CN101653463A - 一种老鹳草中鞣质类成分的提取、纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种老鹳草中鞣质类成分的提取、纯化方法。本方法是采用老鹳草的地上部分为原料。该工艺流程主要分为三部分：乙醇超声循环提取；明胶沉淀法初步纯化；大孔吸附树脂纯化。本发明确立了老鹳草中鞣质超声循环提取条件、鞣质与明胶沉淀分离条件以及大孔吸附树脂HPD－100纯化条件。鞣质为多元酚类化合物，对温度不稳定，本发明的新工艺方法均在50℃以下操作，避免了鞣质类成分在常规热回流提取过程中因高温加热所引起的化学结构改变，因此本发明方法可得到纯度较高的鞣质，产品中鞣质含量高于50％，且该工艺方法提取溶剂少，提取周期短，方法安全，成本低廉，树脂可反复使用，适于工业化生产。本发明将为老鹳草鞣质类成分化学结构、药理活性及药物制剂的深入研究奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药的提取、纯化方法，具体的说是从中药老鹳草及老鹳草属植物的地上部分提取、纯化鞣质类成分的工艺。
背景技术
中国药典收载药材老鹳草来源于牻牛儿苗科牻牛儿苗属植物牻牛儿苗(Erodiumstephanianum Wild.)、老鹳草属植物老鹳草(Geranium wilfordii Maxim.)或野老鹳草(G.carolinianum L.)的干燥地上部分。我国老鹳草品种较多，分布较广，资源丰富，常见的老鹳草除上述品种外，尚有多种老鹳草属植物作老鹳草药用。老鹳草具有祛风湿、通经络、止泻痢等功效，临床主要用于治疗风湿痹痛、麻木拘挛、泄泻痢疾及痈疽、肠炎、感冒、疱疹性角膜炎等疾病。现代药理研究结果表明，其主要化学成分包括鞣质、挥发油、黄酮类和有机酸等，其中鞣质类成分的含量与其药理活性密切相关，为其主要有效成分之一。国内外研究表明老鹳草中鞣质类成分具有抗菌、抗病毒、抗氧化，抗炎、抗溃疡、免疫和镇痛等药理作用。老鹳草药材分布广泛、资源丰富，且富含鞣质类成分，提取老鹳草中鞣质类成分用于开发药品、消毒制品、保健食品等产品市场潜力巨大。
目前中药中鞣质类成分的提取、纯化多采用丙酮—水溶剂回流提取，用水—乙酸乙酯萃取，浓缩干燥的工艺。该工艺所得鞣质类成分含量一般低于50％，无法满足一些产品研发和生产的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种以老鹳草地上部分为原料，提取物中鞣质类成分含量高于50％的提取、纯化方法。
本发明方法具体优选如下步骤：
(1)超声循环法提取。将粉碎粒度为1～10mm的老鹳草粉末置于乙醇溶液中，物料配比(W/V)为老鹳草∶乙醇溶液＝1∶10～1∶14，乙醇溶液浓度为30～60％，超声功率400～600W，间隔超声时间比为0.6∶1.5～0.6∶4.5，室温下超声循环提取1～2次，每次0.5～1.5h，合并药液，滤过，浓缩，得提取液。
超声循环提取是近年来新兴的提取方法，该提取方法简单，自动化程度高，不需要高温加热，与常规热回流提取法相比提取溶剂用量减少了50％，缩短了提取时间，提高了提取效率和有效成分转移率，适合工业化生产。
(2)初步纯化。提取液中加入浓度为2～6％明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置25min，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀物中加入20～100％丙酮水溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩，得初步纯化液。
明胶沉淀法是分离鞣质常用的方法，该方法反应灵敏，简单易行，加入明胶产生沉淀的原因可能是由于鞣质与带电荷的明胶相互作用，形成了可溶性的蛋白质结合物，结合物之间又彼此相互聚集，最终形成复聚物沉淀出来；丙酮能够溶解明胶沉淀中的鞣质可能是因为丙酮中的羰基与鞣质中的酚羟基易形成羰醛缩合。
(3)纯化。大孔吸附树脂湿法装柱，加入适量初步纯化液上柱，先用2倍柱体积的蒸馏水与1倍柱体积的15％乙醇洗脱除杂，后用2倍柱体积的70％乙醇进行洗脱，洗脱速率均为1.6B V/h，收集洗脱液，得纯化液；
(4)干燥。纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。
大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换机和其他吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，是依靠它与被吸附质之间的范德华力，通过树脂巨大的表明进行物理吸附，达到分离纯化的目的。本发明选用大孔吸附树脂分离技术用于老鹳草提取物中鞣质类成分的纯化，显著提高了鞣质在提取物中含量，经测定本法制备的老鹳草鞣质类成分提取物含量为65～85％，该工艺操作简便，成本较低，树脂可再生使用，适合工业生产。
本发明所用的含量测定方法为《中国药典》2005年版(一部)附录XB项下记载的干酪素法测定鞣质含量。
以下结合实施例对本发明的具体实施方式加以说明。但本发明的保护范围不能认为只局限于下述具体实施方式及具体实例。对所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的基本前提下，还可以做出若干简单推演或等同替换，这些等同替换方案仍然将被视为在本发明的保护范围之内。
具体实施方式
实施实例1：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入20％乙醇12L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取1h，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入50％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为53.5％。
实施实例2：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入40％乙醇12L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取1h，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入50％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为65.9％。
实施实例3：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入60％乙醇12L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取1h，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入50％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为64.5％。
实施实例4：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入40％乙醇7L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取2次，每次0.5h，合并药液，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入50％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为70.7％。
实施实例5：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入40％乙醇12L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取1h，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入30％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为60.4％。
实施实例6：
称取粉碎粒度为2～8mm的老鹳草粉末1kg置于超声循环提取仪中，加入40％乙醇12L，以超声功率500W，间隔超声时间比为0.6∶1.5，室温条件下超声提取1h，滤过，浓缩，得提取液；提取液中加入4％热明胶溶液搅拌至不再产生沉淀为止，静置，离心，弃去上清液得沉淀。沉淀中加入100％的丙酮溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩至相对密度为1.11(60℃)，得初步纯化液；HPD-100大孔吸附树脂湿法装柱，加初步纯化液，依次用2倍柱体积的蒸馏水，1倍柱体积的15％乙醇，2倍柱体积的70％乙醇以1.6BV/h洗脱速度进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液，得纯化液；将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。测定提取物中鞣质含量为63.6％。
Claims (6)
1、一种从老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，该工艺特征包括以下步骤：
(1)超声循环提取。将老鹳草的地上部分粉碎，取适量老鹳草粉末以乙醇为提取溶剂进行超声循环提取；
(2)初步纯化。提取液加入热明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止，静置25min，离心，弃去上清液得沉淀，沉淀物中加入丙酮水溶液，50℃加热搅拌至沉淀完全溶解，30℃水浴30min，滤过除去明胶，滤液经减压浓缩，得初步纯化液；
(3)纯化。大孔吸附树脂湿法装柱，加入初步纯化液，先用2倍柱体积的蒸馏水与1倍柱体积的15％乙醇洗脱除杂，后用2倍柱体积的70％乙醇进行洗脱，洗脱速率均为1.4～1.6BV/h，收集洗脱液，得纯化液；
(4)干燥。将纯化液浓缩至适宜浓度，喷雾干燥，即得老鹳草鞣质类成分提取物。
2、如权利1所述的老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，其特征在于：老鹳草采用《中国药典2005年版》(一部)所收载的中药老鹳草及其它老鹳草属(Geranium)植物的地上部分。
3、如权利1所述的老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，其特征在于：所述步骤(1)中提取方法为超声循环提取法，提取溶剂为30～60％乙醇，物料粉碎粒度为1～10mm，料液配比为1∶10～1∶14，超声功率400～600W，间隔超声时间比为0.6∶1.5～0.6∶4.5，室温下超声循环提取1～2次，每次0.5～1.5h。
4、如权利1所述的老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，其特征在于：所述步骤(2)中，明胶溶液浓度为2～6％，丙酮水溶液浓度为20～100％，初步纯化液的相对密度为1.03～1.13(60℃)。
5、如权利1所述的老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，其特征在于：所述步骤(3)的大孔吸附树脂树脂为HPD-100、HPD-400或ADS-17型；
6、如权利1所述的老鹳草中提取分离鞣质类成分的提取、纯化工艺，其特征在于经所述步骤(1)～(4)后，鞣质类成分在提取物中的含量应高于50％。
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