CN101658559A - 检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法 - Google Patents

检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于分析检测技术领域，公开了一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法。该方法采用胶束电动毛细管色谱法对何首乌提取液进行分析检测，获得二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的电泳图谱；根据校正曲线方程计算出二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度。本发明能够同时分析检测何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分，方法简单、快速和高效；所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，污染小，环境友好；所需的溶剂和样品量少，分析成本低。

Description

检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法
技术领域
本发明属于分析检测技术领域，特别涉及一种同时检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法。
背景技术
毛细管电泳是20世纪80年代以来兴起的一种新的分离分析技术，具有分辨率高、分析时间短、溶剂和样品消耗量少、样品预处理简单，可同时分离测定多组分样品等优点，在药物分析检测中的应用日益广泛。
中药何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根，主产于我国广东、四川、湖南、贵州等地，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等功效。研究表明何首乌主要活性成分为二苯乙烯苷和蒽醌类物质。目前，中国药典(2005年版)何首乌质量标准中仅对二苯乙烯苷进行定量控制，而何首乌的许多药理活性却与其含有的蒽醌类成分密切相关。目前，已有多种分别检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类化合物的方法，如可采用薄层色谱法、液相色谱法、分光光度法、酶化学发光法和毛细管电泳法等进行二苯乙烯苷的检测，而蒽醌类成分的分析方法主要有分光光度法、薄层扫描法、薄层比色法、纸层析法、液相色谱法和毛细管电泳法等。但迄今尚未见同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的报道。对何首乌有效活性成分的同时检测，可以综合地反映出何首乌的质量，能够更有效地对何首乌进行质量控制。
发明内容
为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种能够快速、高效地同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分(大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚)的毛细管电泳方法，该方法的检测步骤如下：
(1)将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成上述各种对照品浓度均为50μg/mL的对照品混合液；采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对对照品混合液进行毛细管电泳分析，获得对照品混合液的电泳图谱；
(2)采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，获得样品液的电泳图谱；
(3)分别根据二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的校正曲线方程，根据步骤(2)所得电泳图谱中各对应物质峰面积，计算出何首乌提取液中二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度；
所述最佳检测条件是：内径为75μm、有效长度为50cm的未涂层熔融石英毛细管、电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇、pH为9.6、分离电压为25kV、检测温度为25℃、进样压力为0.5psi、进样时间为10秒和检测波长为254nm。
步骤(2)中所述何首乌样品提取液是按以下操作步骤进行：将何首乌的干燥块根粉碎，过80～120目筛，取粉末0.2～1.0g，加入甲醇30～60mL，用甲醇超声提取15～30min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用5～15mL甲醇洗涤2～4次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5mL甲醇溶解，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，得到何首乌样品提取液。
所述超声提取是采用60W的超声提取。
对毛细管进行以下处理：
(1)毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理：先用甲醇冲洗10min，去离子水冲洗2min，接着用0.1mol/L盐酸冲洗10min，去离子水冲洗2min，最后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min，去离子水冲洗2min。
(2)每次操作之前，毛细管依次分别用0.1mol/L盐酸、去离子水、0.1mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5min，然后再用电泳缓冲液冲洗5min。连续检测时，每次进样前毛细管用电泳缓冲液冲洗2min。
在最佳检测条件下，二苯乙烯苷和蒽醌类成分在18min内达到基线分离；迁移时间和峰面积的日内RSD值分别为0.43～0.79％和0.98～1.87％；迁移时间和峰面积在6天内的日间RSD值分别为0.74～1.53和1.18～2.39％；检测限(信噪比S/N＝3)为0.26～0.56μg/mL；加标回收率为98.5～104.0％。
本发明相对现有技术，具有如下的优点及有益效果：(1)本发明为何首乌药材及其相关制剂的质量控制提供技术支持；(2)能够同时分析检测何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分，方法简单、快速和高效；(3)环境友好：所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，比液相色谱法更环保和有利于检测者的身体健康，污染小；(4)分析成本低：所需的溶剂和样品量少。
附图说明
图1为对照品混合液的电泳图谱，其中1为二苯乙烯苷；2为大黄素；3为芦荟大黄素；4为大黄酸；5为大黄酚；6为大黄素甲醚。
图2为德庆何首乌样品提取液的电泳图谱，其中1为二苯乙烯苷；2为大黄素；3为芦荟大黄素；4为大黄酚。
图3为峨眉山何首乌样品提取液的电泳图谱，其中1为二苯乙烯苷；2为大黄素；3为芦荟大黄素；4为大黄酸；5为大黄酚。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
所用仪器装置为：内径为75μm、有效长度为50cm的未涂层熔融石英毛细管；P/ACE TM MDQ毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器；
所用试剂为：二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品；何首乌对照品；0.1mol/L的氢氧化钠溶液；5mol/L的氢氧化钠溶液；0.1mol/L的盐酸；甲醇；十二烷基硫酸钠；硼砂；去离子水；配制好的溶液在使用之前均经0.22μm滤膜过滤。
实施例1：
1)最佳检测条件的确定：
(1)电泳缓冲液的配制：
用去离子水分别配制浓度均为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液；
a、利用浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，配制十二烷基硫酸钠浓度分别为10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L、40mmol/L和50mmol/L的15mmol/L硼砂-十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液，用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6；
b、利用浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，配制硼砂浓度分别为5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L和25mmol/L的硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液，用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6；
c、利用浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，配制甲醇体积比浓度分别为0％、5％、10％、15％和20％的15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-甲醇缓冲液，用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6；
d、利用浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，配制缓冲液15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇，用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH分别为8.8、9.2、9.6、10.0和10.4。
(2)二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品混合液的配制：
分别将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成二苯乙烯苷对照品储备液、大黄素对照品储备液、芦荟大黄素对照品储备液、大黄酸对照品储备液、大黄酚对照品储备液和大黄素甲醚对照品储备液，浓度均为400μg/mL，储备液于4℃冰箱保存。将上述各种对照品储备液混合在一起，制成二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品浓度均为50μg/mL的对照品混合液。
(3)毛细管电泳法同时分离检测二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品混合液的条件，并在此条件下进行上述各物质线性范围和检测限的考察：
将步骤(2)所得对照品混合液进行毛细管电泳分析：采用胶束电动毛细管色谱法，在进样压力为0.5psi、进样时间为10秒、检测波长为254nm、检测温度为25℃的条件下，在5-25mmol/L之间调节硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液中硼砂的浓度，在10-50mmol/L之间调节15mmol/L硼砂-十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液中十二烷基硫酸钠的浓度，在体积百分含量0-20％之间调节15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-甲醇缓冲液中甲醇的浓度；在8.8-10.4之间调节15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液的pH值；在15-25kV之间调节分离电压。
综合分离度、峰形、灵敏度、重现性等方面确定灵敏度高、峰形对称无明显峰展宽、分离度及重现性好的检测条件为最佳条件，获得最佳检测条件为：内径为75μm、有效长度为50cm的未涂层熔融石英毛细管，电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-10％甲醇(体积比)，pH为9.6，分离电压为25kV，检测温度为25℃，进样压力为0.5psi，进样时间为10秒，检测波长为254nm。
2)二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品的同时分离检测
将对照品混合液，采用最佳检测条件进行毛细管电泳分析，18min内二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚可同时得到分离检测(电泳图谱如图1所示)。
3)校正曲线的制定
将二苯乙烯苷对照品储备液稀释为400μg/mL、300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL和5μg/mL的二苯乙烯苷标准溶液；大黄素对照品储备液稀释为300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的大黄素标准溶液；芦荟大黄素对照品储备液稀释为300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的芦荟大黄素标准溶液；大黄酸对照品储备液稀释为300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的大黄酸标准溶液；大黄酚对照品储备液稀释为200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的大黄酚标准溶液；大黄素甲醚对照品储备液稀释为200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和5μg/mL的大黄素甲醚标准溶液。在最佳检测条件下，对上述一系列二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的标准溶液进行毛细管电泳分析。以分析物的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线，获得二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的校正曲线方程、线性相关系数、线性范围和检测下限如表1所示。
表1六种分析物的校正曲线回归分析及检测限
Figure G2009101922087D00061
4)重现性实验：
在最佳检测条件下考察重现性：将二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚均分别吸取浓度为5mg/L、50mg/L、100mg/L的对照品溶液在一天内连续进样测定6次，记录其迁移时间和峰面积，考察日内精密度。将上述每种物质均分别吸取浓度为5mg/L、50mg/L、100mg/L的对照品溶液每天进样检测，连续测定6天，记录其迁移时间和峰面积，考察日间精密度。迁移时间和峰面积的日内RSD值分别为0.43～0.79％和0.98～1.87％，迁移时间和峰面积在6天内的日间RSD值分别为0.74～1.53和1.18～2.39％。实验证明本发明方法的峰面积日内精密度及日间精密度均能够达到药物分析RSD在10％以内的要求；日内迁移时间和日间迁移时间的RSD控制在5％内。
5)空白何首乌对照品提取液及含二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品的加标何首乌对照品提取液的制备和检测
加标何首乌对照品提取液的制备：将何首乌的干燥块根粉碎，过80目筛，取粉末0.2g，加入甲醇30mL，用甲醇超声提取15min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用5mL甲醇洗涤2次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5mL甲醇溶解，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，得到空白何首乌样品提取液。取空白何首乌对照品提取液2mL，分别将1mL的二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚储备液加入空白何首乌对照品提取液中配成二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品浓度均为50μg/mL的加标何首乌对照品提取液；
在最佳检测条件下，获得空白何首乌对照品提取液及含二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品的加标何首乌对照品提取液的电泳图谱；根据电泳图谱和步骤3)所得校正曲线方程，计算得到二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚的加标回收率及其相对标准偏差(RSD)分别为104％，2.6％；103％，2.7％；101％，1.2％；98.5％，2.9％；98.6％，2.2％；99.9％，2.6％。
在实验过程中，为保证获得较高的信号响应和较好的检测重现性，需对毛细管进行适当的处理：
A、毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理：先用甲醇冲洗10min，去离子水冲洗2min，接着用0.1mol/L盐酸冲洗10min，去离子水冲洗2min，最后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min，去离子水冲洗2min；
B、每次操作之前，毛细管依次分别用0.1mol/L盐酸、去离子水、0.1mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5min，然后再用缓冲液冲洗5min；连续检测时，每次进样前毛细管用缓冲液冲洗2min。
实施例2
对一种产地为广东德庆的何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分进行分析，所用仪器和溶液处理方法如前所述，检测步骤如下：
(1)提取液的制备
将何首乌的干燥块根粉碎，过100目筛，取粉末0.6g，加入甲醇50mL，用甲醇超声提取20min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用10mL甲醇洗涤3次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5mL甲醇溶解，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，得到何首乌样品提取液。
(2)15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇，pH 9.6缓冲溶液的配制
先用去离子水分别配制浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，浓度为5mol/L的氢氧化钠溶液；然后利用硼砂和十二烷基硫酸钠母液配制15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇缓冲液，最后用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6。
(3)何首乌提取液中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的检测
将步骤(1)所得何首乌提取液进行毛细管电泳分析，检测条件同实施例1所得最佳检测条件：电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-10％甲醇(体积比)，pH为9.6，分离电压为25kV，检测温度为25℃，进样压力为0.5psi，进样时间为10秒，检测波长为254nm。在该条件下，以图1为对照，检测到提取液中含有二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素和大黄酚(电泳图谱见图2)；根据表1的校正曲线方程计算出二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素和大黄酚的含量分别为12.02mg/g、2.16mg/g、1.16mg/g和0.58mg/g。
在实验过程中，为保证获得较高的信号响应和较好的检测重现性，需对毛细管进行适当的处理：
a、毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理：先用甲醇冲洗10min，去离子水冲洗2min，接着用0.1mol/L盐酸冲洗10min，去离子水冲洗2min，最后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min，去离子水冲洗2min。
b、每次操作之前，毛细管依次分别用0.1mol/L盐酸、去离子水、0.1mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5min，然后再用缓冲液冲洗5min。
实施例3
对一种产地为四川峨眉山的何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分的分析，所用仪器和溶液处理方法如前所述，检测步骤如下：
(1)提取液的制备
将峨眉山何首乌的干燥块根粉碎，过120目筛，取粉末1.0g，加入甲醇60mL，用甲醇超声提取30min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用15mL甲醇洗涤4次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5mL甲醇溶解，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，得到何首乌样品提取液。
(2)15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-10％甲醇(体积比)，pH 9.6缓冲溶液的配制
先用去离子水分别配制浓度为100mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸钠母液，浓度为5mol/L的氢氧化钠溶液；然后利用硼砂和十二烷基硫酸钠母液配制15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-10％甲醇(体积比)缓冲液，最后用5mmol/L的氢氧化钠溶液和盐酸调节pH为9.6。
(3)对何首乌提取液中二苯乙烯苷和蒽醌类成分进行检测
将步骤(1)所得何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，检测条件同实施例1所得最佳检测条件：电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-10％甲醇(体积比)，pH为9.6，分离电压为25kV，检测温度为25℃，进样压力为0.5psi，进样时间为10秒，检测波长为254nm。在该最佳条件下，以图1为对照，检测到提取液中含有二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚(电泳图谱见图3)。根据表1的校正曲线方程计算出二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚的含量分别为10.01mg/g、2.45mg/g、1.91mg/g、3.08mg/g和0.32mg/g。
在实验过程中，为保证获得较高的信号响应和较好的检测重现性，需对毛细管进行适当的处理：
(1)、毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理：先用甲醇冲洗10min，去离子水冲洗2min，接着用0.1mol/L盐酸冲洗10min，去离子水冲洗2min，最后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min，去离子水冲洗2min。
(2)、每次操作之前，毛细管依次分别用0.1mol/L盐酸、去离子水、0.1mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5min，然后再用缓冲液冲洗5min。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1、一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将二苯乙烯苷对照品、大黄素对照品、芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品和大黄素甲醚对照品溶于甲醇中，制成上述各种对照品浓度均为50μg/mL的对照品混合液；采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对对照品混合液进行毛细管电泳分析，获得对照品混合液的电泳图谱；
(2)采用胶束电动毛细管色谱法，在最佳检测条件下，对何首乌样品提取液进行毛细管电泳分析，获得样品液的电泳图谱；
(3)分别根据二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的校正曲线方程，根据步骤(2)所得电泳图谱中各对应物质峰面积，计算出何首乌提取液中二苯乙烯苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚的浓度；
所述最佳检测条件是：内径为75μm、有效长度为50cm的未涂层熔融石英毛细管、电泳缓冲液组成为15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸钠-体积比10％甲醇、pH为9.6、分离电压为25kV、检测温度为25℃、进样压力为0.5psi、进样时间为10秒和检测波长为254nm。
2、根据权利要求1所述的一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：步骤(2)中所述何首乌样品提取液是按以下操作步骤进行：将何首乌的干燥块根粉碎，过80～120目筛，取粉末0.2～1.0g，加入甲醇30～60mL，用甲醇超声提取15～30min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣用5～15mL甲醇洗涤2～4次，将洗涤液和上述滤液合并，减压蒸发除去溶剂后加入5mL甲醇溶解，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，得到何首乌样品提取液。
3、根据权利要求2所述的一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：所述超声提取是采用60W的超声提取。
4、根据权利要求1所述的一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：对毛细管进行以下处理：
(1)毛细管在第一次使用前，按以下的程序进行预处理：先用甲醇冲洗10min，去离子水冲洗2min，接着用0.1mol/L盐酸冲洗10min，去离子水冲洗2min，最后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min，去离子水冲洗2min。
(2)每次操作之前，毛细管依次分别用0.1mol/L盐酸、去离子水、0.1mol/L氢氧化钠、去离子水冲洗5min，然后再用电泳缓冲液冲洗5min。
5、根据权利要求1所述的一种同时分离检测何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的毛细管电泳方法，其特征在于：在最佳检测条件下，二苯乙烯苷和蒽醌类成分在18min内达到基线分离；迁移时间和峰面积的日内RSD值分别为0.43～0.79％和0.98～1.87％；迁移时间和峰面积在6天内的日间RSD值分别为0.74～1.53和1.18～2.39％；检测限为0.26～0.56μg/mL；加标回收率为98.5～104.0％。
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