CN101768643A - 辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物。本发明提供的方法，包括如下步骤：以小麦基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果引物对甲的扩增产物中具有402bp的DNA片段且引物乙的扩增产物中不具有404bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1a；如果引物对乙的扩增产物中具有404bp的DNA片段且引物甲的扩增产物中不具有402bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1b；基因型为TaCwi-A1a的小麦的千粒重在统计学上大于基因型为TaCwi-A1b的小麦品种。本发明可以用于培育高千粒重的优良小麦品种，避免筛选千粒重较低的小麦品种。可在发育早期筛选小麦品种，从而优化杂交组合，加快育种速度，降低育种成本。

Description

辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物。

背景技术

小麦是世界上最重要的粮食作物之一，它提供的热量和蛋白占人类营养成分的20％以上，全世界有超过35％的人口以小麦为主粮。我国的小麦种植面积、总产和消费量居世界首位，其产量约占我国粮食总产量的1/5。

提高小麦产量是小麦育种的一个重要目标。小麦的单位面积产量是由单位面积穗数、每穗粒数和平均粒重构成的。千粒重在产量构成因素中对产量的直接贡献最大，在群体条件下提高平均单穗粒重是提高品种群体产量潜力的关键。研究表明不同类型小麦品种(多穗型、中间型和大穗型)千粒重每增加1个单位(g)，产量分别增加151、157和147kg。小麦产量的高低总是伴随着粒重的高低而同步变化的，在增产年份中，粒重占增产因素的比重达87.4％；而在减产年份，因粒重下降造成产量下降占到94.2％。千粒重在产量构成因素中受遗传特征的影响最大，其遗传主要受加性效应的基因控制，广义遗传力高达59-80％。也有研究结果表明千粒重受三组基因控制，一些微效基因起一定辅助作用。

小麦籽粒粒重受多种因素影响，其中灌浆是影响小麦生长、发育的重要生理过程，其持续时间和速率决定小麦籽粒大小或重量，但灌浆持续时间和灌浆速率受品种、环境、栽培措施等条件的影响。有研究认为小麦籽粒最大粒重主要由灌浆速率和灌浆持续期来决定，但也有研究表明灌浆速率的影响大于灌浆持续时间。不同小麦品种籽粒粒重的差异很大，而其差异主要是由灌浆速率不同引起的，而灌浆速率主要受遗传因素控制，是高产育种的重要选择指标。但多年来一直无法直接对籽粒灌浆性状及其基因进行有效选择，成为育种的瓶颈问题。

中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所，在筛选水稻遗传资源的基础上，通过构建遗传定位群体，成功分离了控制水稻籽粒发育中蔗糖运输卸载和灌浆的关键功能基因GIF1，研究表明GIF1是水稻驯化过程中起重要作用的一个基因。人工选择可以使现代栽培稻的GIF1基因有严格的组织表达特异性，有利于籽粒灌浆，使水稻产量提高。GIF1基因是控制蔗糖转化酶的一种基因。光合产物以蔗糖的形式被运输到籽粒中，而转化酶可将光合产物的蔗糖不可逆地裂解形成葡萄糖和果糖，植物酸性转化酶主要有两大类：一类结合于细胞壁上，称之为细胞壁结合的转化酶(cell wall—bound invertase，CWI)，另一类存在于液泡中，称之为可溶性酸性转化酶(solubleacid invertase，SAI)。在所有形式的转化酶中，不溶性转化酶(即CWI)是库器官形成中决定库强的一个关键酶。玉米芯和胚乳中CWI活性缺失的玉米突变体，在早期籽粒形成阶段，籽粒生长即明显受到抑制，成熟时，粒重只有正常籽粒的1/5。对转基因胡萝卜的研究表明，降低CWI活性，植株不能形成主根。CWI在大麦籽粒形成早期的时空表达和蔗糖运输的一致性，表明其在碳水化合物分配方面起到关键作用。对水稻中OsCIN1基因的RNA原位杂交表明，CWI在籽粒形成阶段中对碳水化合物的供应起决定作用。Sturm和Chrispeels(1990)首先从胡萝卜中分离出了细胞壁结合转化酶(CWI)基因，随后在马铃薯、拟南芥、烟草、番茄和葡萄等植物中也分离到编码该酶的全长或部分的核苷酸序列。目前，有关GIF基因在小麦中的克隆并没有报道。

功能标记(Functional marker)是一类基于基因特征序列开发的标记，与目标基因共分离，大大提高了选择的准确性，在MAS中有着广泛应用前景。而小麦千粒重是一个数量性状，受基因型、环境及其互作的影响。因此，克隆和开发小麦GIF基因对小麦高产育种具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物。

本发明提供的辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法，包括如下步骤：以小麦基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果引物对甲的扩增产物中具有402bp的DNA片段且引物乙的扩增产物中不具有404bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1a；如果引物对乙的扩增产物中具有404bp的DNA片段且引物甲的扩增产物中不具有402bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1b；基因型为TaCwi-A1a的小麦的千粒重在统计学上大于基因型为TaCwi-A1b的小麦品种；所述引物对甲由序列表的序列6所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成；所述引物对乙由序列表的序列5所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成。

本发明还保护序列表的序列6所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成的引物对甲。

本发明还保护序列表的序列5所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成的引物对乙。

本发明同时保护所述引物对甲和/或所述引物对乙在制备辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的试剂盒中的应用。

本发明还保护一种辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的试剂盒，包括所述引物对甲和/或权利要求3所述引物对乙。

所述方法，所述应用，所述试剂盒中，所述小麦可为普通小麦。

本发明还保护序列表的序列6所示DNA、序列表的序列7所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成的引物组合物。

所述方法，所述引物对甲，所述引物对乙，所述试剂盒和所述引物组合物均可应用于小麦育种。

本发明还保护如下(a)或(b)或(c)或(d)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦千粒重性状相关的由序列1衍生的蛋白质；

(d)将序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦千粒重性状相关的由序列3衍生的蛋白质。

编码所述蛋白的基因也属于本发明的保护范围，所述基因是如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码小麦千粒重性状相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码小麦千粒重性状相关蛋白的DNA分子。

本发明所提供的蛋白及其编码基因，与小麦籽粒粒重性状有着紧密的相关性。本发明还提供了基于该小麦粒重高低相关蛋白基因等位变异的特异性功能标记，利用该标记可以对小麦粒重高低相关基因的变异进行分子标记辅助选择，从而培育高粒重的优良小麦品种，避免筛选粒重较低的小麦品种。应用本发明提供的蛋白及其编码基因以及功能标记辅助选择，可在发育早期筛选小麦品种，从而优化杂交组合，加快育种速度，降低育种成本。本发明提供的检测小麦粒重高低的方法操作简单，可以避免环境等因素对小麦籽粒粒重的影响、稳定可靠，对快速小麦高产育种具有重要的理论意义和经济价值。本发明对小麦籽粒粒重的基因工程改良将起到重要作用，同时也有助于小麦籽粒粒重的遗传和分子生物学的进一步研究，对高产小麦品种的培育也具有重大意义。

附图说明

图1为来源于普通小麦的2个籽粒粒重相关蛋白TaCwi-A1a与TaCwi-A1b的序列对比。

图2为CWI21/CWI22标记对14个不同粒重材料的多态性检测。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。所有引物合成均由北京奥科生物公司完成。实施例中所用小麦材料均获自中国农业科学院作物科学研究所的国家种质库。

实施例1、与小麦籽粒粒重相关的蛋白及其编码基因的获得

一、TaCwi-A1a蛋白及其编码基因的获得

TaCwi-A1a蛋白编码基因的获得采取电子克隆结合常规PCR扩增的方法。根据水稻粒重相关基因GIF基因(GenBank Accession Number：EU095553)在小麦EST数据库中进行BLAST检索，将筛选得到的EST分别进行拼接，随后根据CK206103、CD927722、CJ673133、D927242电子拼接得到的全长CWI基因，采用Primier Primer5软件设计3对引物C1、C2、C3，从小麦品种豆麦的基因组DNA中获得真正的CWI基因序列。

PCR反应以小麦基因组DNA为模板，在MJ Research PTC-200PCR仪上进行，20μlPCR反应体系为：模板DNA 50ng，Taq酶1U(北京天根生化科技公司)，上、下游引物(5μmol·L^-1)各1.0μl，dNTP(25μmol·L^-1)0.2μl，10×PCR缓冲液2μl，用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl。PCR反应采用步降(Touch down)退火程序：首先95℃5min；然后95℃60s，由66℃开始，每个循环的退火温度降低0.3℃，退火时间1min 30s，72℃2min，共40个循环；最后72℃10min，4℃保温。PCR扩增产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳分离，采用缓冲体系为1×TAE溶液，用北京‘六一’厂的DYC-34A型电泳槽，200V电压电泳30分钟，0.5％溴化乙锭(Ethidium bromide，EB)染色10分钟，蒸馏水漂洗后在Multi Genius Bio-Imaging System成像系统上用紫外灯扫描成像并存入计算机。在紫外灯下将目标带挖下来，克隆至pMD18-T载体上进行测序。测序由上海生工生物工程技术服务有限公司(http://www.sangon.com)完成。

为了保证C1、C2、C3扩增片段位于2A染色体上，每对引物都要在中国春缺体-四体系N2A-T2B、N2B-T2A和N2D-T2B中验证，以确保其PCR扩增的基因组专一性。为防止PCR过程中和测序过程中发生碱基错配和误读，每个PCR反应和测序反应都要重复2到4次，每一段序列只有在至少两次测序结果完全一样的情况下才能最终确定，否则还要继续测定。序列比对采用DNAMAN软件(http://www.lynnon.com)进行，得到用于扩增2A染色体上CWI基因全长的三对引物(表1)。基因组中内含子的位置根据GIF基因的mRNA序列和基因组DNA的序列比对来确定。确定其内含子区及起始密码子和终止密码子，并将外显子进行拼接，翻译获得TaCwi-A1a蛋白序列。

表1用于扩增小麦2A染色体上TaCwi基因全长的引物序列

TaCwi-A1a蛋白的序列如序列表的序列1所示，编码基因如序列表的序列2所示。

二、TaCwi-A1b蛋白及其编码基因的获得

TaCwi-A1b蛋白及其编码基因的获得与TaCwi-A1a的获得方法完全相同，所用小麦品种为洋小麦。

TaCwi-A1b蛋白的序列如序列表的序列3所示，编码基因如序列表的序列4所示。

实施例2、小麦籽粒粒重性状与基因型的相关性分析

一、功能标记引物的设计

根据序列表中的序列2、序列4设计两组引物CWI21(引物对乙；P1/P2)和CWI22(引物对甲；P3/P2)如下：

P1(上游引物)：5’-GTGGTGATGAGTTCATGGTTAAG-3’(序列5)；

P3(上游引物)：5’-GGTGATGAGTTCATGGTTAAT-3’(序列6)

P2(下游引物)：5’-AGAAGCCCAACATTAAATCAAC-3’(序列7)。

用引物对乙，可以扩增序列表中序列4所示核苷酸中404bp的DNA片段，不能扩增序列表中序列2所示核苷酸中的DNA片段；用引物对甲可以扩增序列表中序列2所示核苷酸中402bp的DNA片段，不能扩增出序列表中序列4所示核苷酸中的DNA片段。

二、小麦籽粒粒重与所述基因的相关性分析

材料I：192份中国冬小麦栽培品种(2001年种植于河南安阳)；

材料II：117份中国冬小麦栽培品种(2008年种植于四川成都)；

材料III：130份中国冬小麦农家品种(2008年种植于四川成都)；

材料IV：48份中国冬小麦农家品种(2008年种植北京)。

1、小麦籽粒千粒重的测定

按GB/T 5519-2008检测小麦籽粒千粒重。

2、小麦基因型的测定

提取各个小麦的基因组DNA，分别按以下步骤进行检测：

①以小麦基因组DNA为模板，分别用CWI21和CWI22进行PCR扩增。

PCR反应体系：模板DNA 50ng，Taq酶1U(北京天根生化科技公司)，上、下游引物(5μmol·L^-1)各1μl，dNTP(25μmol·L^-1)0.2μl，10×PCR缓冲液2μl，用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl。

PCR反应程序：首先95℃、5min；然后95℃、1min，58℃(CWI21)或60℃(CWI22)、1min，72℃、1min20s，共40个循环；最后72℃、8min。扩增产物于4℃保存。

②将PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测。

图2为14个样本的鉴定结果；泳道M表示分子量标准(Marker)；泳道01至14分别为以下品种的小麦：豆麦、中麦9号、川麦39、SW18390、内麦8、山农664、川麦43，凤麦24、石4185、临旱917、豫麦21、绵阳26、川农16、扬麦10；A为CWI22扩增结果，B为CWI21扩增结果。

如果用引物对乙扩增出404bp的条带，而同时用引物对甲扩增不出402bp的条带，说明基因型为TaCwi-A1b；如果引物对甲扩增出402bp的条带，而用引物对乙没有扩增出404bp的条带，说明基因型为TaCwi-A1a。

材料I的192个样本中，146个样本的基因型为TaCwi-A1a，46个样本基因型为TaCwi-A1b。材料I中的小麦的品种、来源、千粒重测定结果和基因型分析结果见表2。

材料II的117个样本中，102个样本的基因型为TaCwi-A1a，15个样本的基因型为TaCwi-A1b。材料II中的小麦的品种、来源、千粒重测定结果和基因型分析结果见表3。

材料III的130个样本中，5个样本的基因型为TaCwi-A1a，125个样本的基因型为TaCwi-A1b。材料III中的小麦的品种、来源、千粒重测定结果和基因型分析结果见表4。

材料IV的48个样本中，5个样本的基因型为TaCwi-A1a，43个样本的基因型为TaCwi-A1b。材料IV中的小麦的品种、来源、千粒重测定结果和基因型分析结果见表5。

表2材料I 192份中国冬小麦品种千粒重测定结果和基因型分析结果

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				1	PH85-1-1	a	56.7
2	鄂86642	a	55.9
				3	临旱6114	a	55.7
4	山东955	a	55.2
				5	临旱619	a	54.1
6	鄂81027	a	54.0
				7	宁97-41	a	53.8
8	烟239	a	53.7
				9	中麦9号	a	53.5
10	99G46	a	53.0
				11	临旱619	a	53.0
12	鄂81027	a	52.7
				13	宁97-41	a	52.6
14	烟239	a	52.3
				15	中麦9号	a	52.1
16	99G46	a	52.0
				17	临旱619	a	52.0
18	鄂81027	a	51.8
				19	宁97-41	a	51.7

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				20	烟239	a	51.6
21	CA9550	a	51.4
				22	京9428	a	51.3
23	河北农大341	a	51.2
				24	京冬8	a	51.0
25	云麦42	a	51.0
				26	中育6号	a	51.0
27	白玉149	a	50.7
				28	云麦46	b	50.6
29	绵阳980127	a	50.4
				30	豫麦34号	a	50.3
31	鲁95(6)161	a	50.0
				32	临丰615	a	49.9
33	临汾125	a	49.5
				34	临汾98-6269	a	49.5
35	河农2552	a	49.2
				36	运97169	a	49.1
37	徐858	b	49.1
				38	济麦1号	a	49.1

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				39	川89-107	a	48.9
40	农大116	a	48.6
				41	濮优9175	a	48.5
42	西农6426	b	48.5
				43	99P102	a	48.3
44	85中33	a	48.2
				45	中优9507	a	48.0
46	京农97-86	a	48.0
				47	临汾137	b	48.0
48	鲁麦22	a	48.0
				49	99G66	a	47.8
50	PH85-16	a	47.8
				51	中梁88376	a	47.5
52	临汾5232	a	47.5
				53	99G80	a	47.4
54	郑州9023	b	47.1
				55	豫麦62号	b	47.1
56	晋麦61	a	47.0
				57	沧核030	a	47.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				58	农大99-5009	b	46.8
59	宁97-18	a	46.5
				60	徐州26号	a	46.4
61	晋麦60	a	46.4
				62	农大3213	a	46.2
63	扬96G25	b	45.9
				64	山农60182	a	45.9
65	农大3395	a	45.8
				66	农大3197	a	45.8
67	96C1	a	45.7
				68	丰优6号	a	45.7
69	周麦13号	a	45.6
				70	晋农216	b	45.5
71	98中18	a	45.5
				72	豫麦57	a	45.5
73	绵阳940112	b	45.4
				74	周91177	a	45.4
75	皖麦19号	a	45.4
				76	京农8318	a	45.3

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				77	淮麦18	a	45.3
78	晋麦67	a	45.2
				79	京冬10号	a	45.2
80	883	a	45.1
				81	冀5066	a	45.1
82	中育5号	a	45.0
				83	烟475	a	44.9
84	宁9940	b	44.9
				85	中梁88303	b	44.8
86	992-17	b	44.8
				87	93中6(37)	b	44.7
88	农大3291	a	44.6
				89	R59	a	44.6
90	R57	a	44.5
				91	丰抗2号	a	44.4
92	鄂66378	b	44.4
				93	R25	b	44.1
94	鄂91727	a	44.1
				95	北京837	a	44.1

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				96	CA9722	a	44.0
97	绵阳960107	a	43.8
				98	山农413863	a	43.8
99	豫农94268	a	43.7
				100	9(54)	a	43.6
101	郑州992	a	43.5
				102	豫麦50号	b	43.5
103	豫麦70号	a	43.5
				104	云麦39	b	43.5
105	N9209-3	b	43.4
				106	西农12208019	a	43.3
107	原冬107	a	43.1
				108	冀3475	b	43.1
109	PH82-2-2	a	43.0
				110	烟优361	a	43.0
111	安农98005	b	43.0
				112	豫麦2号	a	43.0
113	中优9844	a	43.0
				114	中作8131-1	a	43.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				115	陕354	b	42.9
116	冀麦38	b	42.9
				117	陕优225	a	42.7
118	宁99415-8	a	42.6
				119	宁9952	a	42.6
120	晋农215	a	42.5
				121	陕302518	b	42.5
122	宁9548	b	42.5
				123	皖麦18	a	42.5
124	徐州25号	b	42.5
				125	兰考24号	a	42.4
126	德麦4号	a	42.2
				127	豫麦47号	a	42.2
128	绵阳99-17	a	42.1
				129	晋麦50	a	42.0
130	豫麦63号	b	42.0
				131	冀麦24	a	42.0
132	CA9532	a	41.9
				133	陕160	a	41.8

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				134	小偃54	a	41.8
135	风麦24	b	41.8
				136	烟99-5	a	41.7
137	豫麦51号	a	41.7
				138	豫麦35号	a	41.6
139	安农91168	a	41.6
				140	皖麦38	a	41.6
141	宁9766	a	41.5
				142	农大3214	a	41.4
143	山农990525	a	41.4
				144	农大152	a	41.3
145	中麦16号	b	41.3
				146	烟2801	a	41.3
147	陕9314	b	41.3
				148	宁9247	b	41.2
149	冀Z76	a	41.1
				150	陕623	b	41.0
151	川育12	a	41.0
				152	运丰早101	a	41.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				153	郑州974	b	40.9
154	引11-12	b	40.9
				155	山农1355	a	40.8
156	陕229	a	40.7
				157	HS97-10	b	40.5
158	高优503	a	40.2
				159	CA9632	a	40.1
160	RF-1	a	40.1
				161	京411	a	40.0
162	郑州81-1	a	40.0
				163	豫麦49号	a	40.0
164	陕93302	b	40.0
				165	西农1163-20	b	40.0
166	皖麦33	a	40.0
				167	淮麦17	b	39.8
168	原冬971	a	39.6
				169	宁9-159	a	39.6
170	晋麦45	a	39.5
				171	西农336	b	39.2

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				172	陕253	a	39.0
173	晋农218	a	38.6
				174	绵阳26	b	38.6
175	临旱917	b	38.0
				176	凤麦27	b	38.0
177	烟农15	a	37.9
				178	安农94022	a	37.7
179	CA8686	a	37.6
				180	豫农95339	a	37.0
181	云麦44	a	36.7
				182	Y10-8	b	36.6
183	西农8925-13	a	36.4
				184	农大139	b	35.8
185	临优1583	a	35.7
				186	运丰早898	b	35.1
187	山东94(6)006	a	35.0
				188	豫麦25号	a	34.9
189	藁城8901	a	34.5
				190	陕898-33	a	33.5

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				191	山东955159	a	33.4
192	豫麦21号	b	32.4

表3材料II中117份小麦品种千粒重测定结果和基因型分析结果

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				1	川麦39	a	55.0
2	川育20	a	54.8
				3	W3734	a	54.4
4	川麦43	a	54.2
				5	省预41	a	54.2
6	川07002	a	52.7
				7	内麦8号	a	52.6
8	省预25	a	52.4
				9	MY05Z13	a	51.8
10	省预14	a	51.7
				11	川农23	a	51.6
12	川麦32	b	51.5

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				13	省预55	a	51.5
14	省预3	a	51.5
				15	省预57	a	51.2
16	省预2	a	50.7
				17	SW18390	a	50.5
18	省预15	a	50.5
				19	川07005	a	50.1
20	省预59	a	50.0
				21	川07001	a	49.9
22	省预46	a	49.6
				23	省预7	a	49.6
24	省预9	a	49.4
				25	省预28	a	49.3
26	省预10	a	49.3
				27	D002	a	49.3
28	省预56	a	49.2
				29	省预36	a	49
30	省预39	a	49
				31	玉脉1号	a	48.9

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				32	省预8	b	48.8
33	07间434	a	48.8
				34	省预18	a	48.5
35	内麦9号	a	48.4
				36	川07225	a	48.4
37	省预50	a	48.3
				38	省预13	a	48.2
39	华2459	b	48.1
				40	川育18	a	48.1
41	MY-68	a	48.0
				42	绵麦38	a	47.8
43	省预11	a	47.8
				44	省预1	a	47.6
45	省预48	a	47.5
				46	绵06-367	a	46.8
47	省预6	a	46.8
				48	毕2002-2	b	46.8
49	川麦44	a	46.7
				50	SW29073	a	46.6

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				51	省预16	a	46.6
52	省预29	a	46.3
				53	省预49	a	46.3
54	LA0758	a	46.3
				55	省预32	a	46.0
56	省预58	a	46.0
				57	川育34713	a	46.0
58	SW2808	a	45.8
				59	川育17	b	45.8
60	川麦42	a	45.7
				61	XK055-3	a	45.7
62	川00030	b	45.6
				63	省预35	a	45.6
64	省预54	a	45.5
				65	07RC766	a	45.4
66	省预23	a	45.3
				67	内5220	a	45.2
68	省预24	b	45.2
				69	B991	a	45.2

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				70	省预53	a	44.8
71	川07品661	a	44.8
				72	省预34	a	44.4
73	内5375	a	44.4
				74	58769-6	a	44.1
75	省预33	b	44.0
				76	省预40	a	43.9
77	贵州98-18	a	43.7
				78	省预12	a	43.6
79	襄麦28	a	43.3
				80	省预31	a	43.2
81	省预20	b	43.0
				82	省预22	a	43.0
83	灌46324	b	43.0
				84	南育2号	a	42.9
85	川麦107	a	42.8
				86	省预21	a	42.7
87	川06品9	a	42.6
				88	省预4	a	42.4

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				89	08J46	a	42.0
90	川农12	a	41.8
				91	XK027-4	a	41.6
92	省预30	a	41.6
				93	云麦56	a	41.5
94	省预5	a	41.4
				95	省预19	a	41.1
96	扬麦12号	a	40.9
				97	省预17	a	40.8
98	LM07-25	a	40.4
				99	川农16	a	40.3
100	省预27	a	40.2
				101	绵06-394	a	39.6
102	绵阳26	b	39.3
				103	省预38	b	38.8
104	川农17	a	38.3
				105	Aug-80	a	38.2
106	LA-2078	a	37.8
				107	凤麦24	b	37.8

编号	品种	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				108	扬麦13	a	37.7
109	省预26	b	37.0
				110	省预60	a	36.0
111	省预44	a	35.0
				112	川育12	a	32.6
113	扬麦9号	a	30.0
				114	扬麦158	a	28.9
115	扬麦10号	b	27.3
				116	绵阳11	a	26.3
117	繁六	a	25.8

表4材料III中130份小麦品种千粒重测定结果和基因型分析结果

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				1	彰明鱼尾兰麦	a	47.0
2	平武一根麦	b	45.5
				3	小红麦	b	41.5
4	白老来变	b	40.5
				5	红春麦	b	40.0
6	金黄麦	b	40.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				7	苏麦	a	40.0
8	海盐种	b	38.5
				9	短麦	b	38.0
10	巫山小麦	a	37.8
				11	大红麦	b	37.5
12	青兰麦	b	37.0
				13	白长梢	b	36.5
14	红芒麦	b	35.0
				15	紫皮丝瓜头	b	35.0
16	皮龙2号	b	35.0
				17	草鞋底	b	35.0
18	营山三月黄	b	34.0
				19	红壳洋麦	b	34.0
20	沐川本地光头小麦	b	33.5
				21	铁堡麦	b	33.5
22	锉刀丝瓜头	b	33.5
				23	露子青	b	33.5
24	小光头	b	33.5
				25	细籽细麦	b	33.0
26	大黄皮	b	32.5
				27	红麦	b	32.5
28	火烧百日麦	b	32.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				29	海盐种	b	32.0
30	雪里青	b	32.0
				31	洋小麦	b	32.0
32	白光浪头	b	32.0
				33	打鼓锤	b	32.0
34	车锏子	b	32.0
				35	红芒小麦	b	32.0
36	白皮小麦	b	32.0
				37	大蚰子	b	31.5
38	毛蒲	b	31.5
				39	中江长芒白小麦	b	31.0
40	南充大光头小麦	b	31.0
				41	红蚰子	a	31.0
42	长芒芒	b	31.0
				43	有芒小麦	b	31.0
44	放赈	b	31.0
				45	三合六棱	b	31.0
46	通江红麦	b	30.5
				47	红长萁	b	30.5
48	罗旁头	b	30.5
				49	霉前五	b	30.5
50	河婆麦	b	30.5

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				51	蓬安三月黄	b	30.0
52	井研小麦	b	30.0
				53	长秆车锏子	b	30.0
54	大黄皮	b	30.0
				55	洋小麦2	a	30.0
56	颖上红	b	30.0
				57	白葫芦头	b	30.0
58	六柱头洋小麦	b	29.5
				59	小玉花	b	29.5
60	大红袍	b	29.5
				61	红橹麦	b	29.5
62	四川原古宋大红花(1)	b	29.0
				63	射洪大榆	b	29.0
64	六柱头	b	29.0
				65	长萁白壳	b	29.0
66	虾儿红	b	29.0
				67	鸭舌子	b	29.0
68	大红芒	b	29.0
				69	泸县白麦子(2)	b	28.5
70	黄县大粒	b	28.5
				71	有芒长四方	b	28.5
72	红芒麦	b	28.5

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				73	白壳早梅	b	28.5
74	丈四黄	b	28.0
				75	毛头麦	b	28.0
76	车锏子	b	28.0
				77	毛头子	b	28.0
78	四川原古宋大红花(2)	b	27.5
				79	光头麦	b	27.5
80	蚂蚱头火麦	b	27.0
				81	百脚子	b	27.0
82	瘸腿麦	b	27.0
				83	鸭嘴子	b	27.0
84	仓蒲子	b	27.0
				85	西南早	b	27.0
86	红壳麦	b	27.0
				87	白壳麦	b	27.0
88	油麦	b	27.0
				89	四川长须须油条	b	26.7
90	泸县无芒红花麦	b	26.5
				91	小红麦	b	26.5
92	红壳矮萁	b	26.5
				93	和尚头	b	26.0
94	早小麦	b	26.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				95	葫芦头	b	26.0
96	秃头麦(乙)	b	26.0
				97	北碚赤壳涿麦	b	25.5
98	观音杜麦	b	25.5
				99	盐边青稞麦	b	25.0
100	金钗种	b	25.0
				101	菜子黄	b	24.0
102	菜子黄	b	24.0
				103	无芒鸭子嘴	b	24.0
104	霉前五	b	24.0
				105	早十天	b	23.5
106	黄芒子	b	23.0
				107	通江小红麦	b	22.5
108	白光头	b	22.5
				109	红芒麦	b	22.5
110	红麦	b	22.5
				111	四川无名小麦	b	22.0
112	江北大脑壳	b	22.0
				113	葫芦头	b	22.0
114	和尚头	b	22.0
				115	钻头白壳	b	22.0
116	康定本地黄花麦	b	21.5

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				117	白毛麦	b	21.5
118	尖头白	b	21.5
				119	红小麦	b	20.5
120	南江青杠麦	b	20.0
				121	宜山小麦	b	19.0
122	红蚂蚱麦	b	18.5
				123	鸭嘴小麦	b	18.5
124	金包银	b	18.0
				125	葫芦头	b	17.5
126	小红芒	b	17.3
				127	五花头	b	17.0
128	天等小麦	b	16.5
				129	齐头白	b	15.0
130	红芒红	b	13.5

表5材料IV中48份小麦品种千粒重测定结果和基因型分析结果

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				1	白洋麦	a	40.0
2	红春麦	a	38.5
				3	火烧头	b	38.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				4	亮麦	b	38.0
5	长腰麦	b	35.5
				6	高芒麦	a	35.5
7	白光头	b	34.5
				8	红光头	b	34.0
9	白葫芦头(无芒)	b	33.0
				10	尖头白	b	33.0
11	大蚰子	b	32.0
				12	小红麦	b	31.0
13	大红麦	b	30.0
				14	车锏子	b	30.0
15	下府麦	b	30.0
				16	白秃头	b	30.0
17	三月黄	b	29.5
				18	白壳红(无芒)	a	29.5
19	白葫芦头(长芒)	b	29.5
				20	红兰麦	b	29.5
21	短钻子头	b	29.0
				22	小麦	b	29.0

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				23	白糠亮麦	b	29.0
24	黄县大粒	b	29.0
				25	一支花	b	29.0
26	大白芒	b	29.0
				27	小红花	b	29.0
28	红芒麦	b	29.0
				29	红蚂蚱麦	b	28.0
30	蚂蚱头麦	b	28.0
				31	红芒麦	b	28.0
32	离子3号	b	27.5
				33	光头小麦	b	27.5
34	红葫芦头	a	27.0
				35	鱼鳞白	b	27.0
36	白秃头	b	27.0
				37	红芒红	b	26.0
38	葫芦头	b	26.0
				39	白皮麦	b	26.0
40	葫芦头	b	26.0
				41	有芒小麦	b	25.5

编号	品种名称	基因型分析结果a：TaCwi-A1a；b：TaCwi-A1b	千粒重(g)
				42	白壳红(长芒)	b	24.5
43	河南光头麦	b	24.5
				44	光脑麦	b	24.5
45	三月黄	b	24.0
				46	罗城小麦	b	23.0
47	秃把麦	b	19.5
				48	钻头白亮	b	18.0

对不同基因型小麦的籽粒粒重进行统计分析，发现有显著差异，见表6。

表6小麦等位变异与籽粒粒重高低关系的统计分析结果

通过小麦千粒重与所述基因的相关性分析，得出以下结论：以小麦基因组DNA为模板，分别用引物甲和引物对进行扩增，如果用引物对乙扩增出404bp的条带，而同时用引物对甲扩增不出402bp的条带，说明基因型为TaCwi-A1b，具有低千粒重；如果用引物对甲扩增出402bp的条带，而用引物对乙没有扩增出404bp的条带，说明基因型为TaCwi-A1a，具有高千粒重。基因型为TaCwi-A1a的小麦品种的千粒重在统计学上大于基因型为TaCwi-A1b的小麦品种。

序列表

<110>中国农业科学院作物科学研究所

<120>辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物

 

<130>CGGNARY102160

 

<160>7

 

<210>1

<211>588

<212>PRT

<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)

 

<400>1

 

Met Val Val Leu Gly Gly Arg Val Ala Trp Ala Cys Ser Val Leu Leu

1               5                   10                  15

Leu Leu Gln Leu Ala Gly Ala Ser His Val Val Tyr Glu Thr His Leu

            20                  25                  30

Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Asp Val Pro Pro Ser Ile Leu Asp

        35                  40                  45

Pro Glu Leu Ser Thr Gly Tyr His Phe Arg Pro Ile Lys Asn Trp Ile

    50                  55                  60

Asn Asp Pro Asn Ala Pro Met Phe Tyr Lys Gly Trp Tyr His Phe Phe

65                  70                  75                  80

Tyr Gln Tyr Asn Pro Lys Gly Ala Val Trp Gly Asn Ile Val Trp Ala

                85                  90                  95

His Ser Val Ser Arg Asp Leu Ile Asn Trp Val Ala Leu Glu Thr Ala

            100                 105                 110

Ile Gln Pro Ser Ile Lys Ser Asp Lys Tyr Gly Cys Trp Ser Gly Ser

        115                 120                 125

Ala Thr Ile Leu Arg Asp Gly Thr Pro Ala Ile Met Tyr Thr Gly Ile

    130                 135                 140

Asp Arg Gly Asp Ile Asn Tyr Glu Val Gln Asn Ile Ala Phe Pro Lys

145                 150                 155                 160

Asn Lys Ser Asp Pro Leu Leu Arg Glu Trp Val Lys Pro Lys Ser Asn

                165                 170                 175

Pro Ile Ile Val Pro Glu Gly Gly Ile Asn Ala Thr Gln Phe Arg Asp

            180                 185                 190

Pro Thr Thr Ala Trp Tyr Ala Asp Gly His Trp Arg Leu Leu Ile Gly

        195                 200                 205

Ala Leu Ser Gly Ala Ser Arg Gly Val Ala Tyr Val Tyr Arg Ser Arg

    210                 215                 220

Asp Phe Met Arg Trp Thr Arg Val Arg Lys Pro Leu His Ser Ala Pro

225                 230                 235                 240

Thr Gly Met Trp Glu Cys Pro Asp Leu Tyr Pro Val Thr Val Asp Gly

                245                 250                 255

Arg Gln Asn Gly Leu Asp Thr Ser Val Thr Ser Ser Pro Lys Val Lys

            260                 265                 270

His Val Leu Lys Asn Ser Leu Asp Leu Arg Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr

        275                 280                 285

Val Gly Thr Tyr Asp Arg Lys Thr Glu Arg Tyr Val Pro Asp Asn Pro

    290                 295                 300

Ala Gly Asp Glu His His Leu Arg Tyr Asp Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala

305                 310                 315                 320

Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Pro Val Lys Arg Arg Arg Ile Leu Trp Gly

                325                 330                 335

Trp Ala Asn Glu Ser Asp Thr Ala Val Asp Asp Val Ala Lys Gly Trp

            340                 345                 350

Ala Gly Ile Gln Ala Ile Pro Arg Lys Val Trp Leu Asp Pro Ser Gly

        355                 360                 365

Arg Gln Leu Met Gln Trp Pro Val Glu Glu Leu Glu Ala Leu Arg Ala

    370                 375                 380

Lys Lys Pro Val Ser Leu Lys Asp Arg Val Val Lys Arg Gly Glu His

385                 390                 395                 400

Val Glu Val Thr Gly Leu Arg Ser Ser Gln Ala Asp Val Glu Val Ser

                405                 410                 415

Phe Glu Val Pro Ser Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Asp Pro Ala Leu

            420                 425                 430

Ala Asn Asp Ala Gln Lys Leu Cys Ser Leu Arg Gly Ala Asp Val Glu

        435                 440                 445

Gly Gly Val Gly Pro Phe Gly Leu Trp Val Leu Ala Ser Ser Lys Leu

    450                 455                 460

Glu Glu Lys Thr Ala Val Phe Phe Gln Val Phe Lys Ala Ala Arg Asn

465                 470                 475                 480

Ile Asn Ser Thr Lys Pro Val Val Leu Met Cys Ser Asp Pro Thr Thr

                485                 490                 495

Ser Ser Leu Asn Pro Asn Leu Tyr Lys Pro Thr Phe Ala Gly Phe Val

            500                 505                 510

Asp Thr Asp Ile Ala Lys Gly Lys Ile Ser Leu Arg Ser Leu Ile Asp

        515                 520                 525

Arg Ser Val Ile Glu Ser Phe Gly Ala Gly Gly Arg Thr Cys Ile Leu

    530                 535                 540

Ser Arg Val Tyr Pro Thr Leu Ala Leu Gly Lys Asn Ala His Leu His

545                 550                 555                 560

Val Phe Asn Asn Gly Lys Ala Asp Ile Lys Val Ser Gln Leu Thr Ala

                565                 570                 575

Trp Glu Met Lys Lys Pro Ala Leu Met Asn Gly Ala

            580                 585

 

<210>2

<211>3506

<212>DNA

<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)

 

<400>2

gccccagtgt gagagcaatg gtagttctcg ggggaagagt tgcatgggca tgctcggtgc     60

tgctgctgtt gcagctcgcc ggggcgtcgc atgtcgtcta cgagacccac ctcctggagg    120

cggaggcggc ggcggccgac gtgccgcctt cgattcttga ccccgagctg agcacggggt    180

accacttccg gccgataaag aactggatca atggtacatg cccactgacc catctctcct    240

gctcgagcta gagcgaagct tagagctagc taggcagacc tccttctttt gcatggctaa    300

agaaaccaac ggtgtgtagt agcactagct cgtccttgct cttcggacaa ctgaacttca    360

aaaccatgca tggccggcgg agggtgggtg gtcagtttct tgggccatac aagaaacttt    420

cgtaatcgtg tccatttatg ttttgttact aaatttagct aggtcatacg gtgctcagtt    480

tgtgtagtac cactatactg ctttacaaga agcaagaaca tgcatgcttt aggactagct    540

ctcagtgaac tgactacggt cacggggctc ctccggtgtc cagtgagcta gagctgcttt    600

agctagcttg cacttgtgtg gcctgagcag tatcctactc ctaataccgt ggattagttt    660

aataacgatg catatatttt attttatttg caaaggttta taactggctc taacttgacg    720

gttttttttt atcatcatca tgttggtggt tgccggatgc cacaccagat cccaacggta    780

cgtcgtcctt ctcccgcgct tgttttaata tcctgtcacg cgtctctgtc gcgtcttcaa    840

tttgatgcta tctgctacaa gaatccgtgt tctgcaactt gcaaccccgt tgaacagcaa    900

cgccttttcg tcctgattat acgtactagc taaacaacac atatacaggc atgcatgcat    960

gcatgctgca tggctcgtga actcgcagcc ccatacacaa accattaacg aatgaaaata   1020

attggctcgc cattaacctt cactgagata atctcttcat gggaatgtga actggacttg   1080

tgatttggtg aaatttggtg catgcagcgc ccatgttcta caaggggtgg taccatttct   1140

tctaccagta caaccccaag ggggcggtgt ggggcaacat cgtgtgggcg cactcggtgt   1200

cgcgcgacct catcaactgg gtggcgctgg agacggccat ccagcccagc atcaagtccg   1260

acaagtacgg ctgctggtcg ggctcggcca ccatcctgcg cgacggcacg ccggcgatca   1320

tgtacacggg catcgaccgc ggcgacatca actacgaggt gcagaacatc gccttcccca   1380

agaacaagtc ggacccgctg ctccgcgagt gggtcaagcc caagagcaac ccgatcatcg   1440

tgccggaggg cggcatcaac gccacccaat tccgggaccc gaccaccgcg tggtacgccg   1500

acggccactg gcggctgctc atcggcgccc tctctggcgc gtcccgcggc gtggcgtacg   1560

tgtaccggag ccgcgacttc atgcggtgga cgcgggtgag gaagccgctg cactcggcgc   1620

ccacggggat gtgggagtgc ccggacctgt acccggtcac ggtggacggc cggcagaacg   1680

ggctcgacac ctccgtcacg tccagcccca aggtgaagca cgtgctgaag aacagcctcg   1740

acctgcgccg ctacgactac tacaccgtcg gcacctacga ccggaagacg gagcggtacg   1800

tgccggacaa ccccgccggc gacgagcacc acctgcggta cgactacggc aacttctacg   1860

cctccaagac gttctacgac cccgtcaagc gccgccgcat cctctggggc tgggccaacg   1920

agtccgacac cgccgtcgac gacgtcgcca agggatgggc cggaatccag gtagctgcct   1980

aatcatatca tatgctggtg tacgtagtaa ccaaaaaact ttcatgtgca ccatgcatgc   2040

atggtctcag ttattatccg tgtgatattt tcaggcgatt ccgaggaagg tttggctgga   2100

cccgagtggg aggcagctga tgcagtggcc cgtggaggag cttgaggcgc tgagggcgaa   2160

aaagccggtg agtctcaagg accgggtggt gaagcgggga gagcacgtcg aggtcaccgg   2220

gctacgaagc tcacaggtga gcgtgcgtgc ctttctgagt tagttcgtgt gcaatcaagg   2280

tgacattttc tagtctagga ccaaaaggcg atcgagatca ctatgtacgt actgccttgc   2340

cttgagtggc gccggccctg cagaatatat tgcccagcca gtagtatgtg ttatcctgga   2400

ccgtgctatc ttatccggcg cgcttctcat ccgagttgtg tccagtgtgc agtgcccact   2460

ctcttgtgcc ttttctactc cgtagatttc actacacctg tcctgcactt taacctcagc   2520

tcggcgtcat gcgttctgtt ccggtccatt acagcttaga aaactagact cgtcgtcacg   2580

cgcacattgg cattggcctt gcacgcacac ctccaatcta gctaggctcc aactgaactg   2640

gtgcaaccta acaatagatc gttttaattt gaccaacata atgtctgttc ccttttgtaa   2700

gcgtgtggtg atgagttcat ggttaattac cggactaact tgtttcatca ggctgacgtc   2760

gaggtgagct ttgaggtgcc gagcctggag ggagcggagg cgctggaccc ggcgctagcc   2820

aacgacgccc agaagctgtg cagcttgagg ggtgccgacg tggaaggcgg cgtgggcccc   2880

ttcggtctgt gggtgctcgc ctcgtccaag ctggaggaga agacggcggt cttcttccag   2940

gtgttcaagg ccgcgcgcaa catcaacagc accaagccgg tggtcctcat gtgctccgac   3000

cccaccacgt aatgacatct cctgatcctc atttctccct taaattcatt atttctcacg   3060

catgtgacat gcacacatta gctagcgttg atttaatgtt gggcttcttt gctcggtgca   3120

ggtcatcttt gaacccgaac ctctacaagc cgacgttcgc aggctttgtt gatactgaca   3180

tagcgaaggg caagatatct ctgaggagtc tggtacgata ttggctacca tatgttcctc   3240

atctcgtaca tacaatatat aagttaacaa atggatcatt cgtactgctt ttgtttgccc   3300

atactttctc tgtctagatt gatcggtccg tcatcgagag cttcggggca ggaggcagga   3360

cctgcatcct ctcccgggtt tatccaacgc tcgccctagg caagaacgct caccttcatg   3420

ttttcaacaa cggcaaggcg gacatcaagg tgtcacagct cacggcgtgg gagatgaaga   3480

agccagcgct catgaacggt gcttag                                        3506

 

<210>3

<211>588

<212>PRT

<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)

 

<400>3

 

Met Val Val Leu Gly Gly Arg Val Ala Trp Ala Cys Ser Val Leu Leu

1               5                   10                  15

Leu Leu Gln Leu Ala Gly Ala Ser His Val Val Tyr Glu Thr His Leu

            20                  25                  30

Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Asp Val Pro Pro Ser Ile Leu Asp

        35                  40                  45

Pro Glu Leu Ser Thr Gly Tyr His Phe Arg Pro Ile Lys Asn Trp Ile

    50                  55                  60

Asn Asp Pro Asn Ala Pro Met Phe Tyr Lys Gly Trp Tyr His Phe Phe

65                  70                  75                  80

Tyr Gln Tyr Asn Pro Lys Gly Ala Val Trp Gly Asn Ile Val Trp Ala

                85                  90                  95

His Ser Val Ser Arg Asp Leu Ile Asn Trp Val Ala Leu Glu Thr Ala

            100                 105                 110

Ile Gln Pro Ser Ile Lys Ser Asp Lys Tyr Gly Cys Trp Ser Gly Ser

        115                 120                 125

Ala Thr Ile Leu Arg Asp Gly Thr Pro Ala Ile Met Tyr Thr Gly Ile

    130                 135                 140

Asp Arg Gly Asp Ile Asn Tyr Glu Val Gln Asn Ile Ala Phe Pro Lys

145                 150                 155                 160

Asn Lys Ser Asp Pro Leu Leu Arg Glu Trp Val Lys Pro Lys Ser Asn

                165                 170                 175

Pro Ile Ile Val Pro Glu Gly Gly Ile Asn Ala Thr Gln Phe Arg Asp

            180                 185                 190

Pro Thr Thr Ala Trp Tyr Ala Asp Gly His Trp Arg Leu Leu Ile Gly

        195                 200                 205

Ala Leu Ser Gly Ala Ser Arg Gly Val Ala Tyr Val Tyr Arg Ser Arg

    210                 215                 220

Asp Phe Met Arg Trp Thr Arg Val Arg Lys Pro Leu His Ser Ala Pro

225                 230                 235                 240

Thr Gly Met Trp Glu Cys Pro Asp Leu Tyr Pro Val Thr Val Asp Gly

                245                 250                 255

Arg Gln Asn Gly Leu Asp Thr Ser Val Thr Ser Ser Pro Lys Val Lys

            260                 265                 270

His Val Leu Lys Asn Ser Leu Asp Leu Arg Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr

        275                 280                 285

Val Gly Thr Tyr Asp Arg Lys Thr Glu Arg Tyr Val Pro Asp Asn Pro

    290                 295                 300

Ala Gly Asp Glu His His Leu Arg Tyr Asp Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala

305                 310                 315                 320

Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Pro Val Lys Arg Arg Arg Ile Leu Trp Gly

                325                 330                 335

Trp Ala Asn Glu Ser Asp Thr Ala Val Asp Asp Val Ala Lys Gly Trp

            340                 345                 350

Ala Gly Ile Gln Ala Ile Pro Arg Lys Val Trp Leu Asp Pro Ser Gly

        355                 360                 365

Arg Gln Leu Met Gln Trp Pro Val Glu Glu Leu Glu Ala Leu Arg Ala

    370                 375                 380

Lys Lys Pro Val Ser Leu Lys Asp Arg Val Val Lys Arg Gly Glu His

385                 390                 395                 400

Val Glu Val Thr Gly Leu Arg Ser Ser Gln Ala Asp Val Glu Val Ser

                405                 410                 415

Phe Glu Val Pro Ser Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Asp Pro Ala Leu

            420                 425                 430

Ala Asn Asp Ala Gln Lys Leu Cys Ser Val Arg Gly Ala Asp Val Glu

        435                 440                 445

Gly Gly Val Gly Pro Phe Gly Leu Trp Val Leu Ala Ser Ser Lys Leu

    450                 455                 460

Glu Glu Lys Thr Ala Val Phe Phe Gln Val Phe Lys Ala Ala Arg Asn

465                 470                 475                 480

Ile Asn Ser Thr Lys Pro Val Val Leu Met Cys Ser Asp Pro Thr Thr

                485                 490                 495

Ser Ser Leu Asn Pro Asn Leu Tyr Lys Pro Thr Phe Ala Gly Phe Val

            500                 505                 510

Asp Thr Asp Ile Ala Lys Gly Lys Ile Ser Leu Arg Ser Leu Ile Asp

        515                 520                 525

Arg Ser Val Ile Glu Ser Phe Gly Ala Gly Gly Arg Thr Cys Ile Leu

    530                 535                 540

Ser Arg Val Tyr Pro Thr Leu Ala Leu Gly Lys Asn Ala His Leu His

545                 550                 555                 560

Val Phe Asn Asn Gly Lys Ala Asp Ile Lys Val Ser Gln Leu Thr Ala

                565                 570                 575

Trp Glu Met Lys Lys Pro Ala Leu Met Asn Gly Ala

            580                 585

<210>4

<211>3506

<212>DNA

<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)

 

<400>4

gccccagtgt gagagcaatg gtagttctcg ggggaagagt tgcatgggca tgctcggtgc     60

tgctgctgtt gcagctcgcc ggggcgtcgc atgtcgtcta cgagacccac ctcctggagg    120

cggaggcggc ggcggccgac gtgccgcctt cgattcttga ccccgagctg agcacggggt    180

accacttccg gccgataaag aactggatca acggtacatg cccactgacc catctctcct    240

gctcgagcta gagcgaagct tagagctagc taggcagacc tccttctttt gcatggctaa    300

agaaaccaac ggtgtgtagt agcactagct cgtccttgct cttcggacaa ctgaacttca    360

aaaccatgca tggccggcgg agggtgggtg gtcagtttct tgggccatac aagaaacttt    420

cgtaatcgtg tccatttatg ttttgttact aaatttagct aggtcatacg gtgctcagtt    480

tgtgtagtac cactatactg ctttacaaga agcaataaca tgcatgcttt aggactagct    540

ctcagtgaac tgactacggt cacggggctc ctccggtgtc cagtgagcta gagctgcttt    600

agctagcttg cacttgtgtg gcctgagcag tatcctactc ctaataccgt ggattagttt    660

aataacgatg catatatttt attttatttg caaaggttta taactggctc taacttgacg    720

ggtttttttt atcatcatca tgttggtggt tgccggatgc cacgccagat cccaacggta    780

cgtcgtcctt ctcccgcgct tgttttaata tcctgtcacg cgtctctgtc gcgtcttcaa    840

tttgatgcta tctgctacaa gaatccgtgt tctgcaactt gcaaccccgt tgaacagcaa    900

cgccttttcg tcctgattat acgtactagc taaacaacac atatacaggc atgcatgcat    960

gcatgctgca tggctcgtga actcgcagcc ccatacacaa accattaacg aatgaaaata   1020

attggctcgc cattaacctt cactgagata atctcttcat gggaatgtga actggacttg   1080

tgatttggtg aaatttggtg catgcagcgc ccatgttcta caaggggtgg taccatttct   1140

tctatcagta caaccccaag ggggcggtgt ggggcaacat cgtgtgggcg cactcggtgt   1200

cgcgcgacct catcaactgg gtggcgctgg agacggccat ccagcccagc atcaagtccg   1260

acaagtacgg ctgctggtcg ggctcggcca ccatcctgcg cgacggcacg ccggcgatca   1320

tgtacacggg catcgaccgc ggcgacatca actacgaggt gcagaacatc gccttcccca   1380

agaacaagtc ggacccgctg ctccgcgagt gggtcaagcc caagagcaac ccgatcatcg   1440

tgccggaggg cggcatcaac gccacccaat tccgggaccc gaccaccgcg tggtacgccg   1500

acggccactg gcggctgctc atcggcgccc tctctggcgc gtcccgcggc gtggcgtacg   1560

tgtaccggag ccgcgacttc atgcggtgga cgcgggtgag gaagccgctg cactcggcgc   1620

ccacggggat gtgggagtgc ccggacctgt acccggtcac ggtggacggc cggcagaacg   1680

ggctcgacac ctccgtcacg tccagcccca aggtgaagca cgtgctgaag aacagcctcg   1740

acctgcgccg ctacgactac tacaccgtcg gcacctacga ccggaagacg gagcggtacg   1800

tgccggacaa ccccgccggc gacgagcacc acctgcggta cgactacggc aacttctacg   1860

cctccaagac gttctacgac cccgtcaagc gccgccgcat cctctggggc tgggccaacg   1920

agtccgacac cgccgtcgac gacgtcgcca agggatgggc cggaatccag gtagctgcct   1980

aatcatatca tatgctggtg tacgtagtaa ccaaaaaact ttcacgtgca ccatgcatgc   2040

atggtctcag ttattatccg tgtgatattt tcaggcgatt ccgaggaagg tttggctgga   2100

cccgagtggg aggcagctga tgcagtggcc cgtggaggag cttgaggcgc tgagggcgaa   2160

aaagccggtg agtctcaagg accgggtggt gaagcgggga gagcacgtcg aggtcaccgg   2220

gctacgaagc tcacaggtga gcgtgcgtgc ctttctgagt tagttcgtgt gcaatcaagg   2280

tgacattttc tagtctagga ccaaaaggcg atcgagatca ctatgtacgt actgccttgc   2340

cttgagtggc gccggccctg cagaatatat tgcccagcca gtagtatgtg ttatcctgga   2400

ccgtgctatc ttatccggcg cgcttctcat ccgagttgtg tccagtgtgc agtgcccact   2460

ctcttgtgcc ttttctactc cgtagatttc actacacctg tcctgcactt taacctcagc   2520

tcggcgtcat gcgttctgtt ccggtccatt acagcttaga aaactagact cgtcgtcacg   2580

cgcacattgg cattggcctt gcacgcacac ctccaatcta gctaggctcc aactgaactg   2640

gtgcaaccta acaatagatc gttttaattt gaccaacata atgtctgttc ccttttgtaa   2700

gcgtgtggtg atgagttcat ggttaagtac cggactaact tgtttcatca ggctgacgtc   2760

gaggtgagct ttgaggtgcc gagcctggag ggagcggagg cgctggaccc ggcgctagcc   2820

aacgacgccc agaagctgtg cagcgtgagg ggtgccgacg tggaaggcgg cgtgggcccc   2880

ttcggtctgt gggtgctcgc ctcgtccaag ctggaggaga agacggcggt cttcttccag   2940

gtgttcaagg ccgcgcgcaa catcaacagc accaagccgg tggtcctcat gtgctccgac   3000

cccaccacgt aatgacatct cctgatcctc atttctccct taaattcatt atttctcacg   3060

catgtgacat gcacacatta gctagcgttg atttaatgtt gggcttcttt gctcggtgca   3120

ggtcatcttt gaacccgaac ctctacaagc cgacgttcgc aggctttgtt gatactgaca   3180

tagcgaaggg caagatatct ctgaggagcc tggtacgata ttggctacca tatgttcctc   3240

atctcgtaca tacaatatat aagttaacaa atggatcatt cgtactgatt ttgtttgccc   3300

atactttctc tgtctagatt gatcggtccg tcatcgagag cttcggggca ggaggcagga   3360

cctgcatcct ctcccgggtt tatccaacgc tcgccctagg caagaacgct caccttcatg   3420

ttttcaacaa cggcaaggcg gacatcaagg tgtcacagct cacggcgtgg gagatgaaga   3480

agccagcgct catgaacggt gcttag                                        3506

 

<210>5

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

 

<223>

 

<400>5

gtggtgatga gttcatggtt aag    23

 

<210>6

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

 

<223>

 

<400>6

ggtgatgagt tcatggttaa t      21

 

<210>7

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

 

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Claims (10)

1.辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法，包括如下步骤：以小麦基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果引物对甲的扩增产物中具有402bp的DNA片段且引物乙的扩增产物中不具有404bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1a；如果引物对乙的扩增产物中具有404bp的DNA片段且引物甲的扩增产物中不具有402bp的DNA片段，待测小麦的基因型为TaCwi-A1b；基因型为TaCwi-A1a的小麦的千粒重在统计学上大于基因型为TaCwi-A1b的小麦品种；所述引物对甲由序列表的序列6所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成；所述引物对乙由序列表的序列5所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成。

2.序列表的序列6所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成的引物对甲。

3.序列表的序列5所示DNA和序列表的序列7所示DNA组成的引物对乙。

4.权利要求2所述引物对甲和/或权利要求3所述引物对乙在制备辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的试剂盒中的应用。

5.辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的试剂盒，包括权利要求2所述引物对甲和/或权利要求3所述引物对乙。

6.如权利要求1所述方法，如权利要求4所述应用，如权利要求5所述试剂盒，其特征在于：所述小麦为普通小麦。

7.序列表的序列6所示DNA、序列表的序列7所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成的引物组合物。

8.权利要求1所述方法，权利要求2所述引物对甲，权利要求3所述引物对乙，权利要求5所述试剂盒或权利要求7所述引物组合物在小麦育种中的应用。

9.如下(a)或(b)或(c)或(d)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦千粒重性状相关的由序列1衍生的蛋白质；

(d)将序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦千粒重性状相关的由序列3衍生的蛋白质。

10.编码权利要求9所述蛋白质的基因，是如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码小麦千粒重性状相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码小麦千粒重性状相关蛋白的DNA分子。

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