CN101603040A - 一种高产纳豆激酶的制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种高产纳豆激酶的制作方法，它包括一个经特殊诱变方法得到的菌种和一种特定的发酵工艺配方，能大大提高纳豆激酶发酵效价，降低纳豆激酶的生产成本。

Description

一种高产纳豆激酶的制作方法
技术领域
本发明涉及一种高产纳豆激酶的制作方法，属于微生物发酵工程领域。
背景技术
纳豆激酶(Nattakinase，NK)是一种从日本传统食品纳豆中提取的物质，由纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)发酵生产，成本低，安全性好，同时纳豆激酶是一种分子量远远小于尿激酶、链激酶、组织型纤溶酶原激活酶等的蛋白质，并可由肠道吸收，纳豆激酶的体外、体内溶栓性也通过试验得到确定，得出纳豆激酶的体内溶栓活性是纤溶酶plasmin的四倍，在体内作用持续时间长，最重要的一点是它还能激活人体内组织型纤溶酶原激活剂，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性，因而纳豆激酶有望开发成为一种新型的口服性溶血栓药物。
纳豆激酶的发酵工艺广泛受到研究者的重视，然而目前采用常规菌种和工艺发酵效价一般只能在2500u/ml以下，效价低，效价影响到纯化回收率，因此，发酵效价对纳豆激酶的生产成本影响很大，提高发酵效价对纳豆激酶向产业化发展具有重要意义。
发明内容
本发明提供一种获得高产纳豆激酶的方法，它包括一个经特殊诱变方法得到的菌种和一种特定的发酵工艺配方，能大幅度提高纳豆激酶发酵效价，使发酵效价在4100u/ml以上，大大降低纳豆激酶的生产成本。
具体实施方式
本发明将纳豆芽孢杆菌BNTN008在含有低聚糖和特定微量元素的培养基中进行发酵，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。
实施例1
将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：
葡萄糖      2.0％
低聚麦芽糖：0.5％
牛肉膏：    0.5％
酵母膏      2.0％
CaCl2       0.3％
ZnSO4.7H2O：30ppm
MnSO4：50ppm
pH     7.0
35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。
实施例2
将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：
葡萄糖      1.0％
低聚果糖：  1.5％
牛肉膏：    0.5％
酵母膏      2.0％
CaCl2       0.3％
ZnSO4.7H2O：100ppm
MnSO4：     10ppm
pH          7.0
35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。
实施例3
将纳豆芽孢杆菌BNTN008接种到具下列配比的培养基中：
低聚麦芽糖：5.0％
牛肉膏：    0.5％
酵母膏      2.0％
CaCl2       0.3％
ZnSO4.7H2O：300ppm
MnSO4：     50ppm
pH          7.0
35℃通气发酵48小时，发酵液经离心、超滤、冷冻干燥获得纳豆激酶产品。

Claims (7)

1.一种高产纳豆激酶的制作方法其特征在于，发酵时使用纳豆芽孢杆菌BNTN008菌株。
2.一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于，在发酵培养基中含有低聚糖。
3.根据权利要求2所述的一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于低聚糖包括：低聚五碳糖、低聚六碳糖以及五碳糖、六碳糖的共同低聚物。
4.根据权利要求2所述的一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于，低聚糖的含量为0.5％～5％。
5.根据权利要求1所述的一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于，在发酵培养基中含有特定微量元素。
6.根据权利要求5所述的一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于，微量元素包括：锰(Mn2+)、锌(Zn2+)。
7.根据权利要求5所述的一种高产纳豆激酶的制作方法，其特征在于，微量元素在培养基中含量为10ppm～300ppm。
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