CN101850132A - 组织工程化乳房移植物及其构建方法 - Google Patents
组织工程化乳房移植物及其构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101850132A CN101850132A CN200910038342A CN200910038342A CN101850132A CN 101850132 A CN101850132 A CN 101850132A CN 200910038342 A CN200910038342 A CN 200910038342A CN 200910038342 A CN200910038342 A CN 200910038342A CN 101850132 A CN101850132 A CN 101850132A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fat
- cell
- stem cell
- collagen
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 title claims abstract description 35
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 239000007943 implant Substances 0.000 title abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 7
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 claims description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 5
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 claims description 4
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 1
- 235000012976 tarts Nutrition 0.000 claims 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 abstract description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 17
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 abstract 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 abstract 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 24
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 24
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010006242 Breast enlargement Diseases 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002734 Collagen Type VI Human genes 0.000 description 2
- 108010043741 Collagen Type VI Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010062575 Muscle contracture Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 230000008195 breast development Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 208000006111 contracture Diseases 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 2
- 210000002976 pectoralis muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108700022737 rat Fat1 Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 1
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000872198 Serjania polyphylla Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- VIISNVUNZFJHDA-UHFFFAOYSA-N [Ca].O=C Chemical compound [Ca].O=C VIISNVUNZFJHDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于生物医学工程中用组织工程方法构建人工器官技术领域，涉及一种组织工程化乳房移植物及其构建方法。木发明所述的组织工程化乳房移植物，以可注射性材料I型胶原凝胶作为载体支架，以脂肪干细胞为种子细胞，所述种子细胞附着于载体支架上，形成脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体，胶原终浓度为2mg/ml，细胞密度为2×107/ml。本发明所述的组织工程乳房移植物采用可注射型材料负载自体脂肪干细胞构成，制备简便，通过实验证实可产生新生脂肪组织，该组织工程乳房移植物最终转化为自体脂肪，不存在免疫排斥问题，从而为乳房填充和重建提供一种新的解决方案。
Description
技术领域
本发明属于生物医学工程中用组织工程方法构建人工器官技术领域，具体是涉及一种组织工程化乳房移植物及其构建方法。
背景技术
由于种族、遗传及营养等原因，相当一部分的女性乳房发育不良或松弛萎缩。隆乳术以其立竿见影的效果受到广大爱美女性的青睐。乳房填充是目前用来改善女性乳房发育不良或松弛萎缩，以及由于肿瘤切除或外伤等原因造成的乳房缺失的治疗方法。在美国每年有20万女性接受隆胸手术，中国国内每年隆胸人数尚无准确统计，而文献推测人数可能在30万至50万之间。目前，目前国内外医学隆乳的方法大致可分为注射法和手术法。注射法使用的材料有自体脂肪颗粒；而手术法则使用硅胶囊假体置入隆乳。
目前，国内外最常用的隆乳方法包括：(1)自体脂肪注射。自体脂肪注射隆胸已开展多年，但因其超过50％的吸收率及可能存在脂肪液化、感染、血肿等并发症，注射脂肪液化所引起的囊肿亦可干扰乳腺肿瘤的诊断，限制了该技术的应用。移植过程中脂肪细胞的损伤，受区早期血液循环建立的状况，移植的脂肪细胞因缺血、缺氧而液化，成熟的脂肪细胞没有增殖能力等，可能是造成脂肪注射隆胸后高吸收率的原因。(2)假体置入法隆乳。根椐硅胶弹性膜内的材料不同，可分为硅凝胶假体和盐水充注式假体。由于假体是异物，植入后导致各种并发症的发生。隆乳术后假体包膜挛缩是术后最常见的并发症，硅胶弹性膜做为一种异物置入人体后引起局部组织反应，形成纤维包膜。严重时发生乳房硬化，发生率高达4.76％-6.19％。
组织工程为乳房填充和重建提供一种新的方法。组织工程的基本原理是从机体获取少量活组织，将功能细胞从组织中分离出来并在体外进行培养、扩增，然后与可降解、吸收的支架材料按一定比例混合，植入体内病损部位，生物材料在体内逐渐被降解和吸收，植入的细胞在体内增殖和分泌细胞外基质，最后形成所需的组织或器官。乳房组织工程是利用组织工程原理对乳房进行填充或再造，其目的是改善其外观。乳房的形状和大小则主要由脂肪组织维持。目前，乳房组织工程的主要难题在于脂肪组织的形成，应用于乳房的组织工程移植物尚未见报道。
发明内容
针对上述现有技术状况，本发明提供一种组织工程乳房移植物，该组织工程乳房移植物为可注射型材料负载自体脂肪干细胞构成，制备简便，通过实验验证可产生新生脂肪组织。制备的组织工程乳房移植物，最终转化为自体脂肪，不存在免疫排斥问题。
脂肪干细胞(Adipose-Derived Stem Cells，ADSCs)具有易获取、增殖快及成脂分化能力的特点，可作为脂肪组织工程的种子细胞。I型胶原蛋白是成熟的产品，本实验使用的I型胶原蛋白(collagen type I，COL)是通过醋酸提取，氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的(参考文献Birkedal-Hansen H.Catabolism and turnover of collagen：Collagenases.Methods Enzymol，1987，144：140-171)。I型胶原蛋白在酸性、低温的状态下为液态，在中性、常温的状态下会迅速凝结，本发明利用这个特点，使用其作为可注射水凝胶支架。I型胶原凝胶支架作为水凝胶类支架的一种，生物相容性好，可降解，可以实现与种子细胞的良好的复合。本发明将I型胶原凝胶与脂肪干细胞复合后直接注射于大鼠乳腺皮下，研究脂肪干细胞与I型胶原凝胶复合体在乳腺的分化情况，探讨将其应用于乳房缺损修复的可行性。
相对于现有技术，本发明具有以下特点和优点：
(1)移植物最终转化为自体脂肪组织，不存在免疫排斥问题。比较假体移植，不易出现包膜挛缩等并发症；比较脂肪游离移植，不易出现感染，脂肪液化等并发症。
(2)采用ADSCs作为组织工程的种子细胞，该细胞具有以下优点：首先，取材方便是其最大的优势，脂肪组织分布广泛，而且吸脂手术属于技术成熟的常规手术，手术风险小。其次，ADSCs在脂肪组织中含量丰富，每250-500mL脂肪抽吸物中的细胞产量可达109个。最后，ADSCs增殖快，成脂分化能力强，冷冻保存后增殖分化能力无明显改变。由此可见，ADSCs适合作为脂肪组织工程的种子细胞。
(3)I型胶原凝胶作为种子细胞的支架。胶原是脊椎动物和人体的最主要结构蛋白，约占机体总蛋白的20％～30％。其中以I、II、III型最为常见，约占体内总胶原蛋白的80％～90％。胶原蛋白生物相容性好，作为支架可促进细胞粘附，降解产物对人体无害。作为美国FDA批准的注射移植材料，胶原蛋白使用的长期安全性已经在临床上得到证实。本发明经实验证明，I型胶原支架可完全降解，降解产物未引起周围乳腺组织炎症反应。
(4)可注射支架在骨、软骨及脂肪组织工程已有开展，但应用于乳房组织工程尚未见报道。本发明采用可注射支架复合细胞的方法构建组织工程乳房移植物，具有微创、美观、可重复的优点，更符合整形外科的发展趋势。
(5)通过本发明的实验发现，脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体(ADSCs-COL)注射后，未见大鼠乳腺皮肤有明显红肿及感染等炎症表现，病理切片显示注射处乳腺组织未见明显炎症反应。说明其组织相容性好，无排斥反应。实验组见新生脂肪组织形成，而对照组未见明显新生脂肪组织，说明ADSCs在三维胶原支架内能增殖分化为成熟脂肪组织。
综上所述，本发明所述的组织工程乳房移植物采用可注射型材料负载自体脂肪干细胞构成，制备简便，通过实验证实可产生新生脂肪组织，该组织工程乳房移植物最终转化为自体脂肪，不存在免疫排斥问题，从而为乳房填充和重建提供一种新的解决方案。
附图说明
图1为显微镜图(100倍)，显示经分离培养至第三代的大鼠脂肪干细胞。
图2为脂肪干细胞经成脂诱导2周后油红O染色的显微镜图(100倍)，图中红色为脂滴。
图3为脂肪干细胞经成骨诱导4周后von Kossa染色的显微镜图(100倍)，图中黑色为钙盐沉积。
图4为大鼠注射脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体(ADSCs-COL)后的外观照片。
图5为大鼠注射8周后的解剖照片。图5a为实验组，见ADSCs-COL注射处新生脂肪样组织形成；图5b为对照组，见单纯COL注射未见明显脂肪形成。
图6为解剖后取出的脂肪组织的照片。图6a为实验组，显示注射处的脂肪组织的大小；
图6b为对照组，显示注射处的脂肪组织的大小。
图7为新生组织HE染色的显微镜图(100倍)，图中见支架已完全降解，脂肪组织形成，而无炎症反应表现。
图8为新生组织油红O染色的显微镜图(400倍)，红色为脂滴，证明为成熟脂肪组织。
具体实施方式
以下结合实验来说明本发明的技术方案和技术效果。
实验动物和主要材料、仪器
实验动物：成年雌性Sprague Dawley大鼠10只，清洁级，体重160～200g，9～10周龄。购自中山大学实验动物中心。
主要材料：胎牛血清FBS、DMEM/F12培养基(Gibco公司，美国)；吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、牛胰岛素、抗坏血酸、II型胶原酶(Sigma公司，美国)；β-甘油磷酸钠(Fluka公司，美国)；油红O(Amresco公司，美国)；I型胶原蛋白(生友生物技术有限公司)。
主要仪器：倒置相差显微镜(Nikon公司，日本)；CO2培养箱(Heraeus公司，德国)。
实施例一：大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的制备
大鼠ADSCs的分离培养
以10％水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，无菌条件下取双侧腹股沟脂肪垫于PBS液中。用PBS液将脂肪垫洗3次，去除可见血管及纤维，将其剪碎。0.075％II型胶原酶37℃消化3Omin(每10min吹打1次)。等体积含10％FBS的DMEM/F12培养液中和胶原酶，1100r/min离心5min，去除上清和脂肪组织。DMEM/F12完全培养液重悬，400目细胞筛(孔径6Oμm)过滤。以1×105/ml接种，37℃、5％CO2和95％湿度的条件下培养，24小时后换液，去除未贴壁细胞、脂滴及残渣。之后每72小时换液一次。贴壁细胞融合达80％～90％后，用0.25％胰蛋白酶消化传代，按1∶3传代接种。
大鼠ADDSCs的形态观察
倒置相差显微镜下观察，刚接种的原代细胞呈圆形，与脂滴一起悬浮于培养液中，24h换液后贴壁细胞呈圆形、多角形或梭形。此后细胞不断增殖，以梭形细胞为主。6～7天细胞融合成单层，排列有一定的方向性，可消化后传代。传代后的ADSCs增殖生长迅速，3～4天后细胞完全融合。连续传10代，细胞的形态无明显变化。图1显示大鼠第三代脂肪干细胞的形态。
大鼠ADDSCs的成脂、成骨诱导分化
成脂诱导剂：10-6moL/L地塞米松，10mg/L胰岛素，0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)和0.2mmol/L吲哚美辛。
成骨诱导剂：10-7moL/L地塞米松，50mg/L抗坏血酸，10mmol/Lβ-甘油磷酸钠。
采用第3代ADSCs细胞，以105/孔接种于6孔板，待其生长融合后，于普通培养液中分别加入上述成脂诱导剂和成骨诱导剂进行培养。实验组、对照组均含有4例样本。
成脂诱导：2周后进行油红O染色检测(油红O，Amresco公司，美国)。PBS洗涤三次，10％甲醛钙液固定10分钟，油红O工作液密闭染15分钟，蒸馏水冲洗，苏木精复染，立即在显微镜下观察。
成骨诱导：4周后进行von Kossa染色检测(硝酸银，上海精细化工材料研究所；硫代硫酸钠，广州化学试剂厂)。von Kossa染色法：PBS洗涤三次，10％甲醛室温固定30分钟。蒸馏水冲洗，加入5％(wt/vol)硝酸银溶液，避光30分钟，然后置紫外线下照射60分钟，加入5％(wt/vol)硫代硫酸钠30分钟，蒸馏水冲洗，立即在显微镜下观察。
大鼠ADSCs的成脂、成骨诱导分化的鉴定
经成脂诱导2周后，如图2所示，油红O染色显示细胞胞浆内布满大小不一的红色脂滴颗；而非诱导组未见明显脂滴形成。说明该细胞具备向脂肪细胞方向分化的能力。
经成骨诱导4周后，如图3所示，Von Kossa染色可见由于细胞及其周围附着的钙盐与硝酸银发生置换反应而被染成黑色，证明此时细胞已发生矿化；而非诱导组未见明显钙盐沉积。Von Kossa染色说明该细胞具备向成骨细胞方向分化的能力。
实施例二：组织工程化乳房移植物的构建
脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体(ADSCs-COL)的构建
在构建组织工程化乳房移植物之前24小时使用上述成脂诱导剂培养细胞。注射前将10瓶(25cm2培养瓶)生长融合的第3代ADSCs细胞消化离心后，加入培养液至540μl中，含细胞数量约2×107个。
I型胶原蛋白溶液：I型胶原蛋白浓度5mg/ml，融解于0.006mol/L乙酸。于冰浴条件下，将400μl I型胶原蛋白溶液加入到24μl 0.1mmol/L NaOH中，立刻混匀，再加入46μl10×PBS，混匀后测定pH值为7。再加入上述540μl的细胞悬液，形成脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体(胶原终浓度为2mg/ml，细胞密度为2×107/ml)。室温(20-25℃)下放置30分钟溶液可凝固。
大鼠自体注射
用10％水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，术区消毒。注射器抽取1mlADSCs-COL凝胶，距乳头1cm处皮下进针，潜行至乳头下方，注射平面位于乳腺与胸肌之间，将ADSCs-COL凝胶注射入右上侧乳腺(实验组)，拔针，进针点压迫10秒。同法在左上侧乳腺注射COL凝胶1ml(对照组)。共注射10例。
注射后定期观测大鼠乳腺皮肤情况。8周后，麻醉并解剖大鼠，观测有无新生组织形成，测量新生组织湿重，新生组织分别切片，进行油红O染色及HE染色。
统计学方法
采用SPSS 16.0统计软件包进行分析。数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，P值＜0.05为有统计学意义。
结果
胶原凝胶注射后，可见乳腺区域局部隆起，如图4所示。定期观察，未见大鼠乳腺皮肤有明显红肿及感染等炎症表现。
8周后解剖大鼠，实验组可见乳腺与胸肌之间有脂肪样新生组织形成，如图5a所示，注射处脂肪组织大小如图6a所示，平均湿重为(123+/-18)mg；对照组未见明显新生组织形成，如图5b所示，注射处脂肪组织大小如图6b所示，平均湿重为(19+/-7)mg。两组间存在统计学差异，P＜0.01。
新生组织HE染色结果表明，支架已完全降解，有脂肪组织形成，而无炎症反应表现。
如图7所示。
新生组织油红O染色结果表明，新生组织为成熟脂肪组织。如图8所示。
Claims (5)
1.一种组织工程化乳房移植物，其特征在于：以可注射性材料I型胶原凝胶作为载体支架，以脂肪干细胞为种子细胞，所述种子细胞附着于载体支架上，形成脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体，胶原终浓度为2mg/ml，细胞密度为2×107/ml。
2.根据权利要求1所述的组织工程化乳房移植物，其特征在于：所述脂肪干细胞是采用培养至第3代，构建组织工程化乳房移植物之前24小时加入成脂诱导剂进行诱导后的脂肪干细胞。
3.根据权利要求2所述的组织工程化乳房移植物，其特征在于：所述的成脂诱导剂包括以下成分：10-6moL/L地塞米松，10mg/L胰岛素，0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和0.2mmol/L吲哚美辛。
4.如权利要求1所述的组织工程化乳房移植物的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.常规方法分离和培养脂肪干细胞，培养至第3代；
B.在构建组织工程化乳房移植物之前24小时使用成脂诱导剂培养上述脂肪干细胞；
C.将步骤B所得的脂肪干细胞消化、离心后，加入培养液，调整为含细胞数量约2×107个；
D.配制I型胶原蛋白溶液：于冰浴条件下，通过加入氢氧化钠溶液及磷酸盐缓冲液，将酸性的I型胶原蛋白溶液pH值调为7；
E.在上述I型胶原蛋白溶液中加入步骤C所得的脂肪干细胞悬液，20-25℃放置30分钟，凝固形成脂肪干细胞/I型胶原凝胶复合体，胶原终浓度为2mg/ml，细胞密度为2×107/ml。
5.根据权利要求4所述的组织工程化乳房移植物的构建方法，其特征在于：所述步骤B中的成脂诱导剂包括以下成分：10-6moL/L地塞米松，10mg/L胰岛素，0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和0.2mmol/L吲哚美辛。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100383421A CN101850132B (zh) | 2009-03-31 | 2009-03-31 | 组织工程化乳房移植物及其构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100383421A CN101850132B (zh) | 2009-03-31 | 2009-03-31 | 组织工程化乳房移植物及其构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101850132A true CN101850132A (zh) | 2010-10-06 |
| CN101850132B CN101850132B (zh) | 2012-11-28 |
Family
ID=42801922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009100383421A Expired - Fee Related CN101850132B (zh) | 2009-03-31 | 2009-03-31 | 组织工程化乳房移植物及其构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101850132B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102258810A (zh) * | 2011-07-20 | 2011-11-30 | 王泰华 | 一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法 |
| CN104984399A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-21 | 西安芙金细胞科技有限公司 | 一种生物支架材料、svf辅助的脂肪组织制备方法 |
| CN107280810A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-10-24 | 西安交通大学 | 一种可降解乳腺支架 |
| CN109078172A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-25 | 白晋 | 一种基于自体组织的制剂及其应用 |
| US10751246B2 (en) | 2017-12-26 | 2020-08-25 | Sanjeev Kaila | Acoustic shock wave therapeutic methods |
| CN115137527A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-10-04 | 湖南大学 | 一种力学仿生复合乳房支架的制备方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106474553A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-03-08 | 广东万海细胞生物科技有限公司 | 一种两段式自体脂肪干细胞丰胸方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5676698A (en) * | 1993-09-07 | 1997-10-14 | Datascope Investment Corp. | Soft tissue implant |
-
2009
- 2009-03-31 CN CN2009100383421A patent/CN101850132B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102258810A (zh) * | 2011-07-20 | 2011-11-30 | 王泰华 | 一种富集自体干细胞的脂肪组织隆胸材料的制备方法 |
| CN104984399A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-21 | 西安芙金细胞科技有限公司 | 一种生物支架材料、svf辅助的脂肪组织制备方法 |
| CN107280810A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-10-24 | 西安交通大学 | 一种可降解乳腺支架 |
| US10751246B2 (en) | 2017-12-26 | 2020-08-25 | Sanjeev Kaila | Acoustic shock wave therapeutic methods |
| CN109078172A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-25 | 白晋 | 一种基于自体组织的制剂及其应用 |
| CN115137527A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-10-04 | 湖南大学 | 一种力学仿生复合乳房支架的制备方法 |
| CN115137527B (zh) * | 2022-07-04 | 2024-01-23 | 湖南大学 | 一种力学仿生复合乳房支架的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101850132B (zh) | 2012-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101850132B (zh) | 组织工程化乳房移植物及其构建方法 | |
| ES2729962T3 (es) | Composiciones para el relleno y la regeneración de tejido blando | |
| CN102198292B (zh) | 组织工程用脐带去细胞Wharton胶支架及其制备方法 | |
| CN102266585B (zh) | 一种用于女性盆底的生物复合补片及其制造方法 | |
| CN105963785B (zh) | 一种基于脂肪干细胞膜片的脱细胞基质材料及其制备方法 | |
| CN101828937A (zh) | 一种利用组织工程脂肪再生技术进行整形美容的方法 | |
| CN112043727A (zh) | 一种细胞复合型子宫内膜修复凝胶的制备方法及应用 | |
| KR20160024881A (ko) | 미용적 유방 충전을 위해 또는 안면 충전 및/또는 회생을 위해 체외 확장 지방조직-유래 줄기세포를 이용하는 지방 충전물 | |
| CN103272282A (zh) | 一种纳米羟基磷灰石/壳聚糖/鱼皮胶原复合支架 | |
| CN109550080A (zh) | 一种人工双层皮肤及其制备方法 | |
| CN104984393B (zh) | 一种骨组织工程支架材料及其制备方法 | |
| CN107137763A (zh) | 一种血管化组织工程骨及其制备方法 | |
| CN102488925A (zh) | 一种可注射的关节软骨组织修复材料及其制备方法 | |
| CN104984399A (zh) | 一种生物支架材料、svf辅助的脂肪组织制备方法 | |
| CN105233345A (zh) | 一种天然蛋白/聚己内酯纳米纤维电纺膜及其制备和应用 | |
| CN102284082A (zh) | 一种可用于面部美容的皮下软组织填充定位纤维蛋白复合物及其制备方法 | |
| CN101690829A (zh) | 一种可再细胞化的生物瓣瓣膜材料的制备方法 | |
| JP3848164B2 (ja) | 軟部組織修復用の前脂肪細胞からなるバイオマテリアル | |
| CN110237302A (zh) | 一种关节软骨修复材料的制备方法-自体富血小板血浆结合透明质酸水凝胶 | |
| CN101496915B (zh) | 去基底膜无细胞的异种真皮网状层支架及其制备方法 | |
| CN108743618A (zh) | 一种可注射性干细胞水凝胶制剂的制备方法及其应用 | |
| CN108624581A (zh) | 一种间充质干细胞结合生物材料的微球及智能喷洒系统 | |
| CN104307047B (zh) | 一种双梯度仿生修复支架及其制备方法 | |
| CN106924814A (zh) | 一种猪源胶原膜‑自体软骨细胞复合支架的构建方法 | |
| CN103372233A (zh) | 一种组织工程化软骨移植物的制备方法及产品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121128 Termination date: 20150331 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |