CN101766120A

CN101766120A - 细胞培养繁殖树莓的方法

Info

Publication number: CN101766120A
Application number: CN200810246902A
Authority: CN
Inventors: 冯连春; 韩德昌; 孙维厚; 杨家鹤; 高兴安
Original assignee: SHENYANG KEAO RENEWABLE ENERGY INSTITUTE
Current assignee: SHENYANG KEAO RENEWABLE ENERGY INSTITUTE
Priority date: 2008-12-30
Filing date: 2008-12-30
Publication date: 2010-07-07

Abstract

一种细胞培养繁殖树莓的方法，其特点是选用树莓幼嫩茎段、茎尖作外植体，消毒后剪成带腋芽茎段，接种到灭过菌的诱导培养基上培养长出侧芽，并进行继代培养；将侧芽切成小块。接种在试管中的培养基上培养直至长出嫩叶；将芽苗从试管中取出，接种在培养基上进行生根培养，直至芽体基部长出不定根，敞开培养瓶锻炼后即移栽到苗床上；准备好基质的苗床，将试管苗从培养瓶中取出，放在温水中将培养基洗掉，最后将试管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床；移栽初期遮荫保湿，在苗床上培养天后即可转入营养钵内，直至移入大田。本发明利用组培技术快速繁育树莓苗木，加快我国的荒漠化治理与生态恢复，促进地区经济建设发展。

Description

细胞培养繁殖树莓的方法

技术领域

本发明涉及一种灌木类经济植物的组织培养，特别是涉及一种细胞培养繁殖树莓的方法，属于生物工程和灌木类经济植物的快速繁育技术。

背景技术

树莓是一种蔷薇科悬钩子属多年生落叶小灌木，果实富含氨基丁酸、维生素、水杨酸、抗氧化物歧化酶鞣酸等防病抗癌药素，具有降血脂、解热镇痛、养筋活血等功效，具有很高的经济价值。目前，我国已有树莓栽培面积约3000hm²，据预测，我国树莓的发展空间约为50000hm²。由于现有繁育苗木方式落后，苗木供不应求已经成为目前发展树莓生产的主要限制因素。我国生态环境问题日益突出，荒漠化面积很大(如科尔沁沙地等)。树莓对干旱和贫瘠的耐受性强，适应性广。在科尔沁沙地大力发展树莓不但对我国生态保护和恢复具有着重要意义，还能扩大当地的就业，促进人们增收致富。扩繁推广树莓既具有较高的经济效益，又有重大的社会和生态效益。

发明内容

本发明的目的就在于克服现有技术存在的上述不足，给出一种细胞培养繁殖树莓的方法，这种细胞培养繁殖树莓的方法针对树莓繁育苗木方式落后、苗木供不应求这一现实状况，采用组培技术建设大规模树莓苗木基地快速繁育树莓，加快我国的荒漠化治理与生态恢复，促进地区经济建设发展。

本发明给出的技术解决方案是：这种细胞培养繁殖树莓的方法，其特点是

选用树莓幼嫩茎段、茎尖作外植体(以春季为佳)，剪去叶片冲洗，然后在无菌室用酒精消毒，再用氯化汞溶液浸泡，用无菌水冲洗，剪成带腋芽茎段，接种到灭过菌的诱导培养基上，然后在26±1℃，光照强度1900lx，光照时间12h/d条件下培养，8～12天后即可长出侧芽，当侧芽长至2～3cm时，可进行继代培养。

将侧芽切成小块，接种在试管中的培养基上，在温度26±1℃下培养，光照强度2000lx，光照时间12h/d。22～28天后长出4～7片嫩叶；

将经过几次继代培养之后的芽苗从试管中取出，接种在培养瓶中的培养基上进行生根培养(继代次数越多越易生根)，生根培养温度为26±1℃，暗培养+光照培养，光照时间14h/d，光照强度1800lx，15～20天后，芽体基部就长出4～6条不定根，敞开培养瓶，在培养室内锻炼4～6天后，即可移栽到苗床上；

在网室(或大棚)中准备铺好基质的苗床。将试管苗从培养瓶中取出，放在温水(18～22℃)中，将附着在根上的培养基清洗掉(不得伤苗)，再用温水清洗，将培养基彻底洗掉，最后将试管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床；

移栽初期，适当遮荫保湿(湿度在85～95％)；在苗床上培养22～28天后即可转入营养钵内，28～32天后，即可移入大田。

注：在移栽入苗床前的所有接种操作均在超净工作台上完成。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：树莓生长期短，经济效益高；易于管理，病害较少；栽培当年即可坐果，第二年即有经济产量，3～4年就进入盛果期，经济寿命可达15～25年，亩产可达1000kg，最低市价5元/kg，即直接经济效益5000元/亩/年。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的具体技术方案做进一步说明：

选用树莓幼嫩茎段、茎尖作外植体(以春季为佳)，剪去叶片，放入洗衣粉水(浓度约5％)浸泡5min后，在自来水下冲洗30～60min(水流不宜过大)，然后在无菌室先用70～75％酒精消毒10s，再用0.1％的氯化汞溶液浸泡7～10min，用无菌水冲洗4～5次，剪成0.5～1.5cm的带腋芽茎段，接种到灭过菌的诱导培养基(MS_改良+6-BA 2mg/L+NAA 0.45mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L)上，然后在26±1℃，光照强度1900lx，光照时间12h/d条件下培养。约10天后即可长出侧芽，当侧芽长至2～3cm时，可进行继代培养。

将侧芽切成约1mm的小块，接种在试管中的培养基(2MS_改良+6-BA 2mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L)上，在温度26±1℃下培养，光照强度2000lx，光照时间12h/d。约25天后，可长出4～7片嫩叶。

将经过几次继代培养之后的芽苗从试管中取出，接种在培养瓶中的培养基(MS_改良+IBA0.6mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L)上进行生根培养(继代次数越多越易生根)。生根培养温度为26±1℃，起初暗培养4～5天，然后光照培养，光照时间14h/d，光照强度1800lx。15～20天后，芽体基部就长出4～6条不定根。敞开培养瓶，在培养室内锻炼4～6天后，即可移栽到苗床上。

在网室(或大棚)中准备铺好基质的苗床。将试管苗从培养瓶中取出，放在温水(约20℃)中，将附着在根上的培养基清洗掉(不得伤苗)，再用约20℃的温水清洗，将培养基彻底洗掉。最后将试管苗蘸60mg/L的IBA溶液后移栽入苗床。

移栽初期，适当遮荫保湿(湿在90％左右)；在苗床上培养约25天后即可转入营养钵内，约30天后，即可移入大田。

本发明所用的培养基(质)的配制为：

一、对MS培养基的改良(即MS_改良)：

1、大量元素(母液I)：

NH₄NO₃，16500；KNO₃，7600；CaCl₂·2H2O，2200；MgSO₄·7H2O，3700；KH₂PO₄，1700。(单位：mg/L)

2、微量元素(母液II)：

KI，85；H₃BO₃，620；MnSO₄·4H₂O，2230；ZnSO₄·7H₂O，860；Na₂MoO₄·2H₂O，25；CuSO₄·5H₂O，3；CoCl₂·6H₂O，2。(单位：mg/L)

3、铁盐(母液III)：

FeSO₄·7H₂O，280；Na₂-EDTA·2H₂O，3730。(单位：mg/L)

4、有机成分(母液IV)：

肌醇15000；烟酸，100；维生素B₆，100；维生素B₁，100；维生素C，100；甘氨酸，400。(单位：mg/L)

以上四种母液均需要单独配制，母液I(大量元素)为20倍浓缩液，母液II、III、IV均为200倍浓缩液。

二、培养基配制的操作程序：

1、加琼脂和无离子水至定容量的70％左右，加热使琼脂溶解；

2、琼脂溶解后，加入培养基母液(四种)、激素、蔗糖等，稍加热使糖溶解；

3、蔗糖溶解后，加无离子水定容；充分搅动，摇匀；

4、用1mol/L NaOH溶液调pH值至6.3(边搅拌边滴加NaOH溶液)；

5、将培养基分装入培养瓶后灭菌。

三、移栽基质：河沙∶腐殖土∶珍珠岩＝3∶3∶2(干重之比)

Claims

1.一种细胞培养繁殖树莓的方法，其特征在于

选用树莓幼嫩茎段、茎尖作外植体，剪去叶片冲洗，在无菌室用酒精消毒，再用氯化汞溶液浸泡，用无菌水冲洗，剪成带腋芽茎段，接种到灭过菌的诱导培养基上，然后在26±1℃，光照强度1900lx，光照时间12h/d条件下培养，8～12天后长出侧芽，当侧芽长至2～3cm时进行继代培养；

将经过几次继代培养之后的芽苗从试管中取出，接种在培养瓶中的培养基上进行生根培养，生根培养温度为26±1℃，暗培养+光照培养，光照时间14h/d，光照强度1800lx，15～20天后芽体基部长出4～6条不定根，敞开培养瓶，在培养室内锻炼4～6天后移栽到苗床上；

在网室或大棚中准备铺好基质的苗床。将试管苗从培养瓶中取出，放在温水(18～22℃)中，将附着在根上的培养基清洗掉，再用温水将培养基彻底洗掉，最后将试管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床；

移栽初期，遮荫保湿(湿度在85～95％)；在苗床上培养22～28天后转入营养钵内，28～32天后移入大田。