙、硫酸钙，硝酸钙、重碳酸钙等无机酸钙盐、蚁酸、醋酸、丙酸、丁酸、海藻酸、乳酸、葡萄糖酸、甘油酸、以及甘油磷酸等有机酸钙盐这些作为游离钙供给体的钙化合物。
此外，作为抗凝固解除剂，在利用凝固因子阻碍剂(抗凝固处理剂)来解除抗凝固处理的情况下，可以适当地选择使用对应于凝固因子阻碍剂的抗凝固解除剂。例如，在采用肝素作为抗凝固处理后的抗凝固解除剂的情况下，该抗凝固解除剂能够使用鱼精蛋白、肝素酶或抗肝素抗体等，在采用水蛭素、水蛭肽和抑肽酶作为抗凝固处理后的抗凝固解除剂的情况下，分别能够使用抗水蛭素抗体、抗水蛭肽抗体和抗抑肽酶抗体等抗凝固解除剂。
此外，在利用凝固因子阻碍剂来解除抗凝血酶抗体的抗凝固处理的情况下，作为抗凝固解除剂可以使用PPACK凝血酶等完全不活化的凝血酶、凝血酶的分解断片和包含有凝血酶中的抗体识别抗原决定部位的合成多肽等抗凝固解除剂。
而且，为了使抗凝固处理或抗凝固解除所使用的抗体对补体系统的影响为最小限度，优选使用利用木瓜蛋白酶等除去Fc功能区的抗体，或者是使用鸡卵黄抗体等不具有人体补体系统活化功能的抗体。
在把为单链寡核苷酸DNA的凝血酶适体(Blood.1993 Jun 15；81(12)：3271-6.或J Mol Biol.1997 Oct 10；272(5)：688-98.)作为抗凝固处理剂来使用的情况下，能够将与相对于凝血酶适体的反义DNA或反义RNA等凝血酶适体结合、并阻碍功能的物质作为抗凝固解除剂使用。如果凝血酶适体合并使用识别胞外分泌I和II两种，则能够得到比单独使用的情况高很多的抗凝固处理效果。此时采用的反义DNA如果实际上使凝血酶适体的抗凝血酶功能无效，则也可以是相对于凝血酶适体的一部分的物质。
从第一流入口311导入并通过第一流路301的抗凝固处理后的血液与从第二流入口312导入并通过第二流路302的抗凝固解除剂合流，到达搅拌部313内，利用搅拌件317使它们均匀地混合。混合后的血液一边被解除抗凝固处理，一边通过流经合流流路303的狭窄部305或诱发材料设置部315，诱发血栓的生成。通过血栓生成室的血液从与排出口314连接的未图示的排出管排出。
通过目测观测此时血液的流速，或者利用与第一泵320连接的压力传感器来测定压力，可以评价血液具有的血液凝固能力。此外，通过目视或用摄像机324来观测血栓生成室，可以监测血液凝固的状态。
向与第一流入口311连接的注射器内填充抗凝固处理后的、例如利用柠檬酸钠处理后的全血和富含血小板的血浆(第一液体)。向与第二流入口312连接的药剂管内填充抗凝固解除剂、例如氯化钙溶液(第二液体)。第二液体的浓度在第一液体的凝固级联作用开始大约5～20毫摩尔时进行调整。利用搅拌件317搅拌第一液体和第二液体的混合液，并使混合液流入到诱发材料设置部315内的血栓生成室中。通过利用这种能够透视的装置来观测流经诱发材料设置部315的血液，可以简便地观测血栓生成。
此外，血栓生成的观测可以通过当血液流动一定时间后，将血液从血栓生成室内除去，利用目视来进行评价。在送出第一液体或第二液体的泵由空气驱动的情况下，可以通过利用一定压力送出第一液体或第二液体，来降低从排出管排出的血流量，从而可以监测在胶原上的血栓生成。在采用富含血小板的血浆的情况下，由于血栓的视觉辨认性高，所以容易观察，从而也能够利用肉眼观察血栓生成。此外，也可以利用米帕林等对血小板进行荧光标记，并利用荧光显微镜进行监测。
接着，与第一实施方式相同，参照图5和图3对本发明血液观测方法的第二实施方式进行说明。
本实施方式与第一实施方式的不同点是，作为血液采用抗凝固处理后的全血或富含血小板的血浆，作为与血液反应的药剂采用使血小板活化的药剂。与第一实施方式相同部分省略了说明。
下面基于图6进行说明。
对与微型薄片3的第一流入口311连接的注射器内的血液进行抗凝固处理。虽然进行如上所述的抗凝固处理，但是其中优选柠檬酸处理。
在与第二流入口312连接的药剂管中填充使血小板活化的药剂。作为使血小板活化的药剂可以例举ADP、胶原、凝血酶和瑞斯托菌素等。
从第一流入口311导入并通过第一流路301的抗凝固处理后的血液与从第二流入口312导入并通过第二流路302的使血小板活化的药剂合流，到达搅拌部313内，并利用搅拌件317使它们均匀地混合。混合后的血液一边使血小板活化，一边通过流经合流流路303的狭窄部305或诱发材料设置部315，引起血小板的粘着、凝聚，从而生成血小板血栓。
通过测定此时血液的流速或压力，可以评价血小板功能。此外，通过目视或用摄像机324来观测血栓生成室，可以监测由血小板引起的血栓生成的状态。由此，在接近人体内的环境下，可以详细地观测血小板的粘着、凝聚等血小板功能。
接着，与第一实施方式相同，参照图5和图3，对本发明的血液观测方法的第三实施方式进行说明。
本实施方式与第一实施方式的不同点是，作为血液使用全血或富含血小板的血浆，并使其直接流入到第一流路301内，在血栓生成室内生成血栓，如果观测到生成了一定程度的血栓，则作为能够与血液反应的药剂，使血栓溶解剂的溶液流入到第二流路302内。与第一实施方式相同部分省略了说明。
下面基于图5进行说明。
没有特意对与微型薄片3的第一流入口311连接的注射器内的血液进行抗凝固处理。
在与第二流入口312连接的药剂管中填充有血栓溶解剂。作为血栓溶解剂可以例举尿激酶、血纤维蛋白溶酶和tPA等。
从第一流入口311导入并流经第一流路301的血液通过搅拌部317，在血栓生成室内生成血栓。此时，即使对搅拌件317进行了凝固抑制处理，有时也会在搅拌部313发生血液凝固。为了防止这种情况的发生，优选的是搅拌件317不转动、保持静止，更优选的是对搅拌部313也利用PVLA等进行凝固抑制处理。
如果观测到一定程度的血栓，则从第二流路302导入血栓溶解剂，通过第二流路302的血栓溶解剂到达搅拌部313内，利用搅拌件317将其与血液均匀地混合。混合后的血液到达血栓生成室内，溶解生成的血栓。
通过测定此时血液的流速或压力，可以评价血栓溶解能力。此外，通过目视或用摄像机324来观测血栓生成室，可以监测血栓溶解的状况。
下面利用图10～12对本发明的血栓观测方法进行说明。
把微型薄片4设置在载物台40上。将第一连接喷嘴435、第二连接喷嘴436分别插入到第二流入口412、第三流入口418内，把搅拌部413设置在载物台40的磁力搅拌器429上方，并且在合流流路403的血栓诱发剂设置部415的上方设置CCD摄像机424，在血栓诱发剂设置部415的下方设置照明431。在载物台40上设置有加热器427，该加热器427使微型薄片4保持一定的温度。优选的是将微型薄片4的温度保持在37℃左右。
根据测定目的适当地确定采用的试剂或血液、血栓诱发材料。
例如，在测定综合反映血液凝固、血小板功能和纤溶等血栓形成能力的情况下，优选如下所述的测定方法。
向血液贮存器433内加入抗凝固处理后的全血。虽然对抗凝固处理没有特别限定，但是优选利用柠檬酸、或柠檬酸和从玉米中提取出的胰蛋白酶抑制剂进行抗凝固处理。血液贮存器433与第一泵420和第一流入口411连接。利用第一泵420将矿物油注入到血液贮存器433内，血液从第一流入口411注入到微型薄片4内。通过第一连接喷嘴435，将氯化钙从第二流入口412注入。血液和氯化钙流经第一流路和第二流路，在搅拌部413内合流，并利用搅拌件将它们混合。
进行混合的氯化钙和血液容量比优选的是，血液∶氯化钙为10∶2～100∶1。如果超过10∶2则血液被氯化钙稀释，不能形成适合于观测的血栓，在100∶1以下的情况下，氯化钙溶液的量为微量而使流速降低，导致难以由第二泵421精密地送出液体。氯化钙溶液的浓度调整为：当混合后使柠檬酸的抗凝固处理无效(解除)。优选的是控制第一泵或第二泵，以使液体在混合部413内停留5秒～3分钟左右进行搅拌。如果搅拌时间在5秒以下，则有可能没有充分地进行搅拌，如果超过3分钟，则有可能导致在搅拌部413内血液不断凝固。
混合后的血液流经合流流路403，并通过血栓生成室415。附着在血栓生成室415的血栓诱发材料优选的是涂布胶原和组织凝血活酶混合物。
通过包含有胶原和组织因子，诱发在胶原上的血小板的粘着和凝聚、以及由组织因子使凝固系活化等综合性的参与血栓形成的现象。流经由合流流路403和血栓诱发材料设置部415构成的血栓生成室415的血液，与从第二喷嘴436通过第三流路注入的血液凝固防止剂混合，从排出口414排出，并通过排出管437贮存到废液容器434内。
由于使用血液凝固防止剂的目的是防止废液从排出口414向废液容器434的移动过程中，因血液凝固而导致堵塞或压力上升，所以可以采用EDTA、柠檬酸等螯合物剂、酸、碱性溶液、乙醇类或胍、尿素、SDS等变性剂。
如果在合流流路内不断形成血栓，则向血液贮存器433送出矿物油部分的压力上升。通过由压力传感器432检测压力上升，可以判断流路内的堵塞状况。
利用由白色LED构成的照明431从下部进行照射，并利用上部的摄像机424拍摄微型薄片4内的血栓形成状况。摄像机424每隔规定的一定时间移动一定的距离，通过连续对同一位置进行拍摄，能够掌握经过一定时间的整个合流流路403内的血栓形成。
实施例
虽然下面例举具体的实施例对本发明进行更详细的说明，但是本发明并不限定于此。
实施例1
制作微型薄片和血液观测装置
准备如图1(A)所示的第一基板100和如图1(B)所示的第二基板110这两块透明基板(株式会社利其尔(Richell)制注塑成型品)。使第一基板100的流路开口一面与第二基板110的作为搅拌部113的孔的开口一面相对，并采用粘着剂将它们进行层叠，来作为如图1(C)、图1(D)所示的微型薄片1。而且，各流路的深度为0.12mm，第一流路101的宽度为1.2mm，合流流路103的狭窄部的宽度为0.3mm。搅拌件117是用PVLA覆盖铁制圆柱而形成的直径为1mm、长度为2mm的圆柱形，将搅拌件117收纳在搅拌部113内。作为搅拌部113的孔是剖面圆形的贯通孔，其内径为3mm、深度为1.2mm。在第二基板110的诱发材料设置部115上涂布有胶原。搅拌件117利用搅拌器的磁力，以100～200rpm的转速转动。
将泵连接在制作完成后的微型薄片1的第一流入口和第二流入口上，从而制作完成血液观测装置。
确认混合状态和残留空气
把纯水作为第一液体以20μL/min的速度从微型薄片1的第一流入口111注入、把红墨水作为第二液体以10μL/min的速度从第二流入口112注入，并在搅拌部113内进行搅拌，当从排出口114排出时，两种液体被均匀地混合。
在使第一基板100位于下方、第二基板110位于上方的状态下，水平放倒设置微型薄片1，来作为血液观测装置，在这种情况下，尽管第一液体和第二液体被顺畅地混合，但在搅拌部113内残留有少量空气。
另一方面，在使微型薄片1的第一流入口111位于下方、排出口114位于上方的状态下，垂直直立设置微型薄片，在这种情况下，在搅拌部113内没有残留空气。
实施例2
制作微型薄片
准备如图2(A)所示的第一基板200和如图2(B)所示的第二基板210这两块透明基板(フルィドゥェア社(Fluidware Technologies Inc.)制注塑成型品)和由透明的丙烯板构成的如图2(C)所示的第三基板220。使第一基板200的流路开口一面与第二基板210的作为搅拌部213的孔的开口一面相对，采用粘着剂将它们进行层叠。使用粘着剂由第三基板220来封闭第二基板200的搅拌部213的孔的开口，作为如图2(D)和图2(E)所示的微型薄片2。而且，第二基板210的厚度为1.2mm，与作为搅拌部213的孔的深度相配合。第二基板210的作为搅拌部213的孔是如图2(B)和图2(E)所示的形状，包括内径3mm的圆形贯通孔和带有三维倾斜的三棱锥状的流出路。各流路的深度为0.25mm，第一流路201的宽度为0.5mm，合流流路203的狭窄部的宽度为0.2mm，第二流路202的宽度为0.15mm，胶原的涂布和搅拌件的收纳与实施例l相同。
制作向液观测装置和确认混合状态
在第一基板200位于上方、第三基板220位于下方的状态下，水平放倒设置微型薄片2，将泵连接在第一流入口和第二流入口上，从而制作完成血液观测装置。
把纯水作为第一液体以20μL/min的速度从微型薄片2的第一流入口211注入、把红墨水作为第二液体以10μL/min的速度从第二流入口212注入，并使它们通过搅拌部，当从排出口214排出时，两种液体被均匀地混合。而且，在搅拌部213内没有残留空气。
实施例3
除了作为实施例2的第二基板210的搅拌部213是内径为3mm的单独圆形贯通孔以外，与实施例2相同地制作微型薄片2和血液观测装置，并与实施例2相同，进行确认混合状态的实验。其结果，虽然两种液体被均匀地混合，但是在搅拌部内残留有空气。
实施例4
制作微型薄片和血液观测装置
与实施例1相同制作如图3所示的微型薄片3。但是，使第三流路306的宽度为0.2mm，并在第二基板310的诱发材料设置部315上涂布大约10μL的胶原类型I(新田ゼラチン社(Nitta Gelatin，Inc.))和PT试剂(希森美康株式会社シスメックス社)的混合液。胶原类型I采用3mg/ml的溶液。PT试剂采用将一小瓶希森美康株式会社的PT试剂溶解在2ml的纯水中，在纯水中透析一个晚上后，以1∶1的比例与胶原类型I混合。此外，搅拌部313的形状与实施例2相同。
在第二基板310位于上方、第一基板300位于下方的状态下，水平放倒设置微型薄片2，使第一流入口至第三流入口分别与第一泵320至第三泵322连接，从而制作完成如图5所示的血液观测装置B。
血液观测1
控制各个泵，从上面开始依次执行如表1所示程序的步骤，使各泵成为规定的流速，并且，从微型薄片3的第一流入口311使添加了总量十分之一的3.2％的柠檬酸钠和25μg/ml的从玉米中提取的胰蛋白酶抑制剂的全血、从第二流入口312使0.2M CaCl2、从第三流入口318使0.5MEDTA pH10流入到微型薄片3内。观测后的血液从排出口314排出。
而且，微型薄片3在最初的32秒期间(步骤1和2)垂直直立，使CaCl2和全血流动，当确认空气被完全从搅拌部313内除去后，在第二基板310位于上方、第一基板300位于下方的状态下，把微型薄片3水平设置在载物台330上。
将600μL血液注入直接插入第一流入口311内的前端具有尖细注入筒的容器(贮存容器)内，再向贮存容器内注入矿物油。把该贮存容器的前端直接插入到第一流入口311内，并使贮存容器倒立，使该贮存容器的后端通过管与第一泵320连接。通过使第一泵320按照程序动作，利用矿物油将血液挤压到微型薄片3内。利用第一泵320的压力传感器测定压力变化。结果如图7(A)所示。
表1
执行步骤动作时间(秒) 第一泵(320)流速(μL/分钟) 第二泵(321)流速(μL/分钟) 第三泵(322)流速(μL/分钟)
12 0 30 0
20 200 20 80
10 20 4 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
10 12 1 80
120 12 1 40
实施例5
血液观测2
与实施例4相同，使用图5的血液观测装置B进行以下观测，其中，血液观测装置B采用如图3所示的微型薄片3。省略了与实施例4相同的部分，仅对不同部分进行说明。
从第一流入口311(第一泵320)使添加了总量十分之一的3.2％的柠檬酸钠的全血、从第二流入口312(第二泵321)使0.1μM ADP溶液流入到微型薄片3内。
将微型薄片3的第三流入口318堵住，不使用第三流入口318。
利用如表2所示的程序控制各个泵，并且从第一流入口311将0.1μM全血、从第二流入口312将ADP溶液挤压到微型薄片3内。而且，最初的步骤1和2是为了将空气从搅拌部313内除去而使泵动作。利用第一泵320的压力传感器测定压力变化。结果如图7(B)所示。
表2
执行步骤动作时间(秒) 第一泵(320)流速(μL/分钟) 第二泵(321)流速(μL/分钟)
10 0 30
30 60 10
10 20 4
3000 12 1
实施例6
血栓生成的图像解析
实际观察到的实施例5的血栓生成过程如图8(A)～(D)的照片所示。在血液刚流入之后的流路内，虽然因血液而为红色，但是随着在流路内生成白色血栓，白色区域增加。
而且，图像处理方法是对血液观测装置B的像素成分进行解析的下述方法。对彩色图像(RGB)的B成分(蓝色)，统计比阈值(80)小的像素，作为图像处理的结果。
这相当于抽出强调R(红色)的部分。阈值在0～255之间，以适度抽出红色部分的方式反复尝试后确定为80。
此外，计算与通道范围相当的像素数(大约86000点)的比例(通道比例)，统计RGB的B成分比阈值(80)小的像素，作为系列1，并将图像处理结果曲线化。结果如图9所示。
实施例7
是表示采用如图12所示的血栓观测装置C来测定凝固和由血小板引起的血栓形成的例子。
图10(A)的基板400的所有流路均为槽，流路深度为120μm，第一流路401、合流流路403的流路宽度为250μm，第二流路402的流路宽度为50μm，第三流路406的流路宽度为50μm。各流入口和排出口的形状是圆形，大小是第一流入口411直径为2mm，第二流入口412直径为0.7mm，第三流入口418直径为2mm。各连接喷嘴的粗细是第一连接喷嘴435的外径为0.7mm，第二连接喷嘴436的外径为2mm。排出口414是圆形，直径为2mm。如图10(B)所示，搅拌部413的形状为半径1.5mm的圆形随着向下游逐渐变窄为扇形，深度为1.2mm。搅拌件417表面镀镍，是具有磁性的圆柱状，其长度为2mm，直径为1mm。
将胶原类型I(新田ゼラチン社(Nitta Gelatin，Inc.))和PT试剂(希森美康株式会社)的混合液24μL作为血栓诱发剂，在基板410的相当于血栓诱发材料设置部415的位置上，涂布成边长为1cm的正方形，在一0.08兆帕、减压三小时的条件下进行干燥。血栓诱发材料涂布成当基板400和基板410贴合后，合流流路403不通过涂布有血栓诱发材料的正方形部分的中心，即，合流流路403从距离正方形端部2.5mm的位置通过。不通过涂布有血栓诱发材料的正方形部分的中心的理由是：由于血栓诱发材料从周围开始干燥，而中心最后才干燥，所以会使表面不平滑。胶原类型I采用3mg/ml的浓度。PT试剂使用将森美康株式会社的PT试剂一小瓶溶解在2ml的纯水中，在纯水中透析一个晚上后，以1∶1的比例与胶原类型I混合。
把第一泵420连接在血液贮存器433上，分别通过管把第一连接喷嘴435连接在第二泵421上，把第二连接喷嘴436连接在第三泵422上。
在第一泵420内填充矿物油，在第二泵421内填充0.2M氯化钙溶液，在第三泵422内填充0.5M EDTA(pH10)溶液。
将3.2％的柠檬酸钠溶液与刚采血后的血液混合，使容量比为血液：柠檬酸钠溶液为9∶1，再加入从玉米中提取出的胰蛋白酶抑制剂，以使最终浓度为25μg/ml，将抗凝固处理后的血液填充到血液贮存器433内。
下述表3表示第一泵420、第二泵421和第三泵422的程序。按照程序将血液注入微型薄片4，血液一边与氯化钙混合，一边流向合流流路。
图13中的(a)表示当血液流向合流流路时，利用压力传感器432测定的压力变化的数据。
表3泵的程序
第一泵血液贮存器 第三泵第二连接喷嘴 第二泵第一连接喷嘴
时间 流量 流量 流量
步骤 0～6000 0～10000 0～10000 0～5000
No. 秒 μL/min μL/min μL/min
1 10 0.0 0.0 4.8
2 20 50.0 0.0 1.2
3 10 10.0 40.0 0.95
4 10 10.0 80.0 0.71
5 120 10.0 40.0 0.71
6 10 10.0 80.0 0.71
7 120 10.0 40.0 0.71
8 10 10.0 80.0 0.71
9 120 10.0 40.0 0.71
10 10 10.0 80.0 0.71
11 120 10.0 40.0 0.71
12 10 10.0 80.0 0.71
13 120 10.0 40.0 0.71
14 10 10.0 80.0 0.71
15 120 10.0 40.0 0.71
16 10 10.0 80.0 0.71
17 120 10.0 40.0 0.71
18 10 10.0 80.0 0.71
19 120 10.0 40.0 0.71
20 10 10.0 80.0 0.71
21 120 10.0 40.0 0.71
22 10 10.0 80.0 0.71
23 120 10.0 40.0 0.71
24 10 10.0 80.0 0.71
25 120 10.0 40.0 0.71
26 10 10.0 80.0 0.71
27 120 10.0 40.0 0.71
28 10 10.0 80.0 0.71
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49 120 10.0 40.0 0.71
50 10 10.0 80.0 0.71
图14是通过本测定例子形成白色血栓并利用图12的驱动式CCD摄像机424每经过一定时间拍摄静止图像再进行合成后的例子。通过每隔一定时间对同一位置进行拍摄，观察渐渐生成白色血栓而逐渐堵塞微型薄片4流路的状况。
实施例8
从血栓观测装置取下实施例7的微型薄片4，揭下基板400和基板410，并取出形成在血栓诱发材料设置部上的由血液凝固和活化血小板构成的白色血栓，通过1％的戊二醛和四氧化锇将其固定化后，利用临界点干燥法进行干燥，并用扫描电子显微镜进行观察。此外，通过再添加钙，对静置状态下全血凝固后的白色血栓进行同样的处理，利用扫描电子显微镜进行观察，并对两者进行比较。
图15(A)是形成在微型薄片内的白色血栓，图15(B)是在静置环境下形成的血饼的电子显微镜照片。
图15(A)中血小板为主要成分，几乎观察不到红血球，而图15(B)中红血球缠绕在蛋白纤维上。根据图15(A)和(B)的不同，判断出在本血栓观测装置中的血栓与在没有血流的环境下形成的以往的全血凝固后的血饼相比，即使在微观分析上也是不同的。而且，通过揭下微型薄片4，再详细地进行观察、分析，可以得到更详细的信息。
实施例9
除了向血液中再添加0.5单位/ml的低分子肝素(法安明)以外，进行与实施例7相同的测定。
图13中的(c)表示利用压力传感器432测定出的因血栓形成而产生的压力上升。
实施例10
除了代替0.2M的氯化钙溶液、将包含有8000单位/ml tPA制剂(血栓溶解剂卫材药业)的0.2M氯化钙溶液填充到第二泵421内以外，进行与实施例7相同的测定。
图13中的(b)表示利用压力传感器432测定出的因血栓形成而产生的压力上升。
实施例11
表示采用如图12所示的血栓观测系统C来测定血小板功能的例子。
基板400的所有流路的深度均为120μm，第一流路401、合流流路403的流路宽度为250μm，第二流路402的流路宽度为50μm，第三流路406的流路宽度为50μm。第一流入口411的直径为2mm，第二流入口412的直径为0.7mm，第三流入口418的直径为2mm。第一连接喷嘴435的外径为0.7mm，第二连接喷嘴436的外径为2mm，排出口414的直径为2mm。搅拌部413的形状是半径1.5mm的圆形随着向下游逐渐变窄为扇形，其深度为1.2mm。搅拌件417表面镀镍，是长度为2mm、直径为1mm的圆柱状。
将胶原类型I(新田ゼラチン社(Nitta Gelatin，Inc.))和PT试剂(希森美康株式会社)的混合液24μL作为血栓诱发剂，涂布成1cm×1cm的正方形，在-0.08兆帕、减压三个小时的条件下进行干燥。血栓诱发剂涂布成当基板400和基板410贴合后合流流路403不通过涂布有血栓诱发材料的正方形的中心，即，合流流路403从距离正方形端部2.5mm的位置通过。胶原类型I采用3mg/ml的浓度。PT试剂使用将森美康株式会社的PT试剂一小瓶溶解在2ml的纯水中，并在纯水中透析一个晚上后，以1∶1的比例与胶原类型I混合。
分别把第一泵420连接在血液贮存器433上，把第一连接喷嘴435连接在第二泵421上，把第二连接喷嘴436连接在第三泵422上。
分别在第一泵420内填充矿物油，在第二泵421内填充纯水和1μM或2μM的ADP溶液，在第三泵422内填充0.5M的EDTA(pH10)溶液。
在血液贮存器433内填充血液，该血液为将3.2％的柠檬酸钠溶液与刚采血后的血液混合，以使容量比是血液∶柠檬酸钠溶液为9∶1。
第一泵420、第二泵421和第三泵422执行与实施例7相同的程序(表3)。
在第二泵421内为纯水的情况下，测定开始30分后也没有确认到血小板块。在第二泵421内为1μM ADP的情况下大约15分钟后、在第二泵421内为2μM ADP的情况下大约10分钟后，在血栓生成室415内形成明显的血小板凝聚块。但是，血小板凝聚块的强度弱，没有引起压力上升。
以上，虽然基于最佳实施方式对本发明进行了说明，但是本发明并不限定于上述实施例或实施方式，可以在不脱离本发明宗旨的范围内对本发明进行各种变更。
例如，也可以对下述搅拌件进行凝固抑制处理后使用：即，专利文献3记载的由柱状突起物构成的搅拌件；专利文献4记载的利用压电效应进行振动的搅拌件；或者专利文献5记载的利用光的压力进行转动的搅拌件等。
工业实用性
本发明的微型薄片、血液观测装置和血液观测方法可以用来评价对患者等的抗血栓药的药效，或者用来综合观测采用微量血液并在与血流同等环境下的血液凝固和由血小板引起的血栓生成。

Claims (13)

1.一种微型薄片，在其内部包括：
第一流路，流入第一液体，所述第一液体从全血、富含血小板的血浆或它们的药剂处理液中选择；
第二流路，与第一流路连接，流入第二液体，所述第二液体包含有能与所述第一液体发生反应的药剂；以及
合流流路，从所述第一流路和所述第二流路的连接部开始延伸设置；
所述微型薄片的特征在于，在所述合流流路上设置有搅拌部，所述搅拌部具有混合所述第一液体和所述第二液体的搅拌件，
所述搅拌部的宽度朝向下游逐渐变窄，所述搅拌部的深度比所述合流流路深，且所述搅拌部的深度朝向下游逐渐变浅。
2.根据权利要求1所述的微型薄片，其特征在于，所述搅拌件的表面进行了凝固抑制处理。
3.根据权利要求2所述的微型薄片，其特征在于，所述凝固抑制处理是用肝素、聚乙酰内脂或聚-2-膦酰甲氧乙基腺嘌呤至少形成所述搅拌件的表面。
4.根据权利要求1所述的微型薄片，其特征在于，所述搅拌部的宽度比所述合流流路宽。
5.根据权利要求1所述的微型薄片，其特征在于，所述合流流路的深度为50μm～200μm。
6.根据权利要求1所述的微型薄片，其特征在于，在第一基板的表面上开设有构成所述第一流路、第二流路和合流流路的槽，在第二基板的表面上开设有作为所述搅拌部的孔，所述第一基板和所述第二基板层叠，并使所述槽和孔的开口部位于内侧。
7.根据权利要求6所述的微型薄片，其特征在于，所述第一基板和第二基板的贴合强度为0.5～50kgf。
8.根据权利要求1所述的微型薄片，其特征在于，所述微型薄片在所述搅拌部的下游具有血栓生成室，在所述血栓生成室内部的至少一部分上设置有诱发血栓生成的血栓生成诱发材料。
9.根据权利要求8所述的微型薄片，其特征在于，所述血栓生成诱发材料是胶原、或者胶原与组织因子的混合物。
10.一种血液观测装置，其特征在于，采用权利要求1所述的微型薄片。
11.根据权利要求10所述的血液观测装置，其特征在于，微型薄片设置成使所述第一流路和所述第二流路位于下方，并且使所述合流流路位于上方。
12.根据权利要求10所述的血液观测装置，其特征在于包括压力传感器，所述压力传感器用于测定所述第一流路、所述第二流路和所述合流流路中至少一个流路内的压力。
13.根据权利要求10所述的血液观测装置，其特征在于包括摄像机，所述摄像机用于观察所述合流流路的内部。
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