CN101773568A - 一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法，该组合物由党参、白术(炒)、茯苓、炙甘草、当归、川芎、白芍(酒炒)、熟地黄、炙黄芪、肉桂等原料药制成，该组合物制剂具备良好的温补气血的作用，对人体有较强的增强免疫力作用，并与抗肿瘤药物具有协同作用。本发明治疗控制方法专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。

Description

一种温补气血的中药组合物及其制备方法、质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法、质量控制方法，特别涉及一种温补气血的中药组合物制剂及其质量控制方法。

背景技术

中医认为疲劳是由于体力、脑力的过度透支，或不合理的生活方式，或不良精神情绪刺激，干扰了人体的正常活动而造成的。《黄帝内经》中认为“疲劳”即“有所劳倦，形气衰少”、“血气乃竭，令人解”，其表现为“倦、身重、体重、四肢不举”等症状，其病机多为气血不足，脏腑功能衰弱。

由党参、白术(炒)、茯苓、炙甘草、当归、川芎、白芍(酒炒)、熟地黄、炙黄芪、肉桂等十味中药组合而成的中药组合物制剂作为温补气血的中药，临床效果甚佳。

党参：为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川党参Codonopsistangshen Oliv.的干燥根。秋季采挖，洗净，晒干。

白术：为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。冬季下部叶枯黄、上部叶变脆时采挖，除去泥沙，烘干或晒干，再除去须根。

茯苓：为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。多于7～9月采挖，挖出后除去泥沙，堆置“发汗”后，摊开晾至表面干燥，再“发汗”，反复数次至现皱纹、内部水分大部散失后，阴干，称为“茯苓个”；或将鲜茯苓按不同部位切制，阴干，分别称为“茯苓皮”及“茯苓块”。

甘草：为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。春、秋二季采挖，除去须根，晒干。

当归：为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。秋末采挖，除去须根及泥沙，待水分稍蒸发后，捆成小把，上棚，用烟火慢慢熏干。

川芎：为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。夏季当茎上的节盘显著突出，并略带紫色时采挖，除去泥沙，晒后炕干，再去须根。

白芍：为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾及细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。

熟地黄：为生地黄的炮制加工品。

炙黄芪：为黄芪的炮制加工品。

肉桂：为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮。多于秋季剥取，阴干。

发明内容

本发明目的在于提供一种温补气血的中药组合物；本发明第二个目的在于提供一种温补气血的中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于提供该中药组合物制剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明一种温补气血的中药组合物制剂的原料组成为：

党参40-120重量份、白术(炒)40-120重量份、茯苓40-120重量份、炙甘草20-60重量份、当归80-160重量份、川芎20-60重量份、白芍(酒炒)40-120重量份、熟地黄80-160重量份、炙黄芪40-120重量份、肉桂5-40重量份。

本发明一种温补气血的中药组合物制剂的原料组成优选为：

党参80重量份、白术(炒)80重量份、茯苓80重量份、炙甘草40重量份、当归120重量份、川芎40重量份、白芍(酒炒)80重量份、熟地黄120重量份、炙黄芪80重量份、肉桂20重量份。

本发明一种温补气血的中药组合物制剂的制备方法为：

以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、丸剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、或口服液体制剂。

本发明一种温补气血的中药组合物丸剂的制备方法优选为：以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。

本发明一种温补气血的中药组合物膏剂的制备方法优选为：以上十味，加水煎煮三次，第一、二各次2小时，第三次1小时合并煎液，滤过，滤液静置24小时，取上清液减压浓缩至相对密度为1.28～1.32(83～90℃)的清膏。每100g清膏加炼蜜700g，混匀，加热至沸，滤过，即得。

本发明一种温补气血的中药组合物酒剂的制备方法优选为：以上十味，粉碎成粗粉，用白酒1720体积份作溶剂，浸渍48小时，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集漉液，加入蔗糖172重量份，搅匀，静置，滤过，即得。

本发明一种温补气血的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为：以上十味，当归、川芎、白术、白芍、肉桂粉碎成粗粉，用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后缓缓渗漉，收集漉液2700体积份；其余熟地黄等五味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，放冷，加入乙醇适量，静置，取上清液与上述漉液合并，回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30～1.32(90～95℃)的清膏。取清膏1份，加蔗糖粉5份，制成颗粒，干燥，即得。

本发明一种温补气血的中药组合物片剂的制备方法优选为：以上十味，党参、熟地黄、黄芪、甘草、茯苓加火煎二次，第一次2小时，第二次？.5小时，合并煎液，滤过，滤过浓缩至稠膏状；当归、川芎、白术用60％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇，并浓缩至稠膏状；肉桂提以挥发油至尽。取白芍粉成细粉，与上述稠膏混匀，制成颗粒，干燥。喷加肉桂油，混匀，压片，包糖衣，即得。

本发明一种温补气血的中药组合物糖浆剂的制备方法优选为：以上十味，熟地黄加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，甘草膏用热水化开与滤液浓缩至适量。当归渗滤提取两次，第一次用4倍量乙醇提取，收集初滤液，第二次用4倍量60％乙醇渗滤提取。肉桂用8倍量60％乙醇渗滤提取，收集初提液，将以上初提液合并备用。川芎用7倍量60％乙醇渗滤提取，收集初提液，继续提取；白术、白芍用7倍量60％乙醇渗滤提取，黄芪用7倍量25％乙醇渗滤提取，收集初滤液，党参用7倍量25％乙醇渗滤提取。将当归、肉桂、川芎、黄芪等续提液与白术、白芍、党参等提取液合并，回收乙醇，浓缩至适量。将水煎煮浓缩液、乙醇提取浓缩液与当归、肉桂初提混合液及川芎，黄芪初提液依次混合均匀，调整容量及含醇量，静置三天，吸取上清液，余液滤除沉淀与上清液合并，加入单糖浆(按应出液数的25％)、菠萝香精(按应出液数的0.3％)，搅匀，静置七天，测定含醇量，吸取上清液，灌装，即得。

上述重量份与体积份对应于g/ml。

上述中药组合物制剂的质量控制方法，该方法包括如下步骤：

鉴别A：取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5-15∶2-5比例的石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

鉴别B：取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；

含量测定C：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000；对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备，取本品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明药物组合物具备良好的温补气血的作用，对人体有较强的增强免疫力作用，并与抗肿瘤药物具有协同作用。本发明治疗控制方法专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。

具体实施方式

实施例1丸剂

组方：

党参      80g  白术(炒)80g   茯苓    80g

炙甘草    40g  当归    120g  川芎    40g

白芍(酒炒)80g  熟地黄  120g  炙黄芪  80g

肉桂      20g

制法：以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。

质量控制方法：

白术、熟地黄薄层鉴别：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

鉴别B：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；

含量测定C：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000；对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备，取本品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，每1g不得少于0.55mg。

实施例2：药效学实验

下述本发明制剂为实施1所制备，但该实验不作为本发明的限制，本发明所提供的各种剂型均能实现本发明的效果。

一、对小鼠耐高温实验的影响

试验方法：昆明种小鼠，置于室温(20±2)℃，相对湿度60％的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、刺五加阳性对照组、本发明中药组合物制剂组。空白对照组：灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；刺五加阳性对照组：灌胃刺五加液，剂量0.2g·kg^-1·d^-1；中药组合物制剂组：12.7g·kg^-1·d^-1。各组给药7d后，进行测试。

各组末次给药后1h，将小鼠装在小铁笼中，置入(55～60)℃烤箱中，充分供氧，秒表记录每只小鼠自主呼吸时间至停止呼吸的死亡时间，作为小鼠耐高温的时间。

二、对小鼠耐低温实验的影响

试验方法：昆明种小鼠，置于室温(20±2)℃，相对湿度60％的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、刺五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组：灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；刺五加阳性对照组：灌胃刺五加液，剂量0.2g·kg^-1·d^-1；中药组合物制剂组：12.7g·kg^-1·d^-1。各组给药7d后，进行测试。

各末次给药后1h，将小鼠装入小铁笼中放入(-10±0.5)℃的冰箱内，充分供氧，秒表记录每只小鼠放置冰箱的时间至停止呼吸的死亡时间，作为小鼠耐低温的时间。

三、对小鼠亚硝酸盐中毒缺氧实验的影响

试验方法：昆明种小鼠，置于室温(20±2)℃，相对湿度60％的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、刺五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组：灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；刺五加阳性对照组：灌胃刺五加液，剂量0.2g·kg^-1·d^-1；中药组合物制剂组：12.7g·kg^-1·d^-1。各组给药7d后，进行测试。

各组末次给药后1h，将小鼠腹腔注射5％亚硝酸钠，0.3ml/只，秒表记录每只小鼠自注射开始时间至停止呼吸的时间，作为小鼠中毒缺氧的时间。

四、对小鼠耐低张缺氧实验的影响

试验方法：昆明种小鼠，置于室温(20±2)℃，相对湿度60％的动物室中，6只/笼，适应3d，自由进食和饮水。随机分成3组，每组12只，分别为空白对照组、刺五加阳性对照组、中药组合物制剂组。空白对照组：灌胃量为每日每次0.4ml蒸馏水；刺五加阳性对照组：灌胃刺五加液，剂量0.2g·kg^-1·d^-1；中药组合物制剂组：12.7g·kg^-1·d^-1。各组给药7d后，进行测试。

各组末次给药后1h，将小鼠放入盛有15g钠石灰的150ml磨口广口瓶中(每瓶一只)，用凡士林密封瓶口后，开始记录每只小鼠从瓶口密封时间到小鼠死亡时间，作为小鼠耐缺氧的时间。以上试验结果见表1。

表1中药组合物制剂对耐高温、耐低温、耐亚硝酸钠缺氧、耐低张缺氧时间的影响

注：与正常对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

以上结果表明：中药组合物制剂对小鼠耐高温的时间越长，表明其生存能力及耐力较强。对小鼠耐低温的时间越长，说明其抵抗力，免疫力越强，证明制剂对人体有较强的增强免疫力作用。中药组合物制剂对小鼠耐亚硝酸钠缺氧、耐低张缺氧能力的实验显示，该制剂能显著提高小鼠的缺氧耐力(P＜0.05)。

五、与抗癌药物的协同作用

试验方法：中药组合物制剂水溶解制成浓度分别为每毫升含生药4.8g的药液，高温消毒后置于4℃冰箱内保存备用。

取生长良好的S₁₈₀腹水，用生理盐水1∶5稀释后，调整细胞浓度为1×1.7～2×1.7个/mL，每只小鼠腋皮下接种0.2mL，随机分组，每组10只，设溶剂对照组，单独用药组和联合用药组。各组剂量设置如下：中药组合物制剂组：0.1ml/10g，ig，7d；紫杉醇组：5mg/kg，ip，7d；注射用丝裂霉素(MMC)组：1mg/kg，ip，7d；阿霉素(ADR)组：1.5mg/kg，ip，7d；中药组合物制剂+紫杉醇组：0.1ml/10g，ig+5mg/kg，ip，7d；中药组合物制剂+MMC组：0.1ml/10g，ig+1mg/kg，ip，7d；全大补丸+ADR组：0.1ml/10g，ig+1.5mg/kg，ip，7d。接种次日起给药，第10天脱颈椎处死，解剖取瘤块，比较各组瘤质量大小，计算各组抑瘤率。

合并用药的效应根据Webb氏分数乘积法计算：(fa)_1，2＝1-[1-(fa)₁][1-(fa)₂]，(fa)₁和(fa)₂分别为两药抑瘤率，(fa)_1，2为计算的理论相加效应。如果合并用药的效应大于计算的相加效应，则表示协同。

中药组合物制剂在0.48g生药/10g剂量时，没有明显的抑制肿瘤作用，但与低剂量的紫杉醇、MMC和ADR联合用药时，表现明显的抑瘤作用，抑瘤率大于Webb氏分数乘积法计算的(fa)_1，2，判定为有协同效应。结果见表2。

实施例3：实施例1丸剂的鉴别方法筛选试验

本中药组合物制剂降低质量控制方法试验操作繁琐程度的同时，更全面的保证了药材的质量。本发明中，在含量测定项下利用HPLC测定制剂中白芍药材的特征成分芍药苷的含量，间接的鉴别了芍药苷的存在，也就验证了白芍药材的存在；本发明组方中芍药、黄芪的薄层鉴别供试品制备繁琐，须经过溶液萃取、大孔树脂柱等过程的纯化才可以鉴别出制剂中的芍药和黄芪药材，操作极其繁琐。本发明中熟地黄、白术药材的薄层鉴别，可以更全面的控制制剂的质量，而且试验操作过程非常简单，不仅样品处理方便，而且利用一个鉴别条件同时对两种药材进行鉴别。

中药熟地黄为生地黄的经高温炮制后的加工品。药材中的多糖经高温裂解，生成5-羟甲基糠醛，为熟地黄中的代表性成分。

白术药材中含有挥发油，为白术的有效成分。白术挥发油中主要含有苍术酮(atractylone)、白术内酯A、B(butenolideA，B)，另含3-β-乙酰氧基苍术酮、3-β-羟基苍术酮等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测白术中的挥发油类成分，以此鉴定制剂中是否含有白术药材。

熟地黄中的5-羟甲基糠醛和白术药材中的挥发油成分极性相近差不大，本发明通过使用相同薄层色谱条件，同时鉴别熟地黄和白术药材，不仅鉴别结果可靠，而且大大简化了试验的操作的过程，降低了制剂检验的工作量。

1、供试品的制备：

1.1供试品的前处理

中药组合物制剂为十味药材粉碎后加入炼蜜制成蜜丸。制剂中含有大量蜂蜜，黏性较大，很难分散，提取时溶剂不易进入制剂内部，会造成提取不完全。硅藻土为固体粉末，没有黏性，流动性好，可以吸收蜂蜜，使蜜丸容易分散，而且硅藻土对化合物没有吸附作用，使用溶剂提取时不会化学成分的损失。因此本发明利用硅藻土将蜜丸分散后，再使用合适溶剂提取相应的化学成分。通过试验验证使用硅藻土分散蜜丸的必要性。

方法一

直接提取：取中药组合物制剂18g，用剪刀剪成小块，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1。

方法二

使用硅藻土分散：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液2。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。

吸取上述四种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

供试品溶液2色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显明显的相同颜色的斑点，而供试品1色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上斑点颜色不明显，说明未加硅藻土分散的样品提取不完全。因此选择将蜜丸用硅藻土分散后再提取。

1.2提取溶剂的选择

白术、熟地黄中的化学成分的极型较低，根据“相似相溶”的原理，应当选择低极性的有机溶剂如石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯，但这类溶剂渗透性较差，本制剂为蜜丸，虽经硅藻土分散，但这类制剂恐也难以进入，所以选择极型较大、渗透性较好、而且可以提取这类成分的乙醇提取。本发明通过试验优选提取中药组合物制剂中白术、熟地黄中化学成分的最优提取方法。

试验一

石油醚(60～90℃)提取：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加石油醚(60～90℃)100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1。

试验二

乙酸乙酯提取：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙酸乙酯100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液2。

试验三

乙醇提取：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液3。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。

吸取上述五种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

供试品3色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显明显的相同颜色的斑点；在供试品1色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置没有观察到相同颜色的斑点；供试品2色谱中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置的斑点颜色不明显。试验结果表明，石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯不能将制剂中的白术、熟地黄化学成分提取出来，而乙醇提取效率较高，因此选择乙醇为提取中药组合物制剂中白术、熟地黄化学成分的最优溶剂。

1.3提取溶剂量的考察

取中药组合物制剂18g三份，分别加硅藻土10g研匀，分别加乙醇50、100、150ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1、2、3。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。

吸取上述五种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

供试品1、2、3在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3斑点较供试品1更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明100ml乙醇可将制剂中的白术、熟地黄成分基本萃取完全。所以确定白术、熟地黄供试品溶液的最佳提取溶剂量为100ml乙醇。

1.4提取时间的考察

取中药组合物制剂18g三份，分别加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，分别超声处理15、40、60分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液1、2、3。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。

吸取上述五种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

供试品1、2、3在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3色谱中较供试品1色谱中的斑点更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明超声提取40分钟可将制剂中的白术、熟地黄成分基本萃取完全。因此确定白术、熟地黄供试品溶液的最佳提取时间为40分钟。

1.5对照药材提取溶剂量的考察

为了保证对照药材的阳性对照效果，对照药材溶液制备时需要与供试品溶液处理过程相同。由于对照药材仅为一味药材，且药材提取量较小，所以对照药材提取溶剂量与供试品有所不同。

取白术对照药材1g三份，分别加乙醇20、40、60ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为白术对照药材溶液1、2、3；

取熟地黄对照药材1g三份，分别加乙醇20、40、60ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为熟地黄对照药材溶液1、2、3；

吸取上述六种对照药材溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

白术对照药材溶液1、2、3在硅胶GF254薄层上均显暗斑。比较斑点情况，白术对照药材溶液1的斑点较暗淡，不易观察；白术对照药材溶液2、3的斑点清晰、明确，且无显著差异。表明40ml乙醇可以将白术药材中成分基本提取完全；

熟地黄对照药材溶液1、2、3经2，4-二硝基苯肼乙醇试液显色后在薄层上均显斑点。比较斑点情况，熟地黄对照药材溶液1的斑点较暗淡，不易观察；熟地黄对照药材溶液2、3的斑点清晰、明确，且无显著差异。表明40ml乙醇可以将熟地黄药材中成分基本提取完。因此确定白术、熟地黄对照药材的最佳提取溶剂量为40ml乙醇水，超声提取40min。1.6供试品及白术、熟地黄对照药材点样量的确定：

取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

分别吸取供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液5、15、25μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

白术、熟地黄对照药材溶液点样量为5μl时，白术、熟地黄对照药材溶液斑点颜色较弱，不宜观察；点样量为15μl的白术、熟地黄对照药材溶液斑点颜色明显，斑点大小适中，无拖尾；点样量为25μl的白术、熟地黄对照药材溶液斑点偏大，明显拖尾。

供试品溶液点样量为5μl时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材相对应的位置上斑点强度较低，不宜观察；供试品溶液点样量为15μl时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材溶液相对应的位置上斑点明显，斑点大小适中，无拖尾，前后无干扰；供试品溶液点样量为25μl时，供试品色谱中，在与白术、熟地黄对照药材溶液相对应的位置上斑点偏大，斑点与前后斑点相连，明显拖尾，而且点样时由于点样次数较多，破坏了硅胶薄层的表面。因此，确定供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液的最优点样量为15μl。

1.7薄层板及显色条件的选择：

白术、熟地黄中的化学成分均为弱极型的化学成分，适合使用硅胶薄层分离。常见的硅胶薄层有两种：硅胶G、硅胶GF254。两种硅胶的对化合物的分离能力相同，其区别在于硅胶GF254加入254nm的荧光指示剂，对于紫外没有吸收的化合物，在紫外254nm照射下在硅胶薄层板GF254上可以形成暗斑。

白术、熟地黄中的化学成分在日光下没有颜色，而且均没有紫外吸收，需要借助其他显色方法进行观察。本发明以硅胶G、硅胶GF254进行试验，选择适于鉴别白术、熟地黄的最佳薄层板和显色条件。

取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

分别吸取供试品溶液、白术、熟地黄对照药材溶液15μl，点于同一硅胶GF254、硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干。

方法一：将硅胶GF254、硅胶G薄层板在日光下观察，白术、熟地黄对照药材色谱中未观察到斑点。

方法二：将硅胶G薄层板在紫外(365nm)下观察，白术、熟地黄对照药材色谱中未观察到斑点。

方法三：将硅胶GF254在紫外(254nm)下观察，白术、地黄对照药材溶液色谱中观察到明显斑点，且供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而在地黄对照药材色谱相应的位置上，供试品中有其他成分干扰，未完全分离。

方法四：将硅胶GF254、硅胶G薄层板喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。在地黄对照药材色谱中观察到明显斑点，且供试品色谱中，在与熟地黄对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而白术对照药材溶液中没有观察到明显斑点。因为地黄中含有5-羟甲基糠醛为醛类化合物，可以特定的与2，4-二硝基苯肼反应，生成有颜色的化合物，所以可以使用2，4-二硝基苯肼鉴别熟地黄中的成分。

由试验结果可知硅胶GF254在紫外(254nm)下观察可以鉴别白术药材，再喷以2，4-二硝基苯肼可以鉴别熟地黄药材，而硅胶G薄层只能鉴别熟地黄中的化学成分。所以选择硅胶GF254薄层和与2，4-二硝基苯肼分离、鉴别中药组合物制剂中的白术、熟地黄成分。

1.8薄层板及显色条件的选择：

白术、熟地黄成分极性较小，因此所以选择石油醚(60～90℃)和极性稍大的醋酸乙酯为展开剂，通过实验选择合适的比例，使所需成分得到分离。

取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

分别取缺确白术的白术阴性制剂18g按供试品制备方法制备缺白术阴性对照溶液。

分别取缺确熟地黄的熟地黄阴性制剂18g按供试品制备方法制备缺熟地黄阴性对照溶液。

取5块硅胶G薄层板，每块薄层均点样上述五种溶液各10～15μl，分别以石油醚(60～90℃)、石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(10∶1)、石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(8∶3)、石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(1∶1)、醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外灯254nm下观察白术色谱相应的斑点，再喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰观察熟地黄色谱相应的斑点。

结果如下：薄层板1以石油醚为展开剂，由于展开剂极性太低，供试品、对照药材中白术、熟地黄成分均未展开；薄层板2以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(10∶1)为展开剂，极性较低，展开不充分，供试品中白术、熟地黄成分未与其他斑点分离；薄层板3以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，极性适中，白术对照药材品中目标斑点Rf值为0.55，熟地黄对照药材品中目标斑点Rf值为0.45，且与其他成分分离良好，供试品中在白术、熟地黄对照药材相对应的位置上显相同颜色的斑点，且白术、熟地黄成分目标斑点与其他成分斑点分离良好，阴性无干扰；薄层板4、5分别以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(1∶1)、醋酸乙酯为展开剂，由于展开剂极性太大，供试品、对照药材中白术、熟地黄成分Rf值较大，与其他成分斑点重叠，分离失败。所以确定白术、熟地黄硅胶薄层最佳的展开剂为石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(8∶3)。

综上试验最后确定中药组合物制剂中白术、熟地黄的薄层色谱鉴别条件为：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例4颗粒剂

组方：

党参      80g      白术(炒)  80g     茯苓    80g

炙甘草    40g      当归      120g    川芎    40g

白芍(酒炒)80g      熟地黄    120g    炙黄芪  80g

肉桂      20g

以上十味，当归、川芎、白术、白芍、肉桂粉碎成粗粉，用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后缓缓渗漉，收集漉液2700体积份；其余熟地黄等五味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，放冷，加入乙醇适量，静置，取上清液与上述漉液合并，回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30～1.32(90～95℃)的清膏。取清膏1份，加蔗糖粉5份，制成颗粒，干燥，即得。

实施例5片剂

组方：

党参        80g  白术(炒)80g   茯苓    80g

炙甘草      40g  当归    120g  川芎    40g

白芍(酒炒)  80g  熟地黄  120g  炙黄芪  80g

肉桂        20g

以上十味，党参、熟地黄、黄芪、甘草、茯苓加火煎二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤过浓缩至稠膏状；当归、川芎、白术用60％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇，并浓缩至稠膏状；肉桂提以挥发油至尽。取白芍粉成细粉，与上述稠膏混匀，制成颗粒，干燥。喷加肉桂油，混匀，压片，包糖衣，即得。

实施例6口服液

组方：

党参        80g  白术(炒)80g   茯苓    80g

炙甘草      40g  当归    120g  川芎    40g

白芍(酒炒)  80g  熟地黄  120g  炙黄芪  80g

肉桂        20g

以上十味，熟地黄加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，甘草膏用热水化开与滤液浓缩至适量。当归渗滤提取两次，第一次用4倍量乙醇提取，收集初滤液，第二次用4倍量60％乙醇渗滤提取。肉桂用8倍量60％乙醇渗滤提取，收集初提液，将以上初提液合并备用。川芎用7倍量60％乙醇渗滤提取，收集初提液，继续提取；白术、白芍用7倍量60％乙醇渗滤提取，黄芪用7倍量25％乙醇渗滤提取，收集初滤液，党参用7倍量25％乙醇渗滤提取。将当归、肉桂、川芎、黄芪等续提液与白术、白芍、党参等提取液合并，回收乙醇，浓缩至适量。将水煎煮浓缩液、乙醇提取浓缩液与当归、肉桂初提混合液及川芎，黄芪初提液依次混合均匀，调整容量及含醇量，静置三天，吸取上清液，余液滤除沉淀与上清液合并，加入单糖浆(按应出液数的25％)、菠萝香精(按应出液数的0.3％)，搅匀，静置七天，测定含醇量，吸取上清液，灌装，即得。

Claims (6)

1.一种温补气血的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

党参40-120重量份、白术(炒)40-120重量份、茯苓40-120重量份、炙甘草20-60重量份、当归80-160重量份、川芎20-60重量份、白芍(酒炒)40-120重量份、熟地黄80-160重量份、炙黄芪40-120重量份、肉桂5-40重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

党参80重量份、白术(炒)80重量份、茯苓80重量份、炙甘草40重量份、当归120重量份、川芎40重量份、白芍(酒炒)80重量份、熟地黄120重量份、炙黄芪80重量份、肉桂20重量份。

3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

原料药粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。

4.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于鉴别方法为：

取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5-15∶2-5比例的石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

鉴别A：取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土5-20g，研匀，加乙醇50-200ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-4ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各0.5-2g，分别加乙醇20-80ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各5-30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5-15∶2-5比例的石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

鉴别B：取中药组合物制剂10-30g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；

含量测定C：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000；对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备，取本品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

6.一种温补气血的中药组合物丸剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

鉴别A：白术、熟地黄薄层鉴别：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术、熟地对照药材各1g，分别加乙醇40ml，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液吸取上述三种溶液各10～15μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下观察，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，稍稍加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与熟地对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

鉴别B：取中药组合物制剂18g，加硅藻土10g，研匀，加乙醇100ml，超声处理40分钟，滤过滤液，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过滤液，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点；

含量测定C：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83比例的乙腈-水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算不低于3000；对照品溶液的制备，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，每1g不得少于0.55mg；

所述温补气血的中药组合物丸剂的制备方法为：党参80g、白术(炒)80g、茯苓80g、炙甘草40g、当归120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地黄120g、炙黄芪80g、肉桂20g十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末用炼蜜35～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水丸即得。