CN106048074B - 鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对。本发明所提供的引物对，由引物甲和引物乙组成；所述引物甲为如下a1)或a2)：a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物乙为如下a3)或a4)：a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。实验证明，采用本发明提供的引物对可鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦，在小麦育种中具有重要的应用价值。

Description

鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重小麦的方法及其专用引物对。
背景技术
小麦是当今世界上最主要的粮食类作物，全世界超过了35％的人把小麦作为主食，在农业类生产以及国民经济中均占有及其重要的地位。我国是世界上小麦栽种面积最大的国家之一，但是，由于我国一直以来地少人多的现实状况，致使我国也是当今世界上最大的小麦进口国，平均每年进口小麦总量高达10，000，000吨，因此我国急需提高小麦产量。小麦产量受单位面积穗数、穗粒数和千粒重三个因素的影响，三者关系的协调是取得小麦高产的关键。而在小麦产量构成因素中受遗传效应的影响最大是小麦的千粒重，广义遗传力要高达59％—80％，而小麦籽粒大小相关指标粒长、粒宽是决定千粒重的重要因子。因此，建立快速、准确以及高通量的鉴定或辅助鉴定小麦千粒重性状的方法，能够缩短小麦育种所需年限并且选育出高产优质的小麦品种。
高分辨率溶解曲线分析技术(High Resolution Melting Curve Analysis，HRM)是一项应用于检测单核苷酸多态性的分析性新技术，该技术是根据不同碱基序列进行PCR扩增反应后形成的双链DNA分子的溶解温度存在差异的这一物理性质，在同一反应容器中对碱基序列进行高分辨率溶解，利用可与双链DNA分子结合的饱和荧光染料运行HRM程序：即将PCR扩增产物从低到高以每次不到0.1℃逐步升温(在60℃～95℃范围内)，双链DNA分子在这一过程中达到一定温度后解链，荧光染料随其解链会脱落，并停止发出荧光信号。以荧光强度变化为纵坐标，解链温度为横坐标，得到相应的特征性溶解曲线，再根据特征性溶解曲线形态变化即可判断双链DNA分子性质的差异。HRM还具有高通量、高灵敏度、特异性好、重复性好、操作简便和适用范围广等优点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了引物对。
本发明所提供的引物对，可由引物甲和引物乙组成；
所述引物甲可为如下a1)或a2)：
a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物乙可为如下a3)或a4)：
a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。
所述引物对中，所述引物甲和所述引物乙的摩尔比可为1:1。
所述引物对的用途为鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦。所述粒重可为千粒重。
所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒或鉴定具有不同粒重的小麦中的应用也属于本发明的保护范围。
上述应用中，所述粒重可为千粒重。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的试剂盒，包括所述引物对。
上述试剂盒中，所述粒重可为千粒重。
所述试剂盒在鉴定具有不同粒重的小麦中的应用也属于本发明的保护范围。
上述应用中，所述粒重可为千粒重。
为解决上述技术问题，本发明还提供了所述试剂盒的制备方法。
本发明所提供的所述试剂盒的制备方法，可为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)：
(Ⅰ)所述引物对中各条引物分别单独包装；
(Ⅱ)所述引物对中各条引物按照权利要求2所述比例混合在一起。所述引物甲和所述引物乙的摩尔比具体可为1:1。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的方法。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的方法，可包括如下步骤：
1)以待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得到样本溶解曲线；以标准小麦甲的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得到b型溶解曲线；以标准小麦乙的基因组DNA为模板，采用所述引物对进行HRM反应，得到a型溶解曲线；
所述标准小麦甲为京红5号、内麦11、晋麦3号、梁来友白皮小麦、毕红穗、小白麦、大白皮、小红皮、定兴寨、红粒当年老、春小麦、大红麦、陕西白麦、牛趾甲、麻花板、红金麦、白齐麦、小口红、兰花麦、带芒红麦、涿鹿冬麦、红麦、红老麦、有芒白稃、红皮冬麦、磐石无芒、有芒白稃、白秋麦、老麦、中优9507、吕旱328、延安11、农大183、线麦、江西早、红花早、江东门、大黄皮、崇阳红麦1、早五天、六柱头、蝉不知、猪毛元字头、水里站、黄水白、落青、早小麦、望水白、婺源麦、车锏子、和尚麦、糯麦、芒小麦、三颗寸、泡子麦、骊英5号、安徽3号、浙麦1号、洋麦、火球、大青芒、新曙光1号、新曙光6号、吉春1016、郑引4号、南大2419、Orofen、水原86、Triumph、Lovrin 10、敖德萨3号、Tanori、潮安小麦、赤壳、松蕊麦、深根、抗锈10号、台中23、晋麦2418、敌锈早、泾阳60、石特14、复壮30、丰产3号、百农3217、西农6028、冀麦2号、内乡5号、郑州6号、咸农39、济南17、小偃6号、陕农7859、矮丰3号、鲁麦1号、莱州953、郑州741、白芒麦、黄瓜先、半截忙、老来瞎、蝼蛄腚、红狗豆、白火麦、三月黄、红抢场、蚰子麦、平原50、白扁穗、白齐麦、白秃子头、有芒扫谷旦、阜阳红、抢场麦、火麦、霉前五、碱麦、三月黄、小佛手、红和尚头、大口麦、白条鱼、白芒麦、大玉花、府麦、老齐麦、紫秸红、大粒半芒、六月黄、葛家乡、葛尔红麦、大春白四棱麦、白朗灰麦、扎红、边巴春麦-6、白芒小麦、乌江卓、木宗卓嘎、藏冬4号、一枝麦、大白麦、尕老汉、火里炎、红秃子、白大头、金黄麦、大白麦、白齐头、白蚂蚱、老秃头、高原506、宁春4号、金麦4号、蜀万8号、繁6、毕麦26、去麦34、兴义4号、凤麦11、同家坝小麦、红花麦、白麦子、成都光头、换香果、小三月黄、红须麦、紫皮、白芒麦、鱼鳅麦、洋麦、猪屎麦、扁头光壳麦、长芒石扁头、猪狗麦、滇西红壳洋麦、白冬麦、红春麦、春麦、无芒春麦、红金包银、喀什白皮、托克逊1号、中国春、郑麦9023或偃展1号；
所述标准小麦乙为红皮小麦、火燎麦、假红麦、小白芒、晋麦8号、丰抗2号、长治6406、北京8号、原冬822、农大311、农大139、铭贤169、东方红3号、兰溪早小麦、华东6号、苏麦3号、扬麦158、恩麦4号、鄂麦6号、白油麦、敦化春麦、光头、新克旱9号、克丰3号、克涝4号、东农101、赤小麦、Funo、KaBka3、农林10号、钱交麦、Early Premium、Villa Glori、Atlas66、甘肃96、上林小麦、碧蚂1号、碧蚂4号、石家庄54、平阳27、泰山1号、济南2号、蚰包、烟农15、石家庄407、温麦6号、西山扁穗、蚂蚱麦、秃芒麦、出山豹、本地黄花麦、墨脱小麦、康定小麦、日喀则54号、日喀则8号、山麦、红芒麦、甘麦8号、青春28、互助红、定西24、会宁10号、贵农10号、酱麦、白花麦、汉中白、梭条红麦、红芒子、阳麦、红冬麦、红春麦、新冬2号或喀什1号；
2)比较样本溶解曲线、a型溶解曲线和b型溶解曲线，如果样本溶解曲线与a型溶解曲线一致、待测小麦为B基因型，如果样本溶解曲线与b型溶解曲线一致、待测小麦为A基因型；然后进行如下d1)或d2)的判断：
d1)A基因型的待测小麦的粒重大于B基因型的待测小麦；
d2)A基因型的待测小麦的粒重大于非A基因型的待测小麦。
上述方法中，所述粒重为千粒重。
上述方法中，所述大于为在统计学上的大于。
上述方法中，所述“采用所述引物对进行HRM反应”的HRM反应体系由待测小麦品种的叶片的基因组DNA、所述引物甲、所述引物乙、LightCycler HRM Master Mix、MgCl2和水组成；其中LightCycler HRM Master Mix为Roche公司的产品。
12.5μL的所述HRM反应体系中，待测小麦品种的叶片的基因组DNA为60ng，所述引物甲的浓度为0.325μmol/L，所述引物乙的浓度为0.325μmol/L，MgCl2的浓度为1.5mol/L，LightCycler HRM Master Mix为6.25μL。
上述方法中，所述“采用所述引物对进行HRM反应，得到样本溶解曲线”的步骤具体如下：
(1)制备所述HRM反应体系，然后进行PCR扩增反应；
(2)取完成步骤(1)的PCR扩增产物，依次进行如下反应：95℃作用30s；降低到50℃作用30s；逐渐升高温度到95℃，期间每升高1℃收集荧光信号25次；迅速降温至37℃作用5s。以荧光强度变化为纵坐标，解链的温度为横坐标，得到特征性溶解曲线。所述步骤(1)中，进行PCR扩增反应的仪器可为Roche LightCycler 96。
所述步骤(1)中，进行PCR扩增反应的PCR程序可为：94℃变性5min；94℃变性30s，58℃退火29s，72℃延伸6s，45个循环；72℃延伸2min。
上述任一所述引物对、上述任一所述试剂盒或上述任一所述方法在小麦育种中的应用也属于本发明的保护范围。
实验证明，采用本发明提供的引物对可鉴定或辅助鉴定具有不同千粒重的小麦，在小麦育种中具有重要的应用价值。
附图说明
图1为特征性溶解曲线。
图2为特征性溶解曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
小麦核心种质就是用最小的小麦种质数量和遗传重复，最大程度地代表了整个小麦种质资源的多样性，而小麦微核心种质则是从小麦核心种质中进一步选择一个核心子集，也即小麦核心种质的核心种质，使用更小的种质资源代表了整个种质库的遗传多样性。我国共有23090份小麦种质资源，针对这些小麦种子资源构建了1160份的小麦核心种质，以5.0％的样本量代表了小麦种质资源90.1％的遗传多样性。进一步从1160份的小麦核心种质中筛选出表1所示的262个种质材料，作为我国的小麦微核心种质。262个小麦品种的冬春性和产地见表1。表1中所示的262个小麦品种均记载与如下文献中：郝晨阳等2008，我国普通小麦核心种质的构建及遗传多样性分析，科学通报，2008，53(8)，908-915。
LightCycler HRM Master Mix和Roche LightCycler 96仪器均为Roche公司产品。
实施例1、测定不同小麦品种的性状
1、小麦籽粒的获得
2013～2014年，将262个小麦品种的种子分别种植于中国农业科学院试验基地(位于北京市)，获得不同小麦品种的小麦籽粒。
2013～2014年，将262个小麦品种的种子分别种植于洛阳农林科学院试验基地(位于河南省洛阳市)，获得不同小麦品种的小麦籽粒。
2014～2015年，将262个小麦品种的种子分别种植于西北农林科技大学试验基地(位于陕西省杨凌示范区)，获得不同小麦品种的小麦籽粒。
2、测量不同小麦品种的小麦籽粒的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重
A、采用手工测量法测量种植于中国农业科学院试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长、粒宽和千粒重
(1)随机取种植于中国农业科学院试验基地的小麦品种的小麦籽粒100粒，计算粒长和粒宽：
粒长：根据长度方向进行紧密排列，记录100粒籽粒的总粒长，取平均值；
粒宽：根据宽度方向进行紧密排列，记录100粒籽粒的总粒宽，取平均值。
每个小麦品种需重复三次，三次结果取平均值，得到种植于中国农业科学院试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长和粒宽。
(2)随机取种植于中国农业科学院试验基地的小麦品种的小麦籽粒200粒，称重并计算千粒重。
每个小麦品种需重复三次，三次结果取平均值，得到种植于中国农业科学院试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的千粒重。
B、采用手工测量法测量种植于洛阳农林科学院试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长、粒宽和千粒重
按照步骤A的方法，将中国农业科学院试验基地替换为洛阳农林科学院试验基地，其它步骤均不变，获得种植于洛阳农林科学院试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长、粒宽和千粒重。
C、采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量种植于西北农林科技大学试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长、粒宽和千粒重
粒长：随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦籽粒100粒，采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量粒长，取平均值；
粒宽：随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦籽粒100粒，采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪测量粒宽，取平均值；
千粒重：随机取种植于西北农林科技大学试验基地的小麦品种的小麦籽粒200粒，采用万深SC-G自动考种分析及千粒重仪称重，并计算千粒重。
每个小麦品种需重复三次，三次结果取平均值，获得种植于西北农林科技大学试验基地的不同小麦品种的小麦籽粒的粒长、粒宽和千粒重。
D、不同小麦品种的小麦籽粒的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重的获得
(1)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦籽粒的粒长、种植于洛阳农林科学院试验基地的小麦籽粒的粒长和种植于西北农林科技大学试验基地的小麦籽粒的粒长取平均值，得到该小麦品种的平均粒长。
(2)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦籽粒的粒宽、种植于洛阳农林科学院试验基地的小麦籽粒的粒宽和种植于西北农林科技大学试验基地的小麦籽粒的粒宽取平均值，得到该小麦品种的平均粒宽。
(3)将同一小麦品种的种植于中国农业科学院试验基地的小麦籽粒的千粒重、种植于洛阳农林科学院试验基地的小麦籽粒的千粒重和种植于西北农林科技大学试验基地的小麦籽粒的千粒重取平均值，得到该小麦品种的平均千粒重。
不同小麦品种的平均粒长、平均粒宽和平均千粒重的测量结果见表1。
表1
Figure BDA0001084133530000061
Figure BDA0001084133530000071
Figure BDA0001084133530000091
Figure BDA0001084133530000101
Figure BDA0001084133530000121
实施例2、特征性溶解曲线与小麦籽粒性状的关联分析
一、引物对的制备
由宝生物工程(大连)有限公司合成引物甲和引物乙，引物甲的核苷酸序列为：5’-TGTGGTGATGAGTTCATGGTTAA-3’(序列表中序列1所示)，引物乙的核苷酸序列为：5’-ACGTCGGCACCCCTCA-3’(序列表中序列2所示)。引物甲和引物乙的纯化级别均为HPLC。
引物对由引物甲和引物乙组成。
二、基因分型的方法
1、基因组DNA的提取
提取待测小麦的叶片的基因组DNA。待测小麦为表1中的262个小麦品种。
2、制备HRM反应体系
HRM反应体系(12.5μL)由待测小麦品种的叶片的基因组DNA(60ng)、引物甲、引物乙、6.25μL LightCycler HRM Master Mix、MgCl2和水组成；其中引物甲的浓度为0.375μmol/L，引物乙的浓度为0.375μmol/L，MgCl2的浓度为1.5mol/L。
3、HRM反应
(1)取步骤2制备的反应体系，置于Roche LightCycler 96仪器，进行PCR扩增反应，PCR程序为：94℃变性5min；94℃变性30s，56℃退火29s，72℃延伸6s，45个循环；72℃延伸2min。
(2)完成步骤(1)后，进行如下反应：首先95℃作用30s(目的为与荧光染料结合)；然后降低到50℃作用30s(目的为使解旋的DNA单链再重新结合为双链结构)；再然后逐渐升高温度到95℃(目的为解链)，期间每升高1℃收集荧光信号25次；最后迅速降温至37℃作用5s。以荧光强度变化为纵坐标，解链的温度为横坐标，得到特征性溶解曲线。采用IBM SPSSStatistics 22软件分析特征性溶解曲线。
部分实验结果见图1(a为碧蚂4号，b为赤壳)结果表明，待测小麦品种进行HRM反应获得的特征性溶解曲线分为a型和b型两种。
根据HRM反应的特征性溶解曲线结果，得出如下结论：以待测小麦的基因组DNA为模板，用引物甲和引物乙组成的特异引物对进行HRM反应，得到特征性溶解曲线，之后进行如下评判：如果所述特征性溶解曲线呈现b型，则所述待测小麦的基因型为A；如果所述特征性溶解曲线呈现a型，则所述待测小麦的基因型为B。
按照上述方法对262个小麦品种的基因型进行分型，实验结果见表1和图2(a为基因型为B的待测小麦，b为基因型为A的待测小麦)。结果表明，186个小麦品种的基因型为A，76个小麦品种的基因型为B。
三、特征性溶解曲线与小麦相关性状的关联分析
对基因型A和基因型B两种类型小麦籽粒的千粒重、粒长和粒宽进行统计，结果见表2。结果表明，基因型A的小麦品种的千粒重显著高于基因型B的小麦品种(P<0.05)，而基因型A的小麦品种的粒宽和基因型B的小麦品种的粒宽无显著差异，基因型A的小麦品种的粒长和基因型B的小麦品种的粒宽也无显著差异。
表2
Figure IDA0001084133610000011

Claims (1)

1.一种鉴定或辅助鉴定具有不同粒重小麦的方法，包括如下步骤：
1）以待测小麦的基因组DNA为模板，采用引物对进行HRM反应，得到样本溶解曲线；以标准小麦甲的基因组DNA为模板，采用引物对进行HRM反应，得到b型溶解曲线；以标准小麦乙的基因组DNA为模板，采用引物对进行HRM反应，得到a型溶解曲线；所述引物对由SEQ IDNO.1所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子组成；所述引物甲和所述引物乙的摩尔比为1:1；
所述标准小麦甲为京红5号、内麦11、晋麦3号、梁来友白皮小麦、毕红穗、小白麦、大白皮、小红皮、定兴寨、红粒当年老、春小麦、大红麦、陕西白麦、牛趾甲、麻花板、红金麦、白齐麦、小口红、兰花麦、带芒红麦、涿鹿冬麦、红麦、红老麦、有芒白稃、红皮冬麦、磐石无芒、有芒白稃、白秋麦、老麦、中优9507、吕旱328、延安11、农大183、线麦、江西早、红花早、江东门、大黄皮、崇阳红麦1、早五天、六柱头、蝉不知、猪毛元字头、水里站、黄水白、落青、早小麦、望水白、婺源麦、车锏子、和尚麦、糯麦、芒小麦、三颗寸、泡子麦、骊英5号、安徽3号、浙麦1号、洋麦、火球、大青芒、新曙光1号、新曙光6号、吉春1016、郑引4号、南大2419、Orofen、水原86、Triumph、Lovrin 10、敖德萨3号、Tanori、潮安小麦、赤壳、松蕊麦、深根、抗锈10号、台中23、晋麦2418、敌锈早、泾阳60、石特14、复壮30、丰产3号、百农3217、西农6028、冀麦2号、内乡5号、郑州6号、咸农39、济南17、小偃6号、陕农7859、矮丰3号、鲁麦1号、莱州953、郑州741、白芒麦、黄瓜先、半截忙、老来瞎、蝼蛄腚、红狗豆、白火麦、三月黄、红抢场、蚰子麦、平原50、白扁穗、白齐麦、白秃子头、有芒扫谷旦、阜阳红、抢场麦、火麦、霉前五、碱麦、三月黄、小佛手、红和尚头、大口麦、白条鱼、白芒麦、大玉花、府麦、老齐麦、紫秸红、大粒半芒、六月黄、葛家乡、葛尔红麦、大春白四棱麦、白朗灰麦、扎红、边巴春麦-6、白芒小麦、乌江卓、木宗卓嘎、藏冬4号、一枝麦、大白麦、尕老汉、火里炎、红秃子、白大头、金黄麦、大白麦、白齐头、白蚂蚱、老秃头、高原506、宁春4号、金麦4号、蜀万8号、繁6、毕麦26、去麦34、兴义4号、凤麦11、同家坝小麦、红花麦、白麦子、成都光头、换香果、小三月黄、红须麦、紫皮、白芒麦、鱼鳅麦、洋麦、猪屎麦、扁头光壳麦、长芒石扁头、猪狗麦、滇西红壳洋麦、白冬麦、红春麦、春麦、无芒春麦、红金包银、喀什白皮、托克逊1号、中国春、郑麦9023或偃展1号；
所述标准小麦乙为红皮小麦、火燎麦、假红麦、小白芒、晋麦8号、丰抗2号、长治6406、北京8号、原冬822、农大311、农大139、铭贤169、东方红3号、兰溪早小麦、华东6号、苏麦3号、扬麦158、恩麦4号、鄂麦6号、白油麦、敦化春麦、光头、新克旱9号、克丰3号、克涝4号、东农101、赤小麦、Funo、KaBka3、农林10号、钱交麦、Early Premium、Villa Glori、Atlas66、甘肃96、上林小麦、碧蚂1号、碧蚂4号、石家庄54、平阳27、泰山1号、济南2号、蚰包、烟农15、石家庄407、温麦6号、西山扁穗、蚂蚱麦、秃芒麦、出山豹、本地黄花麦、墨脱小麦、康定小麦、日喀则54号、日喀则8号、山麦、红芒麦、甘麦8号、青春28、互助红、定西24、会宁10号、贵农10号、酱麦、白花麦、汉中白、梭条红麦、红芒子、阳麦、红冬麦、红春麦、新冬2号或喀什1号；
2）比较样本溶解曲线、a型溶解曲线和b型溶解曲线，如果样本溶解曲线与a型溶解曲线一致、待测小麦为B基因型，如果样本溶解曲线与b型溶解曲线一致、待测小麦为A基因型；然后进行如下的判断：
A基因型的待测小麦的粒重大于B基因型的待测小麦。
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CN101768643A (zh) * 2010-03-17 2010-07-07 中国农业科学院作物科学研究所 辅助鉴定具有不同千粒重性状小麦的方法及其专用引物
CN103060319A (zh) * 2013-01-17 2013-04-24 中国农业科学院作物科学研究所 用于鉴定小麦千粒重的引物对以及相关分子标记
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