CN104307047B - 一种双梯度仿生修复支架及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种双梯度仿生修复支架及其制备方法。本发明将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，‑200℃～‑185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层；将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，‑90℃～‑70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层；将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，‑30℃～‑10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层；将胶原置于第三支架层上，‑3℃～‑4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层；将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层冷冻干燥得到。

Description

一种双梯度仿生修复支架及其制备方法

技术领域

本发明涉及组织工程材料技术领域，尤其是涉及一种双梯度仿生修复支架及其制备方法。

背景技术

疾病或创伤导致的骨软骨缺损往往涉及到光滑的关节软骨面和深层的骨组织。由于自身修复能力非常有限，手术干预一般不可避免。治疗方式取决于年龄、缺损面积和深度，以及在关节的分布。

自体骨软骨移植目前被公认为临床治疗骨软骨缺损的金标准。但是这项技术面临诸多限制，如供体部位病变，缺乏适合的供体组织，以及供体组织难以与损伤部位周围健康组织正确地拟合。异体软骨移植曾广泛应用，但由于负重及磨损,最终使细胞暴露于循环抗体中而引起免疫排斥反应,导致细胞死亡及功能丧失。

人工合成的无机材料也用于代替骨及软骨。组织工程化软骨为病损软骨组织治疗提供了一种新的途径，但目前常用的组织工程化软骨所面临的问题是移植物与宿主组织间缺乏稳固的锚定，采用手术固定移植物的方法，操作困难、耗时长、易损伤正常组织、影响关节面光滑，且创面出血不利于移植物贴覆缺损面，影响愈合及修复组织的增殖转化。采用化学粘合对植入材料及修复部位都会产生损伤作用，容易导致受损伤部位组织细胞死亡。采用生物粘合剂由于生物制品容易感染或传染各种疾病并受来源的限制，且其粘合强度也难以令人满意。

现在有一些通过采用组织工程支架的方式来对软骨结构进行体内固定的研究，如在支架上层部分构建软骨组织,再植入体内,利用支架下层同骨组织的结合,解决软骨的体内固定的问题，这种支架往往单独采用高分子，或采用钙磷盐材料，由于软骨和骨对生长环境的不同特点，单一支架难以同时很好地满足软骨和成骨细胞的生长要求。采用复合支架的方式,如采用多孔生物陶瓷上吸附一层天然高分子，但吸附上的高分子结合强度不高,过度不连续,容易分层,影响细胞的生长迁移及固定效果。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种仿生修复支架，本发明提供的仿生修复支架，可降解、生物相容性好、有利于细胞的生长的分化、从而有利于骨软骨损伤的修复，可以提高修复效果。

本发明提供了一种仿生修复支架的制备方法，包括：

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，-200℃～-185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，-90℃～-70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，-30℃～-10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层；

将胶原置于第三支架层上，-3℃～-4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层；

将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层冷冻干燥，得到仿生修复支架。

优选的，所述胶原的浓度为1～10mg/mL。

优选的，所述胶原和羟基磷灰石混合为通过原位合成法制备。

优选的，所述原位合成法包括：

将胶原和含Ca²⁺离子的化合物混合后放置，与含H₂PO₄ ^-离子的化合物混合，滴加含OH^-离子的化合物，调节pH值，搅拌，分离得到胶原和羟基磷灰石复合物。

优选的，所述含OH^-离子的化合物的滴加速度为6～12d/min。

优选的，所述pH值为6.5～7.5。

本发明提供了一种仿生修复支架，包括：

第一支架层，所述第一支架层包括重量比(3～4)：(6～7)的胶原和羟基磷灰石，所述第一支架层的孔径为1～29μm；

复合于第一支架层上第二支架层，所述第二支架层包括重量比(4.5～5.5)：(5.5～4.5)的胶原和羟基磷灰石，所述第二支架层的孔径为30～79μm；

复合于第二支架层上第三支架层，所述第三支架层包括重量比(6～7)：(3～4)胶原和羟基磷灰石，所述第三支架层的孔径为80～149μm；

复合于第三支架层上第四支架层，所述第四支架层包括胶原，所述第四支架层的孔径为150～170μm。

优选的，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的厚度比为(1～3)：(1～3)：(1～3)：(1～3)。。

优选的，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的总厚度为4～12mm。

本发明提供了由上述权利要求任意一项所述的制备方法制备得到的仿生修复支架或上述权利要求所述的仿生修复支架在骨软骨修复领域上的应用。

与现有技术相比，本发明提供了一种仿生修复支架的制备方法，包括；将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，-200℃～-185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层；将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，-90℃～-70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层；将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，-30℃～-10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层；将胶原置于第三支架层上，-3℃～-4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层；将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层冷冻干燥，得到仿生修复支架。然后将冷冻的多层支架在-50℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。本发明采用特定的分层冷冻的方式，使得胶原和羟基磷灰石具有一定的比例梯度以及孔径大小，使得其更接近于人体生理学结构，并且其有利于细胞的生长的分化、从而有利于骨软骨损伤的修复，可以提高修复效果。本发明的胶原可生物降解，羟基磷灰石生物相容性良好，因此，本发明提供的仿生修复支架生物降解性和相容性良好。

附图说明

图1为软骨细胞在本发明实施例1制备的支架上层的生长的扫描电镜图；

图2为软骨细胞在本发明实施例1制备的支架中层的生长的扫描电镜图；

图3为成骨细胞在本发明实施例1制备的支架下层的生长的扫描电镜图。

具体实施方式

本发明提供了一种仿生修复支架的制备方法，包括：

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，-200℃～-185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，-90℃～-70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，-30℃～-10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层；

将胶原置于第三支架层上，-3℃～-4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层；

将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层冷冻干燥，得到仿生修复支架。

然后将冷冻的多层支架在-50℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。

本发明首先将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，-200℃～-185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层。所述第一支架层的孔径优选为1～29μm；更优选为2～27μm；最优选为5～25μm。

在本发明中，所述胶原选自I型胶原蛋白和II型胶原蛋白中的一种或两种，还可以包括有透明质酸、蛋白多糖、壳聚糖、海藻酸盐、PLA、PLGA中的一种或几种。

所述羟基磷灰石又称羟磷灰石，是钙磷灰石(Ca₅(PO₄)₃(OH))的自然矿物化。但是经常被写成(Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂)的形式。为六方晶系。结构为六角柱体。

本发明所述胶原和羟基磷灰石混合优选为直接混合或通过原位合成法制备。更优选为通过原位合成法制备。本发明对所述直接混合不进行限定，本领域技术人员熟知的直接混合方式即可。

在本发明中，所述原位合成法优选包括：

将胶原和含Ca²⁺离子的化合物混合后放置，与含H₂PO₄ ^-离子的化合物混合，滴加含OH^-离子的化合物，调节pH值，搅拌，分离得到胶原和羟基磷灰石复合物。

本发明所述和Ca²⁺离子、H₂PO₄ ^-离子、OH^-离子的比例按照羟磷灰石中各组分的比例即可；本发明对于所述各个离子的浓度不进行限定，优选的，所述Ca₂ ⁺离子的浓度为0.05～0.15mol/L；所述H₂PO₄ ^-离子的浓度为0.05～0.15mol/L；所述OH^-离子的浓度为0.05～0.15mol/L。

所述放置时间优选为8～15min；所述OH^-离子滴加速度优选为6～12d/min，更优选为7～10d/min；所述pH值优选为6.5～7.5。所述原位合成法中胶原的浓度优选为1～10mg/mL，更优选为2～8mg/mL，所述直接混合法中胶原的浓度优选为1～10mg/mL，更优选为3～8mg/mL。在本发明的制备步骤中，胶原的浓度可以相同或者不同，优选为相同。

本发明对于所述搅拌和分离的方式不进行限定，本领域技术人员熟知的搅拌和离心的方式即可，所述调节pH值后继续搅拌的时间优选为1.5～3h，更优选为1.8～2.5h；所述分离的方式优选为离心分离。所述离心后优选为将沉淀洗涤，所述洗涤次数优选为2～4次，所述洗涤溶剂优选为去离子水。

得到第一支架层后，将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，-90℃～-70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层。所述第二支架层的孔径优选为30～79μm；更优选为32～77μm；最优选为35～75μm。

本发明所述胶原和羟基磷灰石混合方式和各个条件与上述相同，在此不再赘述。

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，-30℃～-10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层。所述第三支架层的孔径优选为80～149μm；更优选为82～147μm；最优选为85～145μm。

本发明所述胶原和羟基磷灰石混合方式和各个条件与上述相同，在此不再赘述。

将胶原置于第三支架层上，-3℃～-4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层。所述第四支架层的孔径优选为150～170μm；更优选为152～168μm；最优选为155～165μm。

将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层冷冻干燥，得到仿生修复支架。本发明对于上述冷冻干燥不进行限定，本领域技术人员熟知的可以使支架中水分升华的冷冻干燥均可，优选为在-45℃～-55℃进行冷冻干燥。

在本发明中，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的厚度比为：(1～3)：(1～3)：(1～3)：(1～3)。

所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的总厚度优选为4～12mm。

本发明提供了一种仿生修复支架，包括：

第一支架层，所述第一支架层包括重量比(3～4)：(6～7)的胶原和羟基磷灰石，所述第一支架层的孔径为1～29μm；

复合于第一支架层上第二支架层，所述第二支架层包括重量比(4.5～5.5)：(5.5～4.5)的胶原和羟基磷灰石，所述第二支架层的孔径为30～79μm；

复合于第二支架层上第三支架层，所述第三支架层包括重量比(6～7)：(3～4)胶原和羟基磷灰石，所述第三支架层的孔径为80～149μm；

复合于第三支架层上第四支架层，所述第四支架层包括胶原，所述第四支架层的孔径为150～170μm。

在本发明中，所述胶原选自I型胶原蛋白和II型胶原蛋白中的一种或两种，还可以包括有透明质酸、蛋白多糖、壳聚糖、海藻酸盐、PLA、PLGA中的一种或几种。

所述羟基磷灰石又称羟磷灰石，是钙磷灰石(Ca₅(PO₄)₃(OH))的自然矿物化。但是经常被写成(Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂)的形式。为六方晶系。结构为六角柱体。

本发明对于胶原和羟基磷灰石的来源、制备、浓度以及孔径的优选范围上文已经有清楚的描述在此不再赘述。

在本发明中，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的厚度比为：(1～3)：(1～3)：(1～3)：(1～3)。

所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的总厚度优选为4～12mm。

本发明对于上述复合方式不进行限定。

本发明提供了由上述权利要求任意一项所述的制备方法制备得到的仿生修复支架或上述权利要求所述的仿生修复支架在骨软骨修复领域上的应用。

本发明优选采用以下方式对本发明制备的支架进行细胞生长实验：

细胞的粘附生长：

软骨细胞按照一定密度接种到支架的上层，成骨细胞按照一定密度接种到支架的下层，体外培养3天，吸出培养液，PBS冲洗3次，每次5分钟。戊二醛4℃固定1h，PBS冲洗3次，每次5分钟。梯度乙醇脱水，样品冻干，喷金，扫描电镜观察。所述接种密度优选为5-10万/毫升。

本发明制备得到的仿生修复支架具有良好的生物相容性和生物降解性，与天然骨具有相似的成分、组成、结构和性能。通过沉积法制备的仿生修复支架，其羟基磷灰石比例从上到下呈递增梯度，支架上层为生物相容性能良好的胶原层，羟基磷灰石含量往下层递进增加，连续过渡到采用以羟基磷灰石为主的下层,其中过渡层完全结合在一起形成一个整体,避免了以往支架体系存在物理界面的缺点。同时，采用不同冷冻温度分层制备的方法，使得每一层复合物在不同冷冻温度下产生大小不同的孔径，形成从上向下孔径逐渐减小的梯度。孔径的变化对于细胞的粘附、迁移及生长具有显著的作用，形成的支架上层为利于软骨细胞生长的软骨层、中间层为利于钙化软骨界面生长的骨软骨层、下层为利于骨细胞长入的成骨层，其孔径梯度具有与天然骨软骨相似的仿生结构。胶原是软骨细胞理想的支架材料，而羟基磷灰石对骨细胞及组织有天然的亲和性，该一体化仿生支架植入体内后利于骨软骨组织快速同支架结合，同时达到固定骨与软骨组织的目的，从而解决了骨软骨修复支架固定的问题。本发明制备的一体化仿生支架对于细胞的粘附、迁移、生长和组织长入具有良好作用，有利于骨软骨的损伤修复，可缩短修复时间，提高修复效果。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的仿生修复支架及其制备方法进行详细描述。

实施例1

首先用0.5mol/L HCl溶液配制胶原溶液5mg/mL，CaCl₂溶液0.1mol/L，NaH₂PO₄溶液0.1mol/L，NaOH溶液0.1mol/L。按照胶原：羟基磷灰石＝3:7的比率，取适量胶原溶液，加入一定量Ca²⁺溶液，混匀后放置10min，加入一定量NaH₂PO₄溶液，搅拌均匀。以6滴/min的速度缓慢滴入0.1mol/L NaOH溶液，直至pH＝7.0，继续搅拌2h，并始终保持溶液为中性。制得胶原羟基磷灰石复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于模具中约1mm，置于液氮-196℃的环境中冷冻2h制得支架第一层。以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为5:5复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于第一层复合物上，厚度约1mm，置于-80℃的环境中冷冻2h制得双层复合支架。再以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为7:3复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于双层复合物支架，厚度约1mm，置于-20℃的环境中冷冻2h制得三层复合支架。最后将胶原溶液平铺于之前所得三层复合物之上，置于-4℃的环境中冷冻2h，得到四层复合支架；然后将冷冻的多层支架在-50℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。采用本发明所述的方式对实施例1制备的仿生修复支架进行细胞生长实验，结果见图1～图3所示，其中图1为软骨细胞在本发明实施例1制备的支架上层的生长的扫描电镜图，图2为软骨细胞在本发明实施例1制备的支架中层的生长的扫描电镜图；图3为成骨细胞在本发明实施例1制备的支架下层的生长的扫描电镜图。由图1～图3可以得出，本发明提供的仿生修复支架从上到下各层的孔径依次分别为150～160μm、90～110μm、40～60μm、10～30μm，并且本发明提供的仿生修复支架有利于细胞的生长。

实施例2

首先用0.5mol/L HCl溶液配制胶原溶液1mg/mL，CaCl₂溶液0.1mol/L，NaH₂PO₄溶液0.1mol/L，NaOH溶液0.1mol/L。按照胶原：羟基磷灰石＝3:7的比率，取适量胶原溶液，加入一定量Ca²⁺溶液，混匀后放置10min，加入一定量NaH₂PO₄溶液，搅拌均匀。以8滴/min的速度缓慢滴入0.1mol/L NaOH溶液，直至pH＝6.5，继续搅拌2h，并始终保持溶液pH。制得胶原羟基磷灰石复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于模具中约2mm，置于液氮-196℃的环境中冷冻2h制得支架第一层。以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为5:5复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于第一层复合支架上，厚度约2mm，置于-80℃的环境中冷冻2h制得双层复合支架。再以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为7:3复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于双层复合支架上，厚度约2mm，置于-20℃的环境中冷冻2h制得三层复合支架。最后将胶原溶液平铺于之前所得三层复合物之上，置于-4℃的环境中冷冻2h，得到四层复合支架。然后将冷冻的多层支架在-45℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。

实施例3

首先用0.5mol/L HCl溶液配制胶原溶液10mg/mL，CaCl₂溶液0.1mol/L，NaH₂PO₄溶液0.1mol/L，NaOH溶液0.1mol/L。按照胶原：羟基磷灰石＝3:7的比率，取适量胶原溶液，加入一定量Ca²⁺溶液，混匀后放置10min，加入一定量NaH₂PO₄溶液，搅拌均匀。以10滴/min的速度缓慢滴入0.1mol/L NaOH溶液，直至pH＝7.5，继续搅拌2h，并始终保持溶液pH。制得胶原羟基磷灰石复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于模具中约3mm，置于液氮-196℃的环境中冷冻2h制得支架第一层。以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为5:5复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于第一层复合支架之上，厚度约3mm，置于-80℃的环境中冷冻2h制得双层复合支架。再以上述相同的步骤原位合成胶原羟基磷灰石比率为7:3复合物，离心分离，沉淀用去离子水洗涤3次，平铺于双层复合支架上，厚度约3mm，置于-20℃的环境中冷冻2h制得三层复合支架。最后将胶原溶液平铺于之前所得三层复合支架之上，置于-4℃的环境中冷冻2h，得到四层复合支架。然后将冷冻的多层支架在-50℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。

实施例4

首先用0.5mol/L CH₃COOH溶液配制胶原溶液8mg/mL，按照胶原：羟基磷灰石＝3:7的比率，取适量胶原溶液，加入一定量羟基磷灰石，搅拌均匀。将胶原羟基磷灰石复合物平铺于模具中，厚度约3mm，置于液氮-196℃的环境中冷冻2h制得支架第一层。按照胶原：羟基磷灰石＝5:5的比率，取适量胶原溶液，加入一定量羟基磷灰石，搅拌均匀，将复合物平铺于第一层支架上，厚度约3mm，置于-80℃的环境中冷冻2h制得双层复合支架。按照胶原：羟基磷灰石＝7:3的比率，取适量胶原溶液，加入一定量羟基磷灰石，搅拌均匀，将复合物平铺于双层复合支架上，厚度约3mm，置于-20℃的环境中冷冻2h制得三层复合支架。最后将胶原溶液平铺于之前所得三层复合支架之上，置于-4℃的环境中冷冻2h，得到四层复合支架。然后将冷冻的多层支架在-50℃冷冻干燥，得到多层仿生修复支架。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种仿生修复支架的制备方法，包括：

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(3～4)：(6～7)，将混合物置于模具中，-200℃～-185℃冷冻1.5～2.5h，得到第一支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(4.5～5.5)：(5.5～4.5)，将混合物置于第一支架层上，-90℃～-70℃冷冻1.5～2.5h，得到第二支架层；

将胶原和羟基磷灰石混合，所述混合重量比为(6～7)：(3～4)，将混合物置于第二支架层上，-30℃～-10℃冷冻1.5～2.5h，得到第三支架层；

将胶原置于第三支架层上，-3℃～-4℃冷冻1.5～2.5h，得到第四支架层；

将所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层在-45℃～-55℃下冷冻干燥，得到仿生修复支架。

2.根据权利要求1所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述胶原的浓度为1～10mg/mL。

3.根据权利要求1所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述胶原和羟基磷灰石混合为通过原位合成法制备。

4.根据权利要求3所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述原位合成法包括：

将胶原和含Ca²⁺离子的化合物混合后放置，与含H₂PO₄ ^-离子的化合物混合，滴加含OH^-离子的化合物，调节pH值，搅拌，分离得到胶原和羟基磷灰石复合物。

5.根据权利要求3所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述含OH^-离子的化合物的滴加速度为6～12d/min。

6.根据权利要求3所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述pH值为6.5～7.5。

7.一种仿生修复支架，包括：

第一支架层，所述第一支架层包括重量比(3～4)：(6～7)的胶原和羟基磷灰石，所述第一支架层的孔径为1～29μm；

复合于第一支架层上第二支架层，所述第二支架层包括重量比(4.5～5.5)：(5.5～4.5)的胶原和羟基磷灰石，所述第二支架层的孔径为30～79μm；

复合于第二支架层上第三支架层，所述第三支架层包括重量比(6～7)：(3～4)胶原和羟基磷灰石，所述第三支架层的孔径为80～149μm；

复合于第三支架层上第四支架层，所述第四支架层包括胶原，所述第四支架层的孔径为150～170μm；

所述仿生修复支架通过分层冷冻制备得到，其中制备第一支架层的冷冻温度为-200～-185℃，制备第二支架层的冷冻温度为-90～-70℃，制备第三支架层的冷冻温度为-30～-10℃，制备第四支架层的冷冻温度为-3～-4℃。

8.根据权利要求1所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的厚度比为(1～3)：(1～3)：(1～3)：(1～3)。

9.根据权利要求1所述的仿生修复支架的制备方法，其特征在于，所述第一支架层、第二支架层、第三支架层和第四支架层的总厚度为4～12mm。

10.权利要求1～6任意一项所述的制备方法制备得到的仿生修复支架或权利要求7～9任意一项所述的仿生修复支架在骨软骨修复设备中的应用。