CN101619330A - 一种粘红酵母菌用于生产一种泛醌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法，属于微生物领域。本发明包括以下步骤：平板培养，无菌水洗涤后于－80℃保存，活化后菌种放入发酵培养基培养。本发明提供了一种发酵生产辅酶Q10的新的及高潜力的候选菌。一种粘红酵母菌用于生产一种泛醌的方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法，属于微生物领域。
背景技术
辅酶Q10(Ubiquinone-10，Coenzyme Q10，CoQ10)又称泛醌。其分子式为C59H90O4，相对分子量863.4，是一种脂溶性醌类化合物，化学名称为2，3-二甲氧基-5-甲-6-癸异戊烯基苯醌。辅酶Q10在室温下为黄色或橙黄色结晶性粉末，熔点49℃，无臭无味。由于具有长的类戊二烯侧链，因此易溶于氯仿、苯、四氯化碳，溶于丙酮、石油醚及其乙醚，不溶于水和甲醇。见光易分解成红色物质，对温度和湿度较稳定。结构式如下所示：
辅酶Q10结构式
辅酶Q10是人体血液中必需的物质，在人体细胞内与线粒体内膜结合，是呼吸链中重要的递氢体。它是细胞自身产生的天然抗氧化剂，与网状内皮组织系统有关，能使机体免疫力提高。正因为它具有多方面的生理活性，因此，是一种良好的生化药物。辅酶Q10具有抗氧化、消除自由基、提高机体免疫力、抗衰老等功能，广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗。常用作辅助药物，食品添加剂或用于化妆品领域。另外，因为辅酶Q10可以激活细胞呼吸，在细胞能量转换中具有重要作用，常作为人体或运动员等的体能增强剂。作为一种代谢激活剂，辅酶Q10能激活细胞呼吸、加速产生三磷酸腺苷(ATP)。它是细胞自身产生的天然抗氧剂，能抑制线粒体的过氧化，保护生物膜结构完整性，对免疫有特殊的增强作用。可用于医治急慢性病毒性肝炎。辅酶Q10的另一生物化学作用能改善男性不育症状，不育男性通过服用辅酶Q10，能显著增强与男性生育作用有关的物质性能；因为辅酶Q10与人体代谢碳水化合物密切相关，因此在治疗糖尿病方面可能有效，辅酶Q10的缺乏将影响人体胰腺中胰岛素的合成，从而影响血糖浓度和糖代谢，对于糖尿病病人来说会削弱人体中辅酶Q10的含量。
目前，辅酶Q10的生产方法共有4种：动植物组织提取法、化学合成法、植物细胞培养法、微生物发酵法。
(1)从动植物中提取辅酶Q10的研究方面。主要是从烟叶、大豆或动物内脏中进行分离和提取；辅酶Q10从植物中提取方法主要有皂化法，溶剂萃取法，吸附层析法等，提取法制备工艺较简单，但提取成本高，且受原料及季节性等限制，不适合于现代化生产。除采用天然的植物外，从植物组织中获得辅酶Q10还可以采用植物细胞培养法。细胞悬浮培养物中辅酶Q10最高含量达189μg/g(以干细胞计)。
(2)辅酶Q10的有机合成。辅酶Q10的化学合成需要3个关键步骤：首先是合成母核化合物(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-苯酮或氢酮)，然后一般采用茄尼醇为出发原料，合成出具有立体选择性的多戊烯醇或其卤化物，最后进行两者的缩合。无论是侧链引入还是侧链延长方式，都需要对母核化合物进行基团保护，还要考虑产物的构型问题，合成过程复杂，对催化剂要求高，反应条件苛刻，总体产率不高。影响产业化进程。
(3)微生物发酵法生产辅酶Q10。该法不受原料、季节等条件限制，可实现规模化生产。应用微生物发酵法生产，其发酵液中辅酶Q10含量达到770mg/L。微生物发酵法合成的辅酶Q10成本低、无光学异构体，生物学活性高，且该方法具有不受原料限制，分离过程相对简单，不存在手性问题等优点，成为最有潜力的辅酶Q10生产方法。
日本首先实现发酵法辅酶Q10的工业化生产，是世界上最早也是最主要的辅酶Q10生产国，全球90％的辅酶Q10均产自日本，产量最高的是日清制粉及协和发酵株式会社两家公司产量达到了1g/L发酵液。由于没有技术公开和文献的报道，我们并不知道产自日本的辅酶Q10是通过什么方法生产，但是据已公开的文献和专利我们可以知道在工业上，辅酶Q10是半合成生产的，或者通过发酵微生物及随后从生物体中提取产生的。半合成的辅酶Q10的生物活性与微生物发酵生产的相比要弱很多，因此，选择好的发酵菌种仍是当前研究的热点。目前常用来生产辅酶Q10的菌有：有细菌属的假单胞菌、黄杆菌、硫杆菌、土壤杆菌、Alcaligene sp.、Geotricus sp.和Cryptococcus sp.，以及红极毛杆菌、脱氮极毛杆菌、氢极毛杆菌、脱氮副球菌、粪产碱杆菌、甲烷微环菌、光合细菌、Erythrobacter och、Protomonas和Oligomonas methanolica等，霉菌中的红曲霉、黑曲霉、烟曲霉和Sprotrichumcellalophilium等，酵母菌中的异常尚德酒香酵母、假丝酵母、隐球酵母、Crytococcuslaurentii、Sporobolomyces salmonicolor、Torulopsis aeria。
微生物体内合成辅酶Q10已经成为生产热点，其在生物体内合成的原理在2001年和2002年分别由Meganathan R.和Makoto Wamukai发表文章综述中详细阐明。
通过阅读文献和各种专利，不难发现现用菌种生产辅酶Q10的产量仍相对较低并且不尽如人意，虽然人们已经尝试通过分子生物学方法来增加辅酶Q10的产量，但是工业生产中通常选用天然的菌株以生产所期望的化合物。因此，在科学界仍需要筛选用于生产辅酶Q10的高效菌株。
粘红酵母是一种常用于生产β-胡萝卜素的菌株，有很高的生物量和甲羟戊酸通量，可以在很多便宜易得的培养基上生长，是很有潜力的工业菌种。目前，粘红酵母产β-胡萝卜素的研究已经基本成熟，在酵母代谢途径中，β-胡萝卜素和辅酶Q10有同样的前体物。除了β-胡萝卜素，粘红酵母还可以合成很多来自于甲羟戊酸途径的产物，如麦角固醇，番茄红素，虾青素等。因此，辅酶Q10代谢途径的碳通量很充足，可以预测辅酶Q10可以达到很高的含量。而利用该菌生产辅酶Q10未见报道。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法。
本发明用于生产辅酶Q10的微生物是一种粘红酵母菌Rhodotorula glutinis，该酵母菌是已知现有菌种，各大菌种保藏库中均有保存。本发明使用的菌种购自中科院微生物所，编号为As2.102。
粘红酵母具有如下的性质：
形态生理生化特征：
形态特征：呈圆形、卵形或长形。多边芽殖，有明显的红色或黄色色素。很多种因由荚膜而形成粘质状菌落。
生理生化特征：产β-胡萝卜素，人造肉和L苯丙氨酸等。
本发明提供了一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将粘红酵母菌在琼脂平板上于25-35℃培养24-48小时，平板培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，2.5％琼脂，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；
2)将培养后的平板用无菌水洗涤后，加入无菌甘油于-80℃保存；
3)取-80℃保存的平板菌种一个单菌落接种到活化培养基中，活化培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；放至摇床内培养，培养温度25-30℃，摇床转速为100-200r/min，活化24-48h；
4)将活化后的菌种，放入锥形瓶中培养或者发酵罐中的培养；
在锥形瓶中培养是以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，摇床20-35℃培养，摇床转速为100-200r/min，培养至少60小时；
在发酵罐中的培养以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，pH在4.5-7.5之间，摇床20-35℃培养，搅拌速度在100-300rpm之间，培养时间至少50小时；
所述的发酵培养基成分质量百分比为葡萄糖3％，蛋白胨1％，酵母粉1％，(NH4)2SO40.5％，KH2PO40.1％，NaCl 0.1％，MgSO40.5％，NaAc 0.2％，CaCl20.01％，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；
5)从菌体中提取辅酶Q10。
从菌体中提取辅酶Q10的方法是已知的，包括酸热法破壁，丙酮萃取等。任选一种方法进行进一步的纯化，例如通过沉淀、结晶、柱层析、薄层层析等进行纯化。鉴别和量化的分析方法包括HPLC、质谱分析法、核磁共振质谱法等。技术人员可以自己选择正确的方法。
本发明的再一方面涉及一种培养本发明微生物的方法，该方法是以在发酵期间将具有刺激辅酶Q10的生产潜力的添加剂与所述微生物接触的方式进行的，所述添加剂选自由以下所组成的组：辅酶Q10的前体物对羟基苯甲酸酯(PHB)(100-200mg/L)、异戊烯醇(100-200mg/L)、酪氨酸(100-300mg/L)、苯丙氨酸(100-300mg/L)、分支酸(100-200mg/L)、色氨酸(100-300mg/L)，茄尼醇(50-100mg/L)，西红柿提取物(30-100ml/L)，胡萝卜汁(30-100ml/L)，豆油(5-10ml/L)，及刺激菌体生产辅酶Q10的酶的激活剂等，如：酮康唑(5-20mg/L)，两性霉素B(5-20mg/L)，柠檬酸(100-200mg/L)，丙二酸钠(100-200mg/L)，硝酸钠(100-200mg/L)，青霉素(1-2mg/L)，氯霉素(1-2mg/L)等。以上数值均为添加剂和发酵培养基的质量体积比。已经证实使用这样的添加剂，辅酶Q10的产量可以加倍(见表1)。在本发明中，优选使用酮康唑，茄尼醇和酪氨酸。这些药品或试剂是可以商购的。
从上述可以看出，本发明提供了一种发酵生产辅酶Q10的新的及高潜力的候选菌。
本发明的术语微生物是指包括了完整生物体形式的完整细胞以及破碎形式的细胞。
具体实施方式
实施例1：
筛选辅酶Q10高产菌株
所筛选菌种购于中科院微生物所，所内编号为As2,102。对于筛选辅酶Q10高产菌种，我们采用的方法是先将粘红酵母菌株活化，活化36h后在已倒入活化培养基的平皿上分别划线，挑选出其中长势最好的单菌落，放入富集培养基的液体中，28℃培养36h，接着转移富集培养基固体培养基中培养，由于此培养基中的葡萄糖含量相对较高，所以菌落形状饱满，颜色也比较红。然后挑一株长势最好的单菌落接入苛刻培养基中，再接入缺乏营养物质的固体培养基中培养，由于缺乏性培养基中氮源碳源等营养物质含量较少，因此会致使一部分生长状况不好的菌种死亡，剩下的存活菌种即为筛选出的性能较好的菌落。最后将其放至发酵培养基中扩大培养。提取菌体中辅酶Q10，选出产量最高的菌株，扩大培养，并保存甘油管。
富集培养基：葡萄糖60g，蔗糖20g，蛋白胨10g，酵母粉10g，(NH4)2SO45g，KH2PO41g，NaCl 1g，MgSO45g，NaAc 2g，CaCl20.1g，NaNO32g，定容到1L，自然pH值。
固体富集培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
苛刻培养基：葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母粉5g，定容到1L，自然pH值。
固体苛刻培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
活化培养基：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母粉10g，定容到1L，自然pH值。
固体活化培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
发酵培养基：葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母粉10g，(NH4)2SO45g，KH2PO41g，NaCl 1g，MgSO45g，NaAc 2g，CaCl20.1g，定容到1L，自然pH值。
培养筛选出的高产菌株
1)将筛选出的粘红酵母菌在琼脂平板上于28℃培养30小时，平板培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，酵母粉0.5％，2.5％琼脂，其余为水，自然pH值；
2)将培养后的平板用无菌水洗涤后，加入无菌甘油于-80℃保存；
3)取-80℃保存的平板菌种一个单菌落接种到活化培养基中，活化培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，其余为水，自然pH值；放至摇床内培养，培养温度28℃，摇床转速为200r/min，活化30h；
4)将活化后的菌种，放入锥形瓶中培养
在锥形瓶中培养是以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，摇床28℃培养，摇床转速为200r/min，培养至少60小时；
所述的发酵培养基成分质量百分比为葡萄糖3％，蛋白胨1％，酵母粉1％，(NH4)2SO40.5％，KH2PO40.1％，NaCl 0.1％，MgSO40.5％，NaAc 0.2％，CaCl20.01％，其余为水，自然pH值。
对分离的菌株生产辅酶Q10的检测
提取方法熟知本领域的技术人员均熟悉提取分析方法：离心，破壁，丙酮萃取，分析。
辅酶Q10产量的提高
为增加粘红菌株中辅酶Q10的产量，在培养期间将不同的添加剂加入基本培养基中，所述添加剂即酪氨酸，茄尼醇，青霉素，酮康唑，丙二酸钠(表1)。基本的辅酶Q10的产量为9.83mg/L。补加不同的添加剂以增加辅酶Q10的产量，其中效果最好的是产量达到19.87mg/L，产量增加了102.1％。这些结果清晰地表明粘红菌株特别适用于生产辅酶Q10。也显示了这些添加物在生产辅酶Q10的过程中的巨大潜力。
表1：添加剂在粘红菌株生产辅酶Q10中的作用。
| 添加物 | CoQ10产量mg/L | 干重g/L(DCW) | CoQ10mg/g(DCW) |
| 空白 | 9.83 | 14.13 | 0.69 |
| 酪氨酸 | 18.55 | 16.14 | 1.15 |
| 丙二酸钠 | 12.63 | 14.78 | 0.85 |
| 茄尼醇 | 15.57 | 14.25 | 1.09 |
| 酮康唑 | 19.87 | 12.92 | 1.54 |
| 青霉素 | 13.24 | 16.46 | 0.80 |
所有数据均为三次独立实验的平均值。
实施例2：
筛选辅酶Q10高产菌株
所筛选菌种购于中科院微生物所，所内编号为As2,102，对于筛选辅酶Q10高产菌种，我们采用的方法是先将粘红酵母菌株活化，活化40h后在已倒入活化培养基的平皿上分别划线，挑选出其中长势最好的单菌落，放入富集培养基的液体中，32℃培养40h，接着转移富集培养基固体培养基中培养，由于此培养基中的葡萄糖含量相对较高，所以菌落形状饱满，颜色也比较红。然后挑一株长势最好的单菌落接入苛刻培养基中，再接入缺乏营养物质的固体培养基中培养，由于缺乏性培养基中氮源碳源等营养物质含量较少，因此会致使一部分生长状况不好的菌种死亡，剩下的存活菌种即为筛选出的性能较好的菌落。最后将其放至发酵培养基中扩大培养。提取菌体中辅酶Q10，选出产量最高的菌株，扩大培养，并保存甘油管。
富集培养基：葡萄糖70g，蔗糖15g，蛋白胨15g，酵母粉15g，(NH4)2SO43g，K2HPO41g，NaCl 1g，MgSO43g，NaAc 1g，CaCl20.5g，NaNO32g，定容到1L，pH＝7。
固体富集培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
苛刻培养基：葡萄糖5g，蛋白胨3g，酵母粉3g，定容到1L，pH＝7。
固体苛刻培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
活化培养基：葡萄糖25g，蛋白胨15g，酵母粉10g，定容到1L，pH＝7。
固体活化培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
发酵培养基：葡萄糖25g，蛋白胨20g，酵母粉5g，(NH4)2SO42g，KH2PO40.5g，NaCl1g，MgSO42g，NaAc 1g，CaCl20.1g，定容到1L，pH＝7。
培养筛选出的高产菌株
1)将筛选出的粘红酵母菌在琼脂平板上于32℃培养40小时，平板培养基成分质量百分比为葡萄糖2.5％，蛋白胨1.5％，酵母粉1％，2.5％琼脂，其余为水，pH值为7；
2)将培养后的平板用无菌水洗涤后，加入无菌甘油于-80℃保存；
3)取-80℃保存的平板菌种一个单菌落接种到活化培养基中，活化培养基成分质量百分比为葡萄糖2.5％，蛋白胨1.5％，酵母粉1％，其余为水，pH值为7；放至摇床内培养，培养温度32℃，摇床转速为150r/min，活化40h；
4)将活化后的菌种，放入锥形瓶中培养
在锥形瓶中培养是以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，摇床32℃培养，摇床转速为150r/min，培养至少60小时；
所述的发酵培养基成分质量百分比为葡萄糖2.5％，蛋白胨2％，酵母粉0.5％，(NH4)2SO40.2％，KH2PO40.05％，NaCl 0.1％，MgSO40.2％，NaAc 0.1％，CaCl20.01％，其余为水，pH值为7；
对分离的菌株生产辅酶Q10的检测
提取方法熟知本领域的技术人员均熟悉提取分析方法：离心，破壁，丙酮萃取，分析。
辅酶Q10产量的提高
为增加粘红菌株中辅酶Q10的产量，在培养期间将不同的添加剂加入基本培养基中，所述添加剂即苯丙氨酸，西红柿提取物，豆油，两性霉素B(表2)。基本的辅酶Q10的产量为9.83mg/L。补加不同的添加剂以增加辅酶Q10的产量，其中效果最好的是产量达到17.95mg/L，产量增加了82.6％。这些结果清晰地表明粘红菌株特别适用于生产辅酶Q10。也显示了这些添加物在生产辅酶Q10的过程中的巨大潜力。
表2：添加剂在粘红菌株生产辅酶Q10中的作用。
| 添加物 | CoQ10产量mg/L | 干重g/L(DCW) | CoQ10mg/g(DCW) |
| 空白 | 9.83 | 14.13 | 0.69 |
| 苯丙氨酸 | 17.95 | 15.34 | 1.17 |
| 西红柿提取物 | 16.87 | 15.25 | 1.11 |
| 豆油 | 16.33 | 14.93 | 1.09 |
| 两性霉素B | 12.14 | 12.92 | 0.94 |
所有数据均为三次独立实验的平均值。
实施例3：
筛选辅酶Q10高产菌株
所筛选菌种购于中科院微生物所，所内编号为As2,102，对于筛选辅酶Q10高产菌种，我们采用的方法是先将粘红酵母菌株活化，活化32h后在已倒入活化培养基的平皿上分别划线，挑选出其中长势最好的单菌落，放入富集培养基的液体中，28℃培养32h，接着转移富集培养基固体培养基中培养，由于此培养基中的葡萄糖含量相对较高，所以菌落形状饱满，颜色也比较红。然后挑一株长势最好的单菌落接入苛刻培养基中，再接入缺乏营养物质的固体培养基中培养，由于缺乏性培养基中氮源碳源等营养物质含量较少，因此会致使一部分生长状况不好的菌种死亡，剩下的存活菌种即为筛选出的性能较好的菌落。最后将其放至发酵培养基中扩大培养。提取菌体中辅酶Q10，选出产量最高的菌株，扩大培养，并保存甘油管。
富集培养基：葡萄糖65g，蔗糖20g，蛋白胨13g，酵母粉13g，(NH4)2SO42g，K2HPO41.5g，NaCl 1g，MgSO42.5g，NaAc 1.5g，CaCl21g，NaNO32g，定容到1L，pH＝6.5。
固体富集培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
苛刻培养基：葡萄糖2g，蛋白胨1g，酵母粉1g，定容到1L，pH＝6.5。
固体苛刻培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
活化培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母粉15g，定容到1L，pH＝6.5。
固体活化培养基：在液体条件下加入25g琼脂。
发酵培养基：葡萄糖25g，蛋白胨20g，酵母粉5g，(NH4)2SO42g，KH2PO40.5g，NaCl1g，MgSO42g，NaAc 1g，CaCl20.1g，定容到1L，pH＝6.5。
培养筛选出的高产菌株
1)将筛选出的粘红酵母菌在琼脂平板上于28℃培养32小时，平板培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉1.5％，2.5％琼脂，其余为水，pH值为6.5；
2)将培养后的平板用无菌水洗涤后，加入无菌甘油于-80℃保存；
3)取-80℃保存的平板菌种一个单菌落接种到活化培养基中，活化培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉1.5％，其余为水，pH值为6.5；放至摇床内培养，培养温度28℃，摇床转速为150r/min，活化32h；
4)将活化后的菌种，放入发酵罐中培养
在发酵罐中的培养以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，pH值为6.5，28℃培养，搅拌速度在150rpm之间，培养时间为48小时；
所述的发酵培养基成分质量百分比为葡萄糖2.5％，蛋白胨2％，酵母粉0.5％，(NH4)2SO40.2％，KH2PO40.05％，NaCl 0.1％，MgSO40.2％，NaAc 0.1％，CaCl20.01％，其余为水，pH值为6.5；
对分离的菌株生产辅酶Q10的检测
提取方法熟知本领域的技术人员均熟悉提取分析方法：离心，破壁，丙酮萃取，分析。
辅酶Q10产量的提高
为增加粘红菌株中辅酶Q10的产量，在培养期间将不同的添加剂加入基本培养基中，所述添加剂即胡萝卜汁，酮康唑，西红柿提取物，柠檬酸(表2)。基本的辅酶Q10的产量为19.26mg/L。补加不同的添加剂以增加辅酶Q10的产量，其中效果最好的是产量达到34.65mg/L，产量增加了90.3％。这些结果清晰地表明粘红菌株特别适用于生产辅酶Q10。也显示了这些添加物在生产辅酶Q10的过程中的巨大潜力。
表3：添加剂在粘红菌株生产辅酶Q10中的作用。
| 添加物 | CoQ10产量mg/L | 干重g/L(DCW) | CoQ10mg/g(DCW) |
| 空白 | 19.26 | 26.53 | 0.73 |
| 酮康唑 | 36.65 | 24.15 | 1.52 |
| 胡萝卜汁 | 33.57 | 30.79 | 1.09 |
| 西红柿提取物 | 32.18 | 29.63 | 1.09 |
| 柠檬酸 | 28.14 | 28.72 | 0.98 |
所有数据均为三次独立实验的平均值。
Claims (2)
1.一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将粘红酵母菌在琼脂平板上于25-35℃培养24-48小时，平板培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，2.5％琼脂，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；
2)将培养后的平板用无菌水洗涤后，加入无菌甘油于-80℃保存；
3)取-80℃保存的平板菌种的一个单菌落接种到活化培养基中，活化培养基成分质量百分比为葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；放至摇床内培养，培养温度25-30℃，摇床转速为100-200r/min，活化24-48h；
4)将活化后的菌种，放入锥形瓶中培养或者发酵罐中的培养；
在锥形瓶中培养是以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，摇床20-35℃培养，摇床转速为100-200r/min，培养至少60小时；
在发酵罐中的培养以10％的体积接种量接入已灭菌的发酵培养基中，pH在4.5-7.5之间，摇床20-35℃培养，搅拌速度在100-300rpm之间，培养时间至少50小时；
所述的发酵培养基成分质量百分比为葡萄糖3％，蛋白胨1％，酵母粉1％，(NH4)2SO4 0.5％，KH2PO4 0.1％，NaCl 0.1％，MgSO4 0.5％，NaAc 0.2％，CaCl20.01％，其余为水，pH值在4.5-7.5之间；
5)从菌体中提取辅酶Q10。
2.根据权利要求1所述的一种粘红酵母菌用于生产辅酶Q10的方法，其特征在于，还在发酵培养基中加入以下添加剂：对羟基苯甲酸酯、异戊烯醇、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、茄尼醇、西红柿提取物、胡萝卜汁、豆油、酮康唑、两性霉素B、柠檬酸、丙二酸钠、硝酸钠、青霉素或氯霉素。
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| CN102533799A (zh) * | 2010-12-24 | 2012-07-04 | 上海市农业科学院 | 一种源于阴沟肠杆菌的泛醌辅酶q10合成酶基因及其制备方法 |
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