CN101658647B

CN101658647B - 一种中药妇炎康复制剂的制备方法及其检测方法

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Publication number: CN101658647B
Application number: CN2009100240485A
Authority: CN
Inventors: 黄小华; 付彬; 张�浩; 石丽; 雒西萍
Original assignee: BEILIN PHARMACEUTICAL Co Ltd XI'AN
Current assignee: BEILIN PHARMACEUTICAL Co Ltd XI'AN
Priority date: 2009-09-25
Filing date: 2009-09-25
Publication date: 2011-12-14
Anticipated expiration: 2029-09-25
Also published as: CN101658647A

Abstract

本发明涉及一种中药妇炎康复制剂的制备方法及其检测方法。目前，用于治疗妇科疾病的方法有物理治疗和药物治疗，物理治疗会使宫颈口变硬，留有疤痕，对于没有生育的病人，尤其是大寒体质的人，不宜采用物理治疗；女性阴道内的生态环境为弱酸性，本身对很多细菌有一定的抑制作用，常用药物治疗破坏了阴道酸碱度，导致病菌急剧生长，阴道本身抵抗细菌的能力大大下降，使阴道炎的感染率增加。本发明由败酱草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黄芩、赤芍、陈皮以及辅料交联聚维酮和淀粉，经检测、特殊方法制备而成的一种治疗妇科疾病的中药。本发明方法工艺简单合理，在有效降低成本的情况下，能较多的保留药物有效成份，使得有效成份含量得到显著提高。

Description

一种中药妇炎康复制剂的制备方法及其检测方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药妇炎康复制剂的制备方法及其检测方法。

背景技术

世界卫生组织的调查显示，中国女性40％以上患有妇科病，已婚妇女患病率更达70％以上，临床妇科炎症主要有：阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、外阴炎以及尿道炎等；妇科炎症通常表现为白带异常、外阴瘙痒等，盆腔炎还会有腹痛、腹胀等表现，妇科炎症对性生活、生育等都有影响，有的甚至会发生癌变，危及生命，带给女性朋友无穷无尽的烦恼和隐患。宫颈癌，它在女性生殖道肿瘤中发病率第一，全球每年新发现40万至45万例，其中1/4到1/3在中国。

目前，临床上用于治疗妇科疾病的方法分为物理治疗和药物治疗两种。其中物理治疗分为激光、冷冻、微波等疗法。因为物理治疗会使宫颈口变硬，并且留有疤痕，对今后的怀孕、分娩都会有影响，所以对于还没有生育的病人，尤其是大寒体质的人，不宜采用物理治疗。药物治疗分为清洗液疗法、栓剂疗法及口服药物疗法。清洗液疗法拥有其自身的弊端：因为女性阴道内的生态环境是弱酸性的，本身对很多细菌有一定的抑制作用，常用清洗液就破坏了阴道酸碱度(PH)，导致病菌急剧生长，阴道本身抵抗细菌的能力大大下降，使阴道炎的感染率增加。目前治疗妇科疾病的栓剂的种类非常多，一般来说，一种栓剂只针对一种阴道炎。但有些患者得的是混合性阴道炎采用栓剂治疗效果并不好。而且使用某些栓剂会破坏阴道正常菌群，造成菌群失调，导致阴道炎反复发作。口服药物疗法分为西药疗法和中药疗法两种。其中西药治疗毒副作用太大，肝脏、肾脏的负担过大，使肝、肾功能下降，人体免疫力也随之下降，人体免疫力下降又使病情加重或有并发感染，形成恶性循环，久治不愈，或越治越重。而中药治疗具有较强的整体观念，妇科疾病虽然是身体的某一局部的疾病，但实际上是一种全身性疾病。对多数的妇科疾病患者来说，局部治疗是不能解决根治问题的，而中医由于从整体观念出发，实施辨证论治，既考虑了局部的治疗，又采取扶正培本的方法，对于改善患者的局部症状和全身状况都具有重要的作用。

已公开的一种妇科药物及其制备方法，申请号为03118890.7，制备方法是败酱草290-350份、薏苡仁145-175份、川楝子110-130份、柴胡110-130份、黄芩110-130份、赤芍110-130份、陈皮55-65份加水煎煮三次，浓缩煎煮液，另外加入上述薏苡仁的40％-60％量薏苡仁粉，混匀，干燥，过筛，装胶囊。首先该发明只公开了该处药对治疗慢性盆腔炎的治疗效果而我单位研发人员经过长期的临床实验发现该组方对阴道炎、宫颈炎亦具有良好的疗效。其次该工艺的缺陷是：产品有效成份含量低及胶囊剂的机械性差，易碎不易携带。

另一公开的治疗妇科疾病的薄膜衣片及其制备方法，其申请号为200710092498.9，其只公开了该处方药治疗金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌、铜绿色假单细胞菌、奇异变形菌、白色念球菌有较好的抑菌作用。对金葡菌引起的小鼠感染具有很强的体内保护作用，而经过我单位研发人员经长期临床实验研究证明该制剂不但具有体外抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的生长繁殖，而且可以改变培育液的PH和细菌接种量，不影响该中药制剂对大肠杆菌及变形杆菌的MIC。其次抗阴道毛滴虫试验表明，该中药制剂体外可杀灭阴道毛滴虫，具有时间和计量依赖性。结果说明，该中药制剂有镇痛和抗炎作用，能增强小鼠非特异性免疫及特异性体液和细胞免疫，体外有抗菌和抗阴道毛滴虫作用。其次经过我单位科研人员的长期试验我们改变了原工艺的崩解剂，在低成本的情况下使得产品崩解时间短，稳定性好，黄芩苷的含量较高，含量差异性小。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种治疗慢性宫颈炎、阴道炎、慢性盆腔炎的中药制剂的制备方法。该方法工艺简单合理，在有效降低成本的情况下，能较多的保留药物有效成份，使得有效成份含量得到显著提高。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种中药妇炎康复制剂的制备方法，其处方组成为：败酱草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黄芩、赤芍、陈皮，其特征在于：(1)、将黄芩用沸水煮制10分钟，备用；(2)、将川楝子清炒成表面焦黄色，备用；(3)、将一半量薏苡仁粉碎成100目的细粉，备用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣与败酱草、柴胡、赤芍、陈皮四味药材加水煎煮三次，第一、二次煎煮时间为1小时，第三次煎煮时间为0.5小时，滤液减压浓缩至温度为60℃，相对密度为1.15-1.20的稠膏，浓缩所得稠膏喷雾干燥成膏粉。(5)、将步骤(3)所得中药粉、步骤(4)所得膏粉、交联聚维酮20.62份-21.7份和淀粉31.46份-32.55份，混匀，制备药物制剂。

所述的药物制剂包括丸剂、片剂。

陈皮、黄芩、赤芍的薄层色谱鉴别：

性状：丸剂，显深褐色，味微苦；片剂除去包衣，显深褐色，味微苦。

鉴别：(1)取本品，置显微镜下观察：淀粉粒类圆形或多圆形，直径2~20um，脐点星状或短缝状；

(2)取本品10片或10粒，除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次分别取15ml、10ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取4次，每次分别取15ml、10ml、10ml、10ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲醇∶水的体积比为10∶1.7∶1.3为展开剂，展至约5cm，取出，晾干，再以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸∶水的体积比为20∶10∶1∶1的上层液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以5％三氯花铝乙醇溶液，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本品10片或10粒，去除包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；再取黄芩对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水的体积比为5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品8片或8粒，除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成1m含1ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别于点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸的体积比为40∶5∶10∶0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热使斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。

本发明工艺方法简单合理，在有效降低成本的情况下，能较多的保留药物有效成份，使得有效成份含量得到显著提高。

具体实施方式

本工艺所选取的辅料及其配比是经过严格的筛选得到的，以下为辅料的筛选过程：

实验1：崩解剂的选择

崩解剂的作用是克服粘合剂和压片所需的物理力，若粘合剂的粘合作用较强，则崩解剂的崩解作用必须更强，才能使该中药制剂中有效成份在胃肠液中释放出来。理想的崩解剂，不但能使该中药制剂崩解成颗粒，而且能进一步分散成制粒前细粉状。根据本发明处方中各药味的理化性质，结合实际生产条件，在保证质量合格稳定和节约成本的情况下选择适当辅料。根据妇炎康复片的质量标准薄层鉴别应该能检测出橙皮苷，黄芩苷，芍药苷。含量检测要求每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于1.5mg.崩解时限：应在50分钟内全部崩解；硬度：取供试品10片，分次检查，每次以供试品2片，分持于左右两手，从1m的高处平坠于厚度2cm的松木板上，碎片总数不得超过3片。若超过3片，重做一次，不超过3片者仍属合格；重量差异：±4％(规定片重：每片重0.35g)。超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。微生物限度：细菌数每1g不得过5000个，霉菌和酵母菌数每1g不得过50个，大肠埃希菌每1g不得检出，大肠菌群每1g应小于50个，霉变、长螨者以不合格论。

试验一：在用淀粉为崩解剂时制成的本产品按照订的质量标准进行检测，考察不同用量对产品质量的影响从而确定合适的崩解剂。不同的用量用三个批次进行实验，结果见表一。

表一

从表一可以看出，淀粉为崩解剂时崩解时间长而在淀粉含量为40％时崩解时间小于60分钟符合规定，但是此时黄芩苷含量不符合要求。且陈皮，赤芍也不能完全检出。

试验二：在用交联聚维酮为崩解剂时制成的本产品按照拟订的质量标准进行检测，考察不同用量对产品质量的影响从而确定合适的崩解剂。不同的用量用三个批次进行实验，结果见表二。

表二

含量

批号

含量测定(mg)

重量差异

硬度

崩解时限

陈皮(TCL)

黄芩(TCL)检

赤芍(TCL)

微生物限

总价(元)

从上表二中可以看出用交联聚维酮为崩解剂，崩解时间短，但是硬度不好。且因为交联聚维酮价格昂贵，用交联聚维酮为崩解剂无疑是增加了生产成本。通过表一、表二可以看出在辅料量≥25％黄芩苷的含量不稳定，且不能达到要求。

三、根据本产品原料药及辅料的理化性质，我们将交联聚维酮和淀粉按照不同的比例混合加入，但是必须控制二者总量在药粉总量的25％以下。制成的本产品按照拟订的质量标准进行检测，考察不同用量对产品质量的影响从而确定合适的崩解剂。不同的用量，用三个批次进行实验，结果见表三。

表三

由表三试验结果表明，在交联聚维酮含量增加为9.5％、淀粉含量减少为15.5％按照拟定质量标准检测各项指标符合要求。本着质量合格稳定及节约成本的原则订本工艺崩解剂为交联聚维酮用量为(9.5％-10％)，淀粉的用量为(14.5％-15％)

试验四：当交联聚维酮的用量为(9.5％-10％)，淀粉的用量为(14.5-15％)时本产品成品的稳定性试验：

表四

批号及检验

性状

显微鉴别

黄芩苷的TLC鉴别

赤芍TCL检测

陈皮TCL鉴别

水分(％)

含量测定(mg/g)

卫生学检查

A01 1个月

无变化

检出

6.7

2.51

符合规定

2个月

无变化

检出

6.9

2.49

符合规定

3个月

无变化

检出

6.5

2.52

符合规定

4个月

无变化

检出

6.7

2.50

符合规定

5个月

无变化

检出

6.4

2.51

符合规定

6个月

无变化

检出

6.2

2.48

符合规定

A02 1个月

无变化

检出

6.5

2.49

符合规定

2个月

无变化

检出

6.7

2.52

符合规定

3个月

无变化

检出

6.2

2.51

符合规定

4个月

无变化

检出

6.7

2.48

符合规定

5个月

无变化

检出

6.9

2.50

符合规定

6个月

无变化

检出

6.8

2.51

符合规定

A03 1个月

无变化

检出

6.5

2.48

符合规定

2个月

无变化

检出

6.7

2.52

符合规定

3个月

无变化

检出

6.4

2.49

符合规定

4个月

无变化

检出

6.7

2.52

符合规定

5个月

无变化

检出

6.8

2.49

符合规定

6个月

无变化

检出

7.0

2.51

符合规定

由表四可以看出，当崩解剂为交联聚维酮的用量为(9.5％-10％)，淀粉的用量为(14.5-15％)时，按照拟订的质量标准进行检测崩解时间短，鉴别项均能检出，黄芩苷的含量较高，含量差异性小，表明该产品的稳定性好。

上述实验结果表明，本发明的工艺与现有技术相比具有明显的技术进步。

本发明具有抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的生长繁殖及可杀灭阴道毛滴虫。主治妇女带下，色黄质粘稠或如豆渣状，气臭，少腹，腰骶疼痛，舌暗苔黄腻以及慢性盆腔炎、宫颈炎、子宫内膜炎等症。

本发明是一种中药妇炎康复制剂的制备方法，其有益效果是：用水提取，符合中医传统煎煮服用习惯，具有中医特色，确定了崩解剂及其用量，而且提高了有效成份的含量，使得治疗妇科炎症的疗效有显著提高；

本发明的另一目的修订和提高原质量标准，修订陈皮、黄芪的薄层鉴别，增加了赤芍的薄层色谱鉴别，建立了HPLC法测定黄芩苷的方法是这样实现的：

性状：本品为糖衣或薄膜衣，除去包衣后显深褐色；味微苦。

鉴别：(1)取本品，除去包衣，置显微镜下观察：淀粉粒类圆形或多圆形，直径2~20um，脐点星状或短缝状。

(2)取本品10片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15ml，10ml)，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取4次(15ml，10ml，10ml，10ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—甲醇—水(10∶1.7∶1.3)为展开剂，展至约5cm，取出，晾干，再以甲苯—乙酸乙酯—甲酸—水(20∶10∶1∶1)的上层液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以5％三氯花铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取本品10片，去除包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取黄芩对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(4)取本品8片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成1m含1ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别于点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热使斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。

(5)黄芩苷的含量测定，照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)

试验例一：本发明一种中药妇炎康复制剂的质量标准测定方法研究

【性状】薄膜衣片性状描述为依据中试三批样品(批号：200303001，200303002，200303003)实际性状及结合糖衣片性状而描述。

【鉴别】(1)显微鉴别特征：妇炎康复片为中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第四册收载品种[WS₃-30(Z-21)-93(Z)]，原标准中，显微鉴别项下薏苡仁显微特征明显，专属性强，故保留原药材显微鉴别特征。薄膜衣片依据原标准检验，结果亦符合规定(请见图1)。故此项列入药品标准草案正文中。

(2)取本品10片，除去糖衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15ml，10ml)，弃去乙醚液。再用水饱和的正丁醇提取4次(15ml，10ml，10ml，10ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。制备不含陈皮的制剂，同法制成阴性对照液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别于点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶1.7∶1.3)为展开剂，展至约5cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。而阴性空白溶液在与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点(请见图2)。

上述为方中陈皮药材的薄层色谱鉴别。按原标准方法进行操作，色谱分离效果较差，背景污染严重难以辨认，按正文方法进行操作，分离效果好，斑点清晰可辨，薄膜衣片依据正文标准检验，结果亦符合规定(请见图3)，故此项列入药品标准草案正文中。

(3)取本品10片，除去糖衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。制备不含黄芩药材的制剂，同法制成阴性对照液。另取黄芩对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而阴性空白溶液在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点(请见图4)。

上述为制剂中黄芩的薄层色谱鉴别，按原标准方法进行操作，由于在紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗紫色斑点，该斑点与背景颜色相近，直接观察较困难，用数码相机照相后，对照片反复调整背景颜色才可鉴别(请见图5)。正文方法采用中国药典黄芩药材鉴别项下方法，从而使制剂方法同药材方法一致，更易控制制剂的质量，该方法分离效果好，斑点清晰可辨，薄膜衣片依据正文标准检验，结果亦符合规定(请见图6)，故此项列入药品标准草案正文中。

(4)取本品8片，除去糖衣，研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。同时制备不含赤芍的制剂，同法制成阴性对照液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别于点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热使斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。而阴性空白溶液在与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点(请见图7)。

上述为方中赤芍药材的薄层色谱鉴别。该方法重复性好，专属性强，薄膜衣片依据正文标准检验，结果亦符合规定(请见图8)，故此项列入药品标准草案正文中。

【检查】我们按照中国药典2000年版一部附录I D片剂项下的有关规定，对本品崩解时限、微生物限度等项进行检查，按照中国药典2000年版一部附录IX E重金属检查法第二法，对本品中重金属(以Pb计)进行检查，按中国药典2000年版一部附录IX F砷盐检查法第一法，对本品中砷盐(以As计)进行检查，检查结果请见表1、表2。

表1 糖衣片检查项目及结果

表2 薄膜衣片检查项目及结果

试验结果表明，妇炎康复片糖衣片和薄膜衣片检查的各项指标均符合中国药典2000年版一部附录I D片剂项下的规定，其中重金属(以Pb计)＜10ppm，砷盐(以As计)＜2ppm，因该二项含量均甚微，故不列入药品标准正文检查项。

【含量测定】妇炎康复片为中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第四册收载品种[WS₃-30(Z-21)-93(Z)]，由败酱草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黄芩、赤芍、陈皮等组成，原标准缺少有效成份的定量控制指标，方中主药黄芩苦寒泻火，清热燥湿，所含黄芩苷有抗炎，抗菌解热等作用，对本方的临床疗效有重要作用。以黄芩为定量监控指标可有效的控制产品质量。有关黄芩苷的含量测定方法有比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，查阅大量资料，建立了高效液相色谱法测定本品中黄芩苷的含量的方法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点。

现将该方法学研究情况总结如下：

一、仪器与试药

1.仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪，G1311A型四元梯度泵，G1314A型紫外检测器，G2170AA型化学工作站。

2.试剂：乙腈、甲醇均为色谱试剂，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

3.对照品：黄芩苷由中国药品生物制品检定所提供(批号为：0715-9909，供含量测定用)。

4.供试品：妇炎康复片(糖衣片)，批号：200301001；包装：铝塑板，每板25片，每盒装2板；由本公司生产。

二、色谱条件

1.色谱柱：Kromasil C-18柱

(5μm，250mm×4.6mm)。

2.流动相：乙腈-0.2％磷酸(26∶74)；流速：1.0ml/min。

3.检测波长：取黄芩苷对照品溶液(C＝0.030mg/ml)，置紫外分光光度计中，从250～500nm进行连续波长扫描，结果表明，黄芩苷在277nm处有最大吸收峰，故选择277nm为测定吸收波长(请见图9)。

在上述分析条件下，黄芩苷峰完全达到基线分离，其峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5，理论板数按黄芩苷峰计算大于3000。

三、对照品纯度检查

精密吸取黄芩苷对照品溶液(C＝0.030mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，测定，按面积归一法计算，其含量为99.31％。

四、提取条件选择及提取完全性试验

1.超声时间的选择：取本品10片，共4份，除去糖衣，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇50ml，精密称定，分别超声处理(功率250W，频率50KHZ)20、25、30、40分钟，取出，放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

表3 超声时间考察

序号	超声时间(分)	黄芩苷的含量(mg/片)
			1	20	2.01
2	25	2.12
			3	30	2.22
4	40	2.21

以上结果表明，超声时间为30分钟，与超声40分钟含量已无明显差异，因此选用30分钟作为超声处理时间。

五、方法学考察

1.线性范围的考察：取黄芩苷对照品溶液(0.030mg/ml)，分别进样4μl、8μl、12μl、16μl、20μl记录色谱图，测定峰面积，结果见表4。

表4 线性关系测定结果

进样量(μg)	0.12	0.24	0.36	0.48	0.60
						峰面积值	494.7	1026.4	1489.7	1985.2	2487.8

以峰面积值(y)对进样量(x)进行回归，得标准曲线方程y＝4120.8x+13.26，R＝0.99985。以峰面积值(y)对进样量(x)作图，得一直线(请见图10)。以上结果表明，在0.12～0.60μg范围内，黄芩苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。

2.精密度试验：精密吸取黄芩苷对照品溶液(C＝0.030mg/ml)10μl，连续重复进样5次，测定，记录其峰面积值，结果见表5。

表5 黄芩苷精密度试验

实验号	1	2	3	4	5	RSD(％)
							峰面积值	1231.59	1242.20	1235.97	1238.83	1239.18	0.32

结果表明：黄芩苷对照品重复进样5次测得峰面积积分值的相对标准偏差RSD＜2.0％，故认为本方法具有良好的精密度。

3.阴性空白对照试验：取除去黄芩的模拟处方，制成不含黄芩的空白样品，按供试品溶液制法制成阴性对照溶液。另取供试品溶液及对照品溶液(C＝0.030mg/ml)，按正文方法进行测定。试验结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间位置上，有一对应的单一色谱峰，而阴性对照液色谱中，在该保留时间相应位置处无相对应的峰出现。说明阴性空白对其测定无干扰(请见图11)。

4.稳定性试验：精密吸取同一批(批号：200301001)供试品溶液按0、2、4、6、8小时时间间隔，分别注入液相色谱仪进行测定，试验结果请分别见表6。

表6 稳定性试验结果

试验结果表明，样品溶液中黄芩苷在8小时内稳定性良好。

5.重复性试验：取同一批(批号：200301001)样品5份，按正文方法制备样品供试液，测得峰面积并计算含量，结果见表7。

表7 样品重复性试验及结果

试验结果表明，本方法5次重复测定的相对标准偏差RSD＝1.1％，说明其重复性较好。

6.加样回收率试验：精密称取已知含量的样品(2.218mg/片)适量，精密称定，分别加入黄芩苷对照品适量，依法测定，以下列公式计算回收率，结果见表8。

表8 样品回收率试验结果

试验结果表明：本方法具有较高的回收率，其平均回收率为98.12％，RSD为1.47％，加样回收良好。

六.样品含量测定

取妇炎康复片(糖衣片)连续十批，分别按正文含量测定项下方法，进行测定(请见图12)。结果见表9。

表9 十批样品(糖衣片)中黄芩苷含量测定结果(n＝2)

再取妇炎康复片(薄膜衣片)连续三批，分别按正文含量测定项下方法，进行测定(请见图13)。结果见表10。

表10 三批样品(薄膜衣片)中黄芩苷含量测定结果(n＝2)

七、黄芩药材中黄芩苷的含量测定

取不同来源的黄芩药材，按2000版药典中黄芩项下含量测定方法进行测定，结果请见表11。表11黄芩药材含量测定结果(n＝2)

八、含量限度的确定

十三批样品中，黄芩苷的实测结果，最高含量为2.404mg/片，最低为1.521mg/片；考虑到处方用量，工艺损耗与装量差异等因素影响，薄膜衣片和糖衣片均暂定为本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于1.5mg/片。

三批不同来源药材中，黄芩苷的最低含量为7.84％，最高为10.28％，按中国药典2000年版一部规定，含量不得低于9.0％。中国药典2005年版一部规定，含量亦不得低于9.0％。暂定为其黄芩苷含量不得低于9.0％。

试验例二：本方由七味中药成份组成，采用先进的中药加工提取设备，以先进的工艺手法，制成便于口服携带方便的纯中药制剂。该药通过西安医科大学临床药理研究所试验证明：本发明经过急性毒性试验结论证实：用该中药制剂(以生药计，浓度为58.2％)小鼠灌胃给药每日最大耐受量大于69.84g/kg(以生药计)，相当于成人每日用量274倍以上，证明该药属无毒级药品。长期毒性试验结论证明：在该中药制剂大白鼠90d长期毒性试验中，未发生明显毒性反应，亦无延迟性毒性反应。动物安全用量为20.4g生药Kg/日，相当于临床成人日拟用量的80倍，故临床用药时安全有效。

主要药效学试验证明：扭体法和热板法试验表明，该中药制剂按1.16、3.49、10.48g/kg(以生药计)对小鼠灌胃给药，抑制醋酸自己的小鼠扭体反映，提高小鼠热刺激痛阀。抗炎试验表明，该中药制剂安0.87、2.62、7.86g/kg(以生药剂)对大鼠灌胃给药，抑制角叉菜胶诱导的急性实验性炎症和棉球刺激的肉芽组织增生。免疫试验表明，该中药制剂安1.16、3.49、10.48g/kg(以生药剂)对小鼠灌胃给药，对小鼠胸腺指数和脾指数和脾指数无明显影响；增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能；升高小鼠血清溶血素含量，促进小鼠特异性抗体的产生和分泌；升高小鼠脾脏淋巴细胞增殖指数，促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。抗菌试验表明，该中药制剂体外抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的生长繁殖，改变培育液的PH和细菌接种量，不影响该中药制剂对大肠杆菌及变形杆菌的MIC。抗阴道毛滴虫试验表明，该中药制剂体外可杀灭阴道毛滴虫，具有时间和计量依赖性。结果说明，该中药制剂有镇痛和抗炎作用，能增强小鼠非特异性免疫及特异性体液和细胞免疫，体外有抗菌和抗阴道毛滴虫作用。

通过药学实验结论证实，该药具有明显的镇痛、抗炎、免疫增强作用以及抗菌、抗阴道毛滴虫作用。

综上所述，本发明的药理法方药既符合中医对妇科炎症的认识，又具有实践经验特色及临床试验基础，还具有现代中药药理研究基础，其组方是合理的，该发明研究达到国内同类药物研究科技水领先，填补了国内研究妇科炎症中药口服制剂的一项空白。

本发明药物含量中富有丰富的营养成份，包括丰富的植物蛋白质，动物蛋白，氨基酸、生物活性成份，维生素C、维生素B、维生素E及其一些微量元素，能有效的改善人体整个及局部生理机能。

为了更进一步表明本发明对治疗各种妇科疾病临床疗效下面详细列举一些临床观察，数据及病例。本发明临床研究：

由陕西中医药研究院附属医院、西安医科大学第二临床医学院、西安市中医医院三单位的妇科承担。评价中药制剂本发明治疗多种妇科炎症的效果。提供临床病例300例，其中霉菌性阴道炎56例，滴虫性阴道炎34例，细菌性阴道炎57例，慢性宫颈炎76例，慢性盆腔炎77例子。结果，该中药制剂对慢性阴道炎、宫颈炎、盆腔炎均取得了良好的疗效。

本发明治疗慢性阴道炎、宫颈炎、盆腔炎见效快，无副作用，长期服用均可达到治疗和预防复发的显著效果。

对临床治愈的典型病例介绍：

1.刘琪，女41岁，西安市人，教师，主诉，阴道分泌物增多，呈豆腐渣样、水样或黄色泡沫状或脓性，服用多种治疗妇科疾病的药物效果不佳，病症总是反复。后经妇科医生诊断，确诊因湿热瘀阻所致阴道炎，推荐服用本发明10盒，服用后病情好转，逐渐症状消失并且再无复发。

2.吴雪也：女，49岁，西安市人，报社，主诉，外阴瘙痒，阴道分泌物增多，呈白色粘稠或脓性，排尿困难，月经过多、痛经，经医生诊断，确诊为慢性宫颈炎，服用“本发明”20天后，月经正常，排尿正常、分泌物减少。

3.曹枼：女，43岁，西安市人，文员，下腹坠痛，腰骶部酸痛，常在劳累、性交后、排便时加重及月经前后加重，伴有低热、月经增多和白带增多，经医生诊断为慢性盆腔炎，服用“本发明”20天后病情大有好转，腰骶部酸痛基本消失。

实施例1：

(1)、将黄芩用沸水煮制10分钟，备用；

(2)、将川楝子清炒成表面焦黄色，备用；

(3)、将一半量薏苡仁粉碎成100目的细粉，备用；

(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣与败酱草、柴胡、赤芍、陈皮四味药材加水煎煮三次，第一、二次煎煮时间为1小时，第三次煎煮时间为0.5小时，滤液减压浓缩至温度为60℃，相对密度为1.17的稠膏，浓缩所得稠膏喷雾干燥成膏粉。

(5)、将步骤(3)所得中药粉、步骤(4)所得膏粉、交联聚维酮20.62份和淀粉31.46份份，混匀，制备药物制剂。

实施例2：

(1)、将黄芩用沸水煮制10分钟，备用；

(2)、将川楝子清炒成表面焦黄色，备用；

(3)、将一半量薏苡仁粉碎成100目的细粉，备用；

(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣与败酱草、柴胡、赤芍、陈皮四味药材加水煎煮三次，第一、二次煎煮时间为1小时，第三次煎煮时间为0.5小时，滤液减压浓缩至温度为60℃，相对密度为1.20的稠膏，浓缩所得稠膏喷雾干燥成膏粉。

(5)、将步骤(3)所得中药粉、步骤(4)所得膏粉、交联聚维酮21.7份和淀粉32.55份，混匀，制备药物制剂。

实施例3：

(1)、将黄芩用沸水煮制10分钟，备用；

(2)、将川楝子清炒成表面焦黄色，备用；

(3)、将一半量薏苡仁粉碎成100目的细粉，备用；

(5)、将步骤(3)所得中药粉、步骤(4)所得膏粉、交联聚维酮21份和淀粉32份，混匀，制备药物制剂。

Claims

1.一种中药妇炎康复制剂的制备方法，其原料药组成为：败酱草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黄芩、赤芍、陈皮，其特征在于：所述制剂的制备方法为：（1）、将黄芩用沸水煮制10分钟，备用；（2）、将川楝子清炒成表面焦黄色，备用；（3）、将一半量薏苡仁粉碎成100目的细粉，备用；（4）、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣与败酱草、柴胡、赤芍、陈皮四味药材加水煎煮三次，第一、二次煎煮时间为1小时，第三次煎煮时间为0.5小时，滤液减压浓缩至温度为60℃，相对密度为1.15-1.20的稠膏，浓缩所得稠膏喷雾干燥成膏粉；（5）、将步骤（3）所得细粉、步骤（4）所得膏粉、交联聚维酮20.62份-21.7份和淀粉31.46份-32.55份，混匀，制备药物制剂，其中交联聚维酮占制剂重量百分比的9.5%-10%，淀粉占制剂重量百分比的14.5%-15%，所述的药物制剂为片剂。