CN101829214B - 金樱叶提取物及其在制备治疗烧烫伤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，是一种从中药金樱叶中得到的提取物及其在制备治疗烧烫伤药物中的应用。经大鼠创面愈合试验、绿脓杆菌感染小鼠体内保护试验、抗炎试验，观察金樱叶提取物对烧烫伤的治疗作用，结果表明，金樱叶提取物对烧烫伤性创面愈合率高，能显著抑制绿脓杆菌感染，能显著抑制小鼠耳肿胀的作用，与阳性药磺胺嘧啶银(SD-Ag)相比无显著差异，因此，金樱叶提取物可用于制备治疗烧烫伤的药物。本发明金樱叶提取物制备方法简单，成本低廉，本发明为治疗烧烫伤提供了一种新的药物来源。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，是一种从中药金樱叶中得到的提取物及其在制备治疗烧烫伤药物中的应用。
背景技术
金樱叶为蔷薇科蔷薇属植物金樱子(Rosa laevigata Michx.)的嫩叶。在我国分布很广，主要分布于华东、中南、西南等地区。金樱叶为民间常用中药，是古方“军中一捻金”的主要成分之一，主治金疮出血。《闽东本草》中记载“治汤火伤：金樱叶焙干为末，调麻油涂患处，欲愈时加入蹩甲末”。现代药理研究证明：金樱子果实可做利尿剂、镇咳剂，也可用于神经性头痛、慢性肾炎等的治疗。(阮肖平.浅议金樱子的药用及其食疗价值[J].时珍国医国药，1998，9(5)：46.)。有报道，从金樱子果实中提取分离到乌苏酸、蔷薇酸、坡模酸、齐墩果酸、山楂酸、19α-羟基亚细亚酸等三萜酸类化合物和金樱子皂苷A、野蔷薇苷、委陵菜酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等三萜皂苷类化合物，它们的化学结构通式如下所示：
其中，R1表示氢或羟基，R2表示氢或羟基，R3表示氢或1个吡喃葡萄糖基，R4表示氢或甲基，R5表示氢或羟基，R6表示氢或甲基，R7表示甲基或羟甲基。但至今未见金樱叶提取物用于制备治疗烧烫伤药物的报道。
发明内容
本发明提供一种从中药金樱叶中得到的金樱叶提取物及其在制备治疗烧烫伤 药物中的应用。
金樱叶提取物的制备方法如下：
1、制备金樱叶提取液
将中药金樱叶按常规用5-10倍体积量的40％-95％乙醇水溶液浸泡过夜，加热回流提取2-4次，每次1-3小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；
2、制备提取物粗制品
将上述提取液加水稀释，按常规上大孔树脂柱，大孔树脂选自D101或HP-20，依次用水和浓度不大于20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用40％-95％乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得提取物粗制品；
3、纯化
在提取物粗制品中加入适量水制成混悬液，按常规经聚酰胺柱色谱纯化，先用水洗脱去除杂质，然后用40％-95％乙醇水溶液充分洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得到金樱叶提取物；
或者
在金樱叶提取物粗制品中加入适量水制成混悬液，再依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇分别萃取2-4次，合并萃取液，减压回收溶剂，得金樱叶提取物。
经金樱叶提取物的成分分析，亦即将上述金樱叶提取物经硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，收集不同流份，各流份再经MCI gel柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及反相ODS柱色谱，用水-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分别得到乌苏酸、蔷薇酸、坡模酸、齐墩果酸、山楂酸、19α-羟基亚细亚酸等三萜酸类化合物和金樱子皂苷A、野蔷薇苷、委陵菜酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等三萜皂苷类化合物。
经大鼠创面愈合试验、绿脓杆菌感染小鼠体内保护试验、抗炎试验，观察金樱叶提取物对烧烫伤的治疗作用，结果表明，金樱叶提取物对烧烫伤性创面愈合率高，能显著抑制绿脓杆菌感染，能显著抑制小鼠耳肿胀的作用，与阳性药磺胺嘧啶银(SD-Ag)相比无显著差异，因此，金樱叶提取物可用于制备治疗烧烫伤的药物。
本发明金樱叶提取物制备方法简单，成本低廉，本发明为治疗烧烫伤提供了一种新的药物来源。
具体实施方式
现结合实施例对本发明作详细描述。
实施例1 制备金樱叶提取物
(1)制备金樱叶提取液
取金樱叶[leaf of Rosa laevigata Michx.]2kg，用8倍体积量的70％乙醇水溶液浸泡过夜，按常规加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；
(2)制备提取物粗制品
将上述金樱叶提取液加水稀释后滤去沉淀，滤液经D101型大孔树脂吸附，树脂用量5kg，分别用水和20％乙醇水溶液洗去杂质，再用10000ml 70％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得金樱叶提取物粗制品。
(3)纯化
在金樱叶提取物粗制品中加入5000ml水制成混悬液，再按常规经聚酰胺柱色谱，先用5000ml水洗脱，然后用10000ml的70％乙醇水溶液洗脱，减压回收溶剂，得金樱叶提取物40g。
实施例2 制备金樱叶提取物
金樱叶提取液和金樱叶提取物粗制品的制备同实施例1。
纯化时，将金樱叶提取物粗制品混悬液依次用等体积的乙酸乙酯和正丁醇分别萃取4次，合并萃取液，减压回收溶剂，得提取物45g。
实施例3 金樱叶提取物对烫伤大鼠创面的愈合试验
取SD大鼠30只，雌雄不拘，体重275-300g，由第二军医大学动物中心提供，随机分为3组，即空白对照组、阳性对照组和金樱叶提取物治疗组，每组10只。阳性药为临床上广为应用的治疗烧烫伤药物磺胺嘧啶银(由上海长海医院提供，下同)，按常规背部脱毛麻醉后，将各组大鼠背部置于水浴锅上方用水蒸气进行烫伤，创面20cm2，皮肤发白，出现水泡，病检见证为深Ⅱ度烫伤模型。清创后，阳性对照组创面涂抹磺胺嘧啶银，金樱叶提取物治疗组创面涂抹金樱叶提取物，每天涂药一次，空白对照组创面不作任何处理，共观察24天。观察指标：在烫伤后第7、14、21天分别测定创面愈合率以及创面愈合时间。创面愈合时间以上皮完全覆盖创面为准；创面愈合率检测方法为：首先将各大鼠背部的创面分别描绘 在透明薄膜上，再以此为模板，用质地均匀的硬纸片按模板剪成同样大小，然后用分析天平称重。以硬纸片重量间接地表示创面面积。创面愈合率＝(原始创面面积-测定日创面面积)/原始创面面积x100％。结果见表1、表2。
表1创面愈合时间测定结果 
注：与空白对照组比较，*P＜0.01
表2创面愈合率测定结果 
注：与空白对照组比较，*P＜0.01
由表1、表2可见，金樱叶提取物组创面愈合时间明显少于空白对照组，甚至比阳性对照组也短；给药第7天，金樱叶提取物组的创面愈合率就明显高于空白对照组和阳性对照组，给药第14和第21天，金樱叶提取物组的创面愈合率不仅显著高于空白对照组，而且优于阳性对照组。结果表明，金樱叶提取物能有效治疗烫伤创面。
实施例4金樱叶提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的抑制试验
取小鼠，雌雄各半，体重25-30g，由第二军医大学动物中心提供，随机分为3组，即空白对照组、阳性对照组和金樱叶提取物治疗组，每组10只。阳性药为磺胺嘧啶银。将磺胺嘧啶银和金樱叶提取物用水配制成溶液，各组每日灌胃给药1次，按体重每次给药30mg/kg，连续3天，空白对照组灌胃等体积生理盐水，于末次给药45分钟后，分别以二甲苯棉球接触小鼠右耳5秒钟，15分钟后拉颈椎处死小鼠。以直径8mm打孔器将小鼠双耳同部位切下，测定左右耳重量差，统计处理各组数据并计算抑肿率。结果见表3。
表3金樱叶提取物对二甲苯致炎后鼠耳肿胀度的影响(X±SD，n＝10)
注：与空白对照组比较，*P＜0.01
由表3可见，金樱叶提取物治疗组耳肿胀度和抑制率与阳性对照组接近。结果表明，金樱叶提取物能有效抑制耳肿胀，具有显著的抗炎作用。
实施例5 金樱叶提取物对绿脓杆菌感染小鼠的保护试验
取小鼠30只，雌雄各半，体重25-30g，由第二军医大学动物中心提供，随机分为3组，即空白对照组、阳性对照组和金樱叶提取物治疗组，每组10只。阳性药为磺胺嘧啶银。采用小鼠背部烫伤，以109个/ml绿脓杆菌制成感染动物模型。阳性对照组伤口涂抹磺胺嘧啶银，金樱叶提取物治疗组伤口涂抹金樱叶提取物，各组每8h涂药1次，厚约0.5mm，空白对照组伤口不作任何处理，共观察72h。然后于第12h、36h、72h取痂下组织进行细菌计数。结果见表4。
表4各组伤后痂下组织细菌计数的变化(CUF/g， 
注：与空白对照组比较，*P＜0.01
由表4可见，第12h、36h、72h，金樱叶提取物组痂下细菌数均显著低于空白对照组，甚至比阳性对照组还低，说明本发明金樱叶提取物具有良好的抗绿脓杆菌感染的效果。
上述结果表明，本发明金樱叶提取物能有效治疗烫伤创面，具有显著的抗炎作用，因此可用于制备治疗烧烫伤的药物。
Claims (4)
1.一种金樱叶提取物，制备方法如下：
1)制备金樱叶提取液
将中药金樱叶按常规用5-10倍体积量的40％-95％乙醇水溶液浸泡过夜，加热回流提取2-4次，每次1-3小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；
2)制备提取物粗制品
将上述提取液加水稀释，按常规上大孔树脂柱，大孔树脂选自D101或HP-20，依次用水和浓度不大于20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用40％-95％乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得提取物粗制品；
3)纯化
在提取物粗制品中加入适量水制成混悬液，按常规经聚酰胺柱色谱纯化，先用水洗脱去除杂质，然后用40％-95％乙醇水溶液充分洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得到金樱叶提取物；
或者，
在金樱叶提取物粗制品中加入适量水制成混悬液，再依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇分别萃取2-4次，合并萃取液，减压回收溶剂，得金樱叶提取物。
2.按权利要求1所述的金樱叶提取物，其特征在于制备金樱叶提取液时，用8倍体积量的70％乙醇水溶液浸泡过夜，按常规加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；制备提取物粗制品时，选用D101大孔树脂，依次用水和20％乙醇水溶液洗去杂质，再用70％乙醇水溶液进行洗脱；将提取物粗制品混悬液经聚酰胺柱色谱纯化时，用70％乙醇水溶液洗脱。
3.按权利要求1所述的金樱叶提取物，其特征在于制备金樱叶提取液时，用8倍体积量的70％乙醇水溶液浸泡过夜，按常规加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得提取液；制备提取物粗制品时，选用D101大孔树脂，依次用水和20％乙醇水溶液洗去杂质，再用70％乙醇水溶液进行洗脱；纯化时，将提取物粗制品混悬液依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇分别萃取4次。
4.权利要求1，2或3所述的金樱叶提取物在制备治疗烧烫伤药物中的应用。
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