CN101856398B - 一种清热凉血,活血止痛中药组合物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种清热凉血，活血止痛的中药组合物制剂，该组合物由牡丹皮14.08-25.12重量份、川芎22.4-44.8重量份、冰片1.6-2.7重量份制成；本发明中药组合物具有很好的清热凉血，活血止痛的作用，表现显著的镇痛、解痉效应，对胸痹心痛有很好的治疗效果；本发明中药组合物制剂的质量检测方法，专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及制备、检测方法，特别涉及一种清热凉血，活血止痛的中药组合物及制备方法。
背景技术
随着社会的发展，人们面临的社会竞争和压力越来越大，严重地影响了人们的身体健康和生活质量。被喻为“人类健康第一杀手”的心血管疾病已成为中国第一致死原因，而冠心病就是其中最主要的一种心脏病。据统计，每100位40岁以上的中国人就有4-7人是冠心病患者。
本发明组合物制剂具有清热凉血，活血止痛的功效，经过多年的研究和临床实践，组方完善、疗效独特、无副作用，在用于治疗偏热型轻、中度胸痹心痛，痛兼烦热，舌苔色黄，具有很好的疗效。
发明内容
本发明第一个目的在于提供一种清热凉血，活血止痛的中药组合物；本发明的第二个目的在于提供该中药组合物制剂的制备方法。本发明的第三个目的在于提供该中药组合物制剂的质量检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物制剂的原料组成为：
牡丹皮14.08-25.12重量份、川芎22.4-44.8重量份、冰片1.6-2.7重量份。
本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物制剂的原料组成优选为：
牡丹皮20.1重量份、川芎33.6重量份、冰片2.18重量份。
上述本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物制剂的制备方法为：
牡丹皮粉碎成粗粉，渗漉法提取，用60-100％乙醇作溶剂，冷浸12-48小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇；川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油1-3小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮0.5-3小时，滤过，滤液与上述水 溶液合并，浓缩成相对密度为1.1-1.4(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为30-70％，搅拌，静置12-48小时，吸取上清夜，回收乙醇；合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏；按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于滴丸、片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂、注射制剂或外用制剂；
本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物滴丸剂的制备方法优选为：
牡丹皮粉碎成粗粉，渗漉法提取，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇；川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇；合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)；另取聚乙二醇6000 31.2g，加热，待全部熔融后，加入上述稠膏、川芎挥发油及冰片，搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成1000丸，即得。
本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为：以上三味，牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。加入糖粉和糊精，混匀，干燥，制粒，即得。
本发明一种清热凉血，活血止痛的中药组合物胶囊剂的制备方法优选为：以上三味，牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过， 滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。加入糖粉和糊精，混匀，干燥，制粒，装胶囊，即得。
本发明提供该中药组合物制剂的质量检测方法，该方法包括步骤：
A、含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw(Aw-Dmcs)；柱温170-200℃。
校正因子测定，取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含10-40μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品约50-100mg，丹皮酚对照品约2-12mg，精密称定，置10-50ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2-10ml，精密加入内标溶液0.5-1.5ml，摇匀，吸取2～10μl，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法：取本发明组合物制剂，混匀，取约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水5-20ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取3-5次，合并提取液，置10-50ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取2-10ml，精密加入内标溶液0.2-1.2ml，摇匀，吸取2～8μl，注入气相色谱仪，测定，即得；含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，不得少于0.26％；含冰片(C10H18O)不得少于4.8％。
B、鉴别：取本发明组合物制剂0.5-2g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2-3次，每次5-20ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至1-3ml，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-3mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液1-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以(2-4∶1)比例的环己烷-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
C、鉴别：取本发明组合物制剂0.5-5g，研细，加乙醚5-20ml，滤过，滤液作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5-5g，加乙醇1-10ml，超声处理1-15 分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-20μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以(2-4∶1)比例的环己烷-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
D、鉴别：取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取本发明组合物制剂0.5-2g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2-3次，每次5-20ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至1-3ml，作为供试品溶液；吸取对照品溶液及供试品溶液各1-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-25∶2-4比例的石油醚(60～90℃)醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
上述质量控制方法优选包括如下含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw(Aw-Dmcs)；柱温170-200℃。理论板数按丁香酚峰计算，应不低于5000。丹皮酚、冰片峰与丁香酚峰的分离度应大于2。
校正因子测定：取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品约70mg，丹皮酚对照品约8mg，精密称定，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气相色谱仪，计算校正因子。
测定法取本发明组合物制剂，混匀，取约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
上述质量检测方法中优选包括如下鉴别法：
牡丹皮薄层鉴别：取本发明组合物制剂内容物1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴 上挥至2ml，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
川芎薄层鉴别：取本发明组合物制剂内容物2g，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
冰片薄层鉴别：取本发明组合物制剂内容物1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液。取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取对照品溶液及牡丹皮鉴别项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
上述质量检测方法中药组合物制剂优选原料组成为：牡丹皮20.1g、川芎33.6g、冰片2.18g的滴丸剂，并通过如下方法制备：牡丹皮粉碎成粗粉，渗漉法提取，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。另取聚乙二醇600031.2g，加热，待全部熔融后，加入上述稠膏、川芎挥发油及冰片， 搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成1000丸，即得。
本发明中药组合物具有很好的清热凉血，活血止痛的作用，本发明组合物制剂均表现显著的镇痛、解痉效应。
本发明中药组合物制剂的质量检测方法，经实验证明：本发明含量测定方法检测专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。
下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明滴丸剂，但是本发明实验结果并不仅限于该滴丸剂。
实验例1：药效学实验
本发明组合物制剂镇痛解痉的药理作用
1、试验材料：
本发明组合物制剂数拉于粉碎机中研碎，用30-40℃蒸馏水溶解至所需浓度，颅通定；缩宫素；溴化乙酰胆碱；氯化钡。
热板测痛仪，生理实验多用仪。
昆明种小鼠。18-22g，雌雄兼用。家兔2-3kg，均系健康动物。
2、试验方法与结果：
2.1镇痛实验
2.1.1对乙酸致扭体反应的影响：
小鼠38只随机分四组，每组雌雄各半，喂养2天适应环填。试验前各组小鼠分别灌胃(ig)蒸馏水，本发明组合物制剂0.24g/kg，0.48g/kg及颅通定45mg/kg容量均为0.1ml/10g体重。药后1h腹腔注射0.6％乙酸0.2ml/只，立即观察15min内动物扭体次数。结果(表1)各药物均能显著和非常显著抑制乙酸所致的扭体反应，速效救心两剂量组问无显著差异，但与颅通定比有明显差异。说明在该模型中本发明组合物制剂的镇痛作用不及颅通定。
表1本发明组合物制剂对乙酸扭体反应的影响
与蒸馏水比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
与本发明组合物制剂比较△△△p＜0.001
2.1.2对电刺引痛的影响
小鼠若干，用与生理实验多用仪相连的两根电针.分别刺入距小鼠尾根部的1cm皮下(刺激参数.频率60次/秒，连续波)，缓缓转动电压值旋钮渐加大电压，当小鼠出现第一声嘶叫的电压值作痛指标，每只小鼠测三次，取平均值。若电压值大于1.5或小于0.25伏者剔除。取合格小鼠40只，均分四组，每组雌雄各半，依次ig馏水，本发明组合物制剂0.48g/kg及0.96g/kg，颅通定45mg/kg。测定药后60，120min痛闭值。结果(表2)药后60min本发明组合物制剂大剂量组及颅通定能显著提高痛团值，120min时各用药组的痛团值均非常明显地提高。本发明组合物制剂与颅通定无显著差异，且持续时间较长。
表2本发明组合物制剂对电刺痛的影响
与蒸馏水比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
2.1.3对热板致痛的影响：
将雌性小鼠若干分别置于55℃±0.5℃的热板测痛仪上测定舔后足潜伏期时间，潜伏期超过30秒或喜跳跃者弃之。选合格小鼠40只随机分四组，分别咭燕馏水，本发明组合物制剂0.48g/kg及0.96g/kg。颅通定40mg/kg，测药后60，120min小鼠舔后足潜伏期时间。结果(表3)本发明组合物制剂0.96g/kg及颅通定可明显延长舔后足潜伏期时间。两者无显著差异。
表3本发明组合物制剂对小鼠热板致痛的影响
与蒸馏水比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
2.2解痉作用
2.2.1对家兔离体十二指肠的影响：
家兔5只，2-3kg，击毙后迅速取出十二指肠按常规制备离体肠肌标本10个。分别将肠标本悬吊于篮台氏液的恒温麦氏榕槽中深积20ml 37±0.5℃，先记录一段肠肌收缩曲线待平稳后，逐一进行以下实验(各项实验均做10次)。对自发活动的影响：加入本发明组合物制剂0.24-4.8×10-4g/ml，肠肌松驰，自发性活动消失，收缩幅度给药前为0.77±0.49cm，药后降压-0.84±0.59cm P＜0.001。显示药物对肠肌的自发活动具非常明显的抑制作用。
对氯化钡的影响：
用氯化钡25×10-4g/ml后，肠肌收缩达2.79±1.97cm立即加入本发明组合物制剂4.8-7.210-4g/ml。收缩曲线降为-0.28±0.78cm P＜0.001。当先加入本发明组合物制剂4.8×10-4g/ml使肠肌抑制后，再使用氯化钡25×10-4g/ml，肠肌仍为抑制状态。证明药物不但可完全拮抗氯化钡的共奋作用.而且其作用强烈并 持久。
对乙酸胆碱的影响：
使用Ach2.5-5×10-6g/ml，肠肌收缩达3.75±2.2cm，加入本发明组合物制剂4.8-9.6×10-4g/ml，曲线降为0.87±1.7cm，P＜0.01。表明本发明组合物制剂对Ach也有明显的抑制作用。
2.2.2对家兔离体子宫的影响：
取家免子宫制备离体子宫标本8个，将子宫标本置于盛戴克氏液的恒退麦氏浴槽中(容积20mL，3.8±0.5℃)，记录一段子宫自发活动待稳定后.逐一进行以下实验(每项实验均做14次)。
对自发活动的影响：
加入本发明组合物制剂2.4-4.8×10-4g/ml，子宫立即松驰，收缩幅度由1.28±0.76降为-0.92±1.5cm P＜0.001，提示药物对子宫平滑肌有强烈的抑制作用。对缩宫素的影响：
用缩宫素0.1μg/ml时，子宫肌肉呈痉挛性收缩其幅度达2.42±0.69cm.加入本发明组合物制剂1.2-3.6×10-4g/ml，曲线逐步降为-0.27±0.59cm，P＜0.001。当先用本发明组合物制剂2.4-4.8×10-4g/ml后，再加缩宫素0.1-0.2μg/ml.子宫收缩曲线仍为-0.27±0.57cm。证明药物对缩宫素具有完全抵抗作用且持续时间长。
扭体、电刺及热板三种镇痛模型中，一定剂量的本发明组合物制剂均表现显著或非常显著的镇痛效应。电刺致痛中本发明组合物制剂大剂量(0.96g/kg)与颅通定在镇痛强度及持续时问上无差异，小剂量(0.48g/kg)发挥作用较晚.药后120min与大剂量及颅通定一样表现非常明显的镇痛作用。本发明组合物制剂在热板实验中需大剂量才有明显的镇痛作用，与颅通定亦无明显差异。扭体实验中该药用量较小(0.24g/kg及0.48g/kg)即能明显地抑制扭体反应，但作用不及颅通定。
本发明组合物制剂在电刺及热板致痛二种摸型中，与颅通定无论是在镇痛 强度及时间上均无显著差异，证明该药确实具有较好的镇通作用。
离体肠肌实验表明，本发明组合物制剂无论对肠肌自发活动还是对氯化钡及乙酸胆碱导致的肠肌痉挛性收缩均呈非常显著抑制作用。值得注意的是当本发明组合物制剂抑制氯化钡的兴奋作用后。经过冲洗再使用氯化钡时肠肌不再兴奋，需多次冲洗方可恢复，证明该药对氯化钡具强烈持久的抵抗作用。而对Ach的兴奋作用，本发明组合物制剂需较大用量才出现明显的抑制效应，且持续时间也不长。由此推测药物对离体肠肌的抑制作用可能是直接作用于肌肉，而不是通过肠肌的受体起作用的。
本发明组合物制剂对家兔离体子宫的自发活动及缩宫素引起的痉孪亦表现非常强烈的抑制效应。除了能完全抵抗缩宫素的兴奋作用外，凡本发明组合物制剂作用过的子宫段均需多次反复冲洗，数次缩宫素刺激，肌肉才能恢复到药前的兴奋水平，说明对子宫痉孪该药确具强烈的解痉作用，且持续时间长。痛经时子宫内膜PGRaa异常增高.导致痛觉纤维敏感，子宫痉孪性收缩，局部血流童下降，造成患者剧烈疼痛。
以上实验初步证实了本发明组合物制剂镇痛解痉的药理作用。
实验例2：牡丹皮及冰片含量测定方法实验
为了确保测定结果真实、准确，本发明通过一系列考察，确保制备供试品溶液时将本发明组合物片中的丹皮酚及冰片提取完全。
本实验采用气相色谱法测定丹皮酚和冰片含量，分析速度快，灵敏度高，专属性强，应用范围广，重现性与准确性均优于薄层色谱-紫外分光光度法、薄层色谱扫描法。
1、测定方法的选择：
供试品溶液的制备：取本发明组合物制剂约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，分别精密吸取对照品液5ml与内标溶液1ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品 溶液。
阴性对照样品溶液的制备：取3.36g川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇，减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。另取聚乙二醇60003.12g，加热，待全部熔融后，加入上述稠膏、川芎挥发油及冰片，搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成100丸缺牡丹皮阴性制剂。取牡丹皮阴性制剂制剂约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，分别精密吸取对照品液5ml与内标溶液1ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得阴性对照样品溶液。
对照品溶液的配制：取冰片对照品70mg，丹皮酚对照品8mg，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释到刻度。取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每毫升含20μg的溶液。精密吸取对照品溶液5ml，精密加入丁香酚内标溶液1ml，摇匀，即得冰片与丹皮酚对照品溶液。
精密吸取供试品溶液、阴性对照样品溶液、对照品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定。
1.1色谱柱的选择
试验选用不同极性的色谱柱，DB1301毛细管柱、5％0V-17，10％PEG-20M，M 1TRA-2弹性石英毛细管柱。从3种物质的色谱行为进行综合考虑，以10％PEG-20M较好。
1.2本发明组合物片中丹皮酚及冰片提取条件的考察
1.2.1提取母液的选择
冰片与丹皮酚均易在有机溶剂中溶解。本品是以聚乙二醇6000为辅料制成的滴丸剂。PEG6000在水中易溶，故采用使滴丸溶解于水，再用有机溶剂提取的 方法制备样品溶液。
1.2.2萃取溶剂考察
PEG6000在水中易溶，故采用使滴丸溶解于水，再用有机溶剂提取的方法制备样品溶液。提取4次，第5次提取液进样为结果阴性。
采用石油醚(8、5、5、5ml)提取，与醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)进行比较，结果表明，石油醚不能提取完全。
1.2.3萃取溶剂量的考察
分别采用醋酸乙酯提取4次(8、8、5、5ml)、醋酸乙酯提取4次(5、5、5、5ml)、醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)萃取，结果表明，醋酸乙酯提取4次(5、5、5、5ml)不能萃取完全，醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)所达效果与醋酸乙酯提取4次(8、8、5、5ml)基本一致。因此，选用醋酸乙酯提取4次(8、8、5、5ml)。
实验例3：丹皮酚及冰片含量测定方法验证实验
检测仪器(室温检测)：Agilent 4890型气相色谱仪
厂家：Agilent Techologies安捷伦科技有限公司(中国)
固定相：聚乙二醇20M
涂布浓度：10％
担体：Chromaxorbw(Aw-Dmcs)柱温：170-200℃
对照品来源：
丁香酚购于中国药品生物制品检定所批号：0736-9913
丹皮酚购于中国药品生物制品检定所批号：0736-9913
冰片购于中国药品生物制品检定所批号：0715-9909
供试品批号：04081201、04091302、04101403
供试品溶液的制备：取本发明组合物制剂约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，分别精密吸取对照品液5ml 与内标溶液1ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
1.含量测定方法考察：
1.1线性范围和校正因子的测定：
冰片与丹皮酚对照品溶液的配制
取冰片对照品280mg，丹皮酚对照品32mg，置50ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释到刻度。
内标溶液的配制
取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每毫升含20μg的溶液。
线性范围
精密吸取对照品溶液1，3，5，7，9ml，分别置于10ml量瓶中，用醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，加入内标溶液1ml。取溶液1μl注入气相色谱仪，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标，对照品与内标物的色谱峰面积的比值为纵坐标，分别计算冰片、丹皮酚的回归方程。
冰片：Y＝0.112+4.3074*X，r＝0.9996，线性范围0.47～4.23μg；
丹皮酚：Y＝0.02366+1.1474*X，r＝0.9996，线性范围0.053～0.477μg。
1.2精密度试验
取对照品溶液，重复进样6次，计算冰片与内标物、丹皮酚与内标物的色谱峰面积比值的RSD。结果RSD分别为1.2％，1.8％。
1.3重复性试验
取批号为04081201、04091302、04101403的样品6份，测定冰片与丹皮酚的含量(n＝3)，其相对标准偏差R S D分别为1.6％和2.0％。
1.4回收率试验
采用加样回收方法。取已知含量的样品，加入冰片对照品及丹皮酚对照品，按样品含量测定方法操作。结果见表4。
表4回收率试验结果(n＝5)
1.5样品测定
精密称取本品约1g，加水10ml，时时振摇使溶解。用醋酸乙酯提取4次(8，5，5，5ml)。提取液合并置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀。精密量取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，取此溶液2μl，色谱进样，计算含量。结果见表5。
表5样品中冰片及丹皮酚测定结果(n＝3)
实验例4：牡丹皮薄层鉴别试验
牡丹皮中主要含有丹皮酚等酚类化合物，这类成分为极性偏低，能溶于极性溶剂，如石油醚等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测牡丹皮中主要含有丹皮酚等酚类化合物，以此鉴定制剂中含有丹皮酚药材。
1、薄层色谱方法的选择：
常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析等。牡丹皮中主要含有丹皮酚等酚类化合物，硅胶层析进行试验。
2、供试品的制备：
2.1丹皮酚等酚类化合物的提取：
本处方中药味较多，成份复杂，需要对制剂中的牡丹皮中丹皮酚等酚类化合物进行提取。
采用L93(4)正交实验设计，对供试品溶液提取方法进行考察，见表6。
表6
通过上述实验方案制备了9份供试品溶液。
结果结果表明：
提取溶剂比较：
使用乙醚进行提取，供试品溶液提取液中杂质较多，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显很多颜色相近的重叠斑点；
使用石油醚(60～90℃)进行提取，供试品溶液提取液中杂质较少，但提取能力不强，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显很颜色较弱的斑点；
使用石油醚(30～60℃)进行提取，效果较好，制得供试品溶液杂质较少，斑点清晰。
提取方式比较：
冷浸法时间较长；
超声法提取强度较萃取法大，会多提取一些杂质影响鉴别，萃取方法较适宜。
综合考虑确定供试品制备方法为：取本发明组合物制剂1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液。
2.2供试品溶液及对照药材溶液点样量的考察：
取本发明组合物制剂1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液。
取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
分别吸取上述两种溶液2μl、5μl、10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。
实验结果如下：
丹皮酚对照品溶液点样量为2μl时，斑点强度较低，不宜观察；点样量为5μl时，丹皮酚对照品溶液薄层上斑点清晰，大小适中；点样量为10μl时，斑点太大，拖尾。
因此，确定丹皮酚对照品溶液的最佳点样量为4μl。
供试品溶液点样量为2μl时，在丹皮酚对照品相对应的位置上斑点强度较低，不宜观察；点样量为5μl时，在丹皮酚对照品相对应的位置上斑点明显，斑点大小适中，前后无干扰；点样量为10μl时，在丹皮酚对照品相对应的位置上斑点较大，明显拖尾，与前后荧光斑点相连。
因次确定供试品的最佳点样量为5μl。
2.3展开剂的选择：
按上述方法制备供试品溶液和对照药材溶液。吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别用以下展开剂展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。试验结果如下：为展开剂，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
方法1：展开剂为环己烷-醋酸乙酯(1∶8)，展开剂极性较大，供试品、丹皮酚斑点Rf值接近0.85，供试品色谱中橙皮苷斑点与前后斑点未分开；
方法2：展开剂为环己烷-醋酸乙酯(3∶1)，极性适宜，丹皮酚斑点Rf值接近0.45，供试品色谱中丹皮酚斑点分离良好，前后无干扰；
方法3：展开剂为环己烷-醋酸乙酯(8∶1)，极性偏低，供试品色谱中丹皮酚斑点与前后斑点未分开。
因此，确定分离中药组合物制剂中牡丹皮成分的最优薄层展开剂为环己烷-醋酸乙酯(3∶1)。
2.4显色条件的选择：
牡丹皮中的酚酸类成分日光下没有颜色，但在喷显色剂后却显颜色，因此，考虑直使用通用型显色剂显色后观察和酚类专属显色剂。常用的通用型显色剂为10％的硫酸乙醇溶液。
按上述方法制备供试品溶液、对照药材溶液。取两块硅胶薄层分别点样、展开、晾干。
方法一：薄层1喷以10％的硫酸乙醇溶液；
方法二：薄层2喷5％三氯化铁乙醇溶液；
实验结果表明：
方法一薄层在日光下观察，供试品溶液与对照药材溶液色谱有观察相同颜色的斑点，但斑点不清晰；
方法二薄层在喷5％三氯化铁乙醇溶液，在与丹皮酚相对应的位置上，供试品溶液有明显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，前后无干扰。
因此确定分离中药组合物制剂中酚酸类成分的最佳显色条件为喷5％三氯化铁乙醇溶液。
实验例5：川芎薄层鉴别试验
川芎中主要含有挥发类化合物如川芎嗪等。该类化合物有其自身的制备特点。
1、供试品制备方法的选择
1.1提取溶剂及提取方法的选择
取本发明组合物制剂2g，研细，加石油醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液1。取本发明组合物制剂2g，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液2。取本发明组合物制剂2g，研细，加乙醚10ml，超声30分后，滤过，滤液作为供试品溶液3。
取川芎对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。
结果表明：
供试品溶液1采用石油醚做提取溶剂，很难将川芎中的挥发性成分都提取出来，供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显颜色较弱的荧光斑点；
供试品溶液2、3采用乙醚做提取溶剂，可以较好的将川芎中的挥发性成分都提取出来，不需要超声，浸泡即可，供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。且斑点清晰，圆整。
因此，取本发明组合物制剂2g，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液2。
2、供试品溶液点样量的考察：
分别吸取供试品溶液5、10、20μl点于同一硅胶G板上，展开、检识。试验结果如下：
供试品溶液点样量为5μl时，斑点强度较低，不宜观察；
供试品溶液点样量为10μl时，薄层上荧光斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干扰；
供试品溶液点样量为20μl时，供试品溶液薄层上荧光斑点较大，与前后荧光斑点相连。
因此，确定供试品溶液的最佳点样量为10μl。
实验例6：冰片薄层鉴别试验
1、供试品制备方法的考察：
冰片与牡丹皮均具有挥发性且有相似的极性。因此，冰片的供试品制备方法与牡丹皮中丹皮酚制备方法非常相似，本发明通过试验验证，对冰片薄层鉴别供试品制备方法进行优选。
取本发明组合物制剂内容物1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液。
取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
吸取对照品溶液及供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。
结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。可以用牡丹皮鉴别检查中的供试品制备方法制备冰片供试品溶液。
2.供试品、对照品溶液点样量的考察：
本发明，对供试品溶液、对照品溶液点样量进行考察。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液2、5、8μl点于同一硅胶G板上，展开、检识。试验结果如下：
点样量为2μl时，斑点强度较低，不宜观察；
点样量为5μl时，薄层上荧光斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干扰；
点样量为8μl时，供试品溶液薄层上荧光斑点较大，与前后荧光斑点相连。
因此，确定最佳点样量为5μl。
3、展开剂的选择：
吸取对照品溶液及供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(17∶3)、石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(17∶3)、乙醚-醋酸乙酯(17∶3)、为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
方法1：展开剂为石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(17∶3)，极性适宜，斑点Rf值接近0.45，斑点分离良好，前后无干扰；
方法2：展开剂为石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(17∶3)，极性与石油醚(60～ 90℃)-醋酸乙酯(17∶3)类似，但展开效果却远远不如石油醚(60～90℃)，斑点有拖尾、扩散现象，
方法3：展开剂为乙醚-醋酸乙酯(17∶3)，极性偏大，供试品色谱中斑点与前后斑点未分开。
因此，确定分离中药组合物制剂中冰片成分的最优薄层展开剂为石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(17∶3)。
4.显色条件的考察
分别采用喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟；5％香草醛硫酸溶液，在加热至斑点显色的方法进行对比，
结果表明：
喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，温度较高，显色速度快，时间可控，显色斑点清晰。
喷以5％香草醛硫酸溶液，在加热至斑点显色，温度不易控制，显色时间不可空，影响斑点显色。
因此，选择喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟进行显色。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1
牡丹皮 20.1g 川芎 33.6g 冰片 2.18g
以上三味，牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(《中国药典》2000年版一部附录IO)，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。另取聚乙二醇6000 31.2g，加热，待全部熔融后， 加入上述稠膏、川芎挥发油及冰片，搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成1000丸，即得。
【鉴别】
(1)取本品1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为对照品溶液。另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(2)取本品50丸，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
(3)取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液及[鉴别](1)项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
【含量测定】牡丹皮、冰片照气相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw(Aw-Dmcs)；柱温170-200℃。理论板数按丁香酚峰计算，应不低于5000。丹皮酚、冰片峰与丁香酚峰的分离度应大于2。
校正因子测定取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品约70mg，丹皮酚对照品约8mg，精密称定，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气象色谱仪，计算校正因子。
测定法：取重量差异检查项下的本品，混匀，取约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气象色谱仪，测定，即得。
本品含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，不得少于0.26％；含冰片(C10H18O)不得少于4.8％。
功能主治：清热凉血，活血止痛。用于偏热型轻、中度胸痹心痛，痛兼烦热，舌苔色黄。
用法用量：舌下含服，一次3～9粒，一日3次，急性发作时12～18粒。
规格：每丸40毫克
实施例2
牡丹皮 30.1g 川芎 23.6g 冰片 6.18g
以上三味，牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(《中国药典》2000年版一部附录IO)，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。另取聚乙二醇6000 31.2g，加热，待全部熔融后，加入上述稠膏、川芎挥发油及冰片，搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，制成1000丸，即得。
【鉴别】
(1)取本品1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用石油醚(30～60℃)，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为对照品溶 液。另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(2)取本品50丸，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
(3)取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液及[鉴别](1)项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
【含量测定】牡丹皮、冰片照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw(Aw-Dmcs)；柱温170-200℃。理论板数按丁香酚峰计算，应不低于5000。丹皮酚、冰片峰与丁香酚峰的分离度应大于2。
校正因子测定取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品约70mg，丹皮酚对照品约8mg，精密称定，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气象色谱仪，计算校正因子。
测定法：取重量差异检查项下的本品，混匀，取约1g，精密称定，置分液 漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次(8、5、5、5ml)，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气象色谱仪，测定，即得。
本品含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，不得少于0.26％；含冰片(C10H18O)不得少于4.8％。
实施例3
牡丹皮 20.1g 川芎 33.6g 冰片 2.18g
牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。加入糖粉和糊精，混匀，干燥，制粒，即得颗粒剂。
实施例4
牡丹皮 20.1g 川芎 33.6g 冰片 2.18g
牡丹皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用90％乙醇作溶剂，冷浸24小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇。川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油2小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮1小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成相对密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，加乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置24小时，吸取上清夜，回收乙醇。合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏(约6.6～6.8g)。加入糖粉和糊精，混匀，干燥，制粒，装胶囊，即得。
Claims (4)
1.一种清热凉血，活血止痛的中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
所述中药组合物的原料药组成为：
牡丹皮14.08-25.12重量份、川芎22.4-44.8重量份、冰片1.6-2.7重量份；
检测方法包括如下步骤：
A、含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw Aw-Dmcs；柱温170-200℃；
校正因子测定，取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含10-40μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品50-100mg，丹皮酚对照品2-12mg，精密称定，置10-50ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2-10ml，精密加入内标溶液0.5-1.5ml，摇匀，吸取2～10μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；测定法：取所述中药组合物，混匀，取约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水5-20ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取3-5次，合并提取液，置10-50ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取2-10ml，精密加入内标溶液0.2-1.2ml，摇匀，吸取2～8μl，注入气相色谱仪，测定，即得；含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.26％；含冰片不得少于4.8％；
B、鉴别：取所述中药组合物0.5-2g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用30～60℃石油醚提取2-3次，每次5-20ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至1-3ml，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-3mg的溶液，作为对照溶液；吸取上述两种溶液1-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-4∶1比例的环己烷-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
C、鉴别：取所述中药组合物0.5-5g，研细，加乙醚5-20ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.5-5g，加乙醇1-10ml，超声处理1-15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-20ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以2-4∶1比例的环己烷-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
D、鉴别：取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；取所述中药组合物0.5-2g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用30～60℃石油醚提取2-3次，每次5-20ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至1-3ml，作为供试品溶液；吸取对照品溶液及供试品溶液各1-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-25∶2-4比例的60～90℃石油醚与醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：
牡丹皮20.1重量份、川芎33.6重量份、冰片2.18重量份。
3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述中药组合物的的制备方法为：
牡丹皮粉碎成粗粉，渗漉法提取，用60-100％乙醇作溶剂，冷浸12-48小时，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇；川芎粉碎成碎片，加水提取挥发油1-3小时，蒸馏后的水溶液倾出，药渣再加水煎煮0.5-3小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩成70℃相对密度为1.1-1.4的清膏，加乙醇使含醇量为30-70％，搅拌，静置12-48小时，吸取上清夜，回收乙醇；合并牡丹皮和川芎药液，继续减压浓缩至稠膏；按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂、口服液体制剂、注射制剂或外用制剂。
4.如权利要求1所述的检测方法，该方法包括如下步骤：
含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M为固定相，涂布浓度10％，担体Chromaxorbw Aw-Dmcs；柱温170-200℃；理论板数按丁香酚峰计算，应不低于5000；丹皮酚、冰片峰与丁香酚峰的分离度应大于2；校正因子测定：取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取冰片对照品约70mg，丹皮酚对照品约8mg，精密称定，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；测定法：取所述中药组合物，混匀，取约1g，精密称定，置分液漏斗中，加水10ml，时时振摇使溶解，用醋酸乙酯提取4次，醋酸乙酯用量分别为：8、5、5、5ml，合并提取液，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密吸取5ml，精密加入内标溶液1ml，摇匀，吸取2～4μl，注入气相色谱仪，测定，即得；
鉴别：
牡丹皮薄层鉴别：取所述中药组合物内容物1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用30～60℃石油醚，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液；吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
川芎薄层鉴别：取所述中药组合物内容物2g，研细，加乙醚10ml，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以3∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
冰片薄层鉴别：取所述中药组合物内容物1g，研碎，加水10ml搅拌使溶解，用30～60℃石油醚，提取2次，每次10ml，合并石油醚液，置温水浴上挥至2ml，作为供试品溶液；取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液及牡丹皮鉴别项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17∶3的60～90℃石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑。
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