CN101701031A - 一种多肽缩合剂及其合成方法 - Google Patents
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Abstract
一种多肽缩合剂，它有如下结构通式：其中R1-基团可以是氢、给电子基团或吸电子基团，其可以在6-位，也可以在7-位，R2-可以是甲基或乙基。本发明的多肽缩合剂对多肽缩合的效果超过了DEPBT，同样条件下的多肽缩合产率比DEPBT等常见多肽缩合剂高出10～50％，缩合反应操作简单。本发明公开了其制法。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽缩合剂及其合成方法，具体地说涉及一种基于3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)的新型多肽缩合剂的合成。
背景技术
多肽化合物是重要的生命活性物质，在生物医药领域有广泛的产业应用。多肽合成的关键试剂之一是用于构造多肽酰胺键的缩合试剂。目前已报道的多肽缩合试剂种类非常繁多，从分子结构的角度上主要分为碳化二亚胺类型、磷正离子或磷酸酯类型和脲正离子类型。最常用的碳化二亚胺类缩合试剂是二环己基碳二亚胺(DCC)。由于反应生成的二环己基脲(DCU)在大多数有机溶剂中溶解度很小，难以除去，人们对DCC的结构进行了改进，发展了副产物的脂溶性很好的N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)等和副产物水溶性很好的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)。由于这类缩合试剂活性很高，往往会导致产物有较大程度的消旋。脲正离子型缩合试剂种类繁多，常见的有O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、(苯并三氮唑-1-基氧基)二吡咯烷碳鎓六氟磷酸盐(HBPyU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)等。此类缩合剂结构较为复杂，反应选择性不高。磷正离子或磷酸酯类型多肽缩合试剂由于反应条件简单，反应速度快，产率较高而颇受关注，其中较典型的缩合剂3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)是碳化二亚胺类型缩合剂3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(HOOBt)的磷酸酯，其特点是产物的消旋较小，但此缩合剂存在反应速度比较慢，选择活性低的缺点，从而导致多肽缩合的产率低，成本高。(J.M.Humphrey，A.R.Chamberlin，Chem.Rev.1997，97，2243)
发明内容
本发明目的是发明一种新型多肽缩合剂，其结构以DEPBT为基础，在保持三氮六元环体系不变条件下，对现有的苯环结构用芳香氮杂环取代，并增加不同取代基将原有的结构进行优化改造，从而使分子毒性下降，缩合反应速度增快，选择活性大幅度提高。以及提供其合成方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种多肽缩合剂，它有如下结构通式：
其中R1-基团可以是氢、给电子基团或吸电子基团，其可以在6-位，也可以在7-位，R2-可以是甲基或乙基。
上述的多肽缩合剂，所述的给电子基团可以是烷基、烷氧基或氨基。
上述的多肽缩合剂，所述的吸电子基团可以是氟、氯、溴、碘、硝基、氰基、醛基、酮基、三氟甲基或羧基。
一种制备上述多肽缩合剂的方法，其反应式如下：
它包括下列步骤：
步骤1.将5-位或6-位有上述R1-取代基的2-氨基烟酸甲酯或乙酯与羟胺盐酸盐在过量碱存在下室温反应12-60小时，反应结束后，浓缩反应液，静置，有沉淀析出，过滤，用乙醚洗涤沉淀，
步骤2.将步骤1所得的沉淀溶于盐酸中，冷却，于0-5℃下滴加亚硝酸钠水溶液，滴加完后在室温继续搅拌反应30-120分钟后，过滤出沉淀，用乙醇重结晶，的白色晶体6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮，
步骤3.将步骤2得到的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于二氯甲烷中，加入三乙胺，在冰浴冷却下滴加二乙氧基磷酰氯或二甲氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续在-10-90℃搅拌1-24小时，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓缩，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗涤，干燥，浓缩，加入石油醚得晶体产物肽缩合剂。
上述的制备多肽缩合剂的方法，在步骤1中，所述的碱可以是有机碱或无机碱，所述有机碱可以为三乙胺、吡啶、三乙烯二胺、醇钠、苯胺或N-甲基吡咯烷，所述的无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠或乙酸钠。
上述的制备多肽缩合剂的方法，在步骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与二乙氧基磷酰氯的物质的量之比为1∶1至1∶15。
上述的制备多肽缩合剂的方法，在步骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与三乙胺的物质的量之比为1∶1至1∶10。
上述的制备多肽缩合剂的方法，在步骤3中，所述的溶剂的用量为6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮质量的2-50倍。
上述的制备多肽缩合剂的方法，在步骤1中，所述的过滤出沉淀后，滤液加浓盐酸酸化至pH＝6，静置，有沉淀析出，过滤出沉淀，与第一次滤出的沉淀合并，然后重结晶。
本发明的目标化合物具有以下优点：
1.本发明的多肽缩合剂对多肽缩合的效果已经超过DEPBT，同样条件下的多肽缩合产率比DEPBT等常见多肽缩合剂高出10～50％，缩合反应操作简单。
2.本发明的多肽缩合剂的合成方法，所需设备简单，没有特殊工艺要求，投资较小，操作简便；
3.本发明的多肽缩合剂的合成方法原料简单易得，成本低；
4.本发明的多肽缩合剂的合成方法对环境友好。本发明反应腐蚀小，三废处理负担小，达到清洁生产目的，易于工业化生产；
具体实施方式
下面通过实施例详述本发明，然而，本发明不限于下述的实施例。
实施例1 3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
0℃下将50g盐酸羟胺缓慢加入360mL 4mol/L的NaOH溶液中，搅拌至溶解。往此溶液中加入54.4g 2-氨基烟酸甲酯和200mL甲醇，室温反应12h。减压浓缩至三分之一体积时有沉淀析出，过滤，沉淀用乙醚充分洗涤(200mL×3)，滤液用浓盐酸酸化至pH＝6，放置，有固体析出，过滤。将两部分固体合并溶于720mL 1mol/L盐酸中，冷却至0～5℃，于搅拌下滴加60mL 4.7mol/L的亚硝酸钠水溶液。室温反应45min后过滤得到微黄色固体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率85％。
将8.25g 3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于30mL二氯甲烷及7mL三乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3.7mol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续搅拌2h，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓缩，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，蒸去大部分二氯甲烷至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产物，产率87％。(熔点：205℃；m/z(M+1)+301；δH(400MHz，DMSO)1.30(t，6H)，4.06(m，4H)，7.77(d，1H)，8.35(d，1H))
实施例2 6-溴-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
0℃下将25g盐酸羟胺缓慢加入180mL 4mol/L的NaOH溶液中，搅拌至溶解。往此溶液中加入41.3g 2-氨基-5-溴烟酸甲酯和120mL甲醇，室温反应24h。减压浓缩至三分之一体积时有沉淀析出，过滤，沉淀用乙醚充分洗涤(100mL×3)，滤液用浓盐酸酸化至pH＝6，放置，有固体析出，过滤。将两部分固体合并溶于360mL 1mol/L盐酸中，冷却至0～5℃，于搅拌下滴加30mL 4.7mol/L的亚硝酸钠水溶液。室温反应65min后过滤得到黄色固体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率78％。
将12.2g 6-溴-3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于30mL乙酸乙酯及7mL三乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3.7mol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续搅拌2.5h，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓缩，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，蒸去大部分乙酸乙酯至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产物，产率88％。(熔点：161℃；m/z(M+1)+379；δH(400MHz，DMSO)1.30(t，6H)，4.06(m，4H)，7.77(d，1H)，8.35(d，1H))
实施例3 7-溴-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
0℃下将25g盐酸羟胺缓慢加入180mL 4mol/L的NaOH溶液中，搅拌至溶解。往此溶液中加入41.3g 2-氨基-6-溴烟酸甲酯和120mL甲醇，室温反应24h。减压浓缩至三分之一体积时有沉淀析出，过滤，沉淀用乙醚充分洗涤(100mL×3)，滤液用浓盐酸酸化至pH＝6，放置，有固体析出，过滤。将两部分固体合并溶于360mL 1mol/L盐酸中，冷却至0～5℃，于搅拌下滴加30mL 4.7mol/L的亚硝酸钠水溶液。室温反应65min后过滤得到黄色固体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率75％。
将12.2g 7-溴-3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于30mL乙酸乙酯及7mL三乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3.7mol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续搅拌2.5h，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓缩，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，蒸去大部分乙酸乙酯至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产物，产率81％。(熔点：148℃；m/z(M+1)+379；δH(400MHz，DMSO)1.31(t，6H)，4.07(m，4H)，8.66(d，1H)，8.77(d，1H))
实施例4 6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成以2-氨基-5-硝基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81％和80％。(熔点：155℃；m/z(M+1)+346；δH(400MHz，DMSO)1.35(t，6H)，4.14(m，4H)，8.34(d，1H)，8.85(d，1H))
实施例5 7-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-硝基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为81％和80％。(熔点：137℃；m/z(M+1)+346；δH(400MHz，DMSO)1.41(t，6H)，4.34(m，4H)，9.16(d，1H)，9.53(d，1H))
实施例6 6-氯-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氯烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为77％和85％。(熔点：153℃；m/z(M+1)+335；δH(400MHz，DMSO)1.27(t，6H)，4.15(m，4H)，7.55(d，1H)，8.47(d，1H))
实施例7 7-氯-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氯烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为80％和80％。(熔点：141℃；m/z(M+1)+335；δH(400MHz，DMSO)1.35(t，6H)，4.21(m，4H)，8.47(d，1H)，8.77(d，1H))
实施例8 6-氟-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氟烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为69％和78％。(熔点：144℃；m/z(M+1)+319；δH(400MHz，DMSO)1.25(t，6H)，4.01(m，4H)，7.44(d，1H)，8.58(d，1H))
实施例9 7-氟-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氟烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为70％和77％。(熔点：136℃；m/z(M+1)+319；δH(400MHz，DMSO)1.33(t，6H)，4.01(m，4H)，7.94(d，1H)，8.32(d，1H))
实施例10 6-碘-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-碘烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为66％和76％。(熔点：182℃；m/z(M+1)+427；δH(400MHz，DMSO)1.29(t，6H)，4.04(m，4H)，7.66(d，1H)，7.95(d，1H))
实施例11 7-碘-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-碘烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为60％和80％。(熔点：169℃；m/z(M+1)+427；δH(400MHz，DMSO)1.34(t，6H)，4.11(m，4H)，8.61(d，1H)，9.16(d，1H))
实施例12 6-氰基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氰基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为72％和82％。(熔点：139℃；m/z(M+1)+326；δH(400MHz，DMSO)1.33(t，6H)，4.11(m，4H)，7.92(d，1H)，8.56(d，1H))
实施例13 7-氰基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氰基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为68％和75％。(熔点：121℃；m/z(M+1)+326；δH(400MHz，DMSO)1.39(t，6H)，4.21(m，4H)，8.95(d，1H)，9.24(d，1H))
实施例14 6-醛基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-醛基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为65％和76％。(熔点：145℃；m/z(M+1)+329；δH(400MHz，DMSO)1.29(t，6H)，4.11(m，4H)，8.52(d，1H)，8.60(d，1H)，9.75(s，1H))
实施例15 7-醛基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-醛基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为70％和79％。(熔点：129℃；m/z(M+1)+329；δH(400MHz，DMSO)1.31(t，6H)，4.20(m，4H)，8.65(d，1H)，8.87(d，1H)，9.73(s，1H))
实施例16 6-三氟甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-三氟甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为63％和77％。(熔点：141℃；m/z(M+1)+369；δH(400MHz，DMSO)1.40(t，6H)，4.23(m，4H)，7.55(d，1H)，8.17(d，1H))
实施例17 7-三氟甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-三氟甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为71％和73％。(熔点：130℃；m/z(M+1)+369；δH(400MHz，DMSO)1.43(t，6H)，4.26(m，4H)，8.41(d，1H)，8.66(d，1H))
实施例18 6-甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为77％和84％。(熔点：129℃；m/z(M+1)+315；δH(400MHz，DMSO)1.31(t，6H)，2.53(s，3H)4.13(m，4H)，7.45(d，1H)，8.17(d，1H))
实施例19 7-甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为76％和79％。(熔点：111℃；m/z(M+1)+315；δH(400MHz，DMSO)1.32(t，6H)，2.31(s，3H)4.15(m，4H)，8.34(d，1H)，8.57(d，1H))
实施例20 6-甲氧基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-甲氧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为80％和82％。(熔点：131℃；m/z(M+1)+331；δH(400MHz，DMSO)1.29(t，6H)，3.80(s，3H)4.05(m，4H)，6.79(d，1H)，8.18(d，1H))
实施例21 7-甲氧基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-甲氧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为77％和82％。(熔点：116℃；m/z(M+1)+331；δH(400MHz，DMSO)1.33(t，6H)，3.83(s，3H)4.09(m，4H)，7.86(d，1H)，8.44(d，1H))
实施例22 6-氨基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氨基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81％和82％。(熔点：126℃；m/z(M+1)+316；δH(400MHz，DMSO)1.34(t，6H)，4.13(m，4H)，6.95(d，1H)，7.74(s，2H)，7.87(d，1H))
实施例23 7-氨基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氨基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为78％和81％。(熔点：115℃；m/z(M+1)+316；δH(400MHz，DMSO)1.29(t，6H)，4.09(m，4H)，6.27(s，2H)，7.74(d，1H)，7.90(d，1H))
实施例24 6-羧基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-5-羧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81％和82％。(熔点：244℃；m/z(M+1)+345；δH(400MHz，DMSO)1.34(t，6H)，4.13(m，4H)，6.45(d，1H)，8.64(s，2H)，11.0(d，1H))
实施例25 7-羧基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-羧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为78％和81％。(熔点：232℃；m/z(M+1)+345；δH(400MHz，DMSO)1.29(t，6H)，4.09(m，4H)，8.65(s，2H)，8.90(d，1H)，11.12(d，1H))
实施例26 N-叔丁氧羰基-β-苄酯天冬氨脯氨酸甲酯的合成
方法1：使用7-溴-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂
将L-脯氨酸甲酯4.5g和N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-β-苄酯9.04g加入到150mL DMF中，室温下滴加三乙胺3.4g及7-溴-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮19.3g。室温反应5h，减压除去溶剂，加入乙酸乙酯稀释，有机相依次用5％柠檬酸溶液、饱和NaCl水溶液、5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。减压除去乙酸乙酯，得到油状物，产率98％。
方法2：使用6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂
操作同方法1，产物产率为96％
方法3：使用DEPBT为缩合剂
操作方法同方法1，产物产率为81％。可见，使用本发明设计的多肽缩合剂的反应产率比使用DEPBT有明显提高。
实施例27 Fmoc-Cys(Acm)-Thr(ol)的合成
方法1：使用6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂
将Thr(ol)(2.1g，20mmol)及Fmoc-Cys(Acm)-OH(8.3g，20mmol)溶于100mL无水THF中。加入Et3N(2.8mL，20mmol)及6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮(7.6g，22mmol)。室温反应5h，减压除去THF。加入乙酸乙醋稀释。有机相依次用5％柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5％NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用无水MgSO4干燥。减压除去乙酸乙醋，得白色固体。用乙酸乙醋重结晶，产率88％
方法1：使用6-氨基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂
将Thr(ol)(2.1g，20mmol)及Fmoc-Cys(Acm)-OH(8.3g，20mmol)溶于100mL无水THF中。加入Et3N(2.8mL，20mmol)及6-氨基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮(7.5g，22mmol)。室温反应5h，减压除去THF。加入乙酸乙醋稀释。有机相依次用5％柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5％NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用无水MgSO4干燥。减压除去乙酸乙醋，得白色固体。用乙酸乙醋重结晶，产率84％
方法3：使用DEPBT为缩合剂
将Thr(ol)(2.1g，20mmol)及Fmoc-Cys(Acm)-OH(8.3g，20mmol)溶于100mL无水THF中。加入Et3N(2.8mL，20mmol)及DEPBT(6.6g，22mmol)。室温反应5h，减压除去THF。加入乙酸乙醋稀释。有机相依次用5％柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5％NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用无水MgSO4干燥。减压除去乙酸乙醋，得白色固体。用乙酸乙醋重结晶，产率68％。可见，使用本发明的新型缩合剂的产物产率比DEPBT提高20％。
实施例28 Fmoc-D-Phe-Thr(ol)的合成
操作过程同实施例5，以Fmoc-D-Phe-OH和Thr(ol)为原料，7-甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂，产物产率76％；以7-氰基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂，产物产率70％；以7-碘-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为缩合剂，产物产率80％。
若以DEPBT为缩合剂，产物产率为48％。
可见新型多肽缩合剂对反应产率的提高是显而易见的。
Claims (9)
1.一种多肽缩合剂，其特征是它有如下结构通式：
其中R1-基团是氢、给电子基团或吸电子基团，其在6-位或在7-位，R2-是甲基或乙基。
2.根据权利要求1所述的多肽缩合剂，其特征是：所述的给电子基团是烷基、烷氧基或氨基。
3.根据权利要求1所述的多肽缩合剂，其特征是：所述的吸电子基团是氟、氯、溴、碘、硝基、氰基、醛基、酮基、三氟甲基或羧基。
4.一种制备权利要求1所述多肽缩合剂的方法，其特征是它包括下列步骤：
步骤1.将5-位或6-位有上述R1-取代基的2-氨基烟酸甲酯或乙酯与羟胺盐酸盐在过量碱存在下室温反应12-60小时，反应结束后，浓缩反应液，静置，有沉淀析出，过滤，用乙醚洗涤沉淀，
步骤2.将步骤1所得的沉淀溶于盐酸中，冷却，于0-5℃下滴加亚硝酸钠水溶液，滴加完后在室温继续搅拌反应30-120分钟后，过滤出沉淀，用乙醇重结晶，的白色晶体6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮，
步骤3.将步骤2得到的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于二氯甲烷中，加入三乙胺，在冰浴冷却下滴加二乙氧基磷酰氯或二甲氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续在-10-90℃搅拌1-24小时，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓缩，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗涤，干燥，浓缩，加入石油醚得晶体产物肽缩合剂。
5.根据权利要求4所述的制备多肽缩合剂的方法，其特征是：在步骤1中，所述的碱是有机碱或无机碱，所述有机碱为三乙胺、吡啶、三乙烯二胺、醇钠、苯胺或N-甲基吡咯烷，所述的无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠或乙酸钠。
6.根据权利要求4所述的制备多肽缩合剂的方法，其特征是：在步骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与二乙氧基磷酰氯的物质的量之比为1∶1至1∶15。
7.根据权利要求4所述的制备多肽缩合剂的方法，其特征是：在步骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与三乙胺的物质的量之比为1∶1至1∶10。
8.根据权利要求4所述的制备多肽缩合剂的方法，其特征是：在步骤3中，所述的溶剂的用量为6-位7-位R1取代的3-羟基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮质量的2-50倍。
9.根据权利要求4、5、6、7或8所述的制备多肽缩合剂的方法，其特征是：在步骤1中，所述的过滤出沉淀后，滤液加浓盐酸酸化至pH＝6，静置，有沉淀析出，过滤出沉淀，与第一次滤出的沉淀合并，然后重结晶。
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