CN101838302A - 一种油茶皂苷的提取方法 - Google Patents
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Abstract
一种油茶皂苷的提取方法,将油茶枯饼废渣经50-60℃干燥、-40℃冷冻等预处理,3-5MPa压力下气流式超微粉碎,40-80目过筛;石油醚萃取,使含残油<1%,用水浴蒸馏石油醚;温度40-50℃、固液比1∶5-10、酶用量2.0-10.0μL/g油茶枯饼粉、时间2-4h条件下,纤维素酶破碎;用浓度55%-95%的乙醇水溶液浸提油茶皂苷,浸提时间为3-5h,温度为70-90℃,液固比为5-10∶1(V/g);加入2-3倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,真空干燥;大孔树脂柱纯化;-80℃预冻2-3h后,-80℃真空冷冻干燥。本发明提高了油茶皂苷提取的效率及得率,保护了油茶皂苷原本的色泽,最大量地高效提取,减少能耗,有效保存油茶皂苷的活性。
Description
技术领域
本发明属农产品精深加工领域,特别涉及油茶皂苷的提取方法。
背景技术
自上世纪90年代以来,国内兴起了对油茶皂苷的研究,而国外或因无此品种,或因资源少,而研究甚少。关于油茶皂苷提取的专利报道近年来主要有:张卫国“直接从茶籽中提取茶皂素的方法”(申请号200910037987.3),王永奇,冯宝民,王威,唐玲“油茶皂素的制备方法”(申请号2008100011095.1),邓泽元,郭辉力,彭游“微波/光波干法提取茶皂素的方法”(申请号200810106872.0),陈海辉,张春良,曾莹莹,李启成“一种用水作溶剂从油茶饼粕中提取茶皂素的生产方法”(申请号200410046824.9),孙勇,刘铁平“微生物发酵提取油茶皂甙的方法”(申请号200310107891.2),罗永明“一种防治心脑血管疾病的油茶总皂甙及其制剂”(申请号00104619.5),后晓淮,孙求实,尤少声,王桂兰,张健,苏炳禄,王少莘“一种油茶籽皂甙及其用途”(申请号97100066.2),后晓淮,张健,苏炳禄,尤少声,孙求实,王桂兰,王少莘“一种油茶籽皂素的提取方法”(申请号97100513.3),赵晓东,杨世光,王煦,杨明理“一种提取精制茶皂素的方法”(申请号95113044.7),曹万新,陈燕,周伯川,杨帆“超滤膜法提取精制油茶皂甙的生产工艺”(申请号95100925.7),胡绍海,万冰清“从油茶(茶叶籽)饼粕中提取茶油与皂甙的工艺”(申请号CN91106741.8),王廷吉,魏俊锋“一步浸取饼粕提取油脂和茶皂素工艺”(申请号90101339.0),林欣,王立昆“从山茶科饼粕中提取皂甙的精制方法”(申请号89105715.3),张辛酉,周可成,沈言谆,曾宪强,陈祥标,梁志武“一种油茶饼粕综合利用工艺”(申请号CN86106634A)。这些专利报道极大地丰富了油茶皂苷提取纯化手段,但迄今为止,还没有人在提取油茶皂苷前通过物理化学或生物手段对油茶枯饼中的细胞进行破碎以释放出最大量的油茶皂苷从而高效率高得率地提取出油茶皂苷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种油茶皂苷的高效高得率分离纯化提取方法,该提取方法改进了传统方法油茶皂苷易流失、得率低及效率不高的不足,提高了油茶皂苷的得率及效率。
本发明是通过以下技术方案实现的。
本发明以溶剂提取油茶籽中茶油或压榨茶油后的油茶枯饼废渣为原料。
(1)将油茶枯饼废渣经50-60℃干燥、-40℃冷冻等预处理,3-5MPa压力下气流式超微粉碎,40-80目过筛;
(2)石油醚萃取,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕;
(3)温度40-50℃、固液比1∶5-10、酶用量2.0-10.0μL/g油茶枯饼粉、时间2-4h条件下,纤维素酶破碎;
(4)醇提:用浓度范围在55%-95%的乙醇水溶液浸提油茶皂苷,浸提时间为3-5h,温度为70-90℃,液固比为5-10∶1(V/g);
(5)丙酮沉淀:加入2-3倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,得到初步纯化的油茶皂苷,真空干燥,备用;
(6)大孔树脂柱纯化:将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中配成20-50mg/mL的样品溶液,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附1-2h。用2倍树脂床体积(2BV)浓度在0.1%-1%范围内的NaOH溶液(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV不同浓度的乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm(皂苷类物质吸收峰)。收集含皂苷洗脱液,浓缩;
(7)冷冻干燥:-80℃预冻2-3h后,-80℃真空冷冻干燥。
本发明HPLC鉴定纯度及其色谱的条件:HPLC分析时,采用手动进样,每次进样量为20μL,洗脱流速为1mL/min。样品溶液和洗脱液分别用0.80μm和0.45μm的滤膜过滤。
该工艺的特色在于采用高压气流粉碎和纤维素酶破碎细胞组织释放油茶皂苷,使得传统方法皂苷残留于组织中的量减少并避免了皂苷与其他物质的结合和混合而色泽深沉,从而提高了油茶皂苷提取的效率及得率,保护了油茶皂苷原本的色泽,最大量地高效提取,减少能耗,有效保存油茶皂苷的活性。
本发明的技术效果是:该提取方法解决了一般方法油茶皂苷易残留于组织中、提取效率和得率都不高的缺点,采用高压气流粉碎和纤维素酶破碎细胞组织释放油茶皂苷,使得传统方法皂苷残留于组织中的量减少并避免了皂苷与其他物质的结合和混合而色泽深沉,从而提高了油茶皂苷提取的效率及得率,保护了油茶皂苷原本的色泽,最大量地高效提取,减少能耗,有效保存油茶皂苷的活性。
具体实施方式
本发明将通过以下实施例作进一步说明。
按照上述具体操作步骤,在设定条件下提取油茶皂苷,产物皂苷收率按照下式计算:
皂苷收率=(皂苷质量/原料质量)×100%。
实施例1:
将原料(皂苷含量9.43%)经50℃干燥、-40℃冷冻等预处理后,4Mpa压力下气流式超微粉碎对原料进行处理,40目过筛。称取40目油茶枯饼粉100g,用2倍量的石油醚萃取半小时,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕。采用真空低温纤维素酶破碎细胞释放油茶皂苷,反应温度为40℃,固液比1∶6,酶用量3.0μL/g油茶枯饼粉,时间2h,双层滤布过滤,真空浓缩溶液到较小体积,再将较小体积的溶液连同滤渣倒入同一容器内,备用。
选取浓度为75%的乙醇浸提油茶皂苷,浸提时间为3h,浸提温度为80℃,液固比为7∶1(V/g),双层滤布过滤,真空浓缩至一定体积,加入2倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,速度不宜过快且沉淀后的上层溶液要尽快过滤掉,得到的沉淀物真空干燥,备用。
将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附,上样液浓度为50mg/mL,吸附时间为2h。用2倍树脂床体积(2BV)0.2%NaOH(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV20%、40%、60%、70%乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm。收集含皂苷洗脱液,浓缩,-80℃预冻2h后,-80℃真空冷冻干燥10小时。得到产物皂苷9.02g,皂苷得率为9.02%。
实施例2:
将原料(皂苷含量9.43%)经60℃干燥、-40℃冷冻等预处理后,3Mpa压力下气流式超微粉碎对原料进行处理,过80目筛。称取80目油茶枯饼粉50g,用3倍量的石油醚萃取半小时,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕。采用真空低温纤维素酶破碎细胞释放油茶皂苷,反应温度为50℃,固液比1∶8,酶用量5.0μL/g油茶枯饼粉,时间3h,双层滤布过滤,真空浓缩溶液到较小体积,再将较小体积的溶液连同滤渣倒入同一容器内,备用。
选取浓度为80%的乙醇浸提油茶皂苷,浸提时间为4h,浸提温度为85℃,液固比为8∶1(V/g),双层滤布过滤,真空浓缩至一定体积,加入3倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,速度不宜过快且沉淀后的上层溶液要尽快过滤掉,得到的沉淀物真空干燥,备用。
将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附,上样液浓度为30mg/mL,吸附时间为1h。用2倍树脂床体积(2BV)0.5%NaOH(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV20%、40%、60%、70%乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm。收集含皂苷洗脱液,浓缩,-80℃预冻3h后,-80℃真空冷冻干燥10小时。得到产物皂苷4.48g,皂苷得率为8.96%。
实施例3:
将原料(皂苷含量9.43%)经50℃干燥、-40℃冷冻等预处理后,5Mpa压力下气流式超微粉碎对原料进行处理,过40目筛。称取40目油茶枯饼粉80g,用2倍量的石油醚萃取半小时,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕。采用真空低温纤维素酶破碎细胞释放油茶皂苷,反应温度为45℃,固液比1∶9,酶用量8.0μL/g油茶枯饼粉,时间4h,双层滤布过滤,真空浓缩溶液到较小体积,再将较小体积的溶液连同滤渣倒入同一容器内,备用。
选取浓度为85%的乙醇浸提油茶皂苷,浸提时间为5h,浸提温度为75℃,液固比为7∶1(V/g),双层滤布过滤,真空浓缩至一定体积,加入2.5倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,速度不宜过快且沉淀后的上层溶液要尽快过滤掉,得到的沉淀物真空干燥,备用。
将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附,上样液浓度为40mg/mL,吸附时间为1.5h。用2倍树脂床体积(2BV)0.8%NaOH(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV 20%、40%、60%、70%乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm。收集含皂苷洗脱液,浓缩,-80℃预冻3h后,-80℃真空冷冻干燥10小时。得到产物皂苷7.28g,皂苷得率为9.10%。
实施例4:
将原料(皂苷含量9.43%)经60℃干燥、-40℃冷冻等预处理后,4Mpa压力下气流式超微粉碎对原料进行处理,过80目筛。称取80目油茶枯饼粉100g,用3倍量的石油醚萃取半小时,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕。采用真空低温纤维素酶破碎细胞释放油茶皂苷,反应温度为50℃,固液比1∶10,酶用量10.0μL/g油茶枯饼粉,时间3.5h,双层滤布过滤,真空浓缩溶液到较小体积,再将较小体积的溶液连同滤渣倒入同一容器内,备用。
选取浓度为75%的乙醇浸提油茶皂苷,浸提时间为4.5h,浸提温度为90℃,液固比为10∶1(V/g),双层滤布过滤,真空浓缩至一定体积,加入2.5倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,速度不宜过快且沉淀后的上层溶液要尽快过滤掉,得到的沉淀物真空干燥,备用。
将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附,上样液浓度为35mg/mL,吸附时间为1.5h。用2倍树脂床体积(2BV)1%NaOH(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV 20%、40%、60%、70%乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm。收集含皂苷洗脱液,浓缩,-80℃预冻3h后,-80℃真空冷冻干燥10小时。得到产物皂苷9.06g,皂苷得率为9.06%。
实施例5:
将原料(皂苷含量9.43%)经50℃干燥、-40℃冷冻等预处理后,3Mpa压力下气流式超微粉碎对原料进行处理,过40目筛。称取40目油茶枯饼粉50g,用2倍量的石油醚萃取半小时,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕。采用真空低温纤维素酶破碎细胞释放油茶皂苷,反应温度为45℃,固液比1∶5,酶用量2.0μL/g油茶枯饼粉,时间2.5h,双层滤布过滤,真空浓缩溶液到较小体积,再将较小体积的溶液连同滤渣倒入同一容器内,备用。
选取浓度为85%的乙醇浸提油茶皂苷,浸提时间为5h,浸提温度为70℃,液固比为5∶1(V/g),双层滤布过滤,真空浓缩至一定体积,加入3倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,速度不宜过快且沉淀后的上层溶液要尽快过滤掉,得到的沉淀物真空干燥,备用。
将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中,上样于AB-8大孔树脂柱(10×100cm)吸附,上样液浓度为20mg/mL,吸附时间为1h。用2倍树脂床体积(2BV)0.6%NaOH(1BV/H)洗脱,接着用蒸馏水(1BV/H)洗至中性,然后用2BV20%、40%、60%、70%乙醇洗脱(1BV/H),结合香草醛-浓硫酸法检测A550nm。收集含皂苷洗脱液,浓缩,-80℃预冻3h后,-80℃真空冷冻干燥10小时。得到产物皂苷4.47g,皂苷得率为8.94%。
Claims (1)
1.一种油茶皂苷的提取方法,其特征是:
(1)将油茶枯饼废渣经50-60℃干燥、-40℃冷冻等预处理,3-5MPa压力下气流式超微粉碎,40-80目过筛;
(2)石油醚萃取,得含残油<1%的滤渣饼,用水浴蒸馏石油醚,得干粕;
(3)温度40-50℃、固液比1∶5-10、酶用量2.0-10.0μL/g油茶枯饼粉、时间2-4h条件下,纤维素酶破碎;
(4)醇提:用浓度范围在55%-95%的乙醇水溶液浸提油茶皂苷,浸提时间为3-5h,温度为70-90℃,液固比V/g为5-10∶1;
(5)丙酮沉淀:加入2-3倍量的丙酮进行搅拌沉淀除去杂质,得到初步纯化的油茶皂苷,真空干燥,备用;
(6)大孔树脂柱纯化:将提取的初步纯化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中配成20-50mg/mL的样品溶液,上样于AB-8大孔树脂柱吸附1-2h;用2倍树脂床体积浓度在0.1%-1%范围内的NaOH溶液洗脱,接着用蒸馏水洗至中性,然后用2BV不同浓度的乙醇洗脱,结合香草醛-浓硫酸法检测皂苷类物质吸收峰;收集含皂苷洗脱液,浓缩;
(7)冷冻干燥:-80℃预冻2-3h后,-80℃真空冷冻干燥。
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