CN101629198B - 一种毛蕊花糖苷单体化合物的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种毛蕊花糖苷单体化合物的生产方法。本发明方法利用新鲜肉苁蓉肉质茎，通过细胞破碎、浆液提取等系统工艺及高温灭酶工艺处理，将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，催化水解底物中的松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂、定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物，再通过分离提纯工艺及浓缩、干燥工艺，收获毛蕊花糖苷单体化合；通过调整分离提纯工艺条件，收获的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达50.8％～90％。毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性。

Description

一种毛蕊花糖苷单体化合物的生产方法

技术领域

本发明涉及一种利用新鲜肉苁蓉肉质茎生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法。

背景技术

肉苁蓉(Herba Cistanches)是多年寄生草本植物，素有沙漠“人参”的美誉，为著名的补益中药，具有益精气、补肾助阳和延缓衰老等功效。现代分析表明，肉苁蓉的主要活性成分为苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素苷类、低聚糖类衍生物、D-甘露醇和甜菜碱等。苯乙醇苷类(PhenylethanoidGlycosides，Ph Gs)包括松果菊苷(Echinacoside)、毛蕊花糖苷(Acteoside)等活性物质，通过肠内菌代谢研究发现，苯乙醇苷类化合物的主要成分松果菊苷在胃肠道中运动过程需经大肠内微生物酶催化转化为毛蕊花糖苷的代谢通道，是导致口服后苯乙醇苷类成分药物生物利用度与疗效存在显著差异的主要因素。毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用新鲜肉苁蓉肉质茎，通过系统工艺处理和生物催化转化生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法。

本发明的方法是，利用新鲜肉苁蓉肉质茎，通过细胞破碎、浆液提取工艺及高温灭酶或超高温瞬时灭酶工艺处理，将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，催化水解底物中的松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂(β-1，6-糖苷键)，定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物，再通过分离提纯工艺，及浓缩、干燥工艺，收获毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为38℃～60℃，pH为4.0～5.8，时间为4～11h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为2U/g～1500U/g；通过调整分离提纯工艺条件，收获的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达50.8％～90％。

本发明方法的具体步骤包括：

1、挑选新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，或用工业纯净水漂洗，捞起后，置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入工业纯净水或经预冷的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉破碎细胞浆状物；然后采用通常工业压滤机压滤或工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；可再将滤渣经一次至数次(一般为1～3次)加入工业纯净水或经预冷的工业纯净水，一次至数次经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，还可同时采用通常工业超声波提取装置对破碎细胞进行提取，再经工业压滤机压滤或工业离心机分离，进一步获取肉苁蓉细胞浆液；将破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液控制在20℃以下(一般为4～20℃)低温环境；

2、通过通常工业加热装置将步骤1得到的肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，或进行工业超高温瞬时灭酶，将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为38℃～60℃，最佳温度为42℃～48℃；pH为4.0～5.8，最佳pH为4.5～5.3；时间为4～11h，最佳时间为5h～6h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为2U/g～1500U/g，最佳酶活力为20U/g～100U/g；可再添加K⁺、Na⁺、Mn²⁺或Co²⁺作为催化反应的激活剂以促进酶的活性，添加的激活剂在初始反应物中的浓度为0.1mol/L～2.5mol/L，最佳浓度为0.5mol/L～1.5mol/L；

3、将经步骤2反应后的反应液，采用通常工业超滤膜分离，选择性筛分及截留除去多糖、蛋白质等大分子杂质以及微粒和亚微粒等杂质；再采用通常工业纳滤膜分离，选择性筛分及截留除去氨基酸、D-甘露醇、甜菜碱等小分子杂质；还可再采用通常工业大孔树脂吸附分离工艺，或/和采用通常工业层析柱分离纯化工艺，或/和采用通常模拟移动床色谱分离系统工艺或通常多功能色谱分离系统工艺进一步分离纯化；通过调整以上分离提纯工艺条件，可获得不同纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将步骤3获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓缩工艺或工业薄膜蒸发浓缩工艺，获得固形物含量为30％～50％的浓缩物；再通过工业喷雾干燥工艺，或通常的其它工业干燥方法，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物；收获的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达50.8％～90％；

本发明方法涉及的新鲜肉苁蓉肉质茎，可以是新收获(未经冷藏或冷冻保鲜)的新鲜肉苁蓉肉质茎，或者是置于工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎或置于工业冷冻库冷藏的新鲜肉苁蓉肉质茎；或者是上述新鲜肉苁蓉肉质茎的碎料或切片。

本发明所述的肉苁蓉是符合《中华人民共和国药典》2005年版收载的列当科植物肉苁蓉Cistanchedeserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight。

本发明方法涉及的采用工业冷藏库保鲜的库温一般为1℃～13℃，最佳的冷藏库保鲜库温为4℃～10℃；采用工业冷冻库冷藏的库温一般为-52℃～-10℃，最佳的冷冻库冷藏的库温为-36℃～-18℃。采用的置于水槽中的冷水水温为1℃～20℃，最佳的冷水水温为4℃～10℃；每次加入工业纯净水或经预冷的工业纯净水的量为肉苁蓉破碎细胞或滤渣的100％～400％(重量比)，最佳添加量为200％～300％(重量比)；经预冷的工业纯净水水温为1℃～20℃，最佳水温为4℃～10℃。

本发明方法涉及的β-葡萄糖苷酶工业酶制剂，包括β-葡萄糖苷酶及富含β-葡萄糖苷酶的纤维素酶、植物提取复合酶、植物水解复合酶。

本发明方法涉及的高温灭酶的温度一般为85℃～100℃，时间一般为5min～10min；超高温瞬时灭酶的温度一般为135℃～141℃。

本发明方法涉及的工业生物反应器可以是通常工业生物反应器，或采用通常工业发酵罐或夹层搅拌罐。

本发明方法涉及的超滤膜的相对分子质量为1000～4500，最佳的相对分子质量为1500～3500；纳滤膜相对分子质量为200～300，最佳的相对分子质量为250～280；超滤膜选用CA或CTA、PAN、PS、PSA、PES、PVDF、PEK、SPS的系列膜型号；纳滤膜选用4040-UHT-ESNA或8540-UHY-ESNA、ESNA-FREE650、ESNA-FREE1700、NTR7450HG、NTR729HG、NF-CA膜、NF-CA卷式元件及中空纤维件的系列膜型号；大孔吸附树脂选用XAD、Diaion、SP、Posapak及Chromosorb及非离子型高分子吸附剂AB-8、CHA-III、CAD-40、D101、D301、D296、D396R、D4006、D4020、D3520、DA201、DM301、D130、GDX104、HPD100、HPD450、HPD500、HPD600、HPD8、H107、JD-KW、LD601、LD605、ME-1、ME-2、ME-3、NKA-2、NKA-9、R-A、S8、SIP、WLD及X-5型系列型号；模拟移动床色谱分离系统及多功能色谱分离系统，可以选用MB、MD、ME、MF制备型色谱分离层析仪、SMBC实验型、SMBC中试型、XZ12E-4L型、XZ20Z-2L型及SMBC工业化连续制备色谱型的色谱分离系统。本发明方法涉及的超滤膜、纳滤膜、大孔吸附树脂、非离子型高分子吸附剂、工业层析柱、移动床色谱分离系统、多功能色谱分离系统，可选用通常国外及国内商品。

本发明方法涉及的工业真空浓缩工艺或工业薄膜蒸发浓缩工艺的温度一般为42℃～80℃，最佳温度为45℃～65℃；采用的工业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度一般为125℃～285℃，最佳进风温度为135℃～185℃。

本发明方法涉及的其它工业干燥的方法包括通常工业滚筒干燥、气流干燥、流化床干燥、微波真空干燥、微波干燥、真空干燥或热风循环干燥，干燥温度一般为50～100℃，最佳为58～80℃。

药理实验表明，毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性，易于被小肠吸收而通过血脑屏障进入脑内，对脑细胞保护具有显著的药理活性，可应用于防治脑神经退行性疾病和抑制脑细胞神经元凋亡、老年痴呆症等脑疾病的无毒副作用天然药物开发。

本发明方法生产的毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物，可直接用于医药原料，或作为化妆品原料，也可作为原料或复方原料生产口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、丸剂或袋泡茶等功能性保健食品。本发明方法的推广实施，将使肉苁蓉这一名贵的中药更好地造福于人类的健康。

本发明方法中涉及的各种量的百分比(％)，除了另有说明外，均为重量百分比。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例一：

1、挑选置于库温为4℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为18℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为8℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉破碎细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的200％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为20℃；

2、通过工业微波加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为95℃，时间为6min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为42℃，pH为4.9，时间为5.5h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为80U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达89.1％；

3、将催化反应后的反应液采用相对分子质量为4500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤，然后采用AB-8型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经XZ12E-4L型多功能色谱分离系统进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业真空浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为40％的浓缩物；进一步通过工业真空干燥工艺，干燥温度为58℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为88.8％。

实施例二：

1、挑选置于库温为10℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为19℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为4℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的300％；然后采用工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；将滤渣再加入工业纯净水，水的加入量为滤渣重量的200％，经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，并采用超声波提取装置对破碎细胞进行提取，再经工业离心机分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为18℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为100℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为45℃，pH为4.5，时间为5h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为22U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达95％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为4000的超滤膜分离；再采用相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，然后采用XAD型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经SMBC工业化连续制备色谱型分离系统工艺进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业薄膜蒸发浓缩工艺，温度为55℃，获得固形物含量为45％的浓缩物；进一步通过工业滚筒干燥工艺，干燥温度为55℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为90.0％。

实施例三：

1、挑选置于库温为-32℃的工业冷冻库冷藏的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用工业纯净水漂洗，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的400％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为18℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为85℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂、经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为42℃，pH为4.9，时间为4.5h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为90U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达86％；

3、将催化反应后的反应液采用相对分子质量为4500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤，然后采用NKA-2型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业真空浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为40％的浓缩物；进一步通过工业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度为185℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为81.3％。

实施例四：

1、挑选置于库温为13℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为13℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为2℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的100％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；将滤渣再经2次分别加入工业纯净水，水的加入量每次为滤渣重量的150％，并经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，再经工业压滤机压滤分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为18℃；

2、通过工业超高温瞬时灭酶，温度为138℃；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以植物水解复合酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为58℃，pH为5.0，时间为11h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为50U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达82.2％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为1500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，然后采用CAD-40型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业薄膜蒸发浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为45％的浓缩物；进一步通过工业滚筒干燥工艺，干燥温度为55℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为88.4％。

实施例五：

1、挑选置于库温为-18℃的工业冷冻库冷藏的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用工业纯净水漂洗，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的100％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为15℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为85℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为39℃，pH为4.1，时间为10.5h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为1500U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达88.9％

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为4500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤，然后采用DM301型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业真空浓缩工艺，温度为56℃，获得固形物含量为31％的浓缩物；进一步通过工业真空干燥工艺，干燥温度为56℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为86.5％。

实施例六：

1、挑选置于库温为10℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为8℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为10℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的200％；然后将肉苁蓉细胞浆状物采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；将滤渣再加入经预冷至水温为10℃的工业纯净水，水的加入量为滤渣重量的200％，经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，再经工业压滤机压滤分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为12℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为100℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为48℃，pH为4.9，时间为6h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为30U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达79.5％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为4000的中空纤维超滤膜分离；再采用相对分子质量为200的纳滤膜进行纳滤，然后采用X-5型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业薄膜蒸发浓缩工艺，温度为70℃，获得固形物含量为38％的浓缩物；进一步通过工业滚筒干燥工艺，干燥温度为60℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为85.4％。

实施例七：

1、挑选置于库温为4℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为15℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为14℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的150％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为20℃；

2、通过工业微波加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为98℃，时间为6min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为45℃，pH为4.8，时间为7h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为1500U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达78％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为2000的超滤膜分离；采用相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤，并经工业层析分离纯化工艺进一步分离提纯；获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业真空浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为40％的浓缩物；进一步通过工业真空干燥工艺，干燥温度为58℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为65.2％。

实施例八：

1、挑选置于库温为8℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为14℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为4℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的200％；然后采用工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；将滤渣再经2次分别加入工业纯净水，水的加入量每次为滤渣重量的100％，经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，再经工业离心机分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为14℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为100℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为53℃，pH为5.2，时间为9h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为33U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达88.3％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为2500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，然后采用R-A型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离；获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业薄膜蒸发浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为40％的浓缩物；进一步通过工业滚筒干燥工艺，干燥温度为65℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为58.2％。

实施例九：

1、挑选置于库温为-32℃的工业冷冻库冷藏的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用工业纯净水漂洗，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的250％；然后采用工业压滤机压滤，获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为11℃；

2、通过工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，温度为100℃，时间为10min；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以植物提取复合酶为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为38℃，pH为4.6，时间为4h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为500U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达94％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为3500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为250的纳滤膜进行纳滤；并采用MF制备型色谱分析仪分离纯化；获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业真空浓缩工艺，温度为60℃，获得固形物含量为38％的浓缩物；进一步通过工业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度为185℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为81.3％。

实施例十：

1、挑选置于库温为13℃的工业冷藏库保鲜的新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水漂洗，冷水水温为6℃，捞起后，置于工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨，加入经预冷至水温为6℃的工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉细胞浆状物，水的加入量为破碎细胞重量的200％；然后将采用工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；再将滤渣加入工业纯净水，水的加入量为滤渣重量的400％，经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，再经工业离心机分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液；经检测，破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液温度为18℃；

2、将上述获得的肉苁蓉细胞浆液进行工业超高温瞬时灭酶，温度为138℃；将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以纤维素酶工业酶制剂为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为58℃，pH为4.8，时间为10h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为2U/g；经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物的转化率达80.1％；

3、将上述催化反应后的反应液采用相对分子质量为1500的超滤膜分离；再采用相对分子质量为300的纳滤膜进行纳滤，获得较高纯度的毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

4、将上述提取液通过工业薄膜蒸发浓缩工艺，温度为55℃，获得固形物含量为42％的浓缩物；进一步通过工业滚筒干燥工艺，干燥温度为59℃，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为50.8％。

Claims (10)

1.一种毛蕊花糖苷单体化合物的生产方法，利用新鲜肉苁蓉肉质茎，通过细胞破碎、浆液提取工艺及高温灭酶工艺处理，将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，催化水解底物中松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂、定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物；再通过分离提纯工艺，及浓缩、干燥工艺，收获毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为38℃～60℃，pH为4.0～5.8，时间为4～11h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为20U/g～1500U/g。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征是该方法的具体步骤包括：

(1)挑选新鲜肉苁蓉肉质茎，置于水洗槽中用冷水或用工业纯净水漂洗；捞起后，置于通常工业破碎碾磨装置中将肉苁蓉肉质茎破碎碾磨成为破碎细胞浆状物，加入工业纯净水洗涤破碎细胞成为肉苁蓉破碎细胞浆状物；然后采用通常工业压滤机压滤或工业离心机分离，获取肉苁蓉细胞浆液；破碎碾磨和分离工艺过程肉苁蓉破碎细胞浆状物及细胞浆液控制在20℃以下低温环境；

(2)通过通常工业加热装置将肉苁蓉细胞浆液进行高温灭酶，将灭酶后的肉苁蓉细胞浆液作为催化反应底物，以β-葡萄糖苷酶工业酶制剂为生物催化剂，经通常工业生物反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程温度为38℃～60℃，pH为4.0～5.8，时间为4h～11h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为20U/g～1500U/g；

(3)将经步骤2反应后的反应液，采用通常工业超滤膜分离，选择性筛分及截留除去多糖、蛋白质大分子杂质以及微粒和亚微粒杂质；再采用通常工业纳滤膜分离，选择性筛分及截留除去氨基酸、D-甘露醇、甜菜碱小分子杂质；获得毛蕊花糖苷单体化合物提取液；

(4)将步骤3获得的毛蕊花糖苷单体化合物提取液，通过通常工业真空浓缩工艺或工业薄膜蒸发浓缩工艺，获得固形物含量为30％～50％的浓缩物；再通过工业喷雾干燥工艺或通常的其它工业干燥方法，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征是催化反应过程温度为42℃～48℃，pH为4.5～5.3，时间为5h～6h，催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为20U/g～100U/g。

4.按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(1)中再将滤渣经一次至数次加入工业纯净水，一次至数次经通常工业破碎碾磨机进一步碾磨成浆状物，再经工业压滤机压滤或工业离心机分离进一步获取肉苁蓉细胞浆液。

5.按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(1)中所述的水洗槽中的冷水水温为1℃～20℃，每次加入工业纯净水的量为肉苁蓉破碎细胞或滤渣重量的100％～400％。

6.按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所述的β-葡萄糖苷酶工业酶制剂包括纤维素酶。

7.按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所述的高温灭酶温度为85℃～100℃，时间为5min～10min；或者是温度为135℃～141℃进行超高温瞬时灭酶。

8.按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)中所述的超滤膜的相对分子质量为1000～4500，纳滤膜相对分子质量为200～300。

9.按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)中再采用通常工业大孔树脂吸附分离工艺，或/和采用通常工业层析柱分离纯化工艺，或/和采用通常模拟移动床色谱分离系统工艺或通常多功能色谱分离系统工艺进一步分离纯化。

10.按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(4)中所述的工业真空浓缩工艺或工业薄膜蒸发浓缩工艺的温度为42℃～80℃；工业喷雾干燥工艺的干燥塔进风温度为125℃～285℃；其它工业干燥的方法的干燥温度为50℃～100℃。