CN101810552B - 用于治疗皮肤老化迹象的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗皮肤老化的方法和组合物，所述组合物包含至少一种原弹性蛋白促进剂和至少一种原弹性蛋白交联剂。

Description

用于治疗皮肤老化迹象的组合物和方法
技术领域
本发明涉及治疗皮肤老化的方法和组合物。更具体地讲，本发明涉及用于(i)刺激原弹性蛋白的产生和(ii)同时使原弹性蛋白交联的方法和组合物。
发明背景
皮肤的老化可理解为受到内在因素和外在因素的影响。内在因素包括皮肤的自然变化，这是由基因组成(genetic makeup)调节。外在因素包括诸如紫外损害、环境因素等的外源性影响。
皮肤的老化会通过真皮胞外基质的两种主要组分即胶原和弹性蛋白这两种纤维状蛋白质的变化，对皮肤的弹性和强度造成不利影响。例如，弹性蛋白是由弹性蛋白的前体蛋白分子(例如原弹性蛋白)交联成为螺旋丝而形成的大的纤维状蛋白质。螺旋丝由能够伸展然后又恢复它们的原始形状的肽链组成。
弹性蛋白由真皮结缔组织的成纤维细胞分泌到胞外基质中。但是，弹性蛋白的生物合成通常在成年期的某个时间停止。此外，在内在和外在的老化过程中，弹性蛋白发生结构上和组成上的变化，例如弹性纤维逐渐变性和分离成片断。这些变化会通过诸如细纹(lines)、皱纹、弹性损失、松垂、皮肤干燥和不平、红疤和老年斑的老化迹象而显现出来。
有一些物质因其抑制交联的弹性蛋白的降解的有益作用而为人所知。例如，已知基质金属蛋白酶(MMP)在弹性蛋白降解中起到重要作用，这是一组能够分解胞外基质中的大分子的酶类。已发现衰老皮肤中的MMP含量明显高于年轻皮肤。MMP在外源性因素引起的皮肤过早老化中也起到关键作用。在光老化的皮肤中检测到比避光的老化皮肤更高的MMP水平。J.H.Chung等人，J.Invest.Dermatol.(2001)117，1218-1224。研究还证实，在炎症患者中，一系列基质金属蛋白酶(MMP-1、-3、-9和-13)的水平显著较高。T.Kuboto等人，Arch.Oral.Biol.(1996)41，253-262；A.L.Ejeil等人，J.Periodontol.(2003)74，188-195。此外还发现MMP-2和MMP-9是降解弹性蛋白的蛋白酶。Cosmetics & Toiletries(2000)115(11)，75-82)。
有多种植物提取物已被描述为各种MMP的抑制剂。例如J.L.Lamaison描述了用选自蔷薇科的植物的提取物抑制弹性蛋白酶(猪胰弹性蛋白酶)，并将该抑制作用归因于这些提取物所含的单宁类物质。Ann.Pharmaceutiques Francaises(1990)48，335-340。
M.Herrmann等人揭示，黑莓叶的水醇提取物SymMatrix显示MMP-1、MMP-2和MMP-9抑制活性。SOFW Journal(2006)132(4)，42-46。
另外，一些天然或合成化合物因其促进弹性蛋白前体的产生的有益作用而为人所知。例如，类视色素能上调成纤维细胞中的弹性蛋白产生。Liu B，Harvey CS，McGowan SE.Am.J.Physiol.(1993年11月)265(5 Pt 1)：L430-437。
此外，已指出某些物质能正面影响原弹性蛋白的交联。例如，赖氨酰氧化酶充当交联酶并充当确保弹性蛋白的空间上确定的沉积的支架的部件。Liu，Xiaoqing等人，Nature Genetics(2004)，36(2)，178-182。Valerie等人公开了能诱导赖氨酰氧化酶(LOXL)的基因表达的莳萝提取物，该酶负责成人中的弹性蛋白交联。Experimental Dermatology(2006)，15(8)，574-81。另外，黑醋栗、小豆蔻(cardamon)、黑萝卜(blackradish)、冬青(box holly)、阿魏(Asea foetida)胶、己烯酸乙酯、丁酸甲酯和癸二烯酸乙酯被公开为LOXL基因表达的促进剂。GB 2,438,999。
因此，已提出了多种途径和物质来正面影响弹性蛋白及与其相关的皮肤特性。但是，本发明人已确认，通过局部施用同时包含原弹性蛋白促进剂和原弹性蛋白交联剂的组合物，获得了出乎意料的有益协同功效。
发明内容
本发明涉及治疗皮肤老化迹象的组合物和方法。根据本发明的一个方面，组合物包含至少一种原弹性蛋白促进剂和至少一种原弹性蛋白交联剂。
根据本发明的另一个实施例，治疗皮肤老化迹象的方法包括将美容上有效量的包含至少一种原弹性蛋白促进剂和至少一种原弹性蛋白交联剂的组合物局部施用于有需要的皮肤。
通过本发明的具体实施方式和权利要求书，本发明的其他特征和优点将显而易见。
具体实施方式
除非另有定义，否则本文使用的所有科学技术术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。另外，将本文提及的所有出版物、专利申请、专利及其他参考文献以引用方式并入本文中。除非另有指明，否则百分比是指重量百分比(即％(W/W))。
本文所用的“皮肤老化迹象”包括细纹和皱纹、弹性损失、皮肤不平、红疤和老年斑的存在。
本文所用的“治疗”指减轻、降低、预防、改善或消除病症或疾病的存在或出现。
本文所用的“皱纹”包括微细纹、微皱纹或粗皱纹。皱纹的实例包括但不限于眼睛周围的微细纹(例如“鱼尾纹”)、前额和颊皱纹、眉心纹和嘴巴周围的笑纹。
本文所用的“弹性损失”包括皮肤或组织的弹性或结构完整性的损失，包括但不限于松垂、松弛和松散组织。弹性或组织结构完整性的损失可由多种因素所致，包括但不限于疾病、衰老、激素变化、机械创伤、环境损害，或者是向组织施用诸如美容品或药物的产品的结果。
本文所用的“皮肤不平”是指与弥漫性或斑驳性色素沉着有关的皮肤状况，所述色素沉着可分类为色素沉着过度，如发炎后色素沉着过度。
本文所用的“红疤”是指与发红或红斑有关的皮肤状况。
本文所用的“老年斑”是指与不连续色素沉着有关的皮肤状况，例如可在脸上以及手上发展的较深色素沉着小区域。
本文所用的“美容品”指能保持、恢复、赋予、刺激或增强体美外观或者似乎能增进美貌或年轻的美容物质或制品，具体地涉及到组织或皮肤的外观。
本文所用的“美容上有效量”是指足以治疗一种或多种皮肤老化迹象、但充分低以避免严重副作用的生理活性化合物或组合物的量。化合物或组合物的美容上有效量要随以下因素而变：所治疗的具体病症、最终用户的年龄和身体状况、所治疗/预防的病症的严重程度、治疗的持续时间、其他治疗的性质、所采用的具体化合物或产品/组合物、所具体采用的美容上可接受的载体等等。
据信根据本文的描述，本领域的技术人员可最大限度地利用本发明。下面的具体实施例应该理解为仅仅是示例性的，并且无论如何都不会以任何方式限制本公开内容的其余部分。
原弹性蛋白促进剂
本文所用的“原弹性蛋白促进剂”指具有增强原弹性蛋白的产生的生物活性的一类化合物。根据本发明，原弹性蛋白促进剂包括所有能够增强人体中原弹性蛋白的产生的天然或合成化合物。
合适的原弹性蛋白促进剂可例如用下文的“原弹性蛋白促进作用的测定”来进行确定。
使心肌母细胞系H9c2(2×104个细胞/孔)在48孔板中生长24小时，以达到80-90％铺满。第二天，采用脂质转染胺(Lipofectamine)2000，按照生产商说明书(Invitrogen Corporation，Carlsbad，美国加州)，用pGL2-弹性蛋白2.2萤光素酶报告基因构建物对细胞进行瞬时转染，所述构建物浓度为0.45μg总DNA，比例6∶1 pGL∶pRL。在所有转染中都包括具有海肾(Renilla)萤光素酶报告基因的构建物(pRL-TK)作为内对照。转染后一天，用指定剂量的试验样品处理细胞24小时，然后将它们裂解以供分析。用得自Promega公司的二元萤光素酶报告基因测定系统，按照生产商的方案进行萤光素酶测定。用萤火虫与海肾萤光素酶活性比(RLU)评估试验样品的原弹性蛋白促进活性。具体地讲，将样品的萤火虫与海肾萤光素酶活性比(RLU)除以介质对照所测得的RLU，以得到试验样品的原弹性蛋白促进活性。
优选地，原弹性蛋白促进剂的原弹性蛋白促进活性为至少1.2，优选至少1.25，更优选至少1.3，最优选至少1.5；当在0.5微克/毫升至2.5微克/毫升(以活性物质计)的范围内的一个或多个浓度下测试时，优选地当在1.0微克/毫升至2.5微克/毫升(以活性物质计)的范围内的某个浓度下测试时。
合适的原弹性蛋白促进剂的实例包括但不限于黑莓提取物、黄栌(cotinus)提取物、小白菊提取物和具有铜和/或锌组分的双金属络合物。具有铜和/或锌组分的双金属络合物可以是例如柠檬酸铜-锌、草酸铜-锌、酒石酸铜-锌、苹果酸铜-锌、琥珀酸铜-锌、丙二酸铜-锌、马来酸铜-锌、天冬氨酸铜-锌、谷氨酸铜-锌、戊二酸铜-锌、富马酸铜-锌、葡糖二酸铜-锌、聚丙烯酸铜-锌、己二酸铜-锌、庚二酸铜-锌、辛二酸铜-锌、壬二酸铜-锌、癸二酸铜-锌、十二酸铜-锌或者它们的组合。在一个优选的实施例中，原弹性蛋白促进剂选自黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物和它们的组合。
所谓“黄栌提取物”是指黄栌(Cotinus coggygria)这种植物的提取物，如从保加利亚索非亚的Bilkokoop公司市售获得的黄栌水提取物(3％活性)。
所谓“小白菊提取物”是指小白菊(Tanacetum parthenium)这种植物的提取物，如可按公布的美国专利申请No.US2007/0196523中所述进行制备。一种特别合适的小白菊提取物市售获自美国纽约Ossining镇的Integrated Botanical Technologies公司，为约20％活性小白菊提取物。
特别优选的原弹性蛋白促进剂是黑莓提取物。所谓“黑莓提取物”是指悬钩子属(Rubus)植物的提取物，所述植物优选欧洲黑莓(Rubusfruticosus)。在一个实施例中，提取物是从植物的花分离。在又一个实施例中，提取物是从植物的干燥的花分离。这类提取物可从植物的一个或多个部分分离(例如整株植物及该植物的花、种子、根、根茎、茎干、果实和/或叶)。在一个优选的实施例中，黑莓提取物是黑莓叶提取物。
提取过程可包括物理法移取该植物的一块并例如对其进行研磨。还可用本领域公知的提取方法从植物分离合适的化合物，例如使用有机溶剂，如低级C1-C8醇、C1-C8烷基多元醇、C1-C8烷基酮、C1-C8烷基醚、乙酸C1-C8烷基酯及氯仿，和/或无机溶剂如水、无机酸如盐酸和无机碱如氢氧化钠。
例如，可用水、醇(如乙醇)或者它们的组合进行提取，来制备黑莓提取物。优选使用同时包含乙醇和水的提取剂。
黑莓植物各部分优选先进行干燥再进行提取。优选仅使用黑莓植物的叶子，而不使用其他植物部分，如黑莓果实(浆果)、枝条或根。
在一个实施例中，如下制备黑莓叶提取物：a)将含有选自甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇的醇的提取剂加到黑莓叶子，和b)使黑莓叶子与所述提取剂接触最长达72小时。
优选确定提取剂与叶子固形物的质量比，使得提取剂与叶子固形物质量比为至少10倍，但优选提取剂与叶子固形物质量比不超过50倍，优选在10倍至20倍。特别优选的是提取剂与叶子固形物质量比为14至18倍。用16倍质量的含醇溶剂(相对于叶子固形物)获得了良好的结果。
进行提取步骤b)的时间最多为72小时，但还可更短。如果提取时间特别短，则在步骤b)中仅获得非常稀的提取物。因此优选在步骤b)中提取黑莓叶子至少1小时，特别是至少2小时。必需的提取时间是根据待提取的黑莓叶子的性质(特别是它们的龄期)以及其他提取条件(特别是提取温度)来选择。在高的提取温度下，特别是在60至100℃范围内、优选80至100℃范围内的提取温度下，提取时间优选为1小时至6小时，特别优选2小时至4小时。
另外，还特别优选通过使提取剂回流，特别是在最高达约100℃、优选80至100℃范围内的温度下回流，来进行步骤b)中的提取。在这个情况中，提取时间优选不超过24小时。
提取温度是根据所用的提取剂来确定。如果使用含乙醇的溶剂，则优选60℃至100℃范围内、特别是80℃至100℃范围内的温度，特别是如果如下所述使用乙醇和水的混合物作为提取剂的话。
如果提取剂所含的醇(特别是乙醇)的量占提取剂总重量的至少20wt.％，这是优选的。如果提取剂所含的水的量占提取剂总重量的至少15wt.％，这同样是优选的。如果相对于提取剂的总重量而言，提取剂同时含有至少20wt.％的醇(优选乙醇)和至少15wt.％的水，这是特别优选的。
特别优选的黑莓叶提取物是用由重量比为2∶8(2重量份的乙醇与8重量份的水混合)至8∶2、优选重量比为3∶7至7∶3、特别优选重量比为3∶7至1∶1的乙醇和水组成的提取物获得的。
制备合适的黑莓叶提取物的详细程序在公布的美国专利申请No.2008/0095719有公开，该专利申请全文并入本文。
因此，在一个优选的实施例中，黑莓提取物是黑莓叶提取物，即提取物是从黑莓植物的叶子生产的。在一个特别优选的实施例中，黑莓提取物是从欧洲黑莓的叶子生产。在又一个特别优选的实施例中，通过用水和低级醇(如乙醇)的混合物提取欧洲黑莓的叶子来生产黑莓提取物。
一种通过用水和乙醇的混合物提取欧洲黑莓的叶子来生产的特别合适的黑莓提取物，是市售获自美国新泽西州Teterboro的Symrise，Inc.的材料“SymMatrix”，其在麦芽糖糊精基质中混合成约5至10重量％。
本发明的组合物可包含美容上有效量的一种或多种原弹性蛋白促进剂，如上文所述的原弹性蛋白促进剂。以活性物质计，所述组合物优选包含约0.1％至约10重量％的原弹性蛋白促进剂，更优选约0.5％至约5重量％的原弹性蛋白促进剂，最优选约0.5％至约2重量％的原弹性蛋白促进剂。
原弹性蛋白交联剂
本发明的组合物包含一种或多种原弹性蛋白交联剂。所谓“原弹性蛋白交联剂”是指这么一类化合物，它们具有增强弹性蛋白前体(如原弹性蛋白、原纤蛋白等)的酶促互相交联或者交联到其他弹性蛋白前体上或者交联到现有的弹性纤维上的生物活性。
在一个实施例中，如Colectica的公布的专利申请GB2402676(其以引用方式并入本文)中所述，原弹性蛋白交联剂适合于促进赖氨酰氧化酶的同种型(如LOXL，赖氨酰氧化酶样同种型)的活性。
原弹性蛋白交联剂的特别合适的实例包括天然或合成的化合物，如但不限于莳萝提取物、黑醋栗提取物、小豆蔻提取物、黑萝卜提取物、冬青提取物、阿魏提取物(例如胶)、己烯酸乙酯、丁酸甲酯和癸二烯酸乙酯。一种特别合适的原弹性蛋白交联剂是莳萝提取物。
在一个优选的实施例中，本发明的组合物包含美容上有效量的莳萝提取物。所谓“莳萝提取物”是指前胡属(Peucedanum)植物的提取物，所述植物优选莳萝(Peucedanum graveolens)。提取物可以是来自整株植物及该植物的花、种子、根、根茎、茎干、果实和/或叶之一，如可通过研磨或化学提取来制备。在一个优选的实施例中，莳萝提取物是莳萝(dill)的果实的提取物，优选莳萝(Peucedanum graveolens)的果实的提取物。
还可用本领域公知的提取方法从植物分离这类化合物，例如使用有机溶剂，如低级C1-C8醇、C1-C8烷基多元醇、C1-C8烷基酮、C1-C8烷基醚、乙酸C1-C8烷基酯及氯仿，和/或无机溶剂如水、无机酸如盐酸和无机碱如氢氧化钠。
一种特别合适的莳萝提取物是“莳萝果实”5％-10％水溶液，市售获自美国新泽西州Parsippany的BASF公司，商品名称为“Lys′lastin”。
在一个实施例中，以活性物质计，组合物优选包含约0.1％至约10重量％的原弹性蛋白交联剂，更优选约0.5％至约5重量％的原弹性蛋白交联剂，最优选约0.5％至约2重量％的原弹性蛋白交联剂。
根据本发明，用本发明的组合物实现了在治疗一种或多种皮肤老化迹象方面的出乎意料和协同的作用。具体地讲，本发明组合物的局部施用能改善皮肤的特性，如减少细纹和皱纹，增加弹性以及减少皮肤不平状况、红疤和老年斑。
应指出的是，原弹性蛋白促进剂和原弹性蛋白交联剂可以是两种或更多种单独的化合物。或者，它们可以是同时具有原弹性蛋白促进活性和原弹性蛋白交联活性的单一化合物。
美容上可接受载体
本发明的美容组合物中还可存在一种或多种美容上可接受的载体。
本文所用的“美容上可接受的”是指适合用于与(人)组织(例如皮肤)接触而无不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、过敏反应等，与合理的效益/风险比相称。
本发明的合适载体包括但不限于水、乙醇、异丙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、苄醇、异山梨醇二甲基醚、丙三醇三乙酸酯、乙二醇醚、丙二醇和聚乙二醇(PEG)。特别优选的溶剂包括平均分子量在约200至约400之间的PEG、蓖麻油、丙三醇三乙酸酯、异山梨醇二甲基醚、乙醇和水以及它们的组合。美容上可接受的载体占组合物重量的约50％至约99.99％，更优选占组合物重量的约80％至约95％。在一个特别优选的实施例中，组合物包含至少约25重量％水，更优选至少约50重量％水。
可将各种化合物加到配方中，以使摩尔渗透压浓度和/或pH改变至可接受的水平。这些化合物包括但不限于甘露糖醇、蔗糖、氯化钙、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠和盐酸。
可将组合物制备成多种美容制品，包括但不限于洗剂、霜剂、凝胶、棒(stick)、喷剂、软膏剂、清洁液体洗剂和固体皂、香波和头发调理剂、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须霜、拭巾(wipe)、带(strip)、片(patch)、电动片、伤口敷料和胶粘绷带、水凝胶、成膜产品、脸和皮肤面膜、美容品如粉底、眼线膏和眼影膏等等。
这些产品类型可含有几种类型的美容上可接受的载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液(如微乳液和纳米乳液)、凝胶、固体和脂质体。其他的载体可由本领域普通技术人员配制。为了促进合适的载体的配制，可在组合物中包括多种功能成分中的任何一种。例如，可包括多种以下载体中的任何一种：柔润剂、保湿剂、pH调节剂、螯合剂、乳化剂、湿润剂、增稠剂、聚合物、防腐剂、着色剂、香料和其他常用于个人护理和美容产品中的成分。所选的pH并不关键，而是可在一个范围内，例如约4至约8，如约5至约7。
另外的美容活性剂
在一个实施例中，本发明的组合物除了上述组分外，还可含有一种或多种另外的美容活性剂。所谓“美容活性剂”是对组织具有美容或治疗作用的化合物，其可为合成的化合物，或者为从天然来源提取、分离、纯化或浓缩的化合物，或者为含有化合物的混合物的天然提取物，包括但不限于：抗微生物剂，如抗酵母剂、抗真菌剂和抗细菌剂，抗炎剂、抗老化剂、抗寄生虫剂、抗氧化剂、角质层分离剂、营养物、维生素、矿物质、能量增强剂等。
可作为本发明组合物的组分的维生素的实例包括但不限于维生素A，维生素B类如维生素B3、维生素B5、维生素B7和维生素B12，维生素C，维生素K，维生素E如α，γ或δ-生育酚，以及它们的衍生物(如盐和酯)和混合物。
可用于本发明组合物和方法的抗氧化剂的实例包括但不限于：水溶性抗氧化剂如巯基化合物和它们的衍生物(例如焦亚硫酸钠和N-乙酰-半胱氨酸)、硫辛酸和二氢硫辛酸、白藜芦醇、乳铁蛋白以及抗坏血酸和抗坏血酸衍生物(例如抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明组合物的油溶性抗氧化剂包括但不限于：丁羟甲苯、类视色素(例如视黄醇和视黄醇棕榈酸酯)、不同类型的生育酚(例如α，γ和δ-生育酚以及它们的酯(如乙酸酯)和它们的混合物)、生育三烯醇和泛醌。含有适用于本发明组合物的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：含有类黄素、异类黄素和它们的衍生物如染料木黄酮(genistein)和大豆黄素(diadzein)的提取物(例如大豆和丁香提取物)、含有白藜芦醇的提取物等。
其他材料
可用于本发明的组合物中还可存在各种其他的材料。这些材料包括蛋白质和多肽、防腐剂以及碱性剂。这些材料的实例在美国个人护理用品理事会(Personal Care Products Council)出版的《2008国际美容成分词典和手册》(2008 International Cosmetic Ingredient Dictionary andHandbook)(第12版)中有公开。
以下实例进一步说明本发明。应当理解，这些实例虽然指示出了本发明的优选实施例，但仅以举例说明的方式示出。
实例
实例I：原弹性蛋白促进作用的测定
用以下提取物制备不同样品：黄栌(得自保加利亚索非亚的Bilkokoop公司)、小白菊20％活性，不含小白菊内酯的小白菊提取物，得自纽约Ossining镇的Integrated Botanical Technologies)、欧洲黑莓(10％活性，SymMatrix，得自Symrise)和莳萝(10％活性，Lys′lastin，得自BASF)。将提取物稀释于细胞培养基(Invitrogen的DMEM培养基，San Diego CA)中至下表1所指明的“活性”提取物的浓度。黑莓提取物预先稀释于足够的乙醇中制备成均匀混合物，然后再用细胞培养基稀释。样品中的乙醇浓度为约1％。
将每个样品进行原弹性蛋白促进作用测定。结果在下表1中显示。
表1
  提取物   浓度(以活性物质计)   原弹性蛋白促进活性的提高
  黄栌   15ug/ml   1.57±0.24*
  小白菊   20ug/ml   1.54±.011*
  小白菊   5ug/ml   1.27±.024
  欧洲黑莓   5ug/ml   1.73±.026*
  欧洲黑莓   0.5ug/ml   1.33±.019
  莳萝   2.5mg/ml   0.95±0.11
  介质对照(乙醇)   0.01％   1.0±0.10
*＝P＜0.05，用Student t-检验
黑莓提取物提供最大的原弹性蛋白促进作用，其次是小白菊提取物和黄栌提取物也提供显著的原弹性蛋白促进作用。相反，莳萝提取物即使在高浓度下也不提供原弹性蛋白促进作用。
实例II：组合物的制备
分别用下表2和表3中所示的成分，制备本发明的以下组合物即组合物1和2。
表2：组合物1
  INCI名称   商品名称   百分比
  水   纯化水   68.95
  Ultrez 10   卡波姆(Carbomer)   0.60
  乙二胺四乙酸二钠   Versene NA   0.20
  硬脂醇醚-2   Brij 72   0.75
  硬脂醇醚-21   Brij 721   1.50
  苯甲酸C12-15烷基酯   Finsolv TN   2.00
  Dow Corning Q7-9120 SiliconeFluide(20cst)   二甲硅油   5.00
  Phenonip XB   Phenonip XB   1.00
  莳萝(10％活性)   Lys′Lastine   10.00
  麦芽糊精，欧洲黑莓(黑莓)叶提取物(10％活性) SymMatrix 10.00
VERSENE得自美国密歇根州的Dow Chemical of Midland。
ULTREZ/CARBOMER得自美国俄亥俄州Wickliffe的LubrizolCorporation。
BRIJ得自荷兰阿姆斯特丹的ICI-Uniquema-AkzoNobel。
FINSOLV得自美国新泽西州Elmwood Park的Finetex Corporation。
MIRASIL得自美国新泽西州Cranbury的Rhodia Group。
PHENONIP得自美国德克萨斯州Woodlands的Clariant FunctionalChemicals。
LYS’LASTINE得自美国新泽西州Parsippany的BASF。
SymMatrix得自美国新泽西州Teterboro的Symrise Inc.。
组合物1是如下进行制备。如下制备油相。将苯甲酸C12-15烷基酯加到清洁的玻璃烧杯中。开始搅拌，并将容器加热到55-60℃。当油相达到55℃或以上的温度时，加入Brij 72和Brij 721。当油相达到55-60℃时，使它保持在该温度并混合15分钟(或者直到均匀)。然后将温度保持在55-60℃，同时进行搅拌，直到将其加入到水相。
如下制备水相。将水加到清洁的玻璃烧杯中。开始搅拌，并将容器加热到55-60℃。加入EDTA二钠和Ultrez 10。在55-60℃下，将各成分混合15分钟或者直到均匀。然后将温度保持在55-60℃，同时进行搅拌以定相。
在加强搅拌下将油相加到水相，然后高速混合10-20分钟。在50℃或以下的温度下，加入二甲硅油。在40℃或以下的温度下，加入PhenonipXB。然后将两相混合10分钟或直到均匀。加入氢氧化钠(目标pH为5.4)。然后将组合物混合10分钟或直到均匀。然后加入Lys’Lastine和SymMatrix，混合至均匀。接着将水加到QS，然后将组合物混合10分钟。以活性物质计，黑莓提取物和莳萝提取物在最终组合物中的浓度分别为1％。
表3：组合物2
  INCI名称   商品名称   百分数
  水   去矿物质水   41.47312
  水，羟乙基尿素，乳酸铵   Hydrovance   2.00000
  丙三醇   丙三醇99.5％   4.00000
  乙二胺四乙酸二钠   乙二胺四乙酸二钠   0.10000
  Scleroticum胶   Amigel   0.50000
  咖啡因   咖啡因   2.00000
  水，羟丙基，磷酸淀粉   结构XL   3.70000
  氢氧化钠   氢氧化钠100％   0.00650
  对羟基苯甲酸甲酯   对羟基苯甲酸甲酯   0.20000
  新戊酸异癸酯   DUB VCI 10   2.00000
  异壬酸异壬酯   异壬酸异壬酯   4.00000
  二甲硅油   Mirasil DM 100   1.00000
  鲸蜡醇。丙三醇硬脂酸酯。硬脂基聚氧乙烯醚-20。十六烷基聚氧乙烯醚-20.PEG-75硬脂酸酯   Emulium Delta   3.00000
  BHT   BHT   0.07000
  对羟基苯甲酸丙酯   对羟基苯甲酸丙酯   0.20000
  对羟基苯甲酸乙酯   对羟基苯甲酸乙酯   0.15000
  生育酚乙酸酯   生育酚乙酸酯   0.10000
  二甲硅油   DC 1413   2.00000
  环戊硅氧烷   环戊硅氧烷   3.00000
  Aqua.甲基丙烯酸甲酯交联聚合物   Micropearl M305   1.00000
  苯氧基乙醇   苯氧基乙醇   0.50000
  PEG-8   PEG-8   5.00000
  麦芽糊精，欧洲黑莓(黑莓)叶提取物(10％活性) Symmatrix   10.0000
  莳萝(10％活性)   LysLastine   10.00000
  CI 14700   FD&C Red No.4   0.00038
  含水醇   Alcool ethylique surfin 96   5.00000
HYDROVANCE和STRUCTURE XL得自AkzoNobel公司。
AMIGEL得自美国佛罗里达州迈阿密Alban的Muller International公司。
羟苯甲酯得自美国马萨诸塞州Ward Hill的Alfa Aesar公司。
DUB VCI得自英国Aylesbury的Stearinerie Dubois公司。
EMULIUM得自法国St-Priest的Gattefosse公司。
DC1413得自美国密歇根州Midland的Dow Corning公司。
MICROPEARL得自美国新泽西州Fairfield的Seppic公司。
组合物2是如下制备。如下制备油相。向容器中加入DUB VCI、异壬酸异壬酯、MIRASIL、EMULIUM、BHT、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸乙酯和生育酚乙酸酯，同时混合和加热到80℃。
如下制备水相。将水加入到容器中，并加入STRUCURE XL和EDTA。施加热量，并加入HYDROVANCE和丙三醇。当水相达到40℃时，加入AMIGEL。当水相达到75℃时，加入咖啡因和对羟基苯甲酸甲酯。
将水相和油向在80℃下合并，并让其冷却。在35℃下，加入MICROPEARL、苯氧基乙醇、香料、PEG-8、视黄醇和CL 14700。当混合物冷却到20℃时，加入醇。以活性物质计，黑莓提取物和莳萝提取物在最终组合物中的浓度分别为1％。
用表4中所示的成分，制备比较组合物A(安慰剂)。
表4：比较组合物A
  CTFA名称   商品材料   百分比
  丙二醇   丙二醇   25.00
  水   纯化水   61.45
  乙二胺四乙酸二钠   Versene NA   1.00
  丙三醇917   丙三醇   3.00
  二甲硅油   DC 200 Fluid 100cst   2.00
  BHT   BHT   0.05
  聚丙烯酰胺和月桂醇聚醚-7以及C13-14异链烷烃   Sepigel 305   6.50
  Phenonip XB   Phenonip XB   1.00
DC 200 Fluid 100cst得自美国密歇根州Midland的Dow Corning公司。
SEPIGEL 305得自美国新泽西州Fairfield的Seppic公司。
如下制备比较组合物A。向清洁的玻璃烧杯中加入水和丙二醇，开始搅拌。将该容器加热到40-45℃。将这个水相混合15分钟或者直到均匀。然后加入BHT、丙三醇和DC 200 Fluid，高速混合10-20分钟。让其冷却下来。在40℃或以下的温度，加入Phenonip XB。混合10分钟或者直到均匀。然后加入Sepigel 305，将各成分混合10分钟或者直到均匀，然后让其冷却到室温。这个样品充当安慰剂(无活性物质)。
用表5中所示的成分，制备比较组合物B。
表5：比较组合物B
  CTFA名称   商品材料   百分数
  黄栌(10％symrise提取物)   黄栌(10％symrise提取物)   20.00
  水   纯化水   66.45
  乙二胺四乙酸二钠   Versene NA   1.00
  丙三醇917   丙三醇   3.00
  二甲硅油   DC 200 Fluid 100cst   2.00
  BHT   BHT   0.05
  聚丙烯酰胺和月桂醇聚醚-7以及C13-14异链烷烃   Sepigel 305   6.50
  Phenonip XB   Phenonip XB   1.00
黄栌(10％水提取物)得自美国新泽西州Teterboro的Symrise Inc公司。
按与制备比较组合物A相似的方式制备比较组合物B，例外的是在容器冷却到室温后向其中加入黄栌提取物，并将所得混合物再混合10分钟。以活性物质计，最终组合物中的黄栌提取物浓度为2％。
用与比较组合物A相同的成分制备比较组合物C，例外的是还包括20％的欧洲黑莓提取物，并相应减少水量。用丙二醇将欧洲黑莓提取物预混合成浆液，将此预混合液加到容器中(容器中的物料已冷却到室温)，然后将所得的混合物再混合10分钟。以活性物质计，最终组合物的欧洲黑莓提取物浓度为2％。
用与比较组合物A相同的成分制备比较组合物D，例外的是还包括10％和Lys’Lastine(莳萝提取物)，并相应减少水量。用丙二醇将Lys’Lastine预混合成浆液，将此预混合液加到容器中(容器中的物料已冷却到室温)，然后将所得的混合物再混合10分钟。以活性物质计，最终组合物中的Lys’Lastine浓度为1％。
皮肤弹性计测试
在用50个人受试者(女性，年龄在35岁至50岁之间)进行的临床研究中，使用组合物1和2以及比较组合物A-D。在研究过程中，每个受试者随机分配两种不同的组合物。受试者用组合物处理后，如下所述用皮肤弹性计进行测试。用皮肤弹性计进行的测试能提供与皮肤弹性有关的特性的体内定量测量。
在每个受试者的上臂内侧施用第一组合物，用量为豌豆般大小，每天两次，持续12个星期。第二组合物以相同方式施用在受试者的另一上臂。用皮肤弹性计SEM 580(得自德国科隆的Courage & Khazaka)在每个上臂内侧的中央进行测量，以评估皮肤施用部位的粘弹性。该仪器通过2毫米探针向皮肤小区域施加400毫巴真空两秒钟。然后通过光学技术测量皮肤的弹性反应。这个方法提供以下与皮肤弹性有关的变形参数：“总弹性”和“弹性回复率”。
结果在表6中显示。
表6：皮肤弹性计测试结果
 测试材料   浓度(以活性物质计，％)   总弹性(X 10-3)   弹性回复率的净增(X 10-3)
 比较A(安慰剂)   --   5   0
 比较B(黄栌)   2％   9   2
 比较D(莳萝)   1％   1   -14
 比较C欧洲黑莓   2％   9   8
 比较1(莳萝和欧洲黑莓)   每种提取物1％   33*   21**
*＝P＜0.05，与安慰剂相比显著(用Student t检验)
**＝P＜0.1，与安慰剂相比显著(用Student t检验)
非常出乎意料的是，同时含有1％欧洲黑莓和1％莳萝的组合物1显示出协同的皮肤弹性改进作用。这个组合作用比单独的甚至2％欧洲黑莓和1％莳萝的各自作用之和还要大。事实上，同时含有1％欧洲黑莓和1％莳萝的组合物1的弹性改进作用为2％欧洲黑莓(组合物C)和1％莳萝(组合物D)的各自作用之和的三倍以上。此外，这个出乎意料的协同作用对于总弹性和弹性回复率净增都适用。

Claims (13)

1.一种美容组合物，包含：(a)至少一种原弹性蛋白促进剂；和(b)至少一种原弹性蛋白交联剂，其中所述原弹性蛋白促进剂是黑莓叶提取物，所述原弹性蛋白交联剂是莳萝提取物。
2.根据权利要求1所述的美容组合物，其中所述原弹性蛋白促进剂的存在量占所述组合物的0.1重量%至10重量%。
3.根据权利要求1所述的美容组合物，其中所述原弹性蛋白促进剂的存在量占所述组合物的0.5重量%至5重量%。
4.根据权利要求1所述的美容组合物，其中所述原弹性蛋白交联剂的存在量占所述组合物的0.1%重量至10重量%。
5.根据权利要求1所述的美容组合物，其中所述原弹性蛋白交联剂的存在量占所述组合物的0.5重量%至5重量%。
6.根据权利要求1所述的美容组合物，其中所述原弹性蛋白促进剂的原弹性蛋白促进活性为至少1.2。
7.如权利要求1所述的组合物在制备用于治疗皮肤老化迹象的产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其中所述皮肤老化迹象选自细纹、皱纹、弹性损失、皮肤不平、红疤和老年斑。
9.根据权利要求7所述的应用，其中所述原弹性蛋白促进剂的存在量占所述组合物的0.1重量%至10重量%。
10.根据权利要求7所述的应用，其中所述原弹性蛋白促进剂的存在量占所述组合物的0.5重量%至5重量%。
11.根据权利要求7所述的应用，其中所述原弹性蛋白交联剂的存在量占所述组合物的0.1重量%至10重量%。
12.根据权利要求7所述的应用，其中所述原弹性蛋白交联剂的存在量占所述组合物的0.5重量%至5重量%。
13.根据权利要求7所述的应用，其中所述原弹性蛋白促进剂的原弹性蛋白促进活性为至少1.2。
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