CN101666788B - 中草药降压产品中掺杂生物碱类降压物质的快筛方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种中草药降压产品中掺杂生物碱类降压物质的快筛方法，具体步骤是：先用乙醇-二氯甲烷溶液(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)提取出样品中掺杂的生物碱成分，然后加入0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液，如果出现沉淀或浑浊，则表明样品中可能掺杂有生物碱类降压药物。该方法用少量常用试剂即可快速判断出中草药降压产品是否掺杂有利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦，无需特殊仪器，适用于在现场(药厂或药店)初步筛查非法添加生物碱类降压物质的中草药降压产品，不仅节省了大量的人力物力，还极大地降低了常规抽检的漏检率。
Description
技术领域
本发明涉及借助于材料的化学性质分析材料的方法，具体涉及生物碱类降压药物的检测方法。
背景技术
高血压病史常见的心血管疾病，其并发症已成为人们主要的致死、致残因素，严重危害人们的健康。治疗高血压的药物有西药和中成药。其中，西药起效迅速，降压效果明显，但长期服用有较严重的副作用；而天然中药制成中草药降压产品(包括由中草药制成的中成药、保健品和食品)副作用较小，但起效较慢。为了迎合高血压患者既想快速降压又想副作用小的心理，一些不良厂商在中草药降压产品中擅自添加降压西药，却打着纯天然中药的旗号欺瞒患者。患者在不知情的情况下，除了服用这些掺杂有西药成分的中草药产品外，还服用降压西药的话，易使血压骤然下降或发生较大波动，导致严重的肾损伤、诱发中风，甚至危害生命安全。
近年来在中草药降压产品添加西药的恶劣事件有增加的趋势，尽管政府相关检验机构对此加强了打压的力度，但效果仍不明显，其主要原因在于缺少一个简便快速且可靠的现场快筛方法，检验机构只能在药店或药厂随机或跟据投诉抽取一部分样品带回实验室检测，这样容易漏检。
在中草药降压产品添加的降压西药有很大一部分为生物碱类降压药，如利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦，《中国药典》中关于这些西药的检测方法都是针对纯化合物的检测，对于掺杂在中成药、保健品和食品中的西药成分的检测效果较差，其原因主要是中成药和保健品(主要指中药类的保健品)的成分多且复杂，对检测结果的干扰较大；另外，药典中的方法都是针对某一种成分的，且多需要特殊的仪器试剂，不适于现场检筛查。
一般生物碱都可以与一些特殊试剂(称为生物碱沉淀剂，多为重金属盐类或分子量较大的复盐以及特殊无机酸)作用生成不溶于水的盐而沉淀，利用这个性质可检查中草药中是否含有生物碱以及用以分离生物碱。常用的检测生物碱的方法有以下几种：
(1)在酸性水溶液中，用碘化汞钾试剂(Mayer试剂，HgI2·KI)与生物碱反应生成白色或淡黄色沉淀，该沉淀为一种络盐AIK·HI(HgI2)n，AIK表示生物碱。
(2)在酸性水溶液中，用碘化铋钾试剂(Dragendorff试剂，BiI3·KI)与生物碱反应生成桔红色沉淀，该沉淀为一种络盐AIK·HI·(BiI3)n。
(3)在酸性水溶液中，用碘化钾碘试剂(Wagner试剂，I2·KI)与生物碱反应生成棕红色沉淀，该沉淀为一种络盐AIK·HI·In。
(4)在酸性水溶液中，用硅钨酸试剂(Bertrand试剂，12WO3·SiO2)与生物碱反应生成灰白色沉淀。
(5)：在中性或酸性水溶液中，用磷钼酸试剂(Sonnenschein试剂，H3PO4·12MoO3)与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀。
上述方法可检测出绝大部分生物碱发生沉淀，但直接用来检测中草药降压产品中掺杂生物碱类降压物质并不可行，一是由于不少中草药本身都含有生物碱成分，极易出现假阳性，难以达到筛查的目的；更重要的是中草药产品成分复杂，其中掺杂的生物碱多与制剂辅料相混，即使能与生物碱沉淀剂发生反应，反应现象也不明显，难以判断结果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是使反应现象更为明显，同时排除中草药本身所含的生物碱的干扰。
本发明解决上述问题的技术方案是：
中草药降压产品中掺杂生物碱类降压物质的快筛方法，该方法由以下步骤组成：
(1)取待检样品，按5～10mL/g样品加入乙醇-二氯甲烷溶液，强烈振摇5分钟，滤过；
(2)在滤液中滴入3～5滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液，如果出现沉淀或浑浊，则表明样品中可能掺杂有生物碱类降压药物；
上述步骤中，
乙醇-二氯甲烷溶液由5体积份的乙醇和1体积份的二氯甲烷组成；
所述的生物碱类降压物质为利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦中的一种或两种以上。
本发明采用V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1的乙醇-二氯甲烷溶液为提取溶剂，可将掺杂在中草药产品中的生物碱类降压物质从制剂辅料中充分溶出，以游离的形式存在于提取溶剂中，与生物碱沉淀剂磷钼酸反应十分灵敏，反应现象明显，容易判断。此外，中草药本身所含生物碱成分一般是以结合形式存在，往往经酸或碱水提取后可游离与溶剂中，与生物碱试剂反应。本发明摒弃了在酸性环境和中性水环境中反应的传统做法，可有效排除中草药本身所含的生物碱的干扰。本发明方法简便，所用试剂危险性低，不需要复杂笨重的仪器，适用于现场检测。
为了方便地实施本发明方法，本发明还提供所述方法的专用试剂盒，该试剂盒由以下试剂组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷溶液，该溶液由5体积份的乙醇和1体积份的二氯甲烷组成；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
为了更好地理解本发明，下面将通过实验进一步阐述本发明方法所具有的技术效果。
一、本发明方法对不同生物碱类化合物的选择性以及溶剂的影响
1、实验材料
利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔、厄贝沙坦、颉沙坦、氢氯噻嗪、盐酸可乐定、吲达帕胺(均购自中国药品生物制品检点所)。阳性药物为清脑降压片。
2、实验方法
(1)取3份待检样品；第一份加入2mL乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)溶液，第二份加入2mL 0.1M磷酸溶液(酸性溶液)，第三份加入2mL水；振摇5分钟，滤过；
(2)在第一份样品滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液；在第二、三份样品滤液中分别滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸水溶液。
3、实验结果
结果如表1所示，由下表可见，采用乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)溶剂可使利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦较好溶出，反应现象明显，而其他生物碱无干扰，又有利于试验操作。
表1
| 药物 | 在乙醇-二氯甲烷中的反应现象 | 在酸性溶液中的反应现象 | 在水中的反应现象 |
| 利血平1mg | 混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 盐酸哌唑嗪1mg | 混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 阿替洛尔5mg | 混浊 | 轻微混浊 | 混浊 |
| 厄贝沙坦1mg | 混浊 | 轻微混浊 | 混浊 |
| 颉沙坦1mg | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 盐酸可乐定1mg | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 氢氯噻嗪1mg | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 吲达帕胺1mg | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 阳性药物1片 | 混浊 | 样品难以滤过 | 样品难以滤过 |
二、本发明方法检测中草药降压产品中人为添加生物碱类降压物质的效果
1、实验材料
(1)自制阳性样品：
1#样品：1mg利血平与1片清脑降压片混合制成；
2#样品：1mg盐酸哌唑嗪与1片清脑降压片混合制成；
3#样品：5mg阿替洛尔与1片清脑降压片混合制成；
4#样品：1mg厄贝沙坦与1片清脑降压片混合制成；
5#样品：0.25mg利血平、0.25mg盐酸哌唑嗪、0.25mg厄贝沙坦、2.5mg阿替洛尔与1片清脑降压片混合制成；
6#样品：1mg利血平与1粒脑立清胶囊内容物混合制成；
7#样品：1mg盐酸哌唑嗪与1粒脑立清胶囊内容物混合制成；
8#样品：5mg阿替洛尔与1粒脑立清胶囊内容物混合制成；
(2)阴性对照：清脑降压片；
(3)溶剂对照：乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)。
上述样品中所用清脑降压片标示为陕西盘龙制药集团有限公司生产，每片0.45g；脑立清胶囊标示为修正药业集团股份有限公司，每粒装0.33g。
2、实验方法
(1)取待检样品，加入3mL乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)振摇5分钟，滤过；
(2)在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
3、实验结果
结果如表2所示，采用V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1的乙醇-二氯甲烷溶液为提取溶剂，可将掺杂在中草药产品中的生物碱类降压物质从制剂辅料中充分溶出，以游离的形式存在于提取溶剂中，与生物碱沉淀剂磷钼酸反应十分灵敏，反应现象明显，容易判断。中草药本身所含生物碱成分一般是以结合形式存在，往往经酸或碱水提取后可游离与溶剂中，与生物碱试剂反应。本发明摒弃了在酸性环境和中性水环境中反应的传统做法，可有效，排除中草药本身所含的生物碱的干扰。
表2
| 样品 | 在乙醇-二氯甲烷中的反应现象 | 在酸性溶液中的反应现象 | 在水中的反应现象 |
| 1#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 2#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 3#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 轻微混浊 |
| 4#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 轻微混浊 |
| 5#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 轻微混浊 |
| 6#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 7#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 澄清 |
| 8#样品 | 黄白色混浊 | 轻微混浊 | 轻微混浊 |
| 阴性对照 | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 溶剂对照 | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
三、本发明方法最低检测限的确定
1、实验材料
1#样品：0.5mg、1mg、1.5mg、2mg和3mg利血平分别与1片清脑降压片混合制成；
2#样品：0.5mg、1mg、1.5mg、2mg和3mg盐酸哌唑嗪与1片清脑降压片混合制成；
3#样品：3mg、5mg、10mg、12mg和15mg阿替洛尔与1片清脑降压片混合制成；
4#样品：0.5mg、1mg、1.5mg、2mg和3mg厄贝沙坦与1片清脑降压片混合制成。
上述样品中所用清脑降压片标示为陕西盘龙制药集团有限公司生产，每片0.45g。
2、实验方法
(1)取待检样品，加入3mL乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)振摇5分钟，滤过；
(2)在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
3、实验结果
结果如表3所示，利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔、厄贝沙坦的最低检出量为1mg/片、1mg/片、5mg/片、1mg/片。
表3
具体实施方式
例1
试剂盒组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
本发明方法检测市售清脑降压片(批号：20081102)：
取1片待检样品，破碎，加入3mL乙醇-二氯甲烷(5∶1)振摇5分钟，滤过；在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸乙醇溶液。
结果：无沉淀产生，溶液澄清。
标准方法验证：取1片待检样品，用液-质联用方法检测，结果显示利血平、盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦均为阴性。
例2
试剂盒组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
本发明方法检测市售脑立清胶囊(批号：080401)：
取1片待检样品，破碎，加入3mL乙醇-二氯甲烷(5∶1)振摇5分钟，滤过；在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
结果：出现黄白色混浊。
标准方法验证：取1粒待检样品，用液-质联用方法检测，结果显示利血平阳性。
例3
试剂盒组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
本发明方法检测市售清脑降压片(批号：20081202)：
取1片待检样品，破碎，加入3mL乙醇-二氯甲烷(5∶1)振摇5分钟，滤过；在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
结果：出现混浊。
标准方法验证：取1片待检样品，用液-质联用方法检测，结果显示盐酸哌唑嗪阳性。
例4
试剂盒组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷(V乙醇∶V二氯甲烷＝5∶1)；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
本发明方法检测市售清脑降压片(批号：20090513)：
取1片待检样品，破碎，加入3mL乙醇-二氯甲烷(5∶1)振摇5分钟，滤过；在滤液中滴入3滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
结果：出现混浊。
标准方法验证：取1片待检样品，用液-质联用方法检测，结果显示阿替洛尔、厄贝沙坦阳性。
Claims (2)
1.中草药降压产品中掺杂生物碱类降压物质的快筛方法，该方法由以下步骤组成：
(1)取待检样品，按5～10mL/g样品加入乙醇-二氯甲烷溶液，强烈振摇5分钟，滤过；
(2)在滤液中滴入3～5滴浓度为0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液，如果出现沉淀或浑浊，则表明样品中可能掺杂有生物碱类降压药物；
上述步骤中，乙醇-二氯甲烷溶液由5体积份的乙醇和1体积份的二氯甲烷组成；所述的生物碱类降压物质为盐酸哌唑嗪、阿替洛尔和厄贝沙坦中的一种或两种以上；
所述的中草药降压产品为清脑降压片或脑立清胶囊。
2.实施权利要求1所述方法的专用试剂盒，该试剂盒由以下试剂组成：
试剂1：乙醇-二氯甲烷溶液，该溶液由5体积份的乙醇和1体积份的二氯甲烷组成；
试剂2：0.05g/mL的磷钼酸无水乙醇溶液。
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