CN101757609B - 控制胸腺肽α1微球中有机溶剂残留的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法，它是将制备得到的胸腺肽α1 PLGA微球乳液或复乳在温度15～42℃，转速20～3000转/分钟的条件下进行搅拌。本发明控制胸腺肽α1微球中有机溶剂残留的方法，高效可控、工艺稳定、安全合理，能有效控制二氯甲烷等有机溶剂的残留问题，同时能保持微球完整形态。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂的制备工艺，具体涉及控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留量的方法，属于药物领域。
背景技术
胸腺肽α1(thymosin alphal，简称T α1)是一种具有免疫功能的多肽，临床上多用于免疫增强或治疗病毒性肝炎，其氨基酸序列为：
A C-Ser-A sp-A 1α-A 1α-V α1-A sp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Vαl-Vαl-Glu-Glu-Alα-Glu-Asn_-OH
分子式：C129H215N33O55
分子量：3108.37
现有胸腺肽α1制剂由于半衰期短治疗时间长，需要频繁给药，具有病人顺应性较差而且生物利用度低等缺点。目前采用微球制剂通过将胸腺肽Tα1包裹在球体内，制备成缓释微球，缓慢、可控的释放胸腺肽Tα1，使患者可以通过注射一次Tα1微球制剂，达到较长期的治疗目的。
注射用缓释微球常采用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为骨架材料，包裹胸腺肽Tα1，在制备工艺过程中，需使用有机溶剂，由于有机溶剂对人体、环境都有一定危害，研究证实它们在人体内的积累容易诱发和加速多种疾病的发生和发展，为保障药物质量和用药安全，尤其针对注射用制剂，必须对有机溶剂残留进行控制。
现有关于胸腺肽α1 PLGA微球的报道，通过后期的直接冻干干燥或常温搅拌挥发方法除去有机溶剂。如朱艳等(胸腺肽α1缓释注射微球的研究，药学学报，vol(42)2：211～215)报道：将制备Tα1乳化制成的初乳、复乳后立即用蒸馏水稀释，低速搅拌(400 r/min-)4h，离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24h制得微球。ZL02136181.9公开了胸腺肽α1微球制剂的制备方法，采用常温搅拌使有机溶剂挥干。
由于有机溶剂被PLGA包裹或与PLGA粘连或吸附，采用上述方法不能完全从微球中挥出，球体中二氯甲烷等有机溶剂的残留量仍然保持在一个相对较高的水平，无法再进行进一步的降低。
也有文献报道通过升高温度的方式除去有机溶剂，如何熠等(胸腺肽聚乳酸微球的制备和释药性能研究，中国医药工业杂志，2006，vol37(3)：178～180)报道胸腺肽α1 PLA微球，45℃搅拌微球，挥发二氯甲烷，洗涤、过滤后，60℃干燥过夜；栾瀚森(减压加热法去除纳曲酮微球中残留二氯甲烷，中国医药工业杂志，2005，vol36(9)：545～547)报道：取经冷冻干燥后得到的纳曲酮PLGA微球在减压至100pa，50～65℃的高温下进行减压升温干燥，仅在65℃、100pa的条件下经48小时，微球中有机溶剂残留量可以降至0.04％，但微球突释现象严重；在减压至100pa，50～60℃干燥24～48小时和100pa，65℃干燥24小时后二氯甲烷的残留量仍维持在0.17～1.1％之间，不仅不能保证微球的质量，也不能有效的降低有机溶剂的含量。上述文献报道的温度均在45℃以上，由于PLGA的玻璃态转化温度一般为45～55℃；微量二氯甲烷等小分子有机溶剂与PLGA混合后，PLGA的玻璃态转化温度会改变或降低(郑巧东等，药物控制释放研究及运用，浙江化工，2003，vol(34)5：26～29)。在微球制备工艺中，如果温度接近或高于PLGA的玻璃转化温度，PLGA弹性增加，在微球发生接触和碰撞的时候，微球易发生融合或球体破裂并导致胸腺肽α1渗漏或流出；同时由于复乳的温度升高，微球球体存在形成孔道，经碰撞多个微球的孔道发生融合的趋势，致使微球发生粘连、融合或破裂，使该微球制剂突释严重或丧失缓控释的能效，不能作为药用。因此，仅通过升高温度并不能降低有机溶剂的残留，也不能保证微球制剂的质量。
因此，需要一种行之有效的降低胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留，同时能保持微球完整形态的方法。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法。
本发明提供了一种控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法，它是将制备得到的胸腺肽α1 PLGA微球乳液或复乳在温度15～42℃，转速20～3000转/分钟的条件下进行搅拌。
其中，所述的温度为30.5-39℃，转速300～2500转/分钟，该方法称为升温挥发法，可优选的，搅拌为1-24小时。进一步优选地，温度为33～39℃，转速为500～1500转/分钟，搅拌2～10小时。更进一步优选地，温度为34～36℃，转速为600～800转/分钟，搅拌5～6小时。
其中，将制备得到的胸腺肽α1 PLGA微球乳液或复乳在真空度-0.01～-0.1MP、温度15～40℃，转速20～1000转/分钟的条件，该方法称为减压挥发法。进一步优选地，所述的真空度-0.035～-0.096MP、温度26～35℃，转速50～800转/分钟的条件，搅拌2-18小时。更进一步优选地，所述的真空度-0.08～-0.095MP、温度26～34℃，转速50～400转/分钟的条件下，搅拌3～18小时。更进一步优选地，所述的真空度为-0.08～-0.095MP，温度为26-34℃，转速为120-400转/分钟的条件下，搅拌3～9小时。
完成上述步骤后，均按常规方法过滤、洗涤、冷冻干燥。
本发明控制胸腺肽α1微球中有机溶剂残留的方法，高效可控、工艺稳定、安全合理，能有效控制二氯甲烷等有机溶剂的残留问题，同时能保持微球完整形态。
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
具体实施方式
本发明所述的残留在胸腺肽α1 PLGA微球中的有机溶剂种类包括但不限于：附表1中所列出的有机溶剂，以及三氯甲烷、甲酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、环氧乙烷、一些新兴绿色溶剂等。
附表1 药品中常用有机溶剂
①通常含有60％间二甲苯，14％对二甲苯，9％邻二甲苯和17％乙苯。本发明所述的检测胸腺肽α1微球中有机溶剂残留的测定方法是指常规使用的有机溶剂残留的检测方法。可参照气相色谱法(中国药典2005版附录V E)测定，如下：
1.色谱柱的选择
1.1填充柱固定相 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互代使用。
(1)非极性色谱柱 固定液为100％的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
(2)极性色谱柱 固定液为聚乙二醇(PEG-20M)的毛细管柱。
(3)中极性色谱柱 固定液为(35％)二苯基-(65％)甲基聚硅氧烷，(50％)二苯基-(50％)二甲基聚硅氧烷，(35％)二苯基-(65％)二甲基亚芳基聚硅氧烷，(14％)氰丙基苯基-(86％)二甲基聚硅氧烷，(6％)氰丙基苯基-(94％)二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
(4)弱极性色谱柱 固定液为(5％)苯基-(95％)甲基聚硅氧烷，(5％)二苯基-(95％)二甲基亚芳基硅氧烷共聚物的毛细管柱。
1.2填充柱的选择
可以选择直径为0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。
2.测定方法的选择
可采用毛细管柱顶空进样等温法
色谱条件：柱温一般为40～100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟1.0～2.0ml；顶空瓶加热温度为70～85℃，顶空瓶加热时间30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，温度为250℃。
测定方法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。
此外，关于系统适用性、顶空条件的选择、检测器的选择、内标的选择等可参照中国药典附录中“残留溶剂测定法”。另可据需要进行专属性、检测限、定量限、线性、准确度、耐用性等方法学方面的验证。
以下试验分别采用直接冻干法、常温挥发法、本发明升温挥发法、本发明减压挥发法进行有机溶剂残留的控制并比较每种方法下的有机溶剂残留量。
1、考察样品的制备
处方一(释放时间4周)
Tal 1.0g
PLGA(0.15～0.25dl/g)(50/50) 36.0g
选用的有机溶剂：二氯甲烷
制备工艺：在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到150ml二氯甲烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至2000-2800转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含3％PVA，5％NaCl的水溶液800ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至500-1000转/分，加入初乳，搅拌2分钟，再加入相同温度的含3％PVA，5％NaCl的水溶液200ml，得复乳(W/O/W)，保温放置。
处方二
Tal 1.0g
PLGA(0.70～0.90dl/g)(25/75) 32.0g
选用的有机溶剂：戊烷
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到100ml戊烷中，使之完全溶解，得油相，备用；在10-25℃下，将乳化机转速调至2500-3200转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；将含2％PVA，3％NaCl的水溶液1600ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至500-1000转/分，加入初乳，搅拌2分钟，再加入相同温度的含2％PVA，3％NaCl的水溶液400ml，得复乳(O/W/O)，保温放置。
处方三
Tal 1.0g
PLGA(0.55～0.75dl/g) (75/25) 27.0g
选用的有机溶剂：甲酸乙酯
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到200ml甲酸乙酯中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至3200-3800转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液2500ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，得W/O/W型的微球乳液，保温放置。
2、分别采用直接冻干法、常温挥发法、升温挥发法、减压挥发法对上述三个处方制备得到的复乳进行进一步的制备，并检测终产品微球中有机溶剂的残留量。
2.1直接冻干法
分别取三种处方制得的复乳或微球乳液，在500～1000转/分的条件下搅拌3小时，然后降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥(添加常规保护剂、支撑剂等)，得微球。取样品，按照气相色谱法(中国药典2005版附录V E)测定有机溶剂残留量。为考察冷冻干燥时间、冷冻干燥后升温温度与升温后继续干燥时间对有机溶剂残留量的影响，分别选取不同的时间与温度进行考察，考察参数与结果见下表。
附表2有机溶剂残留量测定结果
| 批号 | 冷冻干燥时间(h) | 冻干后升温温度(℃) | 升温后干燥时间(h) | 有机溶剂残留量(％) |
| 处方一 | 24 | 20 | 12 | 3.1 |
| 处方二 | 24 | 25 | 12 | 4.2 |
| 处方三 | 24 | 35 | 12 | 3.4 |
| 处方一 | 36 | 20 | 24 | 3.0 |
| 处方二 | 36 | 25 | 24 | 2.7 |
| 处方三 | 36 | 30 | 24 | 3.6 |
| 处方一 | 48 | 20 | 36 | 3.0 |
| 处方二 | 48 | 25 | 36 | 4.1 |
| 处方三 | 48 | 35 | 36 | 2.9 |
本实验针对冻干时间、升温温度及升温后的干燥时间进行考察，在冻干时间延长至远超于普通冻干时间(冻干时间一般在5～12小时之间，少数达到24小时)至48小时后，可以除去一部分的有机溶剂，但残留在微球中的有机溶剂仍然维持在一个较高的水平。冻干后的升温温度与升温后的干燥时间对有机溶剂残留量无明显影响。以上长时间的冻干、升温、干燥，会消耗大量的能源和人力物力，使生产成本大幅增加能源消耗巨大。
2.2.2常温挥发法
分别取三种处方制得的复乳或微球乳液，在常温常压条件下500～1000转/分的条件下持续搅拌，随后降温至20℃以下过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥，得微球。取样品，按照气相色谱法(中国药典2005版附录V E)测定有机溶剂残留量。为考察搅拌速度、搅拌时间对有机溶剂残留量的影响，分别选取不同的速度与时间进行考察，考察参数与结果见下表。
附表3有机溶剂残留量测定结果
| 批号 | 搅拌速度(r/min) | 搅拌时间(h) | 有机溶剂残留量(％) |
| 处方一 | 500 | 5 | 3.1 |
| 处方二 | 500 | 10 | 2.8 |
| 处方三 | 500 | 48 | 2.6 |
| 处方一 | 750 | 5 | 2.4 |
| 处方二 | 750 | 10 | 2.0 |
| 处方三 | 750 | 36 | 2.1 |
| 处方一 | 1000 | 5 | 2.2 |
| 处方二 | 1000 | 10 | 1.8 |
| 处方三 | 1000 | 24 | 1.9 |
采取常温挥发法，通过加大转速、延长搅拌时间，可以挥出部分的有机溶剂，减少微球中有机溶剂的残留量，但无法实现进一步的降低。
2.2.3升温挥发法
分别取三种处方制得的复乳或微球乳液，在500～1000转/分的条件下搅拌3小时，然后升温至30.5-42℃，在500～1000转/分的条件下继续搅拌，然后降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥，得微球。取样品，按照气相色谱法(中国药典2005版附录V E)测定有机溶剂残留量。为考察搅拌速度、升高温度、搅拌时间对有机溶剂残留量的影响，分别选取不同的速度与时间进行考察，考察参数与结果见下表。
附表4有机溶剂残留量测定结果
| 批号 | 搅拌速度(r/min) | 搅拌时间(h) | 升高温度(℃) | 有机溶剂残留量(％) |
| 处方一 | 500 | 2 | 30 | 0.052 |
| 处方二 | 500 | 2 | 35 | 0.050 |
| 处方三 | 500 | 2 | 40 | 0.049 |
| 处方一 | 750 | 5 | 30 | 0.048 |
| 处方二 | 750 | 5 | 35 | 0.045 |
| 处方三 | 750 | 5 | 40 | 0.043 |
| 处方一 | 1000 | 8 | 30 | 0.043 |
| 处方二 | 1000 | 8 | 35 | 0.041 |
| 处方三 | 1000 | 8 | 42 | 0.039 |
试验结果表明，通过本发明温度范围内的升温和恒速搅拌，在直接冻干、常温挥发法的基础上通过本法可以进一步的降低有机溶剂的残留量，使其保持在一个相当低的限度内。对本法制得的微球进行扫描电镜观察，微球的形态保持良好，无破坏。
2.2.4减压挥发法
分别取三种处方制得的复乳或微球乳液，在500～1000转/分的条件下搅拌3小时，然后将样品转移至茄型瓶中，使用旋转蒸发器减压、控制温度以挥发有机溶剂，然后降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥，得微球。取样品，按照气相色谱法(中国药典2005版附录V E)测定有机溶剂残留量。为考察压强、旋转速度、挥发温度、挥发时间对有机溶剂残留量的影响，分别选取不同的速度与时间进行考察，考察参数与结果见下表。
附表5有机溶剂残留量测定结果
| 批号 | 旋转速度(r/min) | 旋转时间(h) | 压强(MP) | 挥发温度(℃) | 有机溶剂残留量(％) |
| 处方一 | 50 | 2 | 0.095 | 20 | 0.048 |
| 处方二 | 50 | 4 | 0.075 | 25 | 0.046 |
| 处方三 | 50 | 6 | 0.045 | 30 | 0.043 |
| 处方一 | 100 | 4 | 0.095 | 35 | 0.044 |
| 处方二 | 100 | 2 | 0.075 | 25 | 0.042 |
| 处方三 | 100 | 6 | 0.045 | 20 | 0.040 |
| 处方一 | 200 | 2 | 0.095 | 30 | 0.041 |
| 处方二 | 200 | 6 | 0.075 | 35 | 0.040 |
| 处方三 | 200 | 4 | 0.045 | 30 | 0.039 |
(真空度＝绝对大气压-一个标准大气压，上表的真空度范围是：-0.005～-0.055MP)
试验结果表明，通过控制真空度、温度、搅拌速度和搅拌时间在本发明的各参数范围内，可以大大降低微球中有机溶剂的残留量，使其保持在一个相当低的限度内。
该试验对三种处方制备的复乳分别采用了直接冻干法、常温搅拌挥发法除去溶液中的有机溶剂，并最终测定微球产品中的有机溶剂残留量。实验研究表明，通过强化冷冻干燥和常温搅拌挥发的各种影响因素，可以去除胸腺肽α1微球中的部分有机溶剂，但有机溶剂残留量始终维持在一个较高的范围内，无法进一步的降低，不利于直接供患者使用。
发明人意外发现，通过适当控制复乳的搅拌速度，升高复乳至特定温度，在一定时间内可以大大降低残留在微球中的有机溶剂，并能良好保持微球的形态与包封率、载药量等其他控制指标；即通过该特定工艺在有效控制有机溶剂残留的同时，微球制剂的其他性质不受影响。在该工艺的指导下，通过减压、控制复乳至特定温度，进行适当搅拌，也可达到相似的有益效果。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再进行进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的主题范围仅限于以下的实例凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1本发明控制胸腺肽α1PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.15～0.25dl/g)(50/50) 38.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到150ml二氯甲烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至2000-2800转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含3％PVA，5％NaCl的水溶液800ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至500-1000转/分，加入初乳，搅拌2分钟，再加入相同温度的含3％PVA，5％NaCl的水溶液200ml，得复乳(O/W/O)。在500～1000转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(36℃)、搅拌速度(800-转/分)、搅拌6h和减压挥发法：真空度(-0.095MPa)、温度(31℃)、转速(250转/分)、搅拌(8h)除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥12小时，得微球。微球四周释放完全，无突释现象。
实施例2本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.24～0.56dl/g)(50/50) 32.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到100ml甲酸乙酯中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至2500-3200转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，3％NaCl的水溶液1600ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至500-1000转/分，加入初乳，搅拌2分钟，再加入相同温度的含2％PVA，3％NaCl的水溶液400ml，得复乳(O/W/O)。在500～1000转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(37℃)、搅拌速度(900转/分)、搅拌(7h)和减压挥发法：真空度(-0.080MPa)、温度(26℃)、转速(400转/分)、搅拌9h除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥18小时，得微球。微球四周释放完全，无突释现象。
实施例3本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.55～0.75dl/g)(75/25) 27g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到200ml甲酸乙酯中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至3200-3800转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液2500ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，2％NaCl的水溶液400ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(39℃)、搅拌速度(1500转/分)，搅拌1h和减压挥发法：真空度(-0.085MPa)、温度(32℃)、转速(80转/分)、搅拌12h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥12小时，得微球。微球四周释放完全，无突释现象。
实施例4本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.55～0.75dl/g)(65/35) 38.5g
甘露醇 1.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal和甘露醇，加入到35mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到400ml正戊烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至3800-4300转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液3500ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，2％NaCl的水溶液1500ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(32℃)、搅拌速度(1800转/分)、搅拌2h和减压挥发法：真空度(-0.065MPa)、温度(35℃)、转速(800转/分)、搅拌2h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥24小时，得微球。微球三周释放完全，无突释现象。
实施例5本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.76～0.94dl/g)(25/75) 32.0g
PEG-6000 1.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal和PEG-6000，加入到40mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到280ml乙腈中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至4000-4500转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液4000ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，2％NaCl的水溶液2000ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(38℃)、搅拌速度(1200转/分)、搅拌3h和减压挥发法：真空度(-0.092MPa)、温度(33℃)、转速(300转/分)、搅拌6h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥12小时，得微球。微球两周释放完全，无突释现象。
实施例6本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.76～0.94dl/g)(50/50) 11.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal和甘露醇，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到280ml二氧六环中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至4000-4500转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，1.5％NaCl的水溶液3000ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，1.5％NaCl的水溶液1000ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(30.5℃)、搅拌速度(2000转/分)、时间1.5 h和减压挥发法：真空度(-0.035MPa)、温度(28℃)、转速(300转/分)、搅拌4h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥18小时，得微球。微球两周释放完全，无突释现象。
实施例7本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.76～0.94dl/g)(50/50) 22.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到450ml二氯甲烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至4000-4500转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液6000ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，2％NaCl的水溶液2000ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(34℃)、搅拌速度(600转/分)、搅拌(5h)和减压挥发法：真空度(-0.090MPa)、温度(27℃)、转速(120转/分)、时间(4h)除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥12小时，得微球。微球四周释放完全，无突释现象。
实施例8本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLGA(0.76～0.94dl/g)(50/50)30.0g
甘露醇 1.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到35mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLGA在常温下，加入到500ml二氯甲烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至4000-4500转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，初乳(O/W)，备用；
将含2％PVA，2％NaCl的水溶液6000ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含2％PVA，2％NaCl的水溶液2000ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(31℃)、搅拌速度(350转/分)、搅拌24h和减压挥发法：真空度(-0.091MPa)、温度(34℃)、转速(400转/分)、搅拌3h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥12小时，得微球。微球三周释放完全，无突释现象。
实施例9本发明控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法
Tal 1.0g
PLA(0.26～0.54dl/g) 59.0g
制备工艺
在常温下将处方量的Tal，加入到30mlpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，使其完全溶解，得水相，备用；
将处方量的PLA在常温下，加入到200ml二氯甲烷中，使之完全溶解，得油相，备用；
在10-25℃下，将乳化机转速调至3500-4000转/分，将水相注入油相中，乳化5-10分钟，得初乳(O/W)，备用；
将含3％PVA，5％NaCl的水溶液3500ml冷至10℃以下，将搅拌机转速调至600-1200转/分，加入初乳，搅拌5分钟，再加入相同温度的含3％PVA，5％NaCl的水溶液1500ml，得复乳(W/O/W)。在600～1200转/分的条件下搅拌3小时，将样品分为两份，分别采用升温挥发法：温度(33℃)、搅拌速度(500转/分)、搅拌10h和减压挥发法：真空度(-0.096MPa)、温度(35℃)、转速(50转/分)、搅拌18h，除去有机溶剂。然后均降温至20℃以下，过100目筛，抽滤、抽干，用蒸馏水洗涤2次，抽干，冷冻干燥24小时，得微球。微球十二周释放完全，无突释现象。
各实施例的最终产品有机溶剂残留量、包封率、粒径数据如下：
通过上述实施例，可知，其中，升温挥发法的条件为：温度30.5-42℃，转速350～2000转/分钟的条件下，搅拌1-24小时。减压挥发法的条件为：真空度-0.005--0.096MP、温度26～35℃，转速50～800转/分钟的条件，搅拌时间为：2-18小时。在本发明工艺条件，均能将有机溶剂的残留量控制低于0.06％，且不影响胸腺肽α1 PLGA微球的包封率和粒径，此外微球释放完整，无突释现象。
Claims (3)
1.一种控制胸腺肽α1 PLGA微球中有机溶剂残留的方法，其特征在于：
（1）将制备得到的胸腺肽α1 PLGA微球乳液或复乳在常温常压500~1200转/分的条件下搅拌3小时；
（2）在温度为30.5-39℃，转速为300~2500转/分钟的条件下，搅拌1~24小时。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中温度为33~39℃，转速为500~1500转/分钟，搅拌2~10小时。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中温度为34~36℃，转速为600~800转/分钟，搅拌5~6小时。
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