CN101837091B - 一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，所述的提取黄精皂甙的工序包括：a、提取工序、b、萃取工序、c、上柱工序；所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，本发明与现有技术相比，黄精皂甙收率为黄精总重量的3.9％，为黄精总皂甙的90.7％，纯度95.3％；黄精多糖的收率为黄精重量的13.3％，为黄精总多糖的93.2％，纯度为91.8％；不仅充分利用了黄精资源，提高了原材料的使用价值，而且本技术提取皂甙和多糖具有纯度高，回收率高，低污染、操作简单等特点。
Description
技术领域
本发明属于提取黄精的工艺，特别属于提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺。
背景技术
黄精是宿根性草本植物，别名黄鸡莱、狗姜等，隶属百合科黄精属(Polygonatum Mill.)。黄精中含有较高的多糖以及甾体皂甙。已有研究表明黄精多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、提高记忆力、抗病毒等作用；而黄精皂甙也具有广泛的生理功能，包括提高机体免疫力、降低血糖、抗肿瘤、改善学习记忆等。因此提取黄精中的多糖和甾体皂甙具有重要的社会和经济价值。通常黄精皂甙和黄精多糖是分别提取的，不能充分利用原料黄精。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种收率高的连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺。
本发明解决技术问题的技术方案为：一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，
所述的提取黄精皂甙的工序包括以下工序：
a、浸泡提取工序：将黄精粉末在体积浓度为80-85％的乙醇中浸泡1-2小时，再升温至45-50℃，用频率为25-35kHz的超声波提取0.5-1小时，抽滤，得到黄精提取液和黄精药渣；黄精粉末与体积浓度为80-85％的乙醇的比例为1g∶10-15ml；
超声提取与通常的乙醇加热回流提取皂甙的方法相比，超声提取可大大减少提取时间，提高皂甙得率，因为超声波在介质中传播时的物理特性引发的机械振动、微射流、微声流等多级效应皆使有效成分在溶液中扩散，加速分子的相互撞击导致植物(生物)细胞破壁、变形，进而溢出有效含量。
b、萃取工序：将黄精提取液中的乙醇进行回收；将回收乙醇的黄精提取液用乙醚萃取脱脂；将脱脂后的黄精提取液用饱和正丁醇进行萃取，收集正丁醇提取液，回收正丁醇后得到黄精皂甙的粗产品；
c、上柱工序：将黄精皂甙粗产品用80-85％的乙醇稀释至浓度为0.8-1mg/ml加至已经准备好的大孔树脂柱进行吸附，先用蒸馏水进行洗脱，洗脱至流出液不显molish反应(molish反应为鉴定单糖的反应，用蒸馏水进行洗脱的目的是为了先除掉粗产品中可能存在的糖类)为止，再用体积浓度为80-85％的乙醇进行洗脱，直至洗脱液无皂甙视为洗脱完全(洗脱液与树脂体积比约为4∶1)，挥干乙醇，于冷冻干燥机-65℃进行真空冷冻干燥至恒重，得到黄精皂甙成品，黄精皂甙的粗产品与大孔树脂的重量比为1∶8-10；
所述的大孔树脂的型号为AMBERLITE XAD4。
所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，
在d、脱脂提取工序中，所用的原料为以a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣。
所述的d、脱脂提取工序为：将a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣用索氏提取法除酯后，再加入蒸馏水，于55-60℃以25-35kHz的超声波提取0.5-1小时，离心，收集上清液；上清液经减压浓缩后得到多糖浓缩液；黄精药渣与蒸馏水的重量比为1∶15-20；
为提高黄精多糖的收率，将离心所得的沉淀，再加入蒸馏水进行第二次提取，离心，合并上清液。
所述的e、醇析工序为：将d得到的多糖浓缩液依次经体积浓度为80％，90％，95％以及无水乙醇进行醇析，再分别用乙醚，丙酮洗涤沉淀以便去除其中水分，将沉淀进行在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到混合粗多糖；
所述的f、脱蛋白工序为将醇析工序中所得到的混合多糖利用Sevage法与三氯醋酸法交替脱蛋白；若单独使用Sevage法或与三氯醋酸法，将会导致脱蛋白次数多，且脱不完全的不利后果；
所述的g、透析工序为将f、脱蛋白工序所制的多糖放入透析袋中，以除去粗多糖中的小分子物质，再将透析好的多糖经减压浓缩脱去水分后，得混合黄精多糖；
本发明与现有技术相比，黄精皂甙收率为黄精总重量的3.9％，为黄精总皂甙的90.7％，纯度95.3％；黄精多糖的收率为黄精重量的13.3％，为黄精总多糖的93.2％，纯度为91.8％；不仅充分利用了黄精资源，提高了原材料的使用价值，而且本技术在提取皂甙的同时，并不影响多糖的提取，回收率高，低污染(所有有机溶剂均可重新回收)、操作简单等特点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的说明。
实施例1：
一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，
所述的提取黄精皂甙的工序包括以下工序：
a、浸泡提取工序：将黄精粉末在体积浓度为80％的乙醇中浸泡1小时，再升温至45℃，用频率为25kHz的超声波提取1小时，抽滤，得到黄精提取液和黄精药渣；黄精粉末与体积浓度为80％的乙醇的比例为1g∶15ml；
b、萃取工序：将黄精提取液中的乙醇用旋转蒸发器进行回收；将回收乙醇后的黄精提取液移至分液漏斗中，用乙醚萃取脱脂3次，将脱脂后的黄精提取液用饱和正丁醇萃取3次，收集正丁醇提取液，用旋转蒸发仪回收正丁醇后得到黄精皂甙的粗产品；
c、上柱工序：将黄精皂甙粗产品用80％的乙醇稀释至浓度为0.8mg/ml加至已经准备好的大孔树脂柱(AMBERLITE XAD4)进行吸附，先用蒸馏水进行洗脱，洗脱至流出液不显molish反应为止，再用体积浓度为80％的乙醇进行洗脱，流速3.0ml/min，分步收集(8ml/管)乙醇洗脱部分，每5管用香草醛-冰醋酸法跟踪检测皂甙含量，直至洗脱液无皂甙，即视为洗脱完全(洗脱液与树脂体积比约为4∶1)，挥干乙醇，于-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到黄精皂甙成品，黄精皂甙的粗产品与大孔树脂的重量比为1∶8；
所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，
所述的d、脱脂提取工序为：将a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣置索氏蒸馏器中，用石油醚60℃回流脱脂12h后挥干溶剂(索氏提取法脱酯)，再加入蒸馏水，于55℃以25kHz的超声波提取1小时，离心，收集上清液；将离心所得的沉淀，再加入蒸馏水进行第二次提取，离心，合并上清液，上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到多糖浓缩液；黄精药渣与蒸馏水的重量比为1∶20；
所述的e、醇析工序为：将d得到的多糖浓缩液依次经体积浓度为80％，90％，95％以及无水乙醇进行醇析，再分别用乙醚，丙酮洗涤沉淀以便去除其中水分，将沉淀进行在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到混合粗多糖；
所述的f、脱蛋白工序为将醇析工序中所得到的混合多糖利用Sevage法与三氯醋酸法交替脱蛋白；；
所述的g、透析工序为将f、脱蛋白工序所制的多糖放入规格为直径22mm，截留分子量Da为3500的透析袋中，以除去粗多糖中的小分子物质，再将透析好的多糖经减压浓缩脱去水分后，得混合黄精多糖。
实施例2：
一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，
所述的提取黄精皂甙的工序包括以下工序：
a、浸泡提取工序：将黄精粉末在体积浓度为85％的乙醇中浸泡0.5小时，再升温至50℃，用频率为35kHz的超声波提取0.5小时，抽滤，得到黄精提取液和黄精药渣；黄精粉末与体积浓度为85％的乙醇的比例为1g∶10ml；
b、萃取工序：将黄精提取液中的乙醇用旋转蒸发器进行回收；将回收乙醇的黄精提取液置于分液漏斗中，用乙醚萃取脱脂3次；将脱脂后的黄精提取液用饱和正丁醇萃取3次，收集正丁醇提取液，用旋转蒸发仪回收正丁醇后得到黄精皂甙的粗产品；
c、上柱工序：将黄精皂甙粗产品用85％的乙醇稀释至浓度为1mg/ml加至已经准备好的大孔树脂柱(AMBERLITE XAD4)进行吸附，先用蒸馏水进行洗脱，洗脱至流出液不显molish反应为止，再用体积浓度为80％的乙醇进行洗脱，流速3.0ml/min，分步收集(8ml/管)乙醇洗脱部分，每5管用香草醛-冰醋酸法跟踪检测皂甙含量，直至洗脱液无皂甙，即视为洗脱完全(洗脱液与树脂体积比约为4∶1)，挥干乙醇，于-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到黄精皂甙成品，黄精皂甙的粗产品与大孔树脂的重量比为1∶10；
所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，
所述的d、脱脂提取工序为：将a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣置索氏蒸馏器中，用石油醚60℃回流脱脂12h后挥干溶剂(索氏提取法脱酯)，再加入蒸馏水，于58℃以25kHz的超声波提取1小时，离心，收集上清液；将离心所得的沉淀，再加入蒸馏水进行第二次提取，离心，合并上清液，上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到多糖浓缩液；黄精药渣与蒸馏水的重量比为1∶15；
所述的e、醇析工序为：将d得到的多糖浓缩液依次经体积浓度为80％，90％，95％以及无水乙醇进行醇析，再分别用乙醚，丙酮洗涤沉淀以便去除其中水分，将沉淀进行在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到混合粗多糖；
所述的f、脱蛋白工序为将醇析工序中所得到的混合多糖利用Sevage法与三氯醋酸法交替脱蛋白；；
所述的g、透析工序为将f、脱蛋白工序所制的多糖放入规格为直径22mm，截留分子量Da为3500的透析袋中，以除去粗多糖中的小分子物质，再将透析好的多糖经减压浓缩脱去水分后，得混合黄精多糖。
实施例3：
一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，
所述的提取黄精皂甙的工序包括以下工序：
a、浸泡提取工序：将黄精粉末在体积浓度为85％的乙醇中浸泡1小时，再升温至48℃，用频率为28kHz的超声波提取0.8小时，抽滤，得到黄精提取液和黄精药渣；黄精粉末与体积浓度为80％的乙醇的比例为1g∶12ml；
b、萃取工序：将黄精提取液中的乙醇用旋转蒸发器进行回收；将回收乙醇的黄精提取液置于分液漏斗中，用乙醚萃取脱脂3次；将脱脂后的黄精提取液用饱和正丁醇萃取3次，收集正丁醇提取液，用旋转蒸发仪回收正丁醇后得到黄精皂甙的粗产品；
c、上柱工序：将黄精皂甙粗产品用85％的乙醇稀释至浓度为0.9mg/ml加至已经准备好的大孔树脂柱(AMBERLITE XAD4)进行吸附，先用蒸馏水进行洗脱，洗脱至流出液不显molish反应为止，再用体积浓度为85％的乙醇进行洗脱，流速3.0ml/min，分步收集(8ml/管)乙醇洗脱部分，每5管用香草醛-冰醋酸法跟踪检测皂甙含量，直至洗脱液无皂甙，即视为洗脱完全(洗脱液与树脂体积比约为4∶1)，挥干乙醇，于-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到黄精皂甙成品，黄精皂甙的粗产品与大孔树脂的重量比为1∶9；
所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，
所述的d、脱脂提取工序为：将a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣置索氏蒸馏器中，用石油醚60℃回流脱脂12h后挥干溶剂(索氏提取法脱酯)，再加入蒸馏水，于58℃以28kHz的超声波提取0.6小时，离心，收集上清液；将离心所得的沉淀，再加入蒸馏水进行第二次提取，离心，合并上清液，上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到多糖浓缩液；黄精药渣与蒸馏水的重量比为1∶18；
所述的e、醇析工序为：将d得到的多糖浓缩液依次经体积浓度为80％，90％，95％以及无水乙醇进行醇析，再分别用乙醚，丙酮洗涤沉淀以便去除其中水分，将沉淀进行在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到混合粗多糖；
所述的f、脱蛋白工序为将醇析工序中所得到的混合多糖利用Sevage法与三氯醋酸法交替脱蛋白；
所述的g、透析工序为将f、脱蛋白工序所制的多糖放入规格为直径22mm，截留分子量Da为3500的透析袋中，以除去粗多糖中的小分子物质，再将透析好的多糖经减压浓缩脱去水分后，得混合黄精多糖。
实施例1所得到的黄精皂甙的收率为90.7％、纯度为92.1％；黄精多糖的收率为93.2％、纯度为91.8％；
实施例2所得到的黄精皂甙的收率为87.6％、纯度为95.3；黄精多糖的收率为87.1％、纯度为91.2％；
实施例3所得到的黄精皂甙的收率为89.3％、纯度为93.6％；黄精多糖的收率为91.4％、纯度为90.7％。
Claims (3)
1.一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，依次包括提取黄精皂甙工序、提取黄精多糖的工序，其特征在于：
所述的提取黄精皂甙的工序包括以下工序：
a、浸泡提取工序：将黄精粉末在体积浓度为80-85％的乙醇中浸泡1-2小时，再升温至45-50℃，用频率为25-35kHz的超声波提取0.5-1小时，抽滤，得到黄精提取液和黄精药渣；黄精粉末与体积浓度为80-85％的乙醇的比例为1g∶10-15ml；
b、萃取工序：将黄精提取液中的乙醇进行回收；将回收乙醇的黄精提取液用乙醚萃取脱脂；将脱脂后的黄精提取液用饱和正丁醇进行萃取，收集正丁醇提取液，回收正丁醇后得到黄精皂甙的粗产品；
c、上柱工序：将黄精皂甙粗产品用80-85％的乙醇稀释至浓度为0.8-1mg/ml加至已经准备好的大孔树脂柱进行吸附，先用蒸馏水进行洗脱，洗脱至流出液不显molish反应为止，再用体积浓度为80-85％的乙醇进行洗脱，直至洗脱液无皂甙视为洗脱完全，挥干乙醇，-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到黄精皂甙成品，黄精皂甙粗产品与大孔树脂的重量比为1∶8-10；
所述的提取黄精多糖的工序，包括以下工序：d、脱脂提取工序、e、醇析工序、f、脱蛋白工序、g、透析工序，
在d、脱脂提取工序中，所用的原料为a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣；
所述的大孔树脂的型号为AMBERLITE XAD4。
2.根据权利要求1所述的一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，其特征在于：
所述的d、脱脂提取工序为：将a、浸泡提取工序中所得到的黄精药渣用索氏提取法除酯后，再加入蒸馏水，于55-60℃以25-35kHz的超声波提取0.5-1小时，离心，收集上清液；上清液经减压浓缩后得到多糖浓缩液；黄精药渣与蒸馏水的重量比为1∶15-20。
3.根据权利要求2所述的一种连续提取黄精皂甙和黄精多糖的工艺，其特征在于：将离心所得的沉淀，再加入蒸馏水进行第二次提取，离心，合并上清液。
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