WO2006009418A1 - Obtención de los glicósidos cianogénico y relacionados, más derivados genínicos y sapogenínicos de plantas de la familia sapotácea para la preparación de cosméticos y composiciones dermatológicas - Google Patents

Obtención de los glicósidos cianogénico y relacionados, más derivados genínicos y sapogenínicos de plantas de la familia sapotácea para la preparación de cosméticos y composiciones dermatológicas Download PDF

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Definitions

  • This invention is related to obtaining the cyanogenic glycoside and related structurally related glycosides, and its transformations to alpha hydroxylated derivatives, the first with hydroxynitrilic characteristic initially, later transformed into benzaldehyde as finally obtained, * the latter are obtained as carboxylic acid and amide of the same acid, hydroxylated, achieved and converted all three into an extract of genins and sapogenins respectively, which are separated by their physical properties, derived by chemical or enzymatic hydrolysis of lucumin, and of the structurally related glycosides, principal of the Calocarpum, Chrysophyllum and Lucuma genera of the Sapotácea family, all of them with biological activity.
  • Biological activities are presented as isolated compounds or in a mixture of extractive substances, or purified extracts of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma with their own characteristics and the form of their use in cosmetic and dermatological pharmaceutical compositions.
  • the sources to obtain these glycosides or their genic and sapogenin derivatives can be various principles or tissues of the trees of the Sapotácea family (Calocarpum sapota, C. viride r L ⁇ cuma mammosa r L.
  • Derivatives of the cyanoglycoside and its related glycosides are also obtained from the cyanoglycoside-related glycosidic extract or from the cyanogenic glycoside itself coming from the same previous material sources or prepared mainly from the seeds of those genera.
  • the priority to obtain the glycosides related to the cyan ⁇ glycoside is received by the remnants of the degreased seeds (see residual solid product of lipid extraction or degreased flour in reference 68 at the end of this work) for being evaded "lipid algtm ⁇ s- that intervene in their Purification: KL equals the preference to obtain the agluconic derivatives of the above compounds r the genic and sapogeninic extracts, they are received by the remnants, residual solids of the seeds, of the lipidic expression and or degreased by the lipid extraction r without limiting the raw materials of origin but if not profitability due to the previous lipid use.
  • the biologically active genic and sapogeninic extracts are obtained from lucumin, - the cyanogenic glycoside and related glycosides, plant metabolites that are transformed mainly biochemically with aggregated enzymes of different genres (estrogens), - process that achieves detoxification.
  • the technique of choice for obtaining the genic and sapogenin extracts is enzymatic hydrolysis and preferably the substrate plant tissue is selected from the seeds, which are dried and degreased by the techniques described in the related patent application by the same author. on obtaining the total fixed lipids of Calocarpum, Chrysophyllum and L ⁇ cuma and the residues they leave (ref. 68), without being restrictive for this referred obtaining but if of more profitability in its yield in the integral use of the seeds as it was said previously, being able to be the same tissue of the fresh or dry ground raw seed, or different fabrics such as those mentioned above those used.
  • the raw material in particular of the seeds used are the seeds (seed devoid of the pericarp ⁇ ground and once the glycosides have been extracted, to which it is possible to carry out chemical or enzymatic hydrolysis, but preferably "degreased flours” or al greaves of expression "of the seeds directly with the related cyanogenic glycosidic content (see expression and extraction of lipid [ref.
  • glycoside raw material related to the cyanogenic glycoside, lucumin from sapotes It is also possible to use fresh, dry, non-degreased ground Q seeds to obtain the glycosides related to cyanoglycoside or to derivatives of chemical or enzymatic hydrolysis that are alternate raw materials in variants of this invention.
  • the purpose of the present invention is to put these products with the structurally related cyanoglycosidic principles or their derivatives, the genins and the sap ⁇ genins plus the set of fixed lipids (the latter are the reason for another application in connection, related to a patent by the same author [ref. 68]) of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma available to the public in engineering forms through industrial transformations of application, which solves the technical problems in the uses of the raw materials of these medicinal plants and in traditional rustic uses by practices modern in dermatology and cosmetology as well as in other utilities such as substitute food uses, in a satisfactory way and rational use of resources misused in crude treatments or as waste vegetable material, without being used,.
  • Milky sap is emetic and anthelmintic and has been used topically in wart removal and fungal skin growth. Decoctions are also taken from the bark of the yellow sapote such as febrifuge or in skin rashes. The seed is prepared as a remedy for skin ulcers (ref. 4).
  • the seed is reported (ref. 4) to be a source or substitute for perfumery "Noyeau” for perfumery and alcoholic beverages, replacing the seeds of bitter almond, peach, peach, apricot, apricot or prisco (ref.
  • the fruit of the Calocarpum, Chrysophyllum and L ⁇ cuma have many uses in traditional cuisine and are of considerable economic value (ref. 8,10) and the non-consumable parts as food have diverse uses in cosmetic, food and medicinal preparations for local topical use, traditional rustic (ref. 4,5), which fail to separate the principles and identify the particular effects in isolation or to separate toxic compounds (ref. 4,13,20,) and enable some substances from plant matter .
  • this is a cyanogenic glycoside and related structurally related glycosides such as extract containing the lucumin mentioned in the references 6,15,18 and 35 r and its derivatives which are enzymatically hydrolyzed in the present invention to give the aforementioned aglyconic extracts of genins and sapogenins with the stimulating activity of the follicle pi and other activities as mentioned above and more detailed below.
  • this extract of aglyconic derivatives that we will call here sapogeninic extract because it comes from the sapogenin glycosides which can act in synergy with the non-volatile (total fixed lipids) and volatile (the genic extract) portion of the same plants from the seeds of the sapotes which are the stars of these activities.
  • the genic extract that we will call here as genins (essential oil or volatile oily fraction) both obtained from the same glycosides of the sapotes is also obtained.
  • the genic extract is constituted as the fraction of essential oils or the essence of the sapotes, which together with the sapogeninic extract, both proper form together as a fraction of volatile aromatized, insoluble and water soluble sapotes with activity well-defined biologicals.
  • r is a topical agent with defoliative activity with positive effects on the renewal and stimulation of the development of the epidermis included
  • the objective in the subject of the invention is to make dermatological cosmetic and pharmaceutical preparations with renewal properties of the epidermis and promoters of the conservation of the scalp and characterized by having substances from Calocarpum, Chrysophyllum or Lucuma as derivatives of glycosides.
  • the cyanoglycosides and related structurally related glycosides of sapotes, apart from their biological activity, are mainly used as hydrolyzable substrates.
  • the dermatological cosmetic or pharmaceutical preparations according to the invention preferably contain the active compounds in pure or semi-purified form, or from vegetable extracts or from hydrolytic products or expression products, all of which are soluble and easily treatable and manipulative and safe, which contain the active ingredients. .
  • glycosides structurally related to cyanoglycoside, the genins, the sapogenins or the mixture in combination of sapogenins and genins, within which the volatile oils are constituted and that are described below and of the fixed oils They are constituted as a mixture of oils with non-volatile phosphatidic material, forming the total fixed lipids, plus another fraction of material (lipid) unsaponifiable as triterpene and stetoidal or sterols, non-cyanogenic glycosidic residues (ref. 18,19,27 ⁇ reason are called fixed fraction of lipids "" total "forming the sum of nonvolatile lipids present in the seed. These last five are of another application related patent by the same author (ref. 68).
  • Sapotes are known to contain lucumin and their chemical structure has been elucidated ⁇ ref. 6, 11 r 15,35), although the endogenous or extra exogenous enzymatic transformation of the same to genic derivatives such as benzaldehyde or the related structurally related glycosides, lucupiiinic acid and lucuminamide to sapogenic derivatives such as the hydroxy compound with acidic characteristics similar to mandelic acid and its amide from this group of sapote glycosides and their use in cosmetics and dermatological compositions with pharmacological activities.
  • genic derivatives such as benzaldehyde or the related structurally related glycosides, lucupiiinic acid and lucuminamide to sapogenic derivatives
  • sapogenic derivatives such as the hydroxy compound with acidic characteristics similar to mandelic acid and its amide from this group of sapote glycosides and their use in cosmetics and dermatological compositions with pharmacological activities.
  • amygdalin analogues such as those referred to in the controversial ref. 13, of the analysis of an indecisive activity on the patent of these chemical analogues of lucumin, and of the derivatives of leatrila such as that of Leatrile 111 (registered trademark) ref. Brit. Pat. 788,855 (1958) and US Pat. 2,985,664 (1961), which is the synthetic derivative "of amygdalin or beta glucuronide derivative of mandelonitrile or prunasin".
  • Amygdalin and prunasin are also sourced from natural, plant-based extractives.
  • the extracts obtained with the cyanogenic glycoside and the related structurally related glycosides of the sapotes are mainly used in the present invention to obtain hydrolytic derivatives such as genins and sapogenins, glycosylated, denitrilated, detoxified derivatives of lucumin and related glycans.
  • the hydrolytic extracts obtained from the cyanogenic glycoside present in the plant material, the benzaldehyde derivative, the genic extract and the extract of the carboxylic acid derivative alpha hydroxylated and the amide derivative of the same acid (mandelic and mandelamide respectively)
  • the sapogeninic extract are enriched by different component substances of the extract that are obtained from the vegetable matter of the sapotes and apart from that no energetic chemical reagents are used to obtain it and minimal extractive materials are used in obtaining these glycosidic derivatives as extracts of products of chemical hydrolysis or mainly enzymatic hydrolysis.
  • lueumine and related glycosides related thereto, of the sapotes by the techniques referred to in the present invention, in which methods of obtaining and using them as enzymatic hydrolyzate that uses extrageneric exogenous zymogens (of other genera) to obtain the benzaldehydic derivatives as extract of genins and also to achieve hydroxy compounds with characteristics of carboxylic acid ⁇ -benzyl-hydroxylad ⁇ , the acid Mandelic and its amide, mandelamide or as an extract of sapogenins and their use in cosmetic and dermatological pharmaceutical compositions, all of which are the object of the present invention.
  • characteristic extracts are obtained with different substances that are obtained by the same process of obtaining and separation described, constituting to the volatile organic matter of the sapotes that are the genins or the genic extract (or the essential Q volatile oils) and other volatile organic substances soluble in water that are carried in the process of obtaining from the plant matter of the sapotes as Sapogeninic extract with acidic and amidic characteristics, hydroxylated as defined below.
  • These geninic and sapogeninic extracts are constituted as the products of exogenous, extrageneric enzymatic hydrolysis of cyanogenic and related structurally related glycosides of sapotes.
  • the sapogenins have the feasibility of being crystallized as a hydroxy compound with characteristics of carboxylic acid and amyl carbonyl derivatives of the latter acid, just as the benzaldehyde from sapotes can be obtained in pure form.
  • Benzaldehyde also occurs in some seeds such as those mentioned above, different from sapotes containing amygdalin (ref, 39) such as bitter almond or also known as Prnnus amygdalus.
  • bitter almond In the bitter almond are its own enzymes.
  • endogenous (own internal) of this genus that catalyze the hydrolysis of the glycosides found in these tissues of the seeds of the almond cited (ref. 22, 42,51 r 53 ⁇ and are trivially called emulins ⁇ glucosidases) which, being shredded come into contact with the substrate of the same ground seed, breaking the endogenous cytoplasmic, subcellular or extracellular compartments ⁇ ref.
  • glycosides exiate especially to lucumin and structurally related related glycosides, which in chemical structure are very similar to amygdalin and the glycosides related to these genera correspondingly, (amygdalic acid [or amygdalinic acid] and amygdalinamide) but they vary only in the sugary residue, the gentobiose by primeverosa in the glucoside sapotes and in its related related glycosides, in the amygdalin) but that in the aglycone residue they are similar to each other, but the inability of the genera Calocarpum, Chrysophyllum and in Lucuma to be hydrolyzed in homogenates of their own zymogenic substrate, endogenous from the same seeds present (ref.
  • the biochemical event of the catalytic incapacity of the seeds of the related sapotes (ref. 64,65) as a human demand to be transformed into soluble and insoluble (water) and volatile matter with pharmacological properties such as volatile essences, which are separate as oils from the aqueous medium and with a characteristic aroma to the vegetable and the fact of its use by means of the extra generic exogenous enzymatic replacement to be transformed the related gücósidos by ⁇ -glucosidase added expressly of appropriate exogenous media, of different plant genus or microbial and thus enable its use, are the reason for the present invention and as a technical advantage over known processes such as that of bitter almond amygdalin that only transforms into ben2aldehydic genins with the endogenous own enzymatic systems, that is, without achieving hydroxy compounds with carbonyl characteristics such as carboxylic acid or its related amide corresponding to the cyanogli ⁇ ósido.
  • sugary residues of lucumin and related related glycosides are also recovered as alternative resources; in glucose and xylose or as a primrose-containing disaccharide or in extract form, as metabolites transformable into biomass, in the full use of this plant resource (ref. 14,15,26,35,53 and references cited there; ref, 56,61).
  • the extra generic enzymatic replacement a motive of the present invention results as a profitable process different from the existing ones with a minimum cost in the financing of the process that is limited to the seeds of the sapotes and the zymatic suspension of "emulsines" of a different Appropriate peculiar genus, capable of making the transformations mentioned and described below and that emerge as an innovative method for its use by treating the homogenized seeds of sapotes, plant material that is not used favorably and the reaction container.
  • the favorable uses other than the uses of this invention may be as breeding stock or graft, or that used in another more profitable way than that described in the present invention and the related patent application by the same author (ref.
  • the use of the seed of the sapotes as described in the present invention results in technical advantages with respect to the processes already known in which the resource of the seeds of the sapotes is not used in their entirety, being matter waste of the fruit and very little for other purposes or its null use in processes of profit such as obtaining and using derivatives or extracts such as genins (benzaldehyde derivatives) free of chemical reactants but accompanied by a series of volatile substances that characterize this extractive oil or essential oil and with the co-production of sapogenins or sapogeninic extract, which is also carried out by the process of the present invention or in contrast to the use of mandelic acid obtained by chemical synthesis with energetic reactions giving a racemic msz ⁇ la without obtaining the amide of this acid c ⁇ r ⁇ in the present invention and unlike the way of obtaining and using the sapogenins of the sapotes achieved in a subtle way by enzymatic biochemical reactions and separation techniques against other processes to obtain unequal analogue
  • Another technical advantage of this invention is that the volatile oils of the sapotes (essential oils) are obtained potential pharmaceutical and food ingredients that do not exist in the form of sapote essence and less commercially, which likewise characterizes their obtaining process, by its peculiar sapote aroma, different from the known isolated plant aromas.
  • the objective of the present invention is to solve the problem of rustic use that has been used in traditional cosmetic, medicinal and food uses that distinguish, the beneficial effects on the skin, hair and in different conditions and customs based on Calocarpur ⁇ preparations , Chrysophyllur ⁇ or L ⁇ cuma but without being identified its legitimate action, isolated the principles, detoxified or productively separated the pharmacological, cosmetic or nutritional principles.
  • the principles and derivatives cyanogenic glycoside and related structurally related glycosides, of genins, of sapogenins and as an alternative agent of these effects (or synergistic) to the extracts of fixed lipids in total composition, (the latter are the subject of another patent application by the same author [ref.
  • the present invention is mainly related to the cyanogenic glycoside, lucumin and its related structurally related glycosides or for the corresponding hydrolysis derivatives thereof, the sapogenins and genins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma, the latter substance is made up of oils volatiles used in the present invention as a xubefacient agent and selective irritant of delicate epithelia (face and scalp of the head) that opens the pores of the skin in cosmetic preparations or pharmaceutical dermatological preparations.
  • sapogenins display that result as a defoliation agent that promotes skin renewal and stimulates the development of the epidermis, including hair growth and slowing down hair loss, to combat the effects of epidermal aging and anticipated deterioration of the skin in topical preparations, also with an action to enhance percutaneous penetration.
  • the property of enhancer of percutaneous penetration the preparations exhibit it in aqueous solution together with. a dispersed lipid phase or with a hydrated lamellar lipid phase or liposomal type vesicles that contain them (ref. 2.33,34 ⁇ and the positive effects of repeated use in treatments to improve deteriorated skin and hair , and also with the variation of bacteriostatic and fungistatic effects that it also exhibits "in vitro" and on the skin.
  • triterpene, steroidal, and cyanogenic compounds are also found in the seeds as reported by references 18,19,27 and 67 such as alpha and beta amirin, lupeol, lanosterol or lucumin, livery or esterified.
  • glycosides referred to in the previous paragraph are characterized by being ⁇ -D-digluc ⁇ sides (ref.
  • lucumin [6-0- ( ⁇ -D- Xylopyranosyl) - ⁇ -D-glucopyranosyloxy] -2 -phenylacetonitrile) and related related glycosides derived from the former, lucuminic acid ([6-Q- ( ⁇ -D- Xylopyranosyl) - ⁇ -D-glucopyranosyloxy] -2-phenyl carboxylic acid) and lucuminai ⁇ ida (6-0- ( (-> - D-Xylopyranosyl) - ⁇ -D-glucopyranosyloxy] -2- phenylacetamide) or derivatives of the related cyanoglycoside related to Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma Cref.
  • 15,35,56 which are mainly constituted by aglucones of type of the alpha-hydroxynitrile, the alpha-hydroxylated acid derivative and the alpha-hydroxylated amide derivative of the latter acid, also of a carbohydrate (disaccharide), the prii ⁇ everosa as sugary residue of lucumin and related related glycosides, in which different methods are used in its determinations, including the indirect photometric method and the dire chromatographic cct, being able to be qualitative, semiquantitative or quantitative as described in references 11,14,15,23,24,25,35,36,37,38,43,46,55,56,57,59, 62, 63 or enzymatic references 32,40,41,42,44,45,46,48,49,50,51,52,53,54,58.
  • Vegetable matter such as seeds of Calocarpum, Chrysophyllum and Lucuma in degreased and pulverized form, when breathing these powders through the nose, irritate the respiratory tract and sneeze as reported the activities of sapogenic glycosides (ref- 3).
  • These can be prepared from the seeds, arranged to obtain them in various ways, the main ones being those described above and in the related patent application (ref.
  • the plant matter of the seeds is also made up of volatile glycosidic oils that are intimately linked to the structural matter by means of sugars that bind to long-chain carbohydrates in the germ-bearing tissues in the cotyledon.
  • Some glycosidic substances consist of a disaccharide linked to hydroxy compounds with nitrilic character, carboxylic acid or amidic derivative of the latter that are hydrolyzable in special treatments in the present invention with the introduction of exogenous, external enzymatic products.
  • the first of these substances, from the previous mention, is converted to benzaldehyde, oily and volatile enzymatic genins or spontaneously (ref. 65 and references cited there) as hydrolyzate of nitrilic glycoside (cyanoglycoside); being the last two recoverable substances soluble in water and separable from insoluble genins with oily essential oil characteristics.
  • the cyanogenic glycoside and related structurally related glycosides, genins and sapogenins are obtained by extraction, or their derivatives are obtained by chemical or enzymatic hydrolysis of the bark, leaves, shoots, flowers, of the sap, of the fruits and the shells or the seed of the fruit of Calocarpum, Chrysophyllur ⁇ and L ⁇ cuma.
  • the plant tissue is selected from the seeds, as a renewable resource, which are dried and degreased by expression techniques and by extraction with mainly apolar solvents (which are the subject of another patent application by the same author [ref. 68 ]), in order to recover and evade fixed lipids.
  • a lipid fraction consisting of the fixed lipids in total constitution (fixed oils, phospholipids and triterpene and steroidal or sterols [non-cyanogenic] or mainly sterols); removable by the techniques in use in the present invention and in the related application (ref. 68) for the degreasing of vegetable matter (expression and extraction) as a fraction of fixed oily substances with alternate activity in the aforementioned effects and which are the reason for this and the related patent application by the same author, and as a production and evasion function prior to operations to obtain cyanogenic and structurally related glycosides related or derived from these genins and sapogenins, without these treatments being restrictive.
  • preferred genins and sapogenins is the use of sapogenic glycosides such as lucumin, lucuminic acid, lucuminar ⁇ ide, genins and sapogenins derived from the former.
  • the genins are obtained as aglucones from lucumin, cyanogenic glycoside and sapogenins from glycosides related to cyanoglycoside, lucuminic acid and lucuminamide from Calocarpum or Chrysophyllum or Lucuma.
  • Structurally related glycosides related to e.1 cyanoglycoside are included as the structurally related glycosides related to lucumin, recognized as lucuminic acid, lucuminamide (ref. 15.56); found in the present work with activity against ⁇ -glucosidases [amygdalases] and other denitrilases [hydroxynitril liases or mandelonitril liases] in conjunction with other constituent enzymes of these complex catabolic systems (ref.
  • the plant matter of the Calocarpum, Chrysophyllum and L ⁇ cuma mentioned above are selected from generic groups consisting of Calocarpum sapota, C. mammosum, C. huastecanum, C. vir ⁇ de, C. odoratum, L ⁇ cuma dom ⁇ nge ⁇ sis, L Stahliana, L. dussiana, L. cuprea, L. campechiana, L. obovata, L. hypoglauca, Chrysophyllum mexicanum, Ch. ca ⁇ nito.
  • the glycosidic extracts and their derivatives mentioned above are obtained by methods that are described later as an indication but do not imply any limitation on the scope of the present and on the ways of obtaining the active ingredients of the Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma and their use in cosmetic, pharmaceutical, dermatological preparations and the possibility of being used in substitute uses.
  • plant material that has no value or minimal commercial value such as leaves, fruit peels, or seeds.
  • the latter removed from the pericarp are preferably used *
  • the plant material is selected from which have changes in coloration due to oxidation or degradation with saprophytic flora caused by excess moisture. From this selection they are dried, crushed, degreased as indicated above (or by reference 68) and extracted by means of chemically pure solvents selected from water, alcohols preferably containing from 1 to 4 carbon atoms and esters containing from 3 to 6 carbon atoms or by means of solvent mixtures based on any combination of the above mentioned solvents.
  • the use according to the invention relates to mixtures of lucumin-related glycosides that are obtained according to the present invention as a concentrated extract or as a dry extract by the procedures indicated in examples 1,2 and 3 more ahead.
  • the aforementioned primary glycoside extract is treated with the introduction of an apolar or intermediate polar solvent and after being stirred therein or solvents that are preferably miscible with the primary extraction solvent such as low molecular weight ethers or ketones in particular ethyl ether or isopropyl ether, acetone, ethyl methyl ketone among the main ones.
  • the amount by weight of the apolar or intermediate polarity solvent used is from 1 part to 100 parts of the solvent per one part of the material of the primary extract of the mentioned glycosides.
  • the insoluble material and or the precipitate formed contains a medulla of the aforementioned structurally related related glycosides in semi-purified form according to the invention.
  • the above glycoside mixture by redissolving the insoluble material or the precipitate in volumes ranging from 1 to 20 parts by weight in water.
  • the aqueous solution is removed 2 to 5 times with an alcohol that has poor solubility in water such as n-butyl or iso-butyl alcohols, which has been saturated with water, in proportions that can be, for example, 1: 1 by volume for each operation of extraction.
  • the alcoholic extracts are separated from the aqueous phase r are combined and evaporated under reduced pressure.
  • the evaporation residue is redissolved in 10 parts of its weight in water and dialyzed against pure water.
  • the dialysate from the extract of glycosides related to the cyanoglycoside is lyophilized and if it is necessary to further purify it, the lyophilisate is dissolved in the minimum volume of methanol which is evaporated and is restored with absolute ethyl ether and the precipitate formed is collected.
  • the solid mixture is redissolved in the minimum amount of water and chromatographic techniques are practiced to isolate it as pure compounds, techniques as those proposed in Example 3.
  • the genins and sapogenins can either be extracted from the directly treated plant matter or extracted from the same treatment described in the preceding paragraphs and below, but applied to the extract concentrated in glycosides or concentrated rich in glycosides or from what leaves the plant solid residue. lipid expression products but mainly from what leaves the lipid extraction as a solid remnant of vegetable matter.
  • the genins and sapogenins according to the present invention are obtained as hydrolyzates with the proposed methods from the semi-purified extracts of related glycosides related to lucumin, or by means of the direct treatment of the vegetable matter or by means of the treatment of the solid residue. of expression mentioned above or of the residual solid product of the defatted lipid extract, the fat-free flour (ref, 68), this last procedure being the most advantageous for the productive recovery of all the lipids in the integral use.
  • the genins and sapogenins are extracted from semi-purified extracts related to the related cyanoglycosides OR from crushed raw plant matter or from the solid remnant of the plant matter after expression or from the defatted flour of the seeds that is the solid remnant of the extraction lipid by means of the breakdown of the glycosidic bond, by acid hydrolysis as is conventionally done (ref. 15,23,35 and 39), which is carried out by concentrated or diluted sulfuric and halogenated acids.
  • the main halogenated acids used herein are hydrochloric acid, perchloric acid, trichloroacetic acid, and are used in this work in a similar way to those described in the previous references.
  • enzymatic means, or protein extracts thereof were used without this being a limitation on the form of hydrolyzing or on the 6 enzymatic form, and 5 microbial sources may be of origin ⁇ ref. 32.44, 45.49.5Q) or vegetable.
  • 5 microbial sources may be of origin ⁇ ref. 32.44, 45.49.5Q) or vegetable.
  • enzymatic systems that are very convenient and appropriate for the purpose of this work, which are found in plant tissues and catalyze transformations to particular sugars and aglycones, the latter being the most beneficial way for the purposes of the present invention (ref .
  • the solutions obtained by extra generic enzymatic hydrolysis of the sapotes and by heat separation techniques result in a foam-forming solution, formed by the soluble sapogenins and by insoluble material to water, oily and with characteristic aroma to the same shaped plant by the genins as obtained in a particular variant of the invention, which is to obtain hydrolytic products of the cyanogenic and related glycosides of Calocarpum, Chrysophylluiti and L ⁇ cuma by preparations of external, exogenous, extrageneric emulins ( ⁇ -gluc ⁇ idases from other genus, microbial or vegetable) added expressly, to damped acidity conditions.
  • a particular variant of the invention is the one that uses enzymatic systems of ⁇ -gluc ⁇ sidases not characteristic (non-endogenous) of the Calocarpui ⁇ , Chrysophyllum or L ⁇ cuma, from other peculiar plant species, extrageneric, suitable, mainly acidic emulins in a buffered acid medium, as demonstrated in examples 5,6,7 and 8 whereby insoluble and water soluble aglycones are obtained, - the genins and the sapogenirtas respectively, mentioned above.
  • the acidic buffered medium is achieved using acid citrate, acetate or acid phosphate buffers and mixtures of these among others or to that provided by different plant tissue preparations mainly containing this pH and emulsins of which it is preferred to acidic vegetables such as those mentioned in example 5,6 and 7.
  • the reaction that takes place on the cyanogenic glycoside is deglicosylation in the separation of the sugary residue, regulated by beta-glucosidases, which include enzymes that catalyze the same reaction and subsequent reactions linked in the final integral reaction , such as hydrolases, such as alpha-hydroxylases, prunasin hydrolases, followed by mand ⁇ lonitril lyases; that all lead to obtaining aglycones of the deglicosylated and denitrilated sapotes that comprise glucosidase enzymes mainly from another species, such as hydrolases, hydroxylases and hydroxynitriliase, acids from plant species such as those described in examples 5,6,7 and 8 ( ref 11,12,40,41,42,45,46,50,51,52 ⁇ .
  • a suitable technique for separating the genins and sapogenins is used, which may be by filtration, extraction, or by some other technique. utilizing the ability to separate this emulsified volatiles mixture via the boiling point using heat applied to the reaction product as mentioned above.
  • Apolar or water-immiscible intermediate polarity solvents are used for the extraction of the sapogenins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma when obtained by hydrolysis in aqueous medium.
  • the amount of the apolar or intermediate polarity solvent used can be fractions or from 1 part to 30 parts of the solvent per 1 part of the volume to be extracted.
  • the organic phase thus extracted contains the mixture of sapogenins which are concentrated, to be obtained as a concentrated extract of sapogenins according to the invention.
  • the genins and sapogenins thus obtained are obtained in aqueous media; the genins are obtained as an insoluble liquid mixture in the medium and are separated using this property.
  • the sapogenins which are separated by extraction with a volume of ether, and several extractions can be made, from approximately 1 to 5 to complete the extraction.
  • the extracts are concentrated by evaporation and are formed into a concentrate of sapogenins. It is possible to use some suitable crystallization technique in its separation.
  • the sapogenins can be purified by some suitable crystallization technique with alcohols with 1 to 4 carbon atoms and mixtures with water.
  • the aforementioned sapogenins are selected from those containing non-ionized acid carboxylic groups and their corresponding metal salts, especially calcium and sodium, to carry out the present invention (ref. 31).
  • the invention further provides methods of manufacturing cosmetic or dermatological pharmaceutical products developed in particular as mild defoliation agents that promote gradual skin renewal and stimulation of epidermal development including hair growth, with retardation. in its fall and to combat the effects of epidermal aging and anticipated skin deterioration in topical preparations with percutaneous penetration enhancing activity, and bacteriostatic, fungistatic effects on the skin and in topical preparations, methods that comprise the use of at least some structurally related glycoside related to the cyanoglycoid, gene, inas or sapogenins or whole or fractional portion of total fixed lipids [ref.
  • these methods first comprise that at least partially at least one of the aforementioned structurally related glycosides related to cyanoglycoside, genins and or sapogenins of Calocarpuitt, Chrysophyllum or Lucuma or their corresponding plant extracts or related hydroxylated and carbonyl products are incorporated.
  • compositions used in the methods of the present invention may also contain a variety of optional ingredients forming the appropriate carrier or excipient vehicles that are added to the active ingredients of Calocarpum, Chrysophyllum and Lucuma discussed in detail herein and in the related application of Patent on the fixed lipids (ref. 68) of these genera and plant family.
  • compositions that are used in the methods of the present invention may preferably also contain a solid, sernisolide or liquid dermatological acceptable cosmetic or pharmaceutical vehicle that acts as a diluent, disperser or carrier of the active ingredient (s) in the compositions.
  • suitable cosmetic or pharmaceutical carrier or excipient vehicle or carrier means that the active substance (s) or inert ingredients that the term describes are convenient and suitable for use in humans without toxicity, incompatibilities. , instability, widespread irritation, allergic responses, or similar adverse responses.
  • the suitable dermatological cosmetic or pharmaceutical vehicle may comprise from 0.1% to about 99.9999%, preferably from 25% to about 99.99%, more preferably from 50% to about 99.99% and much more preferably from about 75% to about 99.99% and still much, much more preferably 85? to about 99.9% by weight of the composition.
  • Acceptable carriers include, for example, water, emollients, and lipophilic or hydrophilic humectants, surfactants (emulsifiers), thickening agents, powders, polymers, resins, plasticizers, fillers, lubricants, binders, disintegrants, solvents, cosolvents, pH buffering systems, agents preservatives or preservatives, agent sweeteners, dyes and pigments of all pharmaceutical grade dermatological or cosmetic.
  • surfactants emulsifiers
  • thickening agents powders, polymers, resins, plasticizers, fillers, lubricants, binders, disintegrants, solvents, cosolvents, pH buffering systems, agents preservatives or preservatives, agent sweeteners, dyes and pigments of all pharmaceutical grade dermatological or cosmetic.
  • Water can be used in the compositions described herein as a vehicle.
  • the composition can be in the form of a solution or dispersion or in the form of an emulsion, suspension or cream; or as previously mentioned, forming parts of the hydrated lamellar lipid phase, which may contain the active ingredients of Calocarpum, Chrysophyllum or Lucuma in hydrated lamellar lipid phases formed in the hydrated phases of sapogenins and genins; or of the structurally related glycosides related to lucumin and in the lipid phase also formed by the fixed or volatile lipids or fraction thereof of the Calocarpum, - of the Chrysophyllum or of the Lucuma, these fixed lipids being the reason for another related request of patent by the same author (ref.
  • Emollients and or lipophilic or hydrophilic humectants may include esters, fatty acids, alcohols, polyols, hydrocarbons, silicones, waxes, triglycerides, polymeric mixtures (gels) among the main ones.
  • Examples 8,9 and 15 imply preparations that contain products of the fixed, real or residual lipids of sapotes that are included for their content in glycosides and in derivatives of genins and sapogenins acting as residual expression or extraction products. and as lipid components, likewise, real total fractions or portions of lipids are included due to the synergistic effect they give to sapogenins and genins, all of which are Calocarpum, Chrys ⁇ phyllum or L ⁇ cuma in skin renewal and development and in the stimulation of hair growth that are also motives for this and another invention by the same author, for which reason it is necessary to consult the related patent application (ref. 68).
  • Example 1 Preparation of concentrated extract of glycosides from Calocarpuiti,
  • This is constituted as a. crude extract rich in glycosides.
  • the concentrated glycoside-rich crude extract can be purified as follows.
  • the glycoside extract is mixed with 100 ml. of ethyl ether.
  • the material insoluble in the ether is recovered by sedimentation, decantation, filtration and dissolves in 500 ml. of water and the solution is extracted with n-butanol saturated in water, in duplicate.
  • the butan ⁇ lic phases are combined and concentrated, evaporating under vacuum.
  • the residue is mixed in 200 ml. of ether and the
  • Chrysophyllum or Lucuma They take 1 kg. of fresh degreased powdered cotyledons of
  • Fraction 3 obtained from the column is monitored in a similar way to the previous one, it is concentrated, extracted and the same concentration techniques are practiced as for fraction 2 »The methanol restituted concentrate, as well as crystallization techniques with which 0.581 g are obtained. of a glycoside that responds to tests for amides (ref. 14.56) »
  • Fractions 4 and 5 obtained from Golumna are monitored by the same thin layer chromatography technique, finding a compound with less polarity. This fraction is recovered by the same concentration-extraction techniques as for the previous fractions alone, which is replaced with a 5 ml mixture of water-acetonitrile (9: 1) and crystallization techniques are practiced. 0.752 g is obtained. of a glycoside in the form of crystalline plates that responds to nitrile tests (ref. 14,46,56 ⁇ .
  • the resulting supernatant liquid is fractionated using concentration gradients of (MHi) 2 SO 4 , the precipitate from 30 to 80 % of saturation is collected by centrifugation at the same previous parameters, it is resuspended in the minimum volume of the previous buffer solution and it is dialyzed against the same solution.
  • the hydrolysis procedure of the glycosides of the sapotes is carried out as for Example 2 except that it is done at room temperature with deionized water to which the above mentioned buffer solution is added with the mixture of soluble proteins including the glucosidases of semipurified ⁇ fevea,
  • the activity of Hevea's glucosidases towards the related glycosides related to the cyanoglycoside of the Sapotácea family is determined at the beginning of the stage (basal), intermediate and after the incubation period that is approximately 20 to 30 min. once glycoside degradation and glucose formation has ceased with. the concomitant release of the aglucones has ended.
  • These reactions are estimated by determining aliquots of the glucose reaction mixture, using the Merck GOD-POD "kit" (for more information see the insert), using a glucose calibration curve or assessing when there is no change in the optical density of the series of reaction aliquots, time considered as the end of the reaction, using the aforementioned buffer solution plus the Hevea protein mixture as a blank.
  • the previous mixture is subjected to separation through the boiling point, to recover the genins and sapogenies in the first fractions.
  • 500 ml are recovered.
  • the genins are separated and recovered in a separatory funnel at 5 ° C as an oily fraction of the aqueous solution.
  • the sapogenin mixtures are recovered from the aqueous fraction by extraction with 300 ml. of ether three times, the extracts are pooled and concentrated to dryness. In order to purify the sapogenins, it can be crystallized using some appropriate technique.
  • Lucuma using semi-purified enzymes from Prunus vulgaris 600 seeds of Prunus vulgaris of the same variety are used, which are removed from the bone and the seed is sterilized with a 0.5% (w / v) solution of sodium hypochlorite, dried with filtered air. They are stored at 4 0 C, in their homogenization, in extraction and in semi-purification.
  • Seeds cut in half with a scalpel are homogenized in a mortar in a buffer solution of 0.1 M Tris-HCl at mp 6.0 with 4 g. of PVP plus 6 g. of glass beads.
  • the homogenate is filtered through 6 layers of gauze cloth and the filtrate is centrifuged by 90 rain, at 8,000 x g.
  • the supernatant is removed from the beads and from the lipid phase.
  • the intermediate supernatant is decanted and recentrifuged to the same parameters and dialyzed against 2 Its. of a 0.Q1 M buffer solution of Tris-RCl at pH 6.0.
  • the hydrolysis procedure of the glycosides of the sapotes is carried out as for example 2 except that it is done at room temperature with deionized water to which the above mentioned buffer solution is added with the mixture of soluble proteins including the glucosidases of Semi-purified Prunus vulgaris.
  • the activity of the ⁇ -glucosidases on the glycosides related to the cyanoglycoside plus the recovery of the genins and sap ⁇ genins of the sapotácea family is carried out the same as for example 5.
  • An amygdalin pattern is used using the extracted protein fraction as a monitoring medium. of the enzymatic activity throughout the isolation process and the start, intermediate and final reaction.
  • Amygdalin hydroxolase, prunasin hydrolase, mandelonitril lyase plus some isoenzymatic groups or some multiple enzyme forms that catalyze the degradation of amygdalin to hydrogen cyanide and benzaldehyde are extracted, semi-purified and recovered as a complex enzyme system in a protein set of properties. chemical and similar molecular weights by centrifugation at a determined pH of the homogenate made and extracted at 4 0 C from peach seeds, which give as a resulting product three main compounds derived from the exogenous substrates present in the sapotácea family Calocarpum ⁇ Chrysophyllum r or Lucuma).
  • the extraction, recovery and isolation procedure of the zymogens is as described for example 6 with the use of a 450 g homogenate. preferably fresh seeds of Citrus vulgBris in a 5% acid citrate medium.
  • the hydrolysis procedure is as described for Example 7, except that the extract is added and homogenized at room temperature with water and kept at a temperature between 40-50 ° C with stirring for an additional 15 minutes.
  • the recovery of the ge ⁇ ins- and sapogenins is as for example 5.
  • Chrysophyllum or Lucuma treated differently.
  • This example demonstrates the fermentative activity of different sources of emulsins on spraying Calocarpum seeds.
  • Chrysophyllum or Lucuma in a fresh, dry state, in the form of degreased flour, (or residual product of lipid extraction [ref. 68], degreased by extraction with nonpolar or intermediate polar solvents) and of the expression greaves (or residual product of lipid expression [ref. 68]) and the use of different alternate exogenous, external, extrageneric enzyme systems, such as the procedures used in examples 6 and 7 of this application and without using external enzymatic systems.
  • the previous procedure is repeated but without incorporating the external plant ferments and after a time of 15 to 20 minutes it is separated as for Example 5. It is quantified by the yield of sapogenins and genins.
  • the 8 previous procedures with the use of alternative systems such as those used in examples 6 and 7 are compared against the 4 procedures that use only the seed substrate, in the fresh state, in the dry state, as lipid extraction residue (or in the form of degreased seed meal) and as a residue of lipid expression (or in the form of a chicharrón expression) but without the use of external alternative plant biological catalytic systems different from those from Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma.
  • the results are summarized in the following table.
  • this cream through the efficiency of the activity of this cream for the percutaneous absorption action as an oil-in-water emulsion that together contains the sapogenins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma, presumed main agent responsible for percutaneous activity and as adjuvants of this action to the fixed lipids (ref. 68, example 11) and to the genins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma in a cosmetic preparation. All the ingredients of Calocarpum, Chrysophyllu ⁇ i and L ⁇ cuma are according to the two inventions of sapotes related by the same author.
  • the cream also contains anionic emulsifiers and wetting agents that also help in the mentioned activity.
  • the cream wants to check its efficiency as a percutaneous absorption vehicle for hydroquinone at 0.8%, against the same cream but without a mixture of sapogenins.
  • Hydroquinone serves to return pigmentation to people affected by "cloth” and senescence skin spots, which requires being absorbed by the layers of the stratum corneum and passing to the deep layer of the epidermis to exert its effects.
  • the treatment is given not only because of the problem of blemishes but also because concomitant skin care treatments are required.
  • the test is carried out on 4 women and 1 man from 28 to 49 years of age, who have the problem on the facial skin due to hyperpigmentation spots or commonly called cloth spots.
  • the products are subsequently applied every day for 28 days, in the affected region, applying H to 1 tablespoon of rasa tea that It comprises from 0.3 to 0.5 gram of the cream under test.
  • Product # 1 consisting of absorption vehicle plus hydroquinone, is prepared by a lady and woman under test, preparation of Example 11 of the aforementioned related patent application (ref. 68), which contains the mixture of sap ⁇ genins and fixed lipids totals as used in the present and in the related patent application (ref. 68), for their synergistic action that comprises any form of mixtures of these, which may comprise hydrated lamellar lipid phases according to the two inventions of sapotes .
  • Two remaining ladies received product # 2, consisting of the same cream but removed from the presumed main ingredient responsible for percutaneous activity, the Calocarpum, Chrysophyllum or Lucuma sapogenins.
  • the fourth lady received only the percutaneous excipient but without the pigmentation agent, - hydroquinone.
  • test product # 1 which is the cream for treatment of cutaneous senescence such as that of example 11 of the application.
  • related patent ⁇ ref. 68 and with the sapogenins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma, invention of this application, the individuals who received the product # 2, in the test, do not result with as much efficiency in the fading of the stain, as with the product # 1.
  • the test is based on the bacteriostatic power of sapogenins at concentrations of 5.0 g / 1.
  • the in vitro test is performed with 100 microliters in a diffusion test with discs containing the test substance and is applied on an agar plate which is sow with a standardized suspension of a microorganism. After overnight incubation, the diameters of the zones of inhibition or clearance around the discs are measured.
  • Example 11 Test for the genins of Calocarpum, Chrysophyllum or L ⁇ cuma as a flushing agent with activity in the renewal of the epidermis.
  • the two gentlemen of group # 2 received the same composition of the previous excipient and 0.5% resorcinol, The two gentlemen of group # 3 received only the aforementioned excipient.
  • the following questionnaire is registered and pertinent observations of the test are made. Age; sex; since when they present alopecia; duration of treatment; 1 - The treatment was irritating: a) It was not irritating, b) mild r c) moderate, d) high, e) severe.
  • Calocarpum f Chrysophyllum or Itucum ⁇
  • resorcinol r which is a recognized capillary flushing that also produces moderate keratolysis
  • Lucuma on the growth of eyelashes The test is based on a study in the activity of the products according to the invention in a determined period of time in the growth of the eyelashes, of women from 18 to 40 years of age, who manifest diminished growth, at that they are asked to apply the product on the eyelashes of the right eye with the eyelid tightly closed of the eye to be tested, with a small atomizer and to use the eyelashes of the left eye as a control without receiving any product.
  • the test products are subsequently applied for 42 days of test duration, without application on the seventh day of the seven weeks of application, at a dose that is 500 to 100 ⁇ l.
  • the study is carried out on 8 individuals divided into two groups of four individuals each.
  • the first group received preparations containing 0.5% of the product from Example 6, a mixture of sapogenins from Calocarpum seeds, ⁇ Chrysophyllum or Lucuma) in an excipient.
  • the composition of the excipient per 100 g is: 100.0 g of water for injection.
  • the second group received only the excipient.
  • the study results are obtained as average values at the end of the test time.
  • the analyzed values represent the development of the tabs treated against that of untreated patients at the final treatment period using the eye tab of the individuals treated as the first internal control, the first group is compared against the second control group that received only the excipient in the right eye and without treatment. in the left eye.
  • the gel is applied daily for a period of 3 months of stabilizing treatment on the skin.
  • composition A All the components of composition A are mixed with water first, and anhydrous carbopol 936 is introduced to give a gel, which can be used once or twice a day to promote eyelash growth.
  • Example 15 All the components of composition A are mixed with water first, and anhydrous carbopol 936 is introduced to give a gel, which can be used once or twice a day to promote eyelash growth.
  • Example 16 Shampoo to combat hair loss with genins and sapogenins of
  • Calocarpum, ChxysQpfryllum or L ⁇ cuma Calocarpura sapogenins, (Chrysophyllum or L ⁇ cuma) as obtained in Example 6.
  • Epidermal anti-aging liposomal GI Epidermal anti-aging liposomal GI.
  • the gel used is as prepared according to example 14, except that the distilled water in the gel preparation is replaced with an aqueous solution containing 0.4% of Calocarpum sapogenins, (Chrysophyllum or Lucuma) as obtained from example 7.
  • Example 19 Lotion, to combat loss, of hair, in particular of the scalp.

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Abstract

Proceso para la obtención de extractos de geninas y de sapogeninas por hidrólisis enzimática de derivados de simientes de la familia Sapotáceas, géneros Calocarpum, Crhysophyllum y Lúcuma. La enzima que cataliza la hidrólisis es una beta-glucosidasa exógena, de origen vegetal o microbiano. Los derivados de simientes (semillas desprovistas del pericarpio) pueden ser el glicósido cianogénico, lucumina, y glicósidos afines. También es objeto de protección el proceso para la produción de estos glicósidos partiendo de las simientes y sus usos en composiciones cosméticas y dermatógicas, así como en la obtención de geninas y sapogeninas Los extractos de geninas obtenidos, como aceites volátiles, se utilizan en composiciones tópicas para promover la apertura de poros y la penetración epitelial. Los extractos de sapogeninas obtenidos se utilizan en composiciones tópicas como astringente, exfoliante, para promover la renovación de la piel, el crecimiento del cabello, retardando la caída y para combatir el envejecimiento epidermal y, también, por su actividad bacteriostática y fungistática.

Description

OBTENCIÓN DE LOS GLICÓSIDOS C233ΪOGÉNIC0 Y KBLACXON&DOS;, m.S DERTΨSDQS
GENÍNICOS Y SAPOGΞNÍNICOS DE PLANTAS DK LA FAMILIA SAPQTÁCEA PARA IiA
PREPARACIÓN DE COSMÉTICOS Y COMPOSICIONES DEHMATOLÓ6IQAS.
ANTECEDENTES
Esta invención es continuación de otra solicitud relacionada de patente por el mismo autor con titulo de OBEENCIÓH DE LQS LÍKTDOS B1IJOS TOTALSS DE SEMILLAS DE LA FAMILIA SAPOTÁCEA BARA L& PREPARACIÓN DE COSMÉTICOS Y COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS DESM&TOLÓC3IC&S (ref. 68) . Esta invención se relaciona con la obtención del glicósido cianαgénico y glicósidos relacionados estructuralmente afines a este, y sua transformaciones a derivados alfa hidroxilados, el primero con característica hidroxinitrílica inicialmente, posteriormente transformado en benzaldehido como se obtiene finalmente,* los segundos se consiguen como ácido carboxilico y amida del mismo ácido, hidroxilados, logrados y convertidos los tres en un extractos de geninas y sapogeninas respectivamente, que se separan por sus propiedades físicas, derivados por hidrάlisia química o enzimática de la lucumina, y de los glicósidos relacionados estructuralmente afines, principales de los géneros Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma de la familia Sapotácea, todas ellos con actividad biológica. Las actividades biológicas se presentan como compuestos aislados o en una mezcla de substancias extractivas, o extractos purificados del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma con características propias y la forma de su utilización en cosméticos y composiciones farmacéuticas dermatológicas. Las fuentes para obtener a estos glicósidos o a sus derivados genínicos y sapogenínicos pueden ser varios principios o tejidos de los árboles de la familia Sapotácea (Calocarpum sapota, C. virider Lúcuma mammosar L. sallcifolía y de algunos otros árboles frutales de la misma familia conocidos como "sapotes" incluidos a los Chrysophyllum), como las cortezas, las hojas, las flores o la sabia, pero como recurso renovable resulta ser el tejido de la simientes utilizadas de varias formas, desde la materia en bruto triturada (molida), o IQ que deja de remanente sólido, la simiente después de la expresión lípidica ó lo que dejan como residuo sólido la extracción de lípidos (ohtención de aceites) . También se obtienen a los derivados del cianoglicósido y de sus glicósidos relacionados del extracto glicosidicos relacionadas al cianoglicósido o del glicósido cianαgénico en si provenientes de las mismas fuentes materiales anteriores ó preparados principalmente de las simientes de esos géneros. La prelación para obtener a los glicósidos relacionados al cianσglicósido la reciben los remanentes de las simientes desengrasadas (ver producto sólido residual de extracción lipidica ó harina desengrasada en lar referencia 68 al final de este trabajo) por ser evadidas" algtmσs lípidos- que intervienen en su purificación. KL igual la preferencia para obtener a los derivados aglucónicos de los anteriores compuestosr los extractos genínicos y sapogenínico, la reciben los remanentes, sólidos residuales de las simientes, de la expresión lipidica y ó desengrasados por la extracción lipídicar sin ser limitantes las materias primas de origen pero si de- mas redituabilidad por el aprovechamiento lipidico precedente..
Los extractos geninico y sapogeninico biológicamente activos se obtienen a partir de la lucumina,- el glicósido ciaπogénico y de los glicósidos relacionados, metabolitos vegetales que transformados principalmente bioquímicamente con enzimas agregadas de diferentes géneros (escógenas) ,- proceso que logra la detoxifica.ciάn de la lucumina y la transformación de sus glicósidos relacionados de los sapotes en sus derivados alfa hidrαxilado, enlazados a un anillo bencílico (fenílicσ) ; uno se consigue como ácido carboxílico, otro como amida del mismo derivado anterior como se obtiene en el extracto sapogeninico, y por otro lada la obtención del derivado benzaldehidico como se obtiene en el extracto geninico como mencionado previamente. La obtención del producto sólido residual de la expresión lipidióos aquí nombrado como "el chicharrón de expresión", producto sólido (remanente) residual en, la obtención de los lípidos fijos totales y la obtención de productos sólido (remanente) residual de la extracción lipidica, aquí nombrado como "11Ia harina desengrasada" como producto sólido residual de la extracción lipidica, ambos como remanentes vegetales de las simientes de los sapotes que dejan estos procesos como materia prima para este siguiente proceso de obtener a los glicósidos cianogénico y relacionados y a sus derivados geninico y sapogeninico, inicialmente referidos, los cuales son motivos de esta solicitud y de la otra solicitud relacionada de patente en tramite por el mismo autor (ref. 68) que también son materia elaborada para esta invención.
La técnica de elección para la obtención de los extractos genínicos y sapogenínicos es la hidrólisis enzimática y preferentemente el tejido vegetal de sustrato es seleccionado de las simientes, las cuales son secadas y desengrasadas por las técnicas descritas en Xa solicitud relacionada de patente por el mismo autor sobre la obtención de los lípidos fijos totales del Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma y de los residuos que estos dejan (ref. 68), sin que sean restrictivas para esta obtención referida pero si de más redituabilidad en su rendición en el aprovechamiento integral de Jas semillas como se dijo anteriormente, pudiendo ser el mismo tejido de la simiente molida fresca o seca en bruto, ó diferentes tejidos como los mencionados anteriormente los que se utilicen.
La materia prima en particular de las semilla que se utilizan son las simientes (semilla desprovista del pericarpio} molidas y una vez extraídos los glicósidos a los cuales es posible practicarles la hidrólisis quimica o enzimática pero preferentemente se utilizan las "harinas desengrasadas" o al "chicharrón de expresión" de las simientes directamente con el contenido glicosidico cianogénico y relacionado afin (ver expresión y extracción de lípidica [ref. 68]) para la obtención de los derivados de hidrólisis quimica ó enzimática de la materia prima glicosidica relacionada al glicósido cianogénico, la lucumina de los sapotes. También es posible utilizar, las simientes frescas Q secas molidas sin desengrasar para la obtención de los glicósidos relacionados al cianoglicósido o a los derivados de hidrólisis quimica ó enzimática que son materia prima alterna en variantes de esta invención.
La finalidad de la presente invención es poner estos productos con los principios cianoglicosidicos estructuralmente relacionados ó de sus derivados, las geninas y las sapσgeninas mas al conjunto de lipidos fijos (estos últimos son motivo de otra solicitud en conexión, relacionada de patente por el mismo autor [ref. 68]) del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma al alcance del publico en formas ingenieriles mediante transformaciones industriales de aplicación, el cual resuelva los problemas técnicos en los usos de las materias en bruto de estas plantas medicinales y en usos rústicos tradicionales por practicas modernas en dermatología y cosmetologia al igual que en otras utilidades como empleos alimenticios sucedáneos, de una manera satisfactoria y de uso racional de recursos mal utilizados en tratamientos burdos o como materia vegetal de desecho, sin utilizarse, .
En regiones apartadas del centro de México y de mas al sur se usan como remedios medicinales, cosméticos y alimenticios en usos tradicionales el empleo de preparados de materia vegetal del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma (ref. 5) , Los residuos después de la "extracción" de los aceites (que contienen a los glicósidos) también se reportan con actividad contra afecciones dolorosas de la piel mediante su aplicación como cataplasmas (ref. 4) . Se reporta (ref.4, 15) la corteza como astringente, amarga y que contiene lucumina, el glicósido cianogénico. Decocciones de la corteza se toman como pectorales. En Costa Rica tés de corteza y de hojas se administran en arteriosclerosis e hipertensión. La savia lechosa es emética y antihelmíntica y se ha utilizado tópicamente en la remoción de verrugas y de crecimiento fungal de la piel. También se toman decocciones de la corteza del sapote amarillo como febrifugo o en erupciones de la piel. La semilla se prepara como remedio para las ulceras cutáneas (ref. 4) .
La materia vegetal del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma también es apreciada por su alto contenido de aceites fijos, y volatiJ.es presentes y que también tienen usos tradicionales en la cocina (ref. 4,7,8} y en remedios caseros para el uso en la piel y el pelo (ref.4,8). Sin embargo todos estos preparados de uso tradicional no han sido completamente desarrollados por impedimentos técnicos concernientes en el método de separación y aislamiento de los principios activos que dan estos efectos y llevados a procesos industriales y de consumo»
Los aceites volátiles en los preparados tradicionales son puramente con un efecto etéreo aromático de contacto de la materia vegetal en bruto (ref.
8) que no es posible separar de la materia vegetal de una forma convencional y tan poco se transforman y separan en la actualidad de la forma como se explica en las obtenciones de los mismos en el presente trabajo. Estos aromas esenciales característicos de las plantas que no resultan atractivas la obtención por las técnicas convencionales para lograr estos materiales aromatizados insolubles (y solubles) al agua que se encuentra íntimamente ligado a la materia estructural de la planta, como resultan ser la materia glucosídica sapogénica.
La semilla se reporta (ref. 4) ser fuente o substituto de la fragancia "Noyeau" de perfumería y de bebidas alcohólicas, substituyendo a las simiente de almendra amarga, durazno, melocotón, chabacano, albaricoque ó prisco (ref,
9) siendo las obtenciones del presente trabajo diferentes a la anterior referencia.
En regiones donde se come ampliamente la pulpa de la fruta del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma que resulta como materia alimenticia y vitamínica (ref. 4,8), que insensiblemente también contiene ingredientes activos para las actividades medicinales de estimación tradicional mencionadas anteriormente, se observa que la población conserva buenas condiciones en su piel y el pelo, atribuible al uso cotidiano o por temporadas anuales de este alimento. Estos ingredientes activos también están presentes en el resto de la planta y en las simientes, como se dice en la "voz popular".
La fruta de los Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma tiene muchos usos en la cocina tradicional y de considerable cotización económica (ref. 8,10) y las partes no consumibles como alimento tienen usos diversos en preparados cosméticos, alimenticios y medicinales de uso tópico local, rústico tradicionales (ref. 4,5), los cuales no llegan a separar los principios e identificar los efectos particulares en forma aislada o a separar los compuestos tóxicos (ref. 4,13,20,) y habilitar a algunas substancias de la materia vegetal. El uso de los remedios cosméticos y medicinales dermatológicos caseros de uso tradicional, ήo es posible el ser utilizados en forma difundida por razones de estética y de apariencia que no logran aislar la materia activa ligada a la materia vegetal de sostén o a la materia de estructura de la planta (de bagazo) , que interviene en la apariencia en el uso de los preparados tradicionales y que limitan el uso cotidiano rutinario que es la forma más benéfica y de más resultados en su aplicación. Al igual los uso de preparados alimenticios tradicionales a partir de las simientes se encuentran limitados por el contenido toxico presente.
El conocimiento tradicional le confiere a los aceites del sapote común, el Calocarpum sapota o al Lúcuma mammosum actividad promotora del crecimiento del pelo, sin embargo estudios en la Universidad de California en los Ángeles (1970) , mediante pruebas clínicas practicados a los aceites, fallan en no encontrar esta actividad, pero confirman que los aceites del Calocatputti sapota son efectivos para detener la caida del cabello causada por dermatitis seborreica (ref. 4) . El autor de esta solicitud de patente ha énconttado estas misma actividades que se le atribuye tradicionalmente al sapote de promover el crecimiento del pelo y que mal se a atribuido aisladamente a la fracción de aceites o a la fracción fosfatidica ó a la porción de los lípidos fijos totales en si, por no actuar independientemente sino en sinergia, como se describe en la solicitud relacionada (ref, 68) y en párrafos mas adelante, sin embargo el mismo autor de la presente invención ha encontrado esta misma actividad en otros extractos procedentes de las simientes (al igual que los aceites) que presentan la actividad bien definida sobre el folículo piloso, de incrementar su crecimiento o de incrementar la transformación de pelo velloso a pelo terminal (ref. 1,4,8,15,16) por la estimulación con el extracto mencionado. Este extracto procede de material glicosidico cianogénico ó relacionado (ref. 6,15,18,35) que permanece como remanente sólido después que la materia vegetal ha sido exprimida de los lipidos y o desengrasado con disolventes con anterioridad como el residuo sólido que dejan la materia vegetal de la expresión lipídica o el residuo sólido que deja el extracto lipidico, (estos siendo motivo de reivindicaciones en la invención de la solicitud relacionada de patente [ref. 68] y de esta misma solicitud), que son hidrolizables químicamente (ref. 23,35,39) ó principalmente enzimaticamente (ref, 32,40,41,42,45,51,52,53,54, 58,64f65) como se describe más adelante y extraíales como se menciona: más adelante y se tratan en las referencias 3,6,15,18 y 35. El autor de la presente ha encontrado que se trata de un glicósido cianogénico y de los glicósidos relacionados estructuralmente afines como del extracto que contiene a la lucumina citada en las referencia 6,15,18 y 35r y de sus derivados los cual son hidrσlizados enzimaticamente en la presente invención para dar los extractos aglicónicos anteriormente citados, de geninas y de sapogeninas con la actividad de estimulación del folículo piloso y de otras actividades como se meaciono anteriormente y más detalladas en adelante. Λ este extracto de derivados aglicónicos que le llamaremos aqui extracto sapogeninico por provenir de los glicósidos sapogenínicos el cual puede actuar en sinergia con la porción oleosa no volátil (los lípidos fijos totales) y volátil (el extracto genínico) de las mismas plantas provenientes de las simientes de los sapotes las cuales son los que protagonizan estas actividades. Al igual que el extracto sapogeninico o sapogeninas también se obtiene al extracto genínico que llamaremos aquí como geninas (aceite esencial ó fracción oleosa volátil) ambos procedentes de los mismos glicósidos de los sapotes. El extracto genínico se constituyen como la fracción de aceites esenciales o a la esencia de los sapotes que en conjunto con el extracto sapogeninico, ambas propiamente dicho se forman en conjunto como una fracción de material volátil aromatizado, insoluble y solubles al agua de los sapotes con actividad biológicas bien definidas.
De las pruebas preliminares se a comprobado que de los glicósidos cianogénico y glicósidos relacionados estructuralmente afines es de donde provienen principalmente los extractos de las geninas y el extracto de las sapogeninas respectivamente (ref. 6,15,35) como agluconas y que mediante procesos de extracción (ref. 3,6,15,35,56), ó hidrólisis (ref. 3,6,12,15,23, 35,39) y separaciones {ref. 6,14,25,28,35) es como se obtienen. También se ha logrado saber que las geninas constituyen el principio odorífero de la materia vegetal en forma aislada y que en la aplicación tópica es un agente rubefaciente y contrairritante selectivo para algunos epitelios como el de la cara y el cuero cabelludo principalmente que solo produce irritación del tipo de hiperemia, calor y prurito en el tejido aplicado y de uso en cosmétologias y composiciones farmacéuticas dermatológicas (y en usos alimenticios) que combinado con las sapogeninas (que puede estar en actividad sinérgica en conjunto con la fracción oleosa no volátil (ref. 68) y volátiles, que al ser de las investigaciones farmacológicas realizadas para el presente trabajo y en los hechos expuestos anteriormente y más adelanter se trata de un agente de uso tópico con actividad defoliativa con efectos positivos en la renovación y estimulación del desarrollo de la epidermis incluidos estos efectos al folículo piloso, también con actividad como agente de absorción percutanea para una fase acuosa continua en unión a una fases dispersas lipidicas ó en fases lipidicas laminares hidratadas ó como vesículas del tipo liposomal que las conformen ó las contengan y su factibilidad para pasar a estratos profundos de la epidermis y con la variación de efectos bacteriαstáticos y fungistático, que también produce el ultimo extracto referido o como substancias purificadas. En conjunto estas substancias o extractos", las geninas y las sapogeninas ó en forma de compuestos aislados más sus actividades o en sinergia con los lipidos fijos (siendo estos últimos motivo de otra solicitud relacionada de patente por el mismo autor [ref. 58] ) y de los glicósidos relacionados estructuralmente afines al cianogliσósido de los Calocarpum, los Chrysophyllum o los Lúcuma es posible la manufactura industrial de una gama de cosméticos y de productos farmacéuticos de uso tópico con los efectos mencionados y hechos con este fin como resultados de las presentes invenciones.
El objetivo en la materia de la invención es hacer preparaciones cosméticas y farmacéuticas dermatológicas con propiedades de renovación de la epidermis y de promotores de la conservación del cuero cabelludo y que se caractericen por tener substancias del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma como los derivados de los glicósido cianogénico y glicósidos relacionados afines, las geninas y sapogeninas más a los lipidos fijos totales, aceites fijos, lecitina (fosfolípidos) y de material lipídico no saponificable como residuos glicosídicos (triterpénicos y esteroidales ó esteróles [ref. 18,67]) componentes de la fracción oleosa no volátil mas a el cianoglicósido y glicósidos relacionados estructuralmente afines con actividad biológica. Los lipidos fijos (ó la fracción oleosa no volátil) (ref. 68), con actividad colateral a los efectos mencionados al material aceitoso volátiles, los segundos conformados por las agluconas, las geninas mas de los derivados sapogeninicos que también se obtienen y de sus respectivos glicósidos, de donde provienen y que se logran en un diferente procesos extractivos de separación, todos conteniendo actividades benéficas a dosis mínima en la piel como la hidratación mas a las actividades mencionadas anteriormente. El cianoglicósidσ y glicósidos relacionados estructuralmente afines de .los sapotes aparte de su actividad biológica son utilizados principalmente como sustratos hidrolizables.
Las preparaciones cosméticas o farmacéuticas dermatológicas de acuerdo a la invención contienen preferentemente los compuestos activos en forma pura o semipurificada, ó de extractos vegetales o de productos hidrólíticos o productos de expresión todos ellos solubles y fácilmente tratables y manipulables y seguros los cuales contienen los ingredientes activos. Estos incluyen a la mezcla de glicósidos estructuralmente afines al cianoglicósido, a las geninas, a las sapogeninas ó a la mezcla en unión de sapogeninas y geninas, dentro de los cuales se constituyen los aceites volátiles y que se describen más adelante y de los aceites fijos que se constituyen como una mezcla de aceites con material fosfatídico no volátil, conformando los lípidos fijos totales, más a otra fracción de material (lipidico) insaponificable como residuos glicosidicos triterpénicos y estetoidales o esteróles, no cianogénicos, (ref. 18,19,27} razón por la que se les llama fracción de lípidos fijo ""totales" conformando la suma de lípidos no volátiles presentes en la simiente. Estos cinco últimos son motivo de otra solicitud de patente relacionada por el mismo autor (ref. 68) .
DESCRIPCIÓN DEL ESTADO DE IA TÉCNICA MÁS CERCANA.
Se sabe que los "sapotes" contienen lucumina y su estructura química ha sido dilucidada {ref. 6,llr15,35) , aunque no se conoce en la literatura la transformación enzimática endógena ó exógena extra,generica de la misma a derivados genínicos como el benzaldehido ó de los glicósidos relacionados estructuralmente afines, el ácido lucuπiínico y la lucuminamida a los derivados sapogenínicαs como el hidroxicompuesto con características acidas similares al ácido mandélico y a su amida a partir de este grupo de glucósidos de los sapotes y su utilización en cosméticos y composiciones dermatológicas con actividades farmacológicas.
Por medio de la síntesis química es posible llegar a el benzaldehido (ref. 22) y a la mezcla racémica del ácido mandélico (ref. 28,29,30,31,39) que son los compuestos análogos más cercanos a los encontrados en los extractos de los productos de hidrólisis glicosídica cianogénica y de los glicósidos relacionados a este ultimo de la materia vegetal procedente del Calocarpum, Chrysophyllum y del Lúcuma. Los glicósidos cianogénicos como la amigdalina, la prunasina que vendrían a ser los análogos más cercanos de la lucumina el glicósido cianogénico preponderante de los sapotes, los cuales se obtienen principalmente por extracción de materia vegetal de diferentes géneros como del Prunus de las especies de almendras amargas, de melocotones, de duraznos etc. ó se pueden sintetizar químicamente mezclas racémica de análogos de la amigdalina como los referidos en la controversial ref. 13, del análisis de una indecisa actividad sobre de la patente de estos análogos químicos de la lucumina, y de los derivados de leatrilas como el del Leatrile111 (marca registrada) ref. Brit. Pat. 788,855 (1958) y U.S. Pat. 2,985,664 (1961), que es el derivado sintético "de la amigdalina o del derivado beta glucurónido del mandelonitrilo o de la prunasina". La amigdalina y la prunasina también se consiguen de origen extractivo natural vegetal.
Los extractos obtenidos con el glicósido cianogénico y de los glicósidos relacionados estructuralmente afines de los sapotes, principalmente se utilizan en la presente invención para la obtención de los derivados hidrolíticos como las geninas y sapogeninas, derivados deglicosilados, desnitrilado, detoxificados de la lucumina y de las gliconas relacionados. En el caso de los sapotes los extractos hidrolíticos obtenidos a partir del glicósido cianogénico presente en la materia vegetal, el derivado benzaldehidico, el extracto genínico y el extracto del derivado ácido carboxílico alfa hidroxilado y del derivado amídico del mismo ácido (mandélico y mandelamida respectivamente) , el extracto sapogenínico se ven enriquecidas por diferentes substancias componentes del extracto que se obtienen de la materia vegetal de los sapotes y aparte no se usan reactivos químicos enérgicos en su obtención y se emplean mínimos materiales extractivos en la obtención de estos derivados glicosídicos como extractos de productos de hidrólisis química o principalmente hidrólisis enzímática. Estos se obtiene como un grupo de substancias extractivas caracterizadas por el proceso de obtención y por su actividad biológica, como extracto de geninas y extracto de sapogeninas con un mínimo costo e impetuosos en su obtención, comparado con el proceso sintético que requiere de costosos reactivos químicos, de equipo de fabricación gravoso y caras técnica de purificación y lo más importante que se obtiene con distintas propiedades químicas y biológicas, al proceso extractivo, a partir de los vegetales mencionados anteriormente diferentes de los sapotes. Los procesos de hidrólisis de la amigdalina y de la prunasina para dar compuestos benzaldehidico a partir de los vegetales mencionados anteriormente diferentes de los sapotes, adolecen de los métodos motivos de la presente invención que no definen formas de derivar por hidrólisis principalmente enzimática exógeno extragenerica como en la presente invención a los compuestos benzaldehídico y a hidroxicompuestos (ref. 39} como al ácido mandélico y a su amida (ambos hidroxilados) a partir de los glicósidos relacionados a la lucumina de los sapotes. En contraste la lueumina y los glicósidos relacionados afines a este, de los sapotes por las técnicas referidas en la presente invención en cuyos métodos de obtención y utilización como hidrolizado enziiαático que utiliza zimógenos exógenos extragenéricos (de otros géneros) para obtener los derivados benzaldehidico como extracto de geninas y también lograr hidroxicompuestos can características de ácido carboxilico α-hidroxiladα bencílico, el ácido mandélico y de su amida, la mandelamάda o como extracto de sapogeninas y su utilización en cosméticos y composiciones farmacéuticas dermatológicas siendo todos estos el objeto de la presente invención.
Con este proceso hidroliticσ practicado a la lucumina y a los glicósidos relacionados estructuralmente afines de los sapotes pero principalmente con el proceso de hidrólisis enzimática exógena, extragenβrica se obtienen extractos característicos con diferentes substancias que se obtienen por el mismo proceso de obtención y de separación descritos, constituyendo a la materia orgánica volátil de los sapotes que son las geninas o el extracto genínico (ó los aceites volátiles Q esenciales) y otras substancias orgánicas volátiles solubles al agua que se acarrean en el proceso de obtención a partir de la materia vegetal de los sapotes como extracto sapogeninico con características acidas y amídicas, hidroxilados como se define más adelante. Estos los extractos genínico y sapogeninico se constituyen como los productos de hidrólisis enzimática exógena, extragenerica de los glicósidos cianogénico y relacionados estructuralmente afines de los sapotes. Las sapogeninas tienen factibilidad de ser cristalizada como hidroxicompuesto con características de ácido carboxilico y de derivado amidado carbonílicos de este ultimo ácido al igual el benzaldehido de los sapotes puede obtenerse en forma pura.
Se describe en la literatura (ref. 22) que se obtiene benzaldehido por síntesis química y se obtiene con contaminación de cloro o por productos de oxidación del tolueno a diferencias de la geninas de los sapotes que se caracterizan por el olor a estas plantas y que se obtiene sin contaminación de reactivos químicos como el cloruro de benzal utilizado en la síntesis química o por compuestos de oxidación del tolueno en otras formas de sintetizarlo.
El benzaldehido también ocurre en algunas simientes como las mencionadas anteriormente diferentes a los sapotes que contienen amigdalina (ref, 39) como de la almendra amarga o también conocido como Prnnus amygdalus. En la almendra amarga se encuentran enzimas propias,. endógenas (propias internas) de es genero que catalizan la hidrólisis de los glicósidos que se encuentra en esos tejidos de las simientes de la almendra citada (ref. 22, 42,51r53} y se llaman trivialmente emulsinas {glucosidasas) que al ser trituradas entran en contacto con el sustrato de la misma simiente molida, rompiéndose los compartimientos endógenos citoplásmicos, subcelulares o extracelulares {ref. 65) que las contienen y se produce la hidrólisis de los glicósidos presentes en estancia de agua, y que reaccionan dando benzaldehido o los aceites esenciales de la almendras amargas con. características diferentes al aceite esencial del sapote el cual también contiene benzaldehido pero con una serie de compuestos particulares que se acompañan en el extracto que caracterizan al aceite esencial perteneciente a los aceites volátiles de los vegetales relacionados a los sapotes con su aroma peculiares de donde proceden, pudiendo abarcar desde los hidrocarburos (terpenos y sesquiterpenos) , alcoholes, ácidos, esteres, aldehidos, cetonas, fenoles y lactonas de la misma planta con características odoríferas diferentes que loa distinguen de otros géneros como los mencionados diferentes a los sapotes (ref. 3,17). Se conoce que del genero Prunus amygd&lus, la almendra amarga se obtienen al benzaldehido esto es porque en las simiente de este vegetal se encuentran enzimas endógenas, amigdalasas, glucosidasas (ó emulsinas como antiguamente se les conocía) particulares de este genero de plantas que hidrolizan los propios glicósidos amigdalinicos (ref. 3,17,39,40,41,42) . En los géneros Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma exiaten los glicósidos en especial a la lucumina y glicósidos relacionados estructuralmente afines, que en estructura química muy similares a la amigdalina y a los glicósidos relacionados a estos géneros correspondientemente, (el ácido amigdálico [ó ácido amigdalínico] y la amigdalinamida) pero que varían tan solo en el residuo azucarado, la gentobiosa por primeverosa en los sapotes del glucósido y en sus glicósidos relacionados afines, en la amigdalina) pero que en el residuo de aglicona son similares entre si, pero la incapacidad del los géneros Calocarpum, Chrysophyllum y en el Lúcuma para ser hidrolizados en homogeneizados de sustrato zimogénico propio, endógenos de las mismas simientes presentes (ref. 40,41,42,64,65) y transformados por estos mismos sistemas catalíticos propios de desarrollo interno y ser modificados a las geninas y sapogeninas, en contraste como se describe en la presente invención con la introducción de zirαógenos exógenos, extragenéricos (externos de otro genero vegetal ó microbiano) y por lo tanto el no ser utilizados con este fin, de obtener los gücósidos cianogénico y relacionados afines más a sus derivados hidroliticos. La transformación descrita en la présente invención a derivados de agliconas (las geninas. y las sapogeninas) no tóxicas y la utilización de los compuestos o extractos de los sapotes mencionados en los siguientes usos cosméticos y en composiciones farmacéuticas dermatológicas es el objetivo, sin uso anterior a la presente invención, siendo desaprovechado o inadvertido su potencial como recurso natural aprovechable, en el cual aparte de las geninas benzaldehidicas también se obtienen a el extracto de sapogeninas que contienen a los hidroxicompuestos carbonilicos y el ser utilizados todos en forma purificada o en forma de extractos con el mismo fin, que es el de hacer cosméticos y composiciones farmacéuticas dermatológicas o en usos sucedáneos o potenciales como en usos alimenticios pero con propiedades diferentes a los ya existentes, como descrito más adelante.
El acontecimiento bioquímico de la incapacidad catalítica de las simientes de los sapotes relacionados (ref. 64,65) como demanda humana de ser transformados en materia soluble e insoluble (al agua) y volátil con propiedades farmacológicas como lo son las esencias volátiles, que se separen como aceites del medio acuoso y con aroma característico al vegetal y el hecho de su utilización mediante la reposición enzimática exóge.na extra genérica para ser transformados los gücósidos relacionados por β-glucosidasas agregadas ex profeso de medios exógenos apropiadas, de diferente genero vegetal ó microbiano y así posibilitar su utilización, resultan motivo de la presente invención y como ventaja técnica sobre de procesos conocidos como el de la amigdalina de la almendra amarga que solo transforma en las geninas ben2aldehídicas con el sistemas enzimático propio endógeno, esto es sin lograrse hidroxicompuestos con características carbonílicas como al acidas carboxílico o a su amida relacionadas correspondientes a el cianogliσósido.
Los residuos azucarados de la lucumina y glicósidos relacionados afines también se recuperan como recursos alternos; en glucosa y xilosa o como disacárido primaverosa ó en forma de extracto, como metabolitos transformables en biomasa, en el aprovechamiento integral de este recurso vegetal (ref. 14,15,26,35,53 y referencias ahí citadas; ref, 56,61) .
La reposición enzimática extra genérica un motivo de la presente invención resulta como un proceso redituable diferente a los ya existentes con un costo mínimo en el financiamiento del proceso que se limita a las simientes de los sapotes y a la suspensión zimáticas de "emulsinas" de un diferente género peculiares apropiadas, capaces de hacer las transformaciones mencionadas y descritas más adelante y que surgen como un método innovador para su aprovechamiento mediante el tratamiento de las simientes homogenizadas de los sapotes, material vegetal que no se utilicen favorablemente y del contenedor de reacción. Los usos favorables diferentes a los empleos de esta invención pueden ser como pie de cría ó injerto, ó el utilizado en otra forma más redituable de lo que se describe en la presente invención y de la solicitud relacionada de patente por el mismo autor (ref. 68) ó el empleo en usuras mal aprovechadas en tratamientos rústicos tradicionales que no logran separar la materia farmacológicamente activa de los constituyentes de la simiente que los hacen inapropiados, tóxicos (si se ingieren) y el poder ser utilizada en el proceso descrito en esta sección y más adelante y en la solicitud relacionada (ref. 68) que es la utilización de las materias elaborada obtenidas de las simientes de los sapotes como derivados o extractos geninicos y sapogenínicos, glucosídicos cianogénico y relacionado más extractos lipídicos fijos en composición total y el ser explotadas industrialmente como recurso renovable mediante su transformación a productos de consumo como cosméticos y composiciones farmacéuticas dermatológicas ó en usos sucedáneos ó potenciales (materias primas farmacéuticas en usos alimenticios) . Por esto y lo citado anteriormente la utilización de la simiente de los sapotes como descrita en la presente invención resulta con ventajas técnicas con respecto de los procesos ya conocidos en las que no se utilizan el recurso de las simientes de los sapotes en su totalidad siendo materia de desecho de la fruta y muy poco para otras finalidades o su nula utilización en procesos de provecho como la obtención y uso en derivados o extractos como las genlnas, (el derivados benzaldehídicos) libre de reactantes químicos pero acompañado por una serie de sustancias volátiles que caracterizan a ese aceite extractivo ó aceite esencial y con la coproducción de las sapogeninas ó el extracto sapogenínico que también se lleva a cabo mediante el proceso motivo de la presente invención o en contraste con la utilización de ácido mandélico obtenido mediante síntesis química con reacciones enérgicas dando una mszσla racémica sin obtener a la amida de este ácido cαrαα en la presente invención y a diferencia de la forma de obtención y la utilización de las sapogeninas de los sapotes logradas de forma sutil por reacciones bioquímicas enzimaticamente y por técnicas de separación Contra los otros procesos para obtener análogos inequivalentes.
Otra ventaja técnica de esta invención es que se obtienen a los aceites volátiles de los sapotes (aceites esenciales) ingredientes farmacéutico y alimenticio potenciales que no existen en forma tal como esencia de sapotes y menos comercialmente que al igual se caracteriza su proceso de obtención, por su aroma peculiar a sapote, diferente de los aromas vegetales aislados conocidos.
También el objetivo de la presente invención es resolver el problema del uso rústico que se ha utilizado en usos tradicionales cosméticas, medicinales y alimenticios que distinguen, los efectos benéficos en la piel, el pelo y én diferentes afecciones y costumbres a base de preparados del Calocarpurα, Chrysophyllurα o del Lúcuma pero sin ser identificados su legitima acción, aislados los principios, detoxificados o separados en forma productiva los principios farmacológicos, cosméticos ó alimenticios. Los principios y derivados gliσosídico cianogénico y glicσsidos relacionados estructuralmente afines, de geninas, de sapogeninas y como agente alterno de estos efectos (ó sinérgicos) a los extractos de lípidos fijos en composición total, (estos últimos son motivo de otra solicitud de patente por el misϊαo autor [ref. 68]) todos provenientes del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma e incorporarlos en preparaciones cosméticas efectivas y actuales o preparaciones farmacéuticas dermatológicas como solución al problema técnico en el uso de análogos muy disímbolos o en el uso tradicional (usos rústicos) como novedades técnicas en composiciones cosméticas y farmacéuticas dermatológicas que son efectivas para la defoliación (descamación) de la capa cornea superficial y de la renovación epidermal incluyendo estos efectos a los queratinocitos a nivel del folículo piloso/ el cual se estimula su crecimiento y desarrollo así como en la prevención del deterioro anticipado de la piel y del cuero cabelludo y como agentes que favorecen la penetración percutanea en conjunto con una fase lipídica pudiendo estar formando un fase lipídica laminar hidratada ó en vesículas del tipo liposomal al igual que como agente bacteriostático y fungistático λλin vitro" y "in vivo" son motivo de la presente invención al igual que en usos sucedáneos ó potenciales como en alimentos, usos como materia prima farmacéutica etcétera. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN»
La presente invención se relaciona principalmente con el glicósido cianogénico, la lucumina y sus glicósidos relacionados estructuralmente afines o para las correspondientes derivados de hidrólisis de estos, las sapogeninas y geninas del Calocarpum, del Chrysophyllum o del Lúcuma, esta ultima substancia esta constituida por los aceites volátiles que se usan en la presente invención como agente xubefaciente y contra irritante selectivo de epitelios delicados (cara y cuero cabelludo de la cabeza) que abre los poros de la piel en preparaciones de cosméticos o preparaciones farmacéuticas dermatológicas. Por las actividades que despliegan las sapogeninas que resultan como agente defoliativos que promueven la renovación de la piel y la estimulación del desarrollo de la epidermis incluyendo crecimiento de pelo y en la retardación en la calda del cabello, para combatir los efectos del envejecimiento epidermal y el deterioro anticipado de la piel en preparaciones tópicas, también con acción de potenciador de la penetración percutanea. La propiedad de potenciador de la penetración percutanea, las preparaciones lo exhiben en solución acuosa en conjunto con. una fase lipidica dispersa o con una fase lipidica laminar hidratada o de vesículas del tipo liposomal que las contengan (ref. 2,33,34} y de los efectos positivos por el uso reiterado en tratamientos en el mejoramiento de la piel y el pelo deteriorados, y también con la variación de efectos bacteriostáticos y fungistáticos que también exhibe "in vitro" y en la piel.
En variantes alternas de la presente invención también se encuentran, en las simientes, compuestos triterpénicos, esteroidales, y cianogénicos como reportados por las referencias 18,19,27 y 67 como la alfa y beta amirina, el lupeol, lanosterol o la lucumina, librea o esterificados.
Estas plantas tienen una gran variedad de usos alimenticios y medicinales tradicionales de los cuales el aprovechamiento principal es la pulpa de la fruta por sus excelentes sabores y en recetas tradicionales de alto contenido de proteínas, carbohidratos, fibras, grasas, sales minerales, vitaminas; especialmente compuestos carotenoides, tiamina, riboflavina, niacina, ácido ascórbico (ref.4,7,8, ).
Presentes en las hojas, en las flores, en la corteza, en la savia y en la simiente de los frutos se encuentra un compuesto glicosldico tíianogénico tóxicos, la lucumina y por los glicósidos relacionados estructuralmente afines, el ácido lucumínico y la lucuminamida (ref. 4,15,18,20,35,56), metabolitos secundarios de esta familia {Sapotaceae) y género de plantas (Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma) . Los glicósidos referidos en el párrafo anterior se caracterizan por ser β-D-diglucαsidos (ref. 60,66) y por consistir de lucumina ( [6-0-(β-D- Xilopiranosil)-β-D-glucopiranosiloxi]-2-fenilacetonitrilo) y glicósidσs relacionados afines derivados del primero, el ácido lucuminico ([6-Q-(β-D- Xilopiranosil)-β-D-glucopiranosiloxi]-2-fenil ácido carboxílicσ) y la lucuminaiαida (6-0-((->-D-Xilopiranosil)-β-D-glucopiranosiloxi] -2- fenilacetamida) ó derivados del cianoglicósido relacionado afines al Calocarpum, Chrysophyllum o al Lúcuma Cref. 15,35,56), los cuales están principalmente constituido por agluconas del tipo del alfa-hidroxinitrilo, del derivado ácido alfa-hidroxilado y del derivado amídico alfa-hidroxilado de este ultimo ácido, también de un carbohidrato (disacárido) , la priiαeverosa como residuo azttcarado de la lucumina y de los glicósidos relacionados afines, en los cuales se utilizan diferentes métodos en sus determinaciones, incluidos el método indirecto fotométrico y el directo cromatográfico, pudiendo ser cualitativos, semicuantitativos o cuantitativos como los descritos en la referencias 11,14,15,23,24,25,35,36,37,38,43,46,55,56,57,59, 62,63 o enzimáticσs referencias 32,40,41,42,44,45,46,48,49,50,51,52,53,54,58. La materia vegetal como las simientes ds los Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma en forma desengrasada y pulverizada, al respirar estos polvos por la nariz irritan el tracto respiratorio y hacen estornudar como se reportan las actividades de los glicósidos sapogenicos (ref- 3) . Estos se pueden preparar de las simientes, arreglados para obtenerlos de varias formas, siendo las principales las descritas anteriormente y en la solicitud relacionada de patente (ref. 68), sobre de la obtención del residuo sólido de la expresión lipídica, esto es en forma de ""chicharrón" residuo sólido de exprimido lipidico y ó "harina desengrasada" residuo de la extracción lipidica con disolventes como remanentes vegetal en la obtención de aceites ó lipidos fijos de los sapotes- Los glicósidos sapogenicos y sus derivados también son obtenibles de las simientes como materias en bruto, llanamente brituradas ó molidas.
La materia vegetal de las simientes también están constituido por aceites volátiles glicosidicos que se encuentran intimamente ligados a la materia estructural por medio de azucares que se unen en carbohidratos de cadena largas en los tejidos de sustento germinal en el cotiledón. Algunas substancias glicosídicas consisten de un disacárido unido a hidroxicompuestos con carácter nitrílico, de ácido carboxilicσ o de derivado amidico de este ultimo que son hidrolizables en tratamientos especiales en la presente invención con la introducción de productos enzimáticos exógenos, externos, extragenéricos, de otros géneros vegetales (ó microbianos) , mas no en forma común aisladamente, preparados como materia única independientemente, convertidos a sapogeninas y geninas; usando alguna técnica de separación, pero que conserva la características alfa hidroxiladas (alcohólicas) , de nitrilo, de ácido y de amida respectivamente, La primera de estas substancias, de la mención anterior, se convierte a, geninas benzaldehídica, oleosas y volátiles enzimática ó espontáneamente (ref. 65 y referencias ahí citadas) como hidrolizado del glicósido nitrilico (cianoglicósido) ; siendo las dos ultimas substancias recuperables solubles al agua y separables de la geninas insolubles con características de aceite esencial oleosas.
En una variante en particular de la invención el glicósido cianogénico y glicósidos relacionados estructuralmente afines, geninas y sapogeninas son obtenidos por extracción, o se obtienen sus derivados por hidrólisis química o enzimática de la corteza, hojas, brotes, flores, de la savia, de las frutas y de las cascaras o de la simiente del fruto del Calocarpum, Chrysophyllurα y del Lúcuma. Preferentemente en particular el tejido vegetal es seleccionado de las simientes, como recurso renovable las cuales son secadas y desengrasadas por técnicas de expresión y ó por extracción con disolventes apolares principalmente (que son motivo de otra solicitud de patente por el mismo autor [ref. 68]), con el fin de recuperarse y evadirse a los lípidos fijos.
Para la obtención de los glicósidos cianogénico y relacionados afines es posible utilizar la materia vegetal directamente o siendo posible utilizar la materia vegetal desengrasada total o parcialmente, como sólido residual de las simientes que queda como remanente después de la expresión lipídica y ó la extracción de aceite (para ver la obtención de los lípidos fijos totales de la expresión lípidica o extracción de aceites y de sus derivados residuales ver la solicitud relacionada de patente del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma [ref. 68]). Con esto se obtiene una fracción lipídica consistente en los lípidos fijos en constitución total (aceites fijos, fosfolípidos y residuos glicosídicos [no cianogénicos] triterpénicos y esteroidales ó esteróles principalmente) ; removible por las técnicas en uso en la presente invención y en la solicitud relacionada (ref. 68) para el desengrase de materia vegetal (expresión y ó extracción) como fracción de substancias oleosas fijas con actividad alterna en los efectos mencionados y que son motivo de esta y de la solicitud relacionada de patente por el mismo autor, y como función productiva y de evasión previa a las operaciones para la obtención de los glicósidos cianogénico y relacionados estructuralmente afines ó derivados de estos las geninas y sapogeninas, sin que estos tratamientos sean restrictivos.
En otra creación el glicósido cianogénico y glicósidσs relacionados estructuralxnente afines al primero, geninas y sapogeninas preferidos es el uso de glicósidos sapogenicos como la lucumina, el ácido lucuminico, la lucuminarαida, geninas y sapogeninas derivados de los primeros. Las geninas se obtienen como agluconas de la lucumina, el glicósido cianogénico y las sapogeninas de los glicósidos relacionados al cianoglicósido, el ácido lucuminico y la lucuminamida del Calocarpum ó del Chrysophyllum ó del Lúcuma. Los glicósidos relacionados estructuralmente afín a e.1 cianoglicósido se incluyen como los glicósidos relacionados estructuralmente afines a la lucumina, reconocidos como al ácido lucuminico, la lucuminamida (ref. 15,56); encontradas en el presente trabajo con actividad ante β-glucosidasas [amigdalasas] y a otras desnitrilasas [hidroxinitril liasas ó mandelonitril liasas] en unión a otras enzimas constituyentes de estos complejos sistemas catabólicos (ref. 51,65 y referencias ahi citadas), al igual que la lucumina dando mandelonitrilo y posteriormente benzaldehido; el ácido lucuminico y la lucuminamida dando al ácido mandélico más a otro hidroxiderivado de este ultimo ácido pero con características amídicas respectivamente, ambos con características de alfa hidroxicompuestos carbonílieos, escindidos del residuo azucarado de los dos glicósidos relacionados afines a la lucumina {ref. 11,15, 31,35,36,37,38,39,46,51), que se separan en el mismo proceso ulterior de aislamiento, cuando se somete a calor en el inicio del aislamiento (80 a HO 0C) ; dejando los productos de degradación de la primeverosa, que son a la glucosa y a la xilosa ó a la primaverosa entera, dependido en el tipo o fuerza de la hidrólisis (ref. 11,15,23,26,35,39,).
En todavía otra variante de la presente invención la materia vegetal de los Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma mencionados anteriormente se seleccionan de grupos genéricos consistiendo de Calocarpum sapota, C. mammosum, C. huastecanum, C. viríde, C. odoratum, Lúcuma domíngeαsis, L. stahliana, L. dussiana, L. cuprea, L. campechiana, L. obovata, L. hypoglauca, Chrysophyllum mexicanum, Ch. ca±nito.
En otra creación más de la invención los extractos glicosidicos y de sus derivados anteriormente mencionadas se obtienen por métodos que se describen posteriormente como forma de indicación mas no implican alguna limitación en los alcances de la presente y en la formas de obtención de los ingredientes activos del Calocarpum, Chrysophyllum ó Lúcuma y su utilización en preparaciones cosméticas, farmacéuticas dermatológicas y la posibilidad de ser utilizada en usos sucedáneos.
Se parte de materia vegetal que no tenga valor o minino valor comercial como las hojas, las cascaras del fruto, o de las semillas. Preferentemente se usan estas últimas removidas del pericarpio* La materia vegetal se selecciona de las cuales tienen cambios en la coloración debido a oxidación ó a la degradación con flora saprofítica causada por exceso de humedad. De esta selección se secan, se trituran, se desengrasan como se indico anteriormente (ó por la referencia 68) y se extrae por medio de disolventes químicamente puros seleccionados de agua, alcoholes preferentemente conteniendo de 1 a 4 átomos de carbono y de esteres conteniendo de 3 a 6 átomos de carbono o por medio de mezclas de disolventes basados en cualquier combinación de los disolventes arriba mencionados.
Cuando la extracción glicosídica cíanogénica. y relacionada estructuralπtente afin a concluido el extracto es filtrado y concentrado por evaporación a sequedad bajo presión reducida para dar un extracto primario de glicósidos concentrados de acuerdo con la presente invención.
En una variante particular el uso de acuerdo a la invención se relaciona a mezclas de glicósidos afines a la lucumina que se obtienen de acuerdo a la presente invención como extracto concentrado o como extracto seco por los procedimientos indicados en los ejemplos 1,2 y 3 más adelante. El extracto primario de glicósidos anteriormente mencionado se trata con la introducción de un disolvente apolar o de polaridad intermedia y después de ser agitado en él o los disolventes que de preferencia sean miscibles con el disolvente primario de extracción tal como éteres o cetonas de bajo peso molecular en particular éter etílico o éter isopropílico, acetona, etilmetilcetona de entre los principales. La cantidad en peso del disolvente apolar o de polaridad intermedia utilizada es de 1 parte a 100 partes del disolvente por una parte del material del extracto primario de los glicósidos mencionados. El material insoluble y ó el precipitado formado contiene una mésela de los glicósidos mencionados relacionados estructuralmente afines en forma semipurificados de acuerdo a la invención.
Es posible purificar aun más algunos de los glicósidos relacionados al cianoglicósido por recristalizaciσn por algún método accesible con disolventes polares o de agua, según el procedimiento en la invención.
Aun más es posible purificar la mezcla de glicósidos anteriores por medio de la redisolución del material in≤oluble o el precipitado en volúmenes que van de 1 a 20 partes de su peso en agua. La disolución acuosa es extraída de 2 a 5 veces con un alcohol que tenga escasa solubilidad en agua tal como los alcoholes n-butilo ó iso-butilo, que haya sido saturado con agua, en proporciones que pueden ser por ejemplo de 1:1 en volumen para cada operación de extracción. Los extractos alcohólicos se separan de la fase acuosar se combinan y evaporan a presión reducida. El residuo de la evaporación ge redisuelve en 10 partes de su peso en agua y se dializa contra agua pura. El dializado de extracto de glicósidos afines al cianoglicósido se liofiliza y si es necesario aun purificarlo más el liofilizadσ se disuelve en el minimo volumen de metanol el cual se evapora y es restituido con éter etílico absoluto y el precipitado formado se recolecta. La mezcla sólida se redisuelve en la mínima cantidad de agua y se le practican técnicas de cromatografía para aislarse como compuestos puros, técnicas como las propuestas en el ejemplo 3.
Las geninas y sapogeninas pueden, ser extraídas de la materia vegetal tratada directamente o extraídas del mismo tratamiento descrito en los párrafos anteriores y mas adelante pero practicado a el extracto concentrado en glicósidos o concentrado rico en glicósidos o de lo que dejan de residuo sólido vegetal los productos de expresión lipídica pero principalmente de lo que dejan de remanente sólido de materia vegetal la extracción lipídica. Las geninas y sapogeninas de acuerdo con la presente invención son obtenidas como hidrolizados con los métodos propuestos a partir de los extractos semipurificados de glicósidos relacionados afínes a la lucumina, ó por medio del tratamiento directo de la materia vegetal ó por medio del tratamiento del residuo sólido de expresión que se menciona anteriormente ó del producto sólido residual del extracto lipídico desengrasado, la harina sin grasa (ref, 68), siendo este ultimo procedimiento el más ventajoso por la recuperación productiva de la totalidad de los lípidos en el aprovechamiento integral.
Se procede a extraer las geninas y sapogeninas de extractos semipurificados relacionados al cianoglicósidos afines O de materia vegetal sin procesar triturada o del remanente sólido de la materia vegetal después de la expresión o de la harina desengrasada de las simientes que es el remanente sólido de la extracción lipídica por medio del rompimiento del enlace glicosídicos, por hidrólisis acida como se hace convencionalmente (ref. 15,23,35 y 39), la cual se lleva acabo por ácidos sulfúrico y halogenados concentrados o diluidos. Los ácidos halogenados principales utilizados en la presente son ácido clorhídrico, ácido perclórico, ácido tricloroacético, y se usan en este trabajo en forma similar a las que se describen en las referencias anteriores.
En otras formas de hidrolizar se usaron medios enzimáticos, ó extractos proteicos de los mismos (ref. 47) sin que esto sea una limitante en la forma de hidrolizar o en el origen 6 forma enzimática, pudiendo ser de procedencia 5 microbianas {ref. 32,44, 45,49,5Q) ó vegetal. Sin embargo existen sistemas enzimáticαs específicos y no específicos muy convenientes y apropiado para la finalidad de este trabajo que se encuentran en tejidos vegetales y catalizan transformaciones a azucares y agliconas particulares, siendo esta ultima la forma más provechosa para los objetivos de la presente invención (ref.
10 11,12,39,40,41,42,48,51,52,53,54) .
En un tipo de hidrólisis que utiliza enzimas vegetales y que se lleva a cabo en solución acuoso amortiguado, con medio ácido preferentemente, en la materia vegetal de los Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma que contenga los fermentos ó extractos de sistemas enzimátieos ó enzimas purificadas
15 particulares, peculiares, apropiadas de beta-glucosidasas exógenas que al igual que la glucosidasas de otros géneros vegetales catalizan la hidrólisis de los propios glicósidos del (mismo genero) pero que también es posible utilizarlas en otro tipo genérico de sustrato glucosidico ó vegetal que carezca del potencial enzimático (glucosidasas endógenas funcionales) (ref.
20 3,12,40,41,53) como los sustratos de los géneros de los sapotes relacionados. Estos sistemas de emulsinas hidrolizan enlaces beta-glicosidicos en unidades monoméricas o diméricas de azucares (ref. 56 y referencias ahi citadas, 65 y referencias también ahi citadas) y en hidroxicompuestos, las agliconas, que en el caso de los glicósidos lucurulnico, ácido lucuminico ó lucuminamida se
25 trata de hidroxicompuestos que son bencílicos (fenílieos) con características nitrilica ó aldehídica, acida y amidica respectivamente de aplicación. Estas transformaciones dependen de las propiedades cinéticas, de la actividad especifica de la velocidad de reacción, del pH óptimo, de la temperatura, de operación de los sistemas enzimáticos (ref. 48,51 y referencias ahí citadas,
30 52,53,54,56,65).
Como en la amigdalina ó la prunasina, con aglucona de características mandelonitrílicas y posteriormente transformada en benzaldehido, como se obtienen por otras técnicas esta substancia provenientes del genero Prunus como P. amygdalus y P. serótina (y la hidrólisis del grupo nitrilo del
35 mandelonitrilo para llegar al benzaldehido (ref. 17,39,40,41,42,51,53) que igualmente sucede en la lucumina a excepción que es necesario la introducción de enzimas exógenas (externas), extragenérica, de otro genero para la obtención de resultados significativos de utilidad, cosa que no se consigue con las emulsinas propias endógenas de los géneros de los sapotes (ver ejemplo 8) .
Por hidrólisis de los glicósidos ácido y aiaídico relacionados a la lucumina ó más específicamente al ácido lucumínicσ y a la lucuπiinamida utilizando enzimas vegetales exógenas, extragenéricas se obtienen los derivados alfa hidroxilados ácido y amídico respectivos, promovidos por hidrolasas exógenas extra genéricas, que rompen a los disaeárido de los glicósidos relacionados, liberando a estas agliconas acida y amidica correspondientemente. Estas agliconas siendo separados, como una mezcla de sapogeninas. De la lucumina se libran a las geninas benzaldehidicas, ambos grupos de substancias se obtienen como un extracto volátil.
Las soluciones obtenidas por hidrólisis enzimática extra genéricas de los sapotes y por técnicas de separación con calor, dan como resultado una solución que forma espuma, formada por las sapogeninas solubles y por material insoluble al agua, aceitoso y con aroma característico a la misma planta conformado por las geninas como se obtienen en una variante en particular de la invención, que es la de obtener productos hidroliticos de los glicósidos cianogénico y relacionados afines del Calocarpum, Chrysophylluiti y Lúcuma por preparaciones de emulsinas externas, exógenas, extragenéricas (β-glucσsidasas de otro género, microbiano ó vegetal) agregadas ex profeso, a condiciones amortiguadas de acidez. Esto es con la introducción de un segundo sistema enzimático peculiar de diferente especie vegetal ó microbiano, sistemas inespeqíficos enzimáticos para los sustratos existentes como los que se demuestran en los ejemplos 5,6 y 7. Las geninas y sapogeninas del Calocarpum así obtenidas tienen actividad hemolitica a altas diluciones principalmente las que son solubles al agua.
Por hidrólisis de los enlaces glicosídicos como lo hacen las (emulsinas) β-glucosidasas a estos glicósidos cianogénico y relacionados afines pero llevadas acabo a condiciones de acidez (ref. 65 y referencias ahí citadas) amortiguadas es posible la transformación a los productos específicos, los hidroxicompuestos, bencílico y carbonílico mas al ácido y a la amida con características similares al derivado del mandelonitrilo mencionado y al behzaldehido. Estas agliconas, las geninas y las sapogeninas de los cuales los más abundante son substancias volátiles que semejan ser substancias benzaldehídica, ácido D-mandélico(R) y D-mandelamida (R) respectivamente del Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma por la acción inespecífica ó específica enzimática y ó alternativamente por la hidrólisis química, separadas por calor. Una variante en particular de Xa invención es la que emplea sistemas enzimáticos de β-glucσsidasas no propias (no endógenas) de los Calocarpuiα, Chrysophyllum o Lúcuma, procedentes de otra especie vegetal, extragenerica peculiares, apropiadas, principalmente emulsinas acidas en medio ácido amortiguado, como se demuestra en los ejemplos 5,6,7 y 8 con lo cual se obtienen agliconas insolubles y solubles al agua,- las geninas y las sapogenirtas respectivamente, mencionadas anteriormente.
El medio ácido amortiguado se logra us-ando tampones de citrato ácido, acetato o fosfato ácido y mezclas de estos entre otros o al proporcionado por diferentes preparados de tejidos vegetales principalmente que contengan este pH y emulsinas de las cuales se prefiere a las emulsinas acidas de vegetales como las mencionadas en el ejemplo 5,6 y 7.
Finalmente la reacción que se lleva acabo sobre el glicósido cianogénico (alfa-hidroxinitriladα) es la deglicosilación en la separación del residuo azucarado, regulado por las beta-glucosidasas, que incluyen enzimas que catalizan la misma reacción y reacciones subsecuentes encadenadas en la reacción integral final, como pueden ser hidrolasas, como las alfa- hidroxilasas, la prunasin hidrolasas, seguidas por las mandβlonitril liasas; que todas llevan a obtener agliconas de los sapotes deglicosiladas y desnitriladas que comprenden a enzimas glucosidasas principalmente de otra especie, como las hidrolasas, hidroxilasas e hidroxinitriliasa, acidas de las especies de vegetales como las descritas en los ejemplos 5,6,7 y 8 (ref. 11,12,40,41,42,45,46,50,51,52} .
Después de llevada acabo la reacción enzimática a temperatura ambienta ó entre 25-60 0C y con agitación por unos minutos después se usa alguna técnica de separación de las geninas y sapogeninas adecuado, los cuales puaden ser por filtración, extracción, o por alguna técnica que utilice la capacidad de separar esta mezcla de volátiles emulsionada por medio del punto de ebullición utilizando calor aplicado al producto de reacción como mencionado anteriormente.
Se emplean disolventes apolares o de polaridad intermedia inmiscible al agua para la extracción de las sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma cuando se obtienen por hidrólisis en medio acuoso. La cantidad del disolvente apolar o de polaridad intermedia utilizado puede ser fracciones o de 1 parte a 30 partes del disolvente por 1 parte del volumen a ser extraído. La fase orgánica asi extraída contiene a la mezcla de sapogeninas las cuales se concentran, para obtenerse como extracto concentrado de sapogeninas según la invención. Las geninas y sapogeninas de esta forma logradas se obtienen en medio acuosos; las geninas se consiguen como mezcla liquida insolufale en el medio y son separadas utilizando esta propiedad. En la fase acuosa se encuentran las sapogeninas las cuales se separan por extracción con un volumen de éter, pudiendo hacerse varias extracciones, de 1 a 5 aproximadamente para completar la extracción. Los extractos se concentran por evaporación y se conforman en un concentrado de sapogeninas. Es posible utilizar alguna técnica, de cristalización adecuada en su separación.
Esta forma de llagar a las geninas y sapogeninas es tan solo como forma de indicación, sin que estas impliquen ser una limitante en que materia prima se utilice procedente de las simientes de la familia relacionada y la forma de hidrolizar ó de extracción y de separación de estas y de otras capacidades para obtener a las substancias activas antes mencionadas en la presente invención. De ser requerido las sapogeninas pueden ser purificadas por alguna técnica adecuada de cristalización con alcoholes de 1 a 4 átomos de carbono y mezclas con agua.
En una variante de conveniencia las sapogeninas antes mencionadas son seleccionadas de las que contienen grupos carboxilicos ácidos no ionizados y de sus correspondientes sales metálicas en especial de calcio y de sodio, para llevar acabo la presente invención (ref.31) .
De acuerdo con los hechos expuestos en la presente invención que se relaciona con el uso de cuando menos un derivado del Calocarpum, Chrysophyllum o del Lúcuma de entre los lípidos fijos o fracción de ellos (la obtención de los lipidos fijos son motivo de otra solicitud relacionada de patente por el mismo autor [ref. 68]), de los aceites volátiles ó fracción de ellos, y del resto de substancias volátiles de entre las geninas y las sapogeninas o fracción de alguna de ellas y de los correspondientes glicósidos relacionados afines a la lucumina, de donde se derivan los dos últimos anteriores grupos de substancias o fracción de alguna de ellas en cualquier forma que se pudieran presentar: como productos vegetal residual de la expresión del material lipídico; en forma de residuo sólido de extractos lipidicos de la materia vegetal; o en otra forma de materia prima vegetal en bruto; en forma de productos hidroliticos utilizando ácidos o bases; hidrolizando utilizando enzimas de naturales vegetal o de origen microbiano o por el uso de fermentos o mezclas de ellos conformado por materia vegetal ó de extractos de materia vegetal ó microbiana, ó preparados de las mismas, incorporada en forma de substancias en bruto, semipurificada o purificadas provenientes de la misma materia vegetal del Calocarpurα, Chrysophyllum o Lúcuma y ó de otra especie vegetal ó microbiana en los cuales puede encontrarse estos compuestos que catalizan las transformaciones mencionadas, para ser utilizados en preparados cosméticos o preparados farmacéuticos dermatológicos (ó usos sucedáneos) resueltos particularmente como agentes defoliativos tenue de la capa cornea superficial y de la renovación gradual y estimulación del desarrollo de la epidermis incluyendo estos efectos a los queratinocitos a nivel del folículo piloso, como la estimulación del crecimiento del cabello y para contrarrestar los efectos del envejecimiento epidermal y de la prevención del deterioro anticipado de la piel y del cuero cabelludo; son concomitantes también los efectos como agentes percutáneos y agente bacteriostático y fungistático local en la piel o en preparados cosméticos o farmacéuticos dermatológicos, (ó en usos sucedáneos) como se demuestra en los ejemplos 9,10,11,12 y del ejemplo 5 de la solicitud de patente relacionada por el mismo autor (ref. 68} .
De acuerdo a otros hechos la invención mas allá provee métodos de manufacturar cosméticos o productos farmacéuticos dermatológicos desarrolladas en particular como agentes defoliativos tenue que promueven la renovación gradual de la piel y la estimulación del desarrollo de la epidermis incluyendo al crecimiento del pelo, con una retardación en su caída y para combatir los efectos del envejecimiento epidermal y el deterioro anticipado de la piel en preparados de aplicación tópicas con actividad de potenciador de la penetración percutanea, y de efectos bacteriostáticos, fungistáticos en la piel y en las preparaciones de uso tópico, métodos que comprenden el uso de cuando menos algún glicósido relacionado estructuralmente afín al cianoglicóaido, gen,inas ó sapogeninas ó porción entera ó fraccionada de lípidos fijos totales [ref. 68] ó extractos vegetales de estos últimos ó de productos de expresión correspondientes ó productos hidrolíticos de los primeros en forma pura ó impura ó fracción de alguno de ellos ó transformados a fase lipídica laminares hidratados, en los cuales se presenten preparados con vehículos ó acarreadores excipientes adecuados cosméticos ó farmacéuticos dermatológico.
En una variante, estos métodos comprenden primeramente que cuando menos parcialmente sean incorporados cuando menos uno de los antes mencionados glicósidos relacionados estructuralmente afines al cianoglicósido, geninas y ó sapogeninas del Calocarpuitt, Chrysophyllum ó Lúcuma o sus correspondientes extractos vegetales o productos hidroxilados y ó carbonílicos relacionados hidrolizados de los glicósidos correspondientes ó como productos residuales de expresión, ó como residuos de la extracción lipídica o como hidrolizados de la materia de las simientes en bruto trituradas o molidas (ref, 68), en los cuales se encuentren presentes en fases lipídicas laminares hidratadas o en vesículas del tipo liposomal (ref,2,33,34) con los ingredientes activos antes mencionados y luego preparadas con vehículos excipientes Q acarreadores adecuado pudiendo ser utilizados los propios lípidos del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma para formar las fases lipidicas laminares hidratadas» Los lípidos fijos y sus productos residuales sólidos de estos géneros vegetales son motivo de otra solicitud relacionada de patente por el mismo autor, como se menciono anteriormente (ref. 68) .
Las composiciones utilizadas en los métodos de la presente invención pueden también contener una variedad de ingredientes opcionales formando los vehículos excipientes o acarreadores adecuados que se adicionan a los ingredientes activos del Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma tratados en detalle en la presente y en la solicitud relacionada de patente sobre de los lípidos fijos (ref. 68) de estos géneros y familia vegetal.
Las composiciones que son utilizadas en los métodos de la presente invención preferentemente también pueden contener un vehículo cosmético o farmacéutico dermatológico aceptable sólido, sernisólido o liquido que actúe como diluyente, dispersaste o acarreador del ingrediente o ingredientes activos en las composiciones.
El termino vehículo excipiente o acarreador adecuado cosmético o farmacéutico ó como articulo sucedáneo, como usado en la presente significa que la substancia o substancias activas o los ingredientes inertes que el término describe son convenientes y adecuados para el uso en humanos sin tener toxicidad,, incompatibilidades, inestabilidad, irritación difundida, respuestas alérgicas, o respuestas adversas similares.
El vehículo cosmético o farmacéutico dermatológico adecuado puede comprender del 0.1 % a aproximadamente 99.9999 %, preferiblemente del 25 % a aproximadamente 99.99 %, mas preferentemente del 50 % a aproximadamente 99.99 % y mucho mas preferentemente de aproximadamente el 75 % a aproximadamente 99.99 % y todavía mucho pero mucho mas preferentemente de un 85? a aproximadamente 99.9 % en peso de la composición.
Vehículos aceptables incluyen por ejemplo agua, emolientes y o humectantes lipαfílico o hidrofílico, surfactantes (emulsificantes) , agentes espesantes, polvos, polímeros, resinas, plastificantes, agentes de relleno, lubricantes, ligantes, desintegrantes, disolventes, cosolventes, sistemas amortiguador de pH, agentes preservativos o conservadores, agente endulcolorantes, tintes y pigmentos de todos grado farmacéutico dermatológico o en su caso cosmético.
El agua puede ser empleada en las composiciones descritas en la presente como vehículo. Cuando el agua se emplea como vehículo, la composición puede ser en forma de disolución o dispersión o en forma de emulsión, suspensión o crema; ó como se cito anteriormente formando partes de la fase lipidica laminar hidratada pudiendo contener a los ingredientes activos del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma en fases lipídicas laminares hidratadas formada en las fases hidratadas de sapogeninas y ó geninas; ó de los glucósidos relacionados estructuralmente afines a la lucumina y en la fase lipidica también formada por los lípidos fijos ó volátiles ó fracción de estos de los Calocarpum,- de los Chrysophyllum o de los Lúcuma, estos lípidos fijos siendo motivo de otra solicitud relacionada de patente por el mismo autor (ref. 68) . Los emolientes y o los humectantes lipofílicos o hidrofilico pueden incluir esteres, ácidos grasos, alcoholes, poliol.es, hidrocarburos, siliconas, ceras, triglicérido, mezclas poliméricas (geles) de entre los principales.
Otros objetos, características y beneficios de la invención son claramente aparentes de la siguiente descripción explicativa referente a varios ejemplos que se dan tan solo gomo medio ilustrativo y consecuentemente de ninguna forma limitar el alcance mas vasto de la invención de alguna manera.
En los ejemplos que no se indican unidades se expresa en porcentaje en peso a menos que se indique alguna otra unidad, En el caso de extractos el porcentaje se expresa en peso seco del extracto.
En los ejemplos 8,9 y 15 se implican preparados que contienen a productos de los lípidos fijos, reales ó residuales de los sapotes que se incluyen por su contenido en glicósidos y en derivados de geninas y de sapogeninas desempeñándose como productos residuales de expresión ó extracción y como componentes lipidíeos, al igual se incluyen fracciones o porciones totales reales de los lípidos por el efecto sinérgico que dan a las sapogeninas y geninas, todos d,e los Calocarpum, Chrysαphyllum ó Lúcuma en la renovación y desarrollo de la piel y en la estimulación del crecimiento del pelo que son también motivos de esta y de otra invención por el mismo autor por lo que se requiere de consultar la solicitud de patente relacionada (ref. 68) . Ejemplo 1 Preparación de extracto concentrado de glicάsidos del Calocarpuiti,
Chrysophyllum o Lúcuma.
150 g. de simientes secas que han sido pulverizadas y desengrasado a cabalidad con un disolvente apolar, son maceradas en 2 1. de etanol ia mezcla sé refluja por 2 hrs., la solución se filtra y se recupera. El residuo se vuelve a extraer dos veces con 1 1. de etartol, se filtran y se juntan los tres filtrados y se concentran en un evaporador rotativo a un volumen de 250 mi. Este se constituye como un. extracto crudo rico en glicósidos. El extracto crudo rico en glicósidos concentrado se puede purificar de la siguiente manera. El extracto de glicósidos se mezcla con 100 mi. de éter etílico. El material insoluhle al éter se recupera por sedimentación, decantación, filtración y se disuelve en 500 mi. de agua y la solución es extraída con n-bütanol saturado en agua, por duplicado. Las fases butanάlícas se combinan y concentran, evaporan al vacío. El residuo se mezcla en 200 mi. de éter y el residuo se recupera por filtración.
Ejemplo 2 Preparación de una mezcla de glicósidos, de cotiledones de Calocarpum.,
Chrysophyllum o Lúcuma. Se toman 1 kg. de cotiledones frescos pulverizados desengrasados de
Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma y se maceran en una mezcla de 2 1. de metanol/agua al 50 %, hirviendo en un baño María por H hora. No se recupera la suspensión y el residuo se sujeta al anterior tratamiento de extracción por 1 veces mas y las suspensiones así obtenidas se separa par filtración en caliente. La suspensión se concentra al mínimo volumen aproximadamente 2 Its. El procedimiento de purificación es como el descrito para el ejemplo 1, siendo la extracción con 1 It. de n-butanol y se continua con el procedimiento de aislamiento.
Ejemplo 3 Preparación de glicósidos de cotiledones de Calocarpum, Chrysophyllum o
Lúcuma.
El procedimiento es como descrito para el ejemplo 2. Se usa florisil® (50 g) , la cual se suspende en 100 mi. de, agua y la mezcla se coloca en una columna de vidrio con una llave de paso para elución. La resina se regenera con 100 mi. de ácido clorhídrico diluido 1:3 hasta que el eluido mantiene pH ácido. Luego la resina se enjuaga con metanol y después a pH neutro con 500 mi. de agua destilada.
Se disuelven 4.7 g. de la mezcla de glicósidos obtenida en el ejemplo 2, en una mezcla constituida de 30 ral. de agua y 10 mi, de etanol y luego se pasa la solución a través de la columna con la resina. Se eluyen 300 ral, con agua en 6 fracciones de 50 mi. La fracción 2 contiene una mancha principal en cromatografía de placa fina, placa prerecubierta (Merck-60F254) , revelador de ácido sulfúrico^naftoresorcinol. Esta fracción ge concentra por rota evaporación al vació y se extrae con 20 mi- n-butanol, el extracto butanólico, al igual,- se concentra aj vació y se restituye con. 5 «ti. de metanol para después tratar de cristalizar. Se obtiene 0.710 g. de un polvo cristalino que responde a las pruebas de glicósidos y para ácidos carboxílicos (ref. 14,56).
La fracción 3 obtenida de la columna se monitαrea de forma similar a la anterior, se concentra, extrae y se le practican las mismas técnicas de concentración que para la fracción 2» El concentrado restituido de metanol, al igual se le practican técnicas de cristalización con lo cual se obtienen 0.581 g. de un glicósido que responde a las pruebas para amidas (ref. 14,56)»
La fracción 4 y 5 obtenidas de la Golumna se monitorean por la misma técnica de cromatografía de capa delgada, encontrándose un compuesto de menor polaridad. Esta fracción se recupera por las mismas técnicas de concentración-extracción, que para las fracciones anteriores sola que es restituida con una mezcla de 5 mi, de agua-acetonitrilo (9:1) y se le practican técnicas de cristalización. Se obtiene 0.752 g. de un glicósido en forma de placas cristalinas que responde a las pruebas de nitrilos (ref. 14,46,56} .
Ejemplo 4 Preparación de glicósidos de hojas y brotes del Calocarpum, Chrygophyllum o
Lúcuma.
El procedimiento es como se describe para el ejemplo 1, excepto que se utiliza hojas y brotes de Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma.
Ejemplo 5 Preparación de geninas y sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o
Lúcuma utilizando enzimas semipurificadas de Revea sp, Se toman 750 g de hojas nuevas (inmaduras) de .Hevea las cuales se trituran a un polvo fino en seco congeladas en acetona a -30 0C, después se colocan en una solución tampón de Tris-HCl 50 inM a pH 7.0 después de lo cual se homogenigan en un mezclador mecánico de aspas por 10 min. y se exprime a través de una malla de 6 capas de tela de gasa. El filtrado se centrífuga a 8,000 x g por 90 min. el liquido sobrenadante resultante se fracciona utilizando gradientes de concentración de (MHi)2SO4, el precipitado de 30 a 80 % de saturación se recolecta por centrifugación a los mismos parámetros anteriores, se resuspende en el mínimo volumen de la solución tampóπ anterior y se dializa contra la misma solución.
El procedimiento de hidrólisis de los glicósidos de los- sapotes se lleva acabo como para el ejemplo 2 excepto que se hace a temperatura ambiente con agua desionizada al cual se le agrega la solución tampón anterior mencionada con la mezcla de proteínas solubles incluyendo a las glucosidasas de ífevea semipurificadas,
La actividad de las glucosidasas de Hevea hacia los glicósidos relacionados afines al cianoglicósido de la familia Sapotácea se- determina al inicio de la etapa (basal) , intermediamente y después del periodo de incubación que es de aproximadamente de 20 a 30 min. una ves que la degradación de glucósidos y la formación de glucosa ha cesado con. la concomitante liberación de las agluconas ha terminado. Eátas reacciones se estiman mediante la determinación sobre alícuotas de la mezcla dε reacción de glucosa, utilizado el "kit" Merck GOD-POD (para mayor información ver el inserto) pudiendo utilizar una curva de calibración de glucosa ó valorar cuando no exista cambio en la densidad óptica de la serie de alícuotas de reacción, tiempo que se considera como fin de la reacción, utilizando la solución tampón anteriormente mencionada mas la mezcla de proteínas de Hevea como blanco. La mezcla anterior se somete a separación mediante el punto de ebullición, para recuperar las geninas y sapogeniηas en las primeras fracciones. Se recuperan 500 mi. Las geninas se separan y se recuperan en un embudo de separación a 5 °C como fracción oleosa de la solución acuosa. Las mezclas de sapogeninas se recuperan de la fracción acuosa por extracción con 300 mi. de éter por tres veces, se juntan los extractos y se concentran a sequedad. Con el fin de purificar las sapogeninas, se puede cristalizar utilizando alguna técnica apropiada.
Ejemplo 6 Preparación de geninas y sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o
Lúcuma utilizando enzimas semipurificadas de Prunus vulgaris. Se utiliza 600 semillas de Prunus vulgaris de la misma variedad las cuales son removidas del hueso y la simiente es esterilizada con una disolución de hipoclorito de sodio al 0,5 % (p/v) , secadas con aire filtrado. Son almacenadas a 4 0C, en su homogenización, en la extracción y en la semipurificación.
Se homogenizan en un mortero las simientes cortadas por la mitad con un bisturí en una disolución tampón de Tris-HCl 0.1 M a pfí 6.0 con 4 g. de PVP mas 6 g. de cuentas de vidrio. El homσgenizado se filtra a través de 6 capas de tela de gasa y el filtrado se centrifuga por 90 rain, a 8,000 x g. El sobrenadante es eliminado de las cuentas y de la fase lipidica. El sobrenadante intermedio se decanta y se recentrifuga a los mismos parámetros y se dializa contra 2 Its. de una disolución tampón al 0.Q1 M de Tris-RCl a pH de 6.0.
El procedimiento de hidrólisis de los glicósidos de los sapotes se lleva acabo como para el ejemplo 2 excepto que se hace a temperatura ambiente con agua desionizada al cual se- le agrega la solución tampón anterior mencionada con la mezcla de proteínas solubles incluyendo a las glucosidasas de Prunus vulgaris semipurificadas.
La actividad de las β-glucosidasas sobre los glicósidos relacionados al cianoglicósido mas la recuperación de las geninas y sapαgeninas de la familia sapotácea se lleva acabo igual que para el ejemplo 5. Se utiliza un patrón de amigdalina usando la fracción proteica extraída como medio de monitoreo de la actividad enzimático a lo largo del proceso de aislamiento y de reacción inicio, intermedio y final.
La amigdalín hidxolasa, la prunasín hidrolasa, la mandelonitril liasa mas algunos grupos isoenzimáticos o algunas formas enzimáticas múltiples que catalizan la degradación de la amigdalina a cianuro de hidrógeno y benzaldehido son extraídas, semipurificadas y recuperadas como un sistema complejo enzimático en un conjunto proteico de propiedades químicas y pesos moleculares similares mediante centrifugaciones a un pH determinado del homogenizad hecho y extraído a, 4 0C de semientes de durazno, las cuales dan como producto resultante a tres compuestos principales derivados de los sustratos exógenos presentes de la familia sapotácea Calocarpum {Chrysophyllumr ó Lúcuma) .
Ejemplo 7
Preparación de geninas y sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma utilizando fermentos vegetales exógenos, extragenéricos en un medio acídico amortiguado.
El procedimiento de extracción, recuperación y aislamiento de los zimógenos es como descrito para el ejemplo 6 con la utilización de un homogeneizado de 450 g. de semilla preferentemente frescas de Citrus vulgBris en un medio de citrato ácido al 5 %. El procedimiento de hidrólisis es como se describe para el ejemplo 7,, excepto que se agrega el extracto y se homogeniza a temperatura ambiente con agua y se mantiene a temperatura entre 40-50 °C con agitación por 15 minutos más. La recuperación de las geπinas- y sapogeninas es como para el ejemplo 5.
Ejemplo 8
Demostración de la actividad de emulsiπas de diferente sistemas enzimáticσs exógenos, extragenéricos sobre los glicósidos de simientes de los Calocarpum,
Chrysophyllum o Lúcuma tratados de diferente manera. En este ejemplo se demuestra la actividad fermentativa de diferentes fuentes de emulsinas sobre pulverizado de simientes del Calocarpum,. Chrysophyllum o Lúcuma en estado fresco, seco, en forma de harina desengrasada, (ó producto residual de extracción lipídica [ref. 68], desengrasado mediante extracción con disolventes no polares o de polaridad intermedia) y del chicharrón de expresión (ó producto residual de expresión lipidica [ref. 68] ) y el empleo de diferentes sistemas enzimáticos alternos exógenos, externos, extragenéricos, como el de los procedimientos utilizados en los ejemplos 6 y 7 de esta solicitud y sin usar sistemas ensimáticos externos.
Se hacen los procedimientos pero utilizando 1 kg. de pulverizado de simientes del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma en forma de chicharrón de expresión (ó producto residual de expresión lipidica) y en forma de harina desengrasadas con disolventes (ó producto residual de extracción lipidica, desengrasado mediante extracción con disolventes no polares o de polaridad intermedia) , estas dos formas como se obtienen en el ejemplo 1 y 2 respectivamente de la solicitud relacionada de patente por el mismo autor (ref. 68), sobre de la expresión de los lipidos y extracción de los aceites de los sapotes y de la utilización de los residuos de estos proceso para obtener glicósidos y sus derivados geninicos y sapogeninicos, y la utilización de simientes en bruto trituradas en estado fresco y en estado seco; siguientemente se les montan los procedimientos del ejemplos 6 y el del ejemplo 7 de esta solicitud. Se repite el procedimiento anterior pero sin incorporarle los fermentos vegetales externos y después de un tiempo de 15 a 20 minutos se separa como para el ejemplo 5. Se cuantifica mediante el rendimiento de sapogeninas y de geninas. Los 8 procedimientos anteriores con el uso de sistemas alternos como los utilizados en los ejemplos 6 y 7 se compara contra los 4 procedimiento que utilizan tan solo el sustrato de las simientes, en estado fresco, en estado seco, como residuo de extracción lipídica (ó en forma de harina de simiente desengrasada) y como residuo de la expresión lipídica (ó en forma de chicharrón de expresión) pero sin la utilización de sistemas catalíticos biológico alterno vegetal externos diferentes a los procedentes del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma. Los resultados se resumen en la tabla siguiente.
Tabla de resultados1 de obtenciones de geniaas y sapogenitias por- feHaeatos vegetales exógenos extragenerico, expresadas ea proporción, para 1 Kg. de materia -* vegetaL Las marcas indican (-) menor cantidad y (+)mayo£ cantidad relativas.
Sin agregado Con agregado Coir agregado
Zimogénico. Zimogéráco, Zímogénico, como del comσ del ejemplo 6. ejemplo 7.
Simientes Sapotáceas Genia.-Sapogen. GeoBL-Sapogen. Gβnin,-Sapogen.
Frescas. _ +++ +++ -H-+- +++
Secas. _ -H- -H- -H- -H-
Harina desengrasada. — -H- +++- ++ +-H-
Chicharrón de expresión. +++- ++ +++ ++
1 Para las geninas se les practica extracción liquidorliquido y se cusntifican por volumen (ver ejemplo 5 de esta solicitud). Los resultados para las sapogeninas se obtienen por técnicas semicuantitatϊvas para la mezcla soluble acuoso que se separa de las geninas,. se toma una alícuota del extracto y se usa un exceso de clorhidrato de fenilhidrazϊna disueíta en acetato de sodio acuoso (ref. 14, procedimiento 12.9, If) y se compara contra el patrón preparado de forma similar utilizando una muestra de agua.
Del análisis de los resultados se nota que el procedimiento que obtuvo menos resultado en el rendimiento de sapogeninas y geninas, atribuible al menor poder catalítico biológico, fue el procedimiento que utiliza las simientes desengrasadas sin el empleo de Sistemas catalíticos alternos (como los agregados zimogénico descritos en el ejemplo 6 y del ejemplo 7 de esta solicitud) . Esta situación de menor rendimiento resulta por el uso de disolventes orgánicos {principalmente disolventes no polares o de polarizas media que extraen las grasas y diferentes constituyentes) que aparte desnaturalizan la actividad de los catalizadores (ref. 56) propios del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma y no se obtiene rendimiento en sapogeninas y geninas al igual que para el chicharrón de expresión; iguales resultados que en el ensayo anterior se obtuvo para el rendimiento del chicharrón de expresión a estas condiciones que obtuvo nula utilidad, atribuible al empleo de calor, 80-110 0C) que también desnaturalizan a las enzimas propias de los Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma, ya de por si con escasa actividad enzimático a diferencia del pulverizado de las simientes en estado fresco que fue el que mas obtuvo a estas condiciones seguido por las simientes en estado seco que obtuvieron pocas geπinas y no obtuvieron sapαgeninas.
Se contrasta la aplicación del substrato en forma de harina desengrasado. con disolvente que no obtuvo nada de rendimiento en geninas y en sapogeninas, en el procedimiento sin la utilización de un sistema catalítico enzimático alterno externo, contra el uso de sistemas enziíaáticps alternas externo que dan altos rendimientos en sapogeninas y en geninas cuando se le restituyen de otra fuente vegetal apropiada y peculiar. Al igual que para los otros estados de las simientes empleadas que utilizan sistemas enzimáticos de origen vegetal alternos, exógenos, externos, de diferente especie que dan altos rendimientos con los sistemas de los ejemplos 6 y 7 de esta solicitud.
De los resultados de los procedimientos practicados a la materia vegetal de los Calocarpum,- Chrysαphyllum y Lúcuma en los estados fresco, seco, de harina desengrasado y en forma de chicharrón de expresión; con el empleo de sistemas catalítico alternante, de los cuales se obtiene mas rendimiento mediante el empleo del sustrato de simientes en estado fresco (domo aplicadas en el procedimiento del ejemplo 6 o del ejemplo 7 de esta solicitud), atribuible al mayor poder catalítico de las simientes a estas condiciones del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma en estado fresco y al reforzamiento de la transformación mediante el empleo de un segundo sistema catalizador biológica alterno de otro vegetal apropiado que acelera la transformación hacia las sapogeninas y geninas en un tiempo determinado.
Cuando no hay un sistema catalítico alterno hay menor transformación hacia las sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma por no haber transformación enzimática a las sapogeninas, Se concluye que los géneros Calocarpum, Chrysophyllum y Lúcuma no contienen estos sistemas catalíticos activos (ó no funcionales) , Se reconoce que estas transformaciones son llevadas artificialmente acabo por enzimas inespecíficas (sistemas de glucosidasas peculiares) hacia las sapogeninas, al igual que el otro producto genínico esperado y que se inclinan a estos dos grupos de substancias, unas acidas y amidicas solubles, las sapogeninas; otras oleosas, aromáticas y aldehídicas, las geninas.
Los resultados de los rendimientos en geninas y en sapogeninas de los otros procedimientos en estado seco o en estado desengrasado y como chicharrón de expresión lipídica no son de menoscabar con el empleo de un sistema alternante catalítico de otra especie como los empleados en el ejemplo 6 ó en el ejemplo 7. Se advierte que con el empleo de 1 kg. de simientes secas desengrasadas implican casi el doble del sustrato sin desengrasar (contenido de lípidos fijos cerca del 50 %) el cual también resulta un método de conveniencia para la obtención de sapogeninas y- geninas mediante el empleo de sistema catalítico biológico alterno externo de otra especie vegetal peculiares como los descritos en el ejemplo 6 y ejemplo 7.
Ejemplo 9 Prueba para la actividad percutanea de las sapogeninas del Calαcarpuϊtt,-
Chrysophyllum o Lúcuma.
Se verifica la actividad percutanea de la crema de tratamiento para combatir senescencias de la piel del ejemplo 11 de la solicitud de patente relacionadas por el mismo autor (ref. 68), que utiliza en la demostración de ese ejemplo a los usos de las sapogeninas (y geninas) de los sapotes en preparaciones cosméticas y farmacéuticas dermatológicas por su actividad sinérgica con los lípidos fijos totales ó con alguna fracción de estos, también de los sapotes que son motivo de la referida solicitud de patente relacionada {ref. 68), por medio de la eficiencia de la actividad de esta crema para la acción de absorción percutanea como emulsión aceite en agua que en conjunto contiene las sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma, presunto agente responsable principal de la actividad percutanea y como adyuvantes de esta acción a los lípidos fijos (ref. 68, ejemplo 11) y a las geninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma en una preparación cosmética. Todos los ingredientes del Calocarpum, Chrysophylluπi y Lúcuma son de acuerdo a las dos invenciones de los sapotes relacionadas por el mismo autor. La crema también contiene emulsionantes aniónicos y agentes humectantes que también coadyuvan en la actividad mencionada.
A la crema se le quiere comprobar su eficiencia como vehículo de absorción percutaneo para la hidroquinona al 0.8 %, contra la misma crema pero sin mezcla de sapogeninas. La hidroquinona sirve para devolver la pigmentación a personas afectadas de "paño" y manchas en la piel de senescencias, que requiere ser absorbido por las capas del estrato corneo y pasar a la capa profunda de la epidermis para ejercer sus efectos. El tratamiento se da no solo por el problema de las manchas sino porque también se requieren tratamientos de cuidado en la piel concomitante.
La prueba se lleva acabo en 4 mujeres y 1 hombre de 28 a 49 años de edad, los cuales tienen el problema en la piel de la cara debido a manchas de hiperpigmentación o comúnmente llamadas manchas de paño.
Los productos son aplicados subsecuentemente todos los días por 28 días, en la región afectada, aplicando de H a 1 cucharada para té rasa que comprende de 0.3 a 0.5 gramo de la crema en prueba.
Una dama y el caballero en prueba reciben el producto # 1, consistiendo del vehículo de absorción mas la hidroquinona, preparación del ejemplo 11 de la solicitud de patente relacionada anteriormente mencionada (ref. 68), que contiene la mezcla de sapαgeninas y los lípidos fijos totales como usados en la presente y en la solicitud de patente relacionada (ref. 68) ,por su acción sinérgica que comprende cualquier forma de mezclas de estas, de las que pueden abarcar fases lipídicas laminares hidratadas de acuerdo a las dos invención de los sapotes. Dos d& las damas restantes recibieron el producto # 2, consistiendo en la misma crema pero removida del presunto ingrediente responsable principal de la actividad percutanea, las sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma. La cuarta dama recibió tan solo el excipiente percutaneo pero sin el agente de pigmentación,- la hidroquinona.
Los resultados obtenidos al final del periodo de prueba fueran del desvanecimiento de las manchas mas profundamente y más rápidamente para los individuos recibiendo el producto de prueba # 1, que es la crema para tratamiento de la senescencia cutánea tal como la del ejemplo 11 de la solicitud relacionada de patente {ref. 68) y con las sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma, invención de esta solicitud, ios individuos que recibieron el producto # 2, en la prueba, no resultan con tanta eficiencia en el desvanecimiento de la mancha, como con el producto # 1. Sé comparo los dos grupos de prueba contra la dama usada como control, que recibió el excipiente percutaneo como la crema del ejemplo 11 de la solicitud relacionada mencionada anteriormente (ref. 68), pero removida de la hidroquinona como control de efectividad.
Ejemplo 10 Demostración de la actividad bacreriostática de las sapogeninas del
Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma.
La prueba se basa en el poder bacteriostático de las sapogeninas a concentraciones de 5.0 g/1 se realiza la prueba invitro con 100 microlítros en una prueba de difusión con discos que contienen las substancia en prueba y se aplica en una placa de agar la cual se siembra con una suspensión estandarizada de un microorganismos. Después de la incubación por una noche, se mide los diámetros de las zonas de inhibición o aclaramiento alrededor de los discos.
Los resultados de las pruebas invitro de difusión en agar sobre la susceptibilidad aunado a otros experimentos demuestran una alta eficiencia de la prueba como materia extractiva vegetal de sapogeninas de hidrolizado enzimático, como obtenidas del ejemplo 7, para ejercer efectos bactericidas. Se obtuvieron zonas de inhibición para la mezcla de sapogeninas de- 2.Q mm de¬ diámetro subsecuentes a la incubación. Después del periodo de incubación en un medio de cultivo con cultivos mixtos axilares la zona de inhibición fue de diámetro de 1.5 mm, que resultan con las mismas condiciones. En un medio de cultivo liquido demostró que tan solo 500 mg del extracto seco en crudo de hi.droliz.ado enzimático de sapogeninas del Calocarpuiri, del ejemplo 6, en 1 kg, de sustrato fueron suficientes para ejercer poder bactericida para todos los gérmenes inoculados en el sustrato, previamente sembraos. Los mismos resultados se obtuvieron con tan solo 300 mg de la mezcla de sapogeninas acidas aisladas y purificadas del ejemplo 6, que fueron agregadas a un medio similar.
Ejemplo 11 Prueba para las geninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma como agente rubefaciente con actividad en la renovación de la epidermis.
Se desea evaluar a las geninas del Calocarpum, Chrysαpñyllum o Lúcuma como obtenidas del ejemplo 6 de acuerdo a esta invención, como agente rubefacientes capilar para lo cual se utilizan seis caballeros afectados de alopecia prematura a los cueles se les pide sujetares a la prueba por una semanas, que consiste en aplicarse de 0.5 a 1 mi. de los productos diluidos en prueba en la zona afectada del cuero cabelludo con la piel limpia. Los dos caballero del grupo # 1, recibieron la mezcla de geninas del Calocarpum, (Chrysophyllum o Lúcuma) en una preparación consistiendo en el producto como obtenido del ejemplo 6r al 0.5 % en un excipiente. La composición del excipiente por 100 g. es; agua 20 g., propilenglicol 25 g., aceite de girasol 54.5 g. Los dos caballeros del grupo # 2, recibieron la misma composición del excipiente anterior y resorcinol al 0.5 %, Los dos caballeros del grupo # 3, recibió solo el excipiente antes mencionado. Se registra el siguiente cuestionario y se hacen observaciones pertinentes de la prueba. Edad; sexo; desde cuando presentan la alopecia; duración d&l tratamiento; 1,- Fue irritante el tratamiento: a) No fue irritante, b) lever c) moderado, d) alto, e) severo. 2,- Tipo de irritación: a) hiperemia (calor) , b) inflamación, c) vesicación (produce ampollas) 3.- Queratolítico (producción de descamación) ; a) Sin efecto, b) leve, c) moderada, d) extenso. 4,- Olor: agradable, b) sin comentario, c) desagradable. 5.- Sensación al aplicar los productos en prueba: a) Placentera, b) sin comentarios, c) desagradable.
6.- Comentarios de la prueba- Efectos primarios que percibe el individuo tratado: a) Benéficos, b) coadyuvantesr c) sin efecto,, d) perjudiciales. 7.- Tipo de efectos y observaciones.
El estudio dio como resultado que las geninas del Calocarpumf (Chrysophyllum o Itucumα) son. efectivas como rubefacientes para la región del cuero cabelludo de la cabeza produciendo hiperemia, más tenue que el resorcinolr que es un reconocido rubefacíente capilar que también produce queratólisis moderado, contra el efecto de las geninas del Calocarpum,
(Chrysophyllum o Lúcuma) que no lo producen. Las geninas aparte presentan un agradable aroma según la encuesta.
Se concluye que las geninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma tienen efectos en la renovación epidermal por abrir el poro cutáneo producido por la hiperemia, permitiendo una mayor circulación a través de la epidermis de ingredientes activos.
Ejemplo 12 Prueba para la actividad de las sapogeninas de Calocarpum, Chrysophyllum o
Lúcuma sobre el crecimiento de las pestañas. La prueba se basa en un estudio en la actividad del productos de acuerdo a la invención en un periodo de tiempo de prueba determinado en el crecimiento de las pestañas, de mujeres de 18 a 40 años de edad, las cuales manifiestan crecimiento disminuido, a las que se les pide aplicar el producto sobre la pestañas del ojo derecho con el párpado bien cerrado del ojo a ensayar, con un atomizador pequeño y utilizar la pestañas del ojo izquierdo como control sin recibir nada de producto.
Los productos en prueba se aplican subsecuentemente durante 42 días de duración de la prueba, sin aplicación el séptimo día de las siete semanas de aplicación, a una dosis que es de 500 a 100 μl. El estudio se efectúa en 8 individuos dividida en dos grupos de cuatro individuos cada uno. El primer grupo recibió preparaciones conteniendo 0.5 % del producto del ejemplo 6, mezcla de sapogeninas de simientes del Calocarpum, {Chrysophyllum o Lúcuma) en un excipiente. La composición del excipiente por 100 g es: 100.0 g de agua inyectable. El segundo grupo recibió solo el excipiente.
Los resultados del estudio se obtienen como valores promedio al final del tiempo de la prueba.
Los valores analizados representan el desarrollo de las pestañas tratadas contra el de las no tratadas al periodo final del tratamiento usando la pestaña del ojo izquierdo de los individuos tratados como primer control interno se compara el primer grupo contra el segundo grupo de control que recibió tan solo el excipiente en el ojo derecho y sin tratamiento en el ojo izquierdo.
Se observa de los datos que el numero de pestañas en e-stado de desarrollo se incrementa mucho más rápido en el grupo recibiendo la mezcla de sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma de acuerdo a la invención que en el grupo recibiendo el excipiente, contra las pestaña del ojo izquierdo de primer control interno de todos los individuos en la prueba. Se puede hacer notar que dado el ciclo de crecimiento de las pestañas, es posible continuar con la fase de crecimiento de las pestañas mediante la aplicación por tratamientos mas prolongados.
Se deduce de las observaciones anteriores que la duración de la fase de crecimiento de las pestañas se puede prolongar significativamente y estimular las pestañas en su crecimiento y en su renovación continuamente con las mezclas de sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma en dosis como la de este ejemplo sin ejercer efectos secundarios pronunciados.
Ejemplo 13 GeI para la regulación de la epidermis grasosa.
0.5 de las sapogeninas del Calocarpum, {Chrysophyllum o Lúcuma) tal y como obtenida en el ejemplo 7, se disuelven en 50.0 de agua después la solución se gela por la adición de 49.5 de carbomero 940 al 3 %.
El gel se aplica diariamente por un periodo de 3 meses de tratamiento estabilizantes en la piel.
Ejemplo 14
GeI para el crecimiento de las pestañas. Se prepara las siguientes composiciones: Composición Ai Sapogeninas del Calocarpum, (Chrysophyllum o Lúcuma) tal y como obtenidas del ejemplo 6. 0.4
Propilenglicol 5.0
Agua destilada 82.6
Composición B GeI de carbopol 936 al 1.25 % 12.0
Todos los componentes de la composición A, primero son mezclados en él agua, y el carbopol 936 anhidro es introducido para dar un gel, que se puede utilizar una o dos veces al día paz~a promover el crecimiento de las pestañas. Ejemplo 15
Rímel de tratamiento para la promoción del crecimiento de las pestañas.
Cera de carnauba 5.0
Cera de abejas 15,0 Miristato de isopropilo 10.0
Ácido esteárico 10.0
Monoestearato de glicerilo 10.0
Trietanolamina 5.0
Agua destilada 27.5 Alignato de sodio 2.0
Negro oxido de hierro 5.0
Ejemplo 16 Shampoo para combatir la caída del cabello con geninas y sapogeninas del
Calocarpum, ChxysQpfryllum o Lúcuma. Sapogeninas del Calocarpura, (Chrysophyllum o Lúcuma) tal como obtenidas en el ejemplo 6. 0.8
Laurilsulfato de sodio 35.0
Laurilsulfato de monoetanolamina 20.0
Dietanolamina de coco 2.1 Ácido citrico 1.3
Cloruro de sodio 0.3
Geninas del Calocarpum, (Chrysophyllum o Lúcuma) tal como obtenidas del ejemplo 6. 0,5
Agua 40.0 En esta preparación las sapogeninas se emplean como agentes estimuladores de desarrollo capilares y como conservador antimicrobiano de la preparación cosmética.
Ejemplo 17
GeI liposomal antienvejecimienfco epidermal. El gel utilizado es tal como preparado de acuerdo al ejemplo 14, excepto que el agua destilada en la preparación del gel, se reemplaza con una solución acuosa conteniendo 0.4 % de sapogeninas del Calocarpum, (Chrysophyllum o Lúcuma) tal como obtenida del ejemplo 7.
El gel se aplica en la piel, renovando y reformando donde hay que reducir el deterioro de la piel. Ejemplo 18
GeI estilizador para combatir la pei-dida del cabello-
Sapogeninas del Calocarpum, Chrysophyllum o Lúcuma, tal y como obtenidas en el ejemplo 6. 0.5 GeI al 1.5 % de carbomero 940 50.0
Colágeno 0.2
Hidrolizado de cpieratina 0.1
Agua destilada 49.2
Ejemplo 19 Loción, para el combate de la pérdida, del cabello en particular del cuero cabelludo.
Se prepara la siguiente composición: Sapogeninas del Calocarpum, (Chrysophylluπi o Lúcuma) tal y como obtenidas en el ejemplo 7» 1.0 Geninas de Calocarpum, {Chrysophyliurα o Lúcuma) tal y como obtenidas en el ejemplo 7. 0.1
Pantenol 0.2
Hidrolizado de queratina Q.3
Prσpilenglicαl 15.0 Alcohol al 30 % q.v.p. 100.
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Claims

REIVINDICACIONES
1,- Proceso para la obtención de extractos de geniπas y de sapogeninas derivados de simientes de la familia Sapotácea, caracterizado porque se emplean enzimas β—glucosidasas exógenas, externas de origen vegetal ó microbiano, de otros géneros y los extractos están libres de tóxicos.
2.- Proceso de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque consiste de: a) Mezclar un derivado de simiente de la familia Sapαtácea, agua y el preparado enzimático de de β-glucosidasas externas a un pH de 3.5 a 7 a una temperatura de 15 a 60 °C, durante 5 a 30 minutos, b) Separar por ebullición la mezcla de reacción obtenida del paso a) , a una temperatura de 90 a 110 0C durante 15 a 180 minutos o hasta obtener la totalidad de la fracción deseada, caracterizada por su olor frutal, c) Someter a la fracción de la mezcla liquida obtenida del paso antexior a extracción liquido:liquido y separar la fase oleosa superior correspondiendo a el componente de geninas o al benzaldehido y separar a la fase acuosa inferior correspondiendo a el componente de sapogeninas. d) Someter a la fase acuosa del componente de sapogen±nas a cuando menos una extracción liquido-liquido con éter etilico 1:1, o mediante otro disolvente inmiscible de polaridad similar, separar la fracción orgánica y someterla a evaporación para retirarle el disolvente y obtener el extracto seco de sapogeninas; se puede optar por cristalización fraccionada de los componente ácido y amidico como al ácido mandélico ó a su amida del extracto de sapogeninas mediante la utilización de aguaΛ metanol o etanol, mezclas de metanol/agua, mezcla etanol/agua y de. mezcla de etanol/metanol/agua utilizando alguna técnica adecuada. Opcionaliαente en lugar de separar por ebullición, la mezcla obtenida del paso a) , se puede somete a filtración en papel o en gasa con algodón y se recupera el liquido filtrante y se sigue con los pasos c) y d) . Otra opción de tratamiento de la mezcla obtenida del paso a) , es someterla a cuando menos una extracción a la mezcla líquido acuosa utilizando éter etílico en proporción de 1:1 o 1:2 volúmenes de mezcla:éter, separar la fase etérea y retirarle el éter por evaporación a 37 °C y seguir con los pasos subsecuentes y así obtener un extracto entero de sapogeninas y geninas.
3.- Proceso de conformidad con la reivindicación 1 y 2 caracterizada porque los derivados de las simientes de la familia Sapotácea proviene del grupo que congiste de: a) Simientes frescas ó secas, molidas, b) Derivado sólido residual de simientes obtenido por expresión lipídica. c) Derivado sólido de harina desengrasada de simientes ó de derivado sólido residual de la extracción lipídica. d) Glicósidos cianogénico y relacionados estructuralmente afines a este, derivados de simientes de la familia Sapotácea.
4.- Proceso de conformidad con la reivindicación 3, en donde el derivado sólido residual de simientes obtenido por expresión lipidica se caracteriza porque consiste en someter a las simientes a una presión de 8 a 17 libras/ft2 de 80 a 110 0C, obtener el producto oleoso liquido que contiene lípidos fijos totales y recuperar el producto sólido residual.
5.- Proceso de conformidad con la reivindicación 3, en donde el derivado sólido residual de la expresión y ó el derivado sólido de harina desengrasada ó el residuo sólido de la extracción lipidica de simientes se caracteriza porque consiste de: a) Someter las simientes a molienda, b) Exprimir como para la reivindicación anterior y ó extraer con un disolvente seleccionado de cloruro de metileno, tetracloruro de carbono, cloroformo ó dicloroetileno ó por algún otro disolvente no polar, durante aproximadamente 24 horas, c) Filtrar, recuperar el producto liquido oleoso que contiene lipidos fijos por evaporación al vació del disolvente, d) Recuperar el producto sólido residual de la filtración anterior, que es la harina desengrasada mojada con disolventes, secarla y triturarla si es necesario.
6.- Proceso para la producción del glicósido cianogénico y glicósidos relacionados estructuralmente afines a este, derivados de simientes de la familia Sapotácea para usos y la obtención de geninas y sapogeninas que consiste en utilizar a la harina desengrasada ó al residuo sólido que se obtiene del proceso descrito en la reivindicación 5 a los procedimientos siguientes-, a) Se somete a extracción con solventes polares como agua, metanol o etanol, mezclas de meranol/agua, mezcla etanol/agua y se concentra los extracto por evaporación al vacio, b) El extracto primario de glicósidos del paso anterior se trata con disolventes de polaridad intermedia como éter etílico, éter isopropilico, acetona, etilmetilcehona o acetato de etilo y el material insoluble o el precipitado formado se recupera por sedimentación, decantación y ó filtración, constituyéndose como un extracto semipurificado de mezcla de glicósidos estructuralmente relacionados afines a el cianoglicósido. c) El extracto semipurificado de mezcla de glicósidos relacionados anteriores, el material insoluble, el precipitado y o la fase acosa del paso anterior se redisuelve en la mínima cantidad de agua y es extraído con alcohol de escasa solubilidad en agua tal como n-butanol o iso- butanol que haya sido saturado con agua y el extracto alcohólico se separa de la fase acuosa y se concentra por evaporación al vació, d) El concentrado del extracto del paso anterior se puede optar por purificarse y aislar los componentes glicosidicos relacionados aun. mas usando alguna técnica cromatográfica adecuada, e) El concentrado del extracto del paso c) , también se puede optar por obtenerla como el concentrado anterior de glicosidos relacionados en. estado purificado para lo cual se disuelve en 1.0 partes aproximadamente de su peso en agua y se díaliza contra agua pura. El dializado anterior se liofiliza o puede ser extraído con n-butanol y concentrado por la misma técnica anterior, f) Se puede optar por cristalizar fraccionadamente a los glicósidos relacionados afines al cianoglicosído por técnicas apropiadas con agua, metanol, etanol, agregados de acetonitrilo o mezclas de estos disolventes omitiendo o seguido de los pasos d),e¡ ó f} ; ó obtenerlo como extracto total purificado.
7.- Extracto de geninas ó de benzaldehido derivado de simientes de la familia Sapotácea obtenido por el proceso de la reivindicación 2.
8.- Extracto de sapogeninas ó de ácido itiandélico y de su amida derivados de simientes de la familia Sapotácea obtenido por el proceso de la reivindicación 2.
9.- Extracto de glicósidαs relacionados al cianoglicósido, y de los compuestos afines a la propia lucumina, el ácido lucurαinico y la lucuminamida derivados de simientes de la familia Sapotácea obtenido por el proceso de la reivindicación 3,4,5 y 6.
10.- Producto sólido residual de extracción lipídica seco o como harina desengrasada de simientes de la familia Sapotácea obtenida por el proceso de la reivindicación 5.
11,- Producto sólido residual de expresión lipidica desengrasado como para las reivindicaciones 4 y 5, ó con grasa remanente sin la extracción de la reivindicación 5, como chicharrón sólido residual de la expresión lipídica ó como harina desengrasadas por los dos tratamientos anteriores de simientes de la familia Sapotácea obtenida por el proceso de la reivindicación 5.
12.- Usos del extracto de glicósidos relacionados al cianoglicósido y de los compuestos afines a la propia lucumina, el ácido lucumínico y la lucuminaraida de simientes de la familia Sapotácea, obtenidos por el proceso de la reivindicación 6 para uso alternos y en la utilización en la preparación de composiciones cosméticas y farmacéuticas de aplicación tópica y la obtención de geninas y sapogeninas.
13.- Usos del extracto genínico y del compuesto de la reivindicación 7 para la preparación de composiciones cosméticas y farmacéuticas de aplicación tópica para actuar sobre la piel como rubefaciente, promotor de la apertura de los poros y como promotores de la penetración epitelial.
14.- Usos del extracto sapogenínico y de los compuestos de la reivindicación 8 para la preparación de cosméticos y composiciones farmacéuticas de aplicación tópica para actuar sobre la piel como astringente y como promotores de la penetración epitelial.
15.- Usos, del extracto sapogen±n±co y de los compuestos de la reivindicación 8 para la preparación de cosméticas y composiciones farmacéuticas de aplicación tópica para actuar como exfoliante y con efectos positivos en la renovación y estimulación de la piel.
16.- Usos del extracto sapogeninico y de los compuestos de la reivindicación 8 para la preparación de cosméticas y composiciones farmacéuticas de aplicación tópica para actuar como estimulante capilar.
17.- Usos del extracto sapogenínico y de los compuesto de la reivindicación 8 para la preparación de cosméticas y composiciones farmacéuticas con activad bacteriostática y fungistática mas actividades para conservar Kticrobiologicamente preparaciones de uso tópico y sobre la piel.
18.- Procesos de conformidad con las reivindicación 1,2,3,4,5 y 6 en donde las simientes son seleccionadas de la familia Sapσtaceae, preferentemente de las especies Calαcarpum sapσta? C. mammosυmf C. viride.
Lúcuma domingensis, L. salicifolia,. L. obovatar L. hypoglauca, Chrysophyllum mexicanumr y Ch, caimito,
19.- Extractos de conformidad con la reivindicación 7,8 y 9 en donde las simientes son seleccionadas de la familia Sapotaceae, preferentemente de las especies Calσcarpum sapota, C. mammαsum, C. vitide, Lúcuma domingensis, L. salicifolia, L. obovatar L. hypoglauca, Chrysophyllum mexícanum, y Ch, caimito.
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