CN101613365B - 基于季戊四醇的复合脂质及其制备方法 - Google Patents

基于季戊四醇的复合脂质及其制备方法 Download PDF

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CN101613365B CN2009100725382A CN200910072538A CN101613365B CN 101613365 B CN101613365 B CN 101613365B CN 2009100725382 A CN2009100725382 A CN 2009100725382A CN 200910072538 A CN200910072538 A CN 200910072538A CN 101613365 B CN101613365 B CN 101613365B
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基于季戊四醇的复合脂质及其制备方法，它属于生物医用材料领域。本发明解决了现有脂质制备的脂质体存在稳定性差的缺点。本发明所述复合脂质的结构式为：

Description

基于季戊四醇的复合脂质及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，具体涉及以季戊四醇为骨架、含有脂肪链和硅氧烷基的复合脂质及其制备方法。
背景技术
脂质体是磷脂依靠疏水缔合作用在水中自发形成的一种分子有序组合体，为多层囊泡结构，每层均为类脂双分子膜，层间和脂质体内核为水相，双分子膜为油相。脂质体自20世纪70年代开始作为药物载体应用以来，由于具有制备简单，无毒性，无免疫原性反应，在体内的可降解性，并且易于实现靶向性，提高和延长药物疗效，缓和毒性，避免耐药性和改变给药途径等方面的优点而备受关注；它同时具有亲水性和疏水性，对所载药物具有广泛的适用性，既可以包裹水溶性药物又可以包裹脂溶性药物。水溶性药包裹在脂质体的水层结构中，而脂溶性药物或两亲性药物则被包裹在脂质脂基部分或脂质双分子层中。1988年，第一个脂质体药物在美国进入临床试验，至今脂质体作为一种药物载体已经实现了商业化。在近五年内，美国FDA已批准了五种脂质体类药物，还有很多项目处于临床试验阶段。
现有脂质体大多采用磷脂质制备，这类脂质体与血浆蛋白、调理素、抗体等各种物质的静电，疏水性和范德瓦耳斯相互作用导致了脂质体的去稳定化，导致脂质体通常在达到它们的目标之前从循环系统中被快速清除。另外，在生产包埋某些药物的脂质体方面业已产生了困难，这是因为所述药物与脂质体的磷脂的相互作用。例如，蒽环霉素表现出对磷脂双层的表面活性剂或去污剂样作用，导致泄漏并且产生脂质体不稳定性。因此，对内循环环境和/或它的内含物(如药物)不稳定的脂质体会在到达肿瘤位点之前过早泄漏抗肿瘤剂，从而产生严重的毒副作用。由于体内稳定性和贮存稳定性欠佳等缺点，限制了脂质体制剂的临床应用和工业化生产，尽管研究了几十年但开发的脂质体药物制剂仍然很少。因此，稳定性差是脂质体商品化过程中亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有脂质制备的脂质体存在稳定性差的缺点；而提供了基于季戊四醇的复合脂质及其制备方法。本发明的脂质可通过水解和缩合得到表面具有硅酸盐网络结构的相应脂质体(称之为瓷质体)；制得的脂质体具有稳定性高、生物相容性好、低毒甚至无毒，且药物不易渗漏优点。
本发明中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00021
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y或CONH(CH2)3Si(X)3，以上所述m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基；制备方法是按下述步骤进行的：一、将烷基胺和溴代烷加热回流5天制得二、再将
Figure G2009100725382D00023
与丁二酸酐或戊二酸酐亲核反应得到
Figure G2009100725382D00024
然后
Figure G2009100725382D00025
与过量4～6倍的季戊四醇酯化反应得到
Figure G2009100725382D00026
三、再将
Figure G2009100725382D00027
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R3＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00028
先与6-溴己酰氯进行酯化反应，然后与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷亲核反应得到R3＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质，或者将与丁二酸酐(或戊二酸酐)亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R3＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质。
本发明的基于季戊四醇的复合脂质另一种结构式为：
Figure G2009100725382D00032
其中R4表示C6～C18烷基，R5表示CONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3或CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基；其制备方法是按下述步骤进行的：一、在碱性条件下，将季戊四醇与3倍量的溴代烷亲核取代反应6小时得到
Figure G2009100725382D00033
二、再将与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R5＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00035
先与6-溴己酰氯进行酯化反应，然后与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷亲核反应得到R5＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00036
与丁(或戊)二酸酐亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R5＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质。
本发明脂质制备的脂质体大小均匀，且表面具有硅酸盐网络结构，提高了其稳定性；向脂质体溶液中加入表面活性剂Triton X-100(TX-100)测试脂质体粒径的变化，并与磷脂质(DSPC)制成的传统脂质体在同等条件下粒径变化的比较来考察瓷质体的稳定性，当加入至30倍量的TX-100水溶液后，本发明脂质制备的脂质体(瓷质体)的大小基本保持不变，而DSPC制成的传统脂质体在加入5倍量的TX-100水溶液后，其粒径明显减小，说明其囊泡结构已被破坏，从而证明本发明脂质制备的脂质体具有比传统脂质体更好的稳定性。
本发明脂质制备的脂质体的包封率在95.4％～98.7％，并且表面具有硅酸盐网络结构，因此药物不易泄漏。本发明的方法的工艺简单，促进临床应用和工业化生产；本发明脂质制备的表面具有硅酸盐网络结构的脂质体比现有脂质体更稳定，在作为各类药物、染料、量子点、磁性纳米粒子和DNA等的载体方面将具有较好的应用前景。
附图说明
图1是具体实施方式十制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的透射电镜图；图2是具体实施方式十制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的粒径分布图；图3为具体实施方式十八制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的透射电镜图；图4为具体实施方式十八制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的粒径分布图；图5为具体实施方式十九制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的透射电镜图；图6为具体实施方式十九制备的脂质使用薄膜水化法所制备的瓷质体的粒径分布图；图7为瓷质体的红外光谱图，图7中1表示具体实施方式十脂质制备瓷质体的红外光谱，2表示具体实施方式十八脂质制备瓷质体的红外光谱，3表示具体实施方式十九脂质制备瓷质体的红外光谱。
具体实施方式
通过下述具体实施方式将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。
具体实施方式一：本实施方式的基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00051
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y或CONH(CH2)3Si(X)3，以上所述m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基。
本实施方式脂质制备的脂质体大小均匀，且表面具有硅酸盐网络结构，提高了其稳定性；向脂质体溶液中加入表面活性剂Triton X-100(TX-100)测试脂质体粒径的变化，并与DSPC制成的传统脂质体在同等条件下粒径变化的比较来考察瓷质体的稳定性，当加入至30倍量的TX-100水溶液后，本发明瓷质体的大小基本保持不变，而DSPC制成的传统脂质体在加入5倍量的TX-100水溶液后，其粒径明显减小，说明其囊泡结构已被破坏，从而证明本实施方式的瓷质体具有比传统脂质体更好的稳定性。本实施方式的脂质制备的脂质体的包封率在95.4％～98.7％。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的卤代基为Cl、Br或I。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：R1为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三不同的是：R2为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。其它与具体实施方式一、二或三相同。
具体实施方式五：具体实施方式一所述的基于季戊四醇的复合脂质的制备方法是按下述步骤进行的：一、将烷基胺和溴代烷加热回流5天制得二、再将与丁二酸酐或戊二酸酐亲核反应得到
Figure G2009100725382D00054
然后
Figure G2009100725382D00055
与过量4～6倍的季戊四醇酯化反应得到
Figure G2009100725382D00061
三、再将
Figure G2009100725382D00062
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R3＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00063
先与6-溴己酰氯进行酯化反应，然后与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷亲核反应得到R3＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00064
与丁二酸酐(或戊二酸酐)亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R3＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质；其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y或CONH(CH2)3Si(X)3，以上所述m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基。
具体实施方式六：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00065
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R1＝R2，R3表示CONH(CH2)3Si(X)3，m等于2或3，X是乙氧基或甲氧基，Y表示Cl、Br或I；其制备方法如下：一、在95℃条件下，将摩尔比为1∶2的烷基胺和溴代烷以碳酸钾为催化剂，在乙醇溶剂中加热回流5天制得
Figure G2009100725382D00071
二、再将
Figure G2009100725382D00072
与丁二酸酐或戊二酸酐加入四氢呋喃溶剂中，室温下搅拌两天得到
Figure G2009100725382D00073
(亲核反应)，
Figure G2009100725382D00074
与丁二酸酐或戊二酸酐的摩尔比为1∶1.2，然后
Figure G2009100725382D00075
与过量4～6倍的季戊四醇在二甲亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)中，以二环己基碳二亚胺(DCC)作缩合剂，以4-二甲氨基吡啶(DMAP)作催化剂在40℃下搅拌1天(酯化反应)得到
Figure G2009100725382D00076
三、在氯仿或二氯甲烷溶剂中，以二月桂酸二丁基锡作催化剂，
Figure G2009100725382D00077
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或者异氰酸丙基三甲氧基硅烷按1∶3的摩尔比在50℃条件下亲核反应2～3天得到R3为CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，制备路线如式I所示。
Figure G2009100725382D00078
(式I)
式I中的L表示可离去基团。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式六不同的是：R1与R2不同，在95℃条件下，
Figure G2009100725382D00081
与Z-R2按1∶2的摩尔比，以碳酸钾为催化剂，在乙醇溶剂中加热回流5天制得
Figure G2009100725382D00082
Z表示溴代基。其它步骤和参数与具体实施方式六相同。
具体实施方式八：本实施方式基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00083
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y；制备方法如下：在氯仿或二氯甲烷溶剂中，以有机碱(如三乙胺、吡啶或DMAP)作催化剂，先与6-溴己酰氯按1∶3.5的摩尔比进行酯化反应，再与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷按1∶4的摩尔比进行亲核反应得到R3＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质。
本实施方式所述的制备方法可按具体实施方式六或七的方法制备。
具体实施方式九：本实施方式基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00086
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3；制备方法如下：
Figure G2009100725382D00091
先与丁二酸酐(或戊二酸酐)按1∶6的摩尔比进行亲核反应后所得物质再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷按1∶4.5的摩尔比在DCC或EDC催化下室温搅拌24小时缩合反应脱水得到R3＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质。
本实施方式所述
Figure G2009100725382D00092
的制备方法可按具体实施方式六或七的方法制备。
具体实施方式十：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质C71H144N4O18Si3的制备方法是按下述方法制备的：在电磁搅拌下，向100毫升两颈圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00093
(0.24g，0.35mmol)，异氰酸丙基三乙氧基硅烷(0.26g，1.05mmol)和催化剂二月桂酸二丁基锡(0.069g，0.105mmol)，氮气保护下将上述混合物置于40℃油浴中加热48小时，减压除去反应溶剂，粗产物用硅胶柱层析方法分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质(无色油状物)，产率32％。
本实施方式制得复合脂质C71H144N4O18Si3：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：062(t，J＝8.1Hz，6H，SiCH2CH2CH2NH)，0.88(t，J＝6.6Hz，6H，NCH2CH2(CH2)13CH3)，1.18～1.62(m，89H，NCH2CH2(CH2)13CH3andCH3CH2OSi and SiCH2CH2CH2NH and NCH2CH2(CH2)13CH3)，2.60～2.75(m，4H，COCH2CH2CO)，3.13～3.16(m，10H，SiCH2CH2CH2NH andNCH2CH2(CH2)13CH3)，3.85～3.78(m，18H，CH3CH2OSi)，4.13～4.08(m，8H，COOCH2)，5.30(s，3H，NH).MS：理论值1426.18，实验值[M]+：1427.0；[M+Na]+：1448.8。
Figure G2009100725382D00102
，EtO表示乙氧基。
采用本实施方式脂质体(瓷质体)的制备：取2mg的基于季戊四醇的复合脂质放置于20mL的圆底烧瓶中，加入5mL氯仿溶解，然后减压缓慢旋蒸使其在烧瓶内壁形成薄膜，35℃真空干燥箱中干燥以完全除去氯仿；再往形成薄膜的烧瓶中加入不同pH的水溶液使溶液浓度为0.5mmol/L。用探头式超声仪超声5min得到有一定浑浊度的溶液，室温下放置12小时即可得到瓷质体的水溶液。用DSC仪器及TEM仪器分别检测其大小和形貌。具体透射电镜如附图1所示，粒径如图2及表1所示。
由图1可见本实施方式脂质制备的瓷质体粒径基本在150nm左右。由图2和表1可见其平均粒径为143nm，粒径分布较窄，多分散指数为0.237。
表1：
  次数   有效粒径(nm)   半宽数(nm)   多分散性   基线指数
  1   145.9   77.7   0.283   8.3
  2   141.1   72.9   0.267   4.5
  3   143.3   71.4   0.248   0.1
  4   146.0   73.0   0.250   1.4
  5   141.5   59.8   0.179   8.6
  6   140.5   67.30   0.229   5.5
  平均   143.0   70.3   0.243   4.7
  标准误差   1.0   2.5   0.015   1.4
  综合结果   143.0   69.7   0.237   5.6
具体实施方式十一：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00111
其中R4表示C6～C18烷基，R5表示CONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3或CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y，其中m等于2或3，X是可水解基团，可水解基团为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基。
本实施方式脂质制备的脂质体大小均匀，且表面具有硅酸盐网络结构，提高了其稳定性；向脂质体溶液中加入表面活性剂Triton X-100(TX-100)测试脂质体粒径的变化，并与DSPC制成的传统脂质体在同等条件下粒径变化的比较来考察瓷质体的稳定性，当加入至30倍量的TX-100水溶液后，本发明瓷质体的大小基本保持不变，而DSPC制成的传统脂质体在加入5倍量的TX-100水溶液后，其粒径明显减小，说明其囊泡结构已被破坏，从而证明本实施方式的瓷质体具有比传统脂质体更好的稳定性。本实施方式脂质制备的脂质体的包封率在95.4％～98.7％。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式十一不同的是：所述的卤代基为Cl、Br或I。其它与具体实施方式十一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式十一或十二不同的是：R4为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。其它与具体实施方式十一或十二相同。
具体实施方式十四：具体实施方式十一所述的基于季戊四醇的复合脂质的制备方法是按下述步骤进行的：一、在碱性条件下，将季戊四醇与3倍量的溴代烷亲核取代反应6小时得到
Figure G2009100725382D00112
，二、再将
Figure G2009100725382D00113
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R5＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure G2009100725382D00114
先与6-溴己酰氯进行酯化反应，然后与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷亲核反应得到R5＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质，或者将与丁二酸酐(或戊二酸酐)亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R5＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质；其中R4为C6～C18烷基，R5表示CONH(CH2)3Si(X)3、CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3或CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y，X是可水解基团，可水解基团为乙氧基或甲氧基，Y表示卤代基，m等于2或者3。
具体实施方式十五：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00122
其中R4表示C6～C18烷基，R5＝CONH(CH2)3Si(X)3，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y为Cl、Br或I；其制备方法如下：一、将季戊四醇与3倍量的溴代烷在碱性条件下亲核取代反应6小时得到
Figure G2009100725382D00123
二、在氯仿或二氯甲烷溶剂中，以二月桂酸二丁基锡作催化剂，
Figure G2009100725382D00124
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或者异氰酸丙基三甲氧基硅烷按1∶1的摩尔比在50℃条件下亲核反应2～3天得到R5为CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质制备路线如式II所示。
Figure G2009100725382D00125
(式II)
式II中的L表示可离去基团。
具体实施方式十六：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00131
其中R4表示C6～C18烷基，R5＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y为Cl、Br或I；制备方法如下：在氯仿或二氯甲烷溶剂中，以有机碱(如三乙胺、吡啶或DMAP)作催化剂，
Figure G2009100725382D00132
先与6-溴己酰氯按1∶1.5的摩尔比进行酯化反应，再与二甲胺气体的饱和四氢呋喃溶液亲核反应后再与溴丙基三乙氧基硅烷或溴丙基三甲氧基硅烷按1∶4的摩尔比进行亲核反应得到R5＝CO(CH2)5N(CH2)2(CH2)3Si(X)3Y的基于季戊四醇的复合脂质。
本实施方式所述
Figure G2009100725382D00133
的制备方法可按具体实施方式十五的方法制备。
具体实施方式十七：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure G2009100725382D00134
其中R4表示C6～C18烷基，R5＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，Y为Cl、Br或I；制备方法如下：
Figure G2009100725382D00135
先与丁二酸酐(或戊二酸酐)按1∶2的摩尔比进行亲核反应后所得物质再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷按1∶1.5的摩尔比在DCC或EDC催化下室温搅拌24小时缩合反应脱水得到R5＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质。
本实施方式所述
Figure G2009100725382D00141
的制备方法可按具体实施方式十五的方法制备。
具体实施方式十八：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质C63H129NO8Si的制备方法是按下述方法制备的：在电磁搅拌下，向100毫升两颈圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00142
(0.25g，0.31mmol)，用CH2Cl2(20mL)溶解，再依次往反应瓶中加入异氰酸丙基三乙氧基硅烷(0.073g，0.31mmol)和二月桂酸二丁基锡(0.039g，0.062mmol)，氮气保护下将上述混合物置于50℃油浴中加热48小时，减压除去反应溶剂，粗产物用硅胶柱层析方法分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质，产率81％.
本实施方式制得复合脂质C63H129NO8Si：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ：0.63(t，J＝8.2Hz，2H，SiCH2CH2CH2NH)，0.88(t，J＝6.6Hz，9H，CH3)，1.20～1.26(m，87H，SiOCH2CH3)，1.47～1.65(m，8H，SiCH2CH2CH2NH andOCH2CH2(CH2)13CH3)，3.16(t，J＝5.1Hz，2H，SiCH2CH2CH2NH)，3.15～3.19(m，12H，CH2OCH2)，3.83(q，J＝7.0Hz，6H，SiOCH2CH3)，4.10(s，2H，COOCH2CCH2O)，4.83(s，1H，NH).MS理论值：1056.7，实验值[M]+：1057.4.
本实施方式脂质制备瓷质体方法与采用具体实施方式十相同的制备，具体透射电镜如附图3所示，粒径如图4及表2所示。
由图3可见本实施方式脂质制备瓷质体的粒径基本在200nm左右。由图4和表2可见其平均粒径为196nm，粒径分布较窄，多分散指数为0.243。
表2
  次数   有效粒径(nm)   半宽数(nm)   多分散性   基线指数
  1   190.0   79.8   0.176   0.0
  2   195.9   95.8   0.239   2.5
  3   195.9   103.1   0.277   0.0
  4   194.1   80.1   0.170   9.9
  5   186.2   76.0   0.167   2.3
  6   202.2   106.5   0.277   3.6
  平均   194.0   90.2   0.218   3.1
  标准误差   2.3   5.4   0.022   1.5
  综合结果   195.9   96.6   0.243   3.4
具体实施方式十九：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质C66H133NO9Si的制备方法是按下述方法制备的：
步骤一、在电磁搅拌下，向50毫升圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00151
(0.17g，0.21mmol)和丁二酸酐(0.042g，0.42mmol)，用CH2Cl2(20mL)溶解，再往反应瓶中依次加入DMAP(0.028g，0.21mmol)和三乙胺(0.084g，0.84mmol)，将上述混合物置于30℃油浴中加热5天。减压浓缩反应液，所得粗产物用硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质中间体C57H112O7(白色固体)，产率70％。
本实施方式制得复合脂质中间体C57H112O7：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ：0.90(t，J＝6.6Hz，9H，CH3)，1.25～1.52(m，86H，OCH2CH2(CH2)13CH3andNCH2CH2(CH2)13CH3and COOCH2CCH2O)，2.85～2.89(m，4H，COCH2CH2CO)，3.33～3.37(m，12H，HOCH2CCH2O and OCH2CH2(CH2)13CH3)，4.15(s，1H，OH).MS理论值：909.49，实验值[M]+：910.1。
步骤二、在电磁搅拌下，向50毫升圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00161
(0.255g，0.28mmol)，用CH2Cl2(20mL)溶解，再往反应瓶中DCC(0.069g，0.336mmol)，室温搅拌15分钟后，再加入氨丙基三乙氧基硅烷(0.093g，0.42mmol)，室温下再搅拌1天。减压浓缩，所得粗产物用硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质(白色固体)，产率50％。
Figure G2009100725382D00162
本实施方式制得复合脂质C66H133NO9Si：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ：0.64(t，J＝8.2Hz，2H，SiCH2CH2CH2NH)，0.88(t，J＝6.7Hz，9H，CH3)，1.16～1.32(m，87H，OCH2CH2(CH2)13CH3and SiOCH2CH3)，1.43～1.68(m，8H，OCH2CH2(CH2)13CH3and SiCH2CH2CH2NH)，2.45(t，J＝7.1Hz，2H，COCH2CH2CO)，2.67(t，J＝7.1Hz，2H，COCH2CH2CO)，3.20～3.37(m，14H，SiCH2CH2CH2NH and COOCH2CCH2O and OCH2CH2(CH2)13CH3)，3.83(q，J＝7.0Hz，6H，SiOCH2CH3)，4.12(s，2H，COOCH2CCH2O).MS理论值：1112.8，实验值[M]+：1113.5。
本实施方式脂质制备瓷质体方法与采用具体实施方式十相同的制备，具体透射电镜如附图5所示，粒径如图6及表3所示。
由图5可见本实施方式脂质制备瓷质体的粒径基本在200nm左右。由图6和表3可见其平均粒径为216nm，粒径分布较窄，多分散指数为0.222。
表3
  次数   有效粒径(nm)   半宽数(nm)   多分散性   基线指数
  1   216.0   91.8   0181   5.3
  2   217.4   102.4   0.222   4.3
  3   214.3   112.1   0.274   0.1
  4   217.7   103.1   0.224   4.0
  5   206.2   99.1   0.231   2.8
  6   219.1   105.3   0.231   0.0
  平均   215.1   101.8   0.227   2.8
  标准误差   1.9   2.7   0.012   0.9
  综合结果   215.9   101.8   0.222   2.2
具体实施方式二十：本实施方式考察所形成瓷质体1、2和3的稳定性，具体方法如下：分别将具体实施方式十、十八、十九对应的复合脂质C71H144N4O18Si3、C63H129NO8Si、C66H133NO9Si制备成瓷质体1、瓷质体2、瓷质体3，通过向脂质体溶液中加入不同比例的表面活性剂Triton X-100(TX-100)，测定脂质体粒径的变化，并与DSPC制成的传统脂质体在同等条件下粒径变化的比较来考察瓷质体的稳定性，结果如表4所示，当加入至30倍量的TX-100水溶液后，瓷质体的大小基本保持不变，而DSPC制备的传统脂质体在加入5倍量的TX-100水溶液后，其粒径明显减小，说明其囊泡结构已被破坏，从而证明瓷质体具有比传统脂质体更好的稳定性。
表4瓷质体的稳定性
Figure G2009100725382D00171
具体实施方式二十一：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质C70H144NO8Si+的制备方法是按下述步骤制备的：步骤一、在电磁搅拌下，向50毫升圆底烧瓶中依次加入
Figure G2009100725382D00181
(0.65g，0.80mmol)，二氯甲烷(20mL)，DMAP(0.10g，0.8mmol)和三乙胺(0.162g，1.6mmol)，将上述溶液冷却至0℃，再逐滴加入6-溴己酰氯(0.27g，1.2mmol)的二氯甲烷溶液(8mL)，0℃下搅拌1小时，再于室温下搅拌16小时后减压浓缩，所得粗产物用硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质中间体C55H117BrO5(无色油状物)，所述的中间体C55H117BrO5，产率56％。
Figure G2009100725382D00182
本实施方式制得复合脂质中间体C55H117BrO5：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：0.88(t，J＝7.2Hz，9H，CH3)，1.26～1.45(m，78H，OCH2CH2(CH2)13CH3)1.45～1.52(m，8H，OCH2CH2(CH2)13CH3and BrCH2CH2CH2)，1.84～1.91(m，4H，BrCH2CH2CH2CH2CH2CO)，2.31(t，J＝7.4Hz，2H，BrCH2CH2CH2CH2CH2CO)，3.33～3.37(m，12H，COOCH2CCH2O and OCH2CH2(CH2)13CH3)，3.40(t，J＝7.6Hz，2H，BrCH2)，4.11(s，2H，COOCH2).MS理论值：986.46，实验值[M]+：986.0，988.0。
步骤二、在电磁搅拌下，将
Figure G2009100725382D00183
(0.45g，0.46mmol)加入经二甲胺气体饱和的四氢呋喃(40mL)溶液中，于室温下搅拌3天，后通入空气将未反应的二甲胺气体除去，再减压除去溶剂四氢呋喃，所得固体用氯仿(20mL)溶解，后依次用饱和氯化钠水溶液，4％的碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，所得粗产物经硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质中间体C61H123NO5(白色固体)，产率70％。
Figure G2009100725382D00191
本实施方式制得复合脂质中间体C61H123NO5：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：0.88(t，J＝7.1Hz，9H，CH3)，1.26～1.47(m，78H，OCH2CH2(CH2)13CH3)1.48～1.64(m，12H，OCH2CH2(CH2)13CH3and NCH2CH2CH2CH2)，2.26(s，6H，N(CH3)2)，2.32(t，J＝7.2Hz，2H，NCH2CH2CH2CH2CH2CO)，2.46(t，J＝7.1Hz，2H，NCH2CH2CH2CH2CH2CO)，3.33～3.40(m，12H，COOCH2CCH2O andOCH2CH2(CH2)13CH3)，4.10(s，2H，COOCH2).MS理论值：950.63，实验值[M]+：951.7。
步骤三、在电磁搅拌下，往50毫升的圆底烧瓶中依次加入
Figure G2009100725382D00192
(0.282g，0.316mmol)，干燥的DMF溶剂(25mL)，溴丙基三乙氧基硅烷(0.516g，1.264mmol)，将上述混合物在氮气保护下室温搅拌5天，减压除去溶剂，所得粗产物经硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质C70H144NO8Si+(无色油状物)，产率41％.
Figure G2009100725382D00193
本实施方式制得复合脂质C70H144NO8Si+：1H NMR(CDCl3，400MHz)：d＝0.59(t，J＝7.8Hz，2H，SiCH2)，0.88(t，J＝6.6Hz，9H，OCH2CH2(CH2)13CH3)，1.25～1.43(m，89H，NCH2CH2(CH2)13CH3，N+CH2CH2CH2CH2CH2CO，CH3CH2OSi)，1.73～1.81(m，12H，OCH2CH2(CH2)13CH3，CH2CH2CH2N+CH2CH2CH2CH2CH2CO)，2.33(t，J＝7.0Hz，2H，N+CH2CH2CH2CH2CH2CO)，3.24～3.26(m，4H，CH2CH2N+CH2CH2)，3.31(s，6H，CH2N+(CH3)2CH2)，3.37～3.39(m，6H，OCH2CH2(CH2)13CH3)，3.79～3.83(m，12H，CH3CH2OSi，CCH2O)，4.01(s，1H，COOCH2).
具体实施方式二十二：本实施方式中基于季戊四醇的复合脂质C80H156N4O21Si3的制备方法是按下述步骤制备的：步骤一，在电磁搅拌下，向50毫升圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00201
(0.50g，0.73mmol)和丁二酸酐(0.438g，4.38mmol)，用CH2Cl2(25mL)溶解，再往反应瓶中依次加入DMAP(0.089g，0.73mmol)和三乙胺(0.293g，2.92mmol)，将上述混合物置于30℃油浴中加热4天。减压浓缩反应液，所得粗产物用硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质中间体C53H93NO15(白色固体)，产率75％。
Figure G2009100725382D00202
本实施方式制得复合脂质中间体C53H93NO15：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：0.88(t，J＝6.7Hz，6H，NCH2CH2(CH2)13CH3)，1.26～1.52(m，56H，NCH2CH2(CH2)13CH3，NCH2CH2(CH2)13CH3)，2.61～2.72(m，4H，NCOCH2CH2CO)，2.73～2.82(m，12H，COCH2CH2COOH)，3.20～3.21(m，4H，NCH2)，4.00(s，CCH2COO).MS理论值：984.30，实验值[M]+：985.4。
步骤二，在电磁搅拌下，向50毫升圆底烧瓶中加入
Figure G2009100725382D00211
(0.30g，0.305mmol)，用CH2Cl2(20mL)溶解，再往反应瓶中DCC(0.075g，0.366mmol)，室温搅拌15分钟后，再加入氨丙基三乙氧基硅烷(0.308g，1.38mmol)，室温下再搅拌1天。减压浓缩，所得粗产物用硅胶柱层析分离提纯得基于季戊四醇的复合脂质C80H156N4O21Si3(无色油状物)，产率53％。
Figure G2009100725382D00212
本实施方式制得复合脂质C80H156N4O21Si3：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：062(t，J＝8.0Hz，6H，SiCH2CH2CH2NH)，0.88(t，J＝6.6Hz，6H，NCH2CH2(CH2)13CH3)，1.20～1.61(m，89H，NCH2CH2(CH2)13CH3andCH3CH2OSi，SiCH2CH2CH2NH，NCH2CH2(CH2)13CH3)，2.45～2.75(m，12H，COCH2CH2CO)，3.13～3.30(m，10H，SiCH2CH2CH2NH andNCH2CH2(CH2)13CH3)，3.78～3.83(m，18H，CH3CH2OSi)，4.02(s，8H，CCH2OCO).MS理论值：1594.37，实验值[M]+：1595.4.

Claims (7)

1.基于季戊四醇的复合脂质，其特征在于基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure FSB00000659783100011
其中R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3或CONH(CH2)3Si(X)3，以上所述m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基。
2.根据权利要求1所述的基于季戊四醇的复合脂质，其特征在于R1为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。
3.权利要求2所述的基于季戊四醇的复合脂质，其特征在于R2为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。
4.如权利要求1所述基于季戊四醇的复合脂质的制备方法，其特征在于基于季戊四醇的复合脂质的结构式为
Figure FSB00000659783100012
R1为C6～C18烷基，R2为C6～C18烷基，R3表示CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3或CONH(CH2)3Si(X)3，以上所述m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基；其制备方法是按下述步骤进行的：一、将烷基胺和溴代烷加热回流5天制得
Figure FSB00000659783100013
二、再将
Figure FSB00000659783100014
与丁二酸酐或戊二酸酐亲核反应得到
Figure FSB00000659783100015
然后
Figure FSB00000659783100016
与过量4～6倍的季戊四醇酯化反应得到
Figure FSB00000659783100017
三、再将
Figure FSB00000659783100018
与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R3＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure FSB00000659783100021
与丁二酸酐或戊二酸酐亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R3＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质。
5.基于季戊四醇的复合脂质，其特征在于基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure FSB00000659783100022
其中R4表示C6～C18烷基，R5表示CONH(CH2)3Si(X)3或CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基。
6.根据权利要求5所述的基于季戊四醇的复合脂质，其特征在于R4为正己基、正辛基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基。
7.如权利要求5所述基于季戊四醇的复合脂质的制备方法，其特征在于基于季戊四醇的复合脂质的结构式为：
Figure FSB00000659783100023
R4表示C6～C18烷基，R5表示CONH(CH2)3Si(X)3或CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3，其中m等于2或3，X为乙氧基或甲氧基，其制备方法是按下述步骤进行的：一、在碱性条件下，将季戊四醇与3倍量的溴代烷亲核取代反应6小时得到
Figure FSB00000659783100024
二、再将与异氰酸丙基三乙氧基硅烷或异氰酸丙基三甲氧基硅烷亲核反应2～3天得到R5＝CONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，或者将
Figure FSB00000659783100026
与丁二酸酐或戊二酸酐亲核反应后再与氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷缩合反应脱水得到R5＝CO(CH2)mCONH(CH2)3Si(X)3的基于季戊四醇的复合脂质，步骤一中所述的
Figure FSB00000659783100031
中R4表示C6～C18烷基。
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