CN101594870A

CN101594870A - 4-氨基喹唑啉衍生物及其使用方法

Info

Publication number: CN101594870A
Application number: CNA2007800393013A
Authority: CN
Inventors: 罗杰·通
Original assignee: Concert Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Concert Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-08-22
Filing date: 2007-08-22
Publication date: 2009-12-02
Also published as: US20110097320A1; EP2054063A2; AU2007288204A1; EP2054063A4; WO2008024439A2; CA2661223A1; KR20090042994A; WO2008024439A3; US20080051422A1; JP2010501572A; MX2009001814A

Abstract

本发明涉及一种新型的4－氨基喹唑啉及其衍生物、药物学上可接受盐、其溶剂化物和水合物。本发明还涉及含有本发明化合物的组合物，以及该组合物在通过进行抑制剂EGFR和HER－2的给药有益治疗疾病与症状方面的治疗方法的应用。

Description

4-氨基喹唑啉衍生物及其使用方法

有关申请

本申请要求于2006年8月22日申请的美国临时专利申请60/839,503的优先权。

技术领域

本申请涉及新型的4-氨基喹唑啉及其衍生物、药物学上可接受盐、其溶剂化物和水合物。本发明还提供了含有本发明化合物的组合物，以及该组合物在通过进行抑制剂EGFR和HER2的给药有益治疗疾病与症状方面的治疗方法的应用。

背景技术

拉帕替尼，也称作N-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基]-6-[5-[2-(甲磺酰基)乙基胺甲基]呋喃-2-基]喹唑啉-4-胺双(4-甲基苯磺酸盐)水合物，可抑制表皮生长因子受体(EGFR；ErbB1)和人类表皮受体2(HER2；ErbB2)的酪氨酸激酶的活性。

美国已核准将拉帕替尼与卡培他滨联用，以治疗其肿瘤过表达为HER2和在先治疗失败的晚期或转移乳腺癌患者。拉帕替尼可经临床相关浓度的细胞色素P450亚型3A4(CYP3A4)而代谢，拉帕替尼也可抑制细胞色素P450亚型3A4。FDA的注册商标推荐，避免在需要服用CYP3A4抑制剂化合物的患者体内进行强CYP3A4抑制剂的共同给药，或者降低拉帕替尼的剂量(http://www.fda.gov/cder/foi/label/2007/0220591bl.pdf)。值得注意得是，药物的胃肠道毒性、临床限制方面呈现出与给药剂量有关，而不是与血浆浓度有关(Burris HA et al.，J Clin Oncol 2005；23：5305)。这表明肠道内的局部药物浓度关系到拉帕替尼的毒性，以及增大给定口服剂量的血浆浓度有可能增大其治疗窗，因而增强其实用性而并不引起不良副作用的相关增加。

也述及与拉帕替尼化学相关的化合物，并且其显示具有抵抗ErbB1、ErbB2和/或ErbB4(HER4)的潜在的酪氨酸激酶的抑制活性。参见美国专利6,727,256。

尽管拉帕替尼具有良好活性，但仍需要一种治疗上述疾病与症状的新的化合物。

发明内容

定义

术语“改善”和“治疗”可交替使用，既包括治疗处理又包括预防性治疗。该两个术语均指减退、抑制、削弱、缩小、阻断或稳定疾病的发病或演变(如本文所述的疾病或异常，例如瘤形成)。

“疾病”是指损害或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何症状或异常。

可确认的是，在依赖于合成中所用的化学原料来源的合成化合物里，同位素的天然丰度出现一些变化。因此，拉帕替尼制剂可固有地含有少量的含重氢和/或¹³C的同位素化合物(isotopologue)。相比于本发明中化合物的稳定同位素置换的程度，天然丰富的稳定的氢和碳同位素的浓度，尽管存在有变化，但其浓度很小并且是无关紧要的。参见例如Wada E etal.，Seikagaku 1994，66：15；Ganes LZ et al.，Comp Biochem Physiol MolIntegr Physiol 1998，119：725。在本发明的化合物中，当一特定位置被指定含有重氢，就可以理解为，该位置重氢的丰度基本上大于重氢的天然丰度，即0.015％。指定含有重氢的位置在所述化合物中被指定为重氢的各原子之处代表性地具有至少3000的最低同位素富集系数(含有45％的重氢)。

术语“同位素富集系数”在本文是指具体同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比。

在其他实施方式中，本发明中的化合物的各指定重氢原子具有如下的同位素富集系数：至少3500(在各指定重氢原子中含52.5％重氢)、至少4000(含60％重氢)、至少4500(含67.5％重氢)、至少5000(含75％重氢)、至少5500(含82.5％重氢)、至少6000(含90％重氢)、至少6333.3(含95％重氢)、至少6466.7(含97％重氢)、至少6600(含99％重氢)或至少6633.3(含99.5％重氢)。

在本发明的化合物中未特别指定为特定同位素的任何原子均代表该原子的任何稳定的同位素。除非有其他声明，当一位置被特别指定为“H”或“氢”时，该位置可理解为含有天然丰度同位素成分的氢。

术语“同位素化合物”是指仅在其同位素成分方面不同于本发明中特定化合物的物质。

正如本文所用的，术语“化合物”也意指包括其任何盐、溶剂化物或水合物。

本发明化合物的盐是在一种酸与化合物的诸如氨基官能团的碱基之间形成的，或者在一种碱和化合物的诸如羧基官能团的酸基之间形成。另一个实施方式中的该化合物是药物学上可接受的酸加成盐。

正如本文所用的，术语“药物学上可接受的”是指一种成分，即在合理医学判断范围内适于与人类和其他哺乳动物的组织接触使用而没有不当毒性、刺激、过敏反应等并且相当于合理的利益/风险比的成分。“药物学上可接受的盐”是指任何无毒性盐，其每当给药于接受者时，就能够直接或者间接地提供本发明的化合物。“药物学上可接受的反离子”是当给药于接受者时从其盐中释放出的无毒性的盐的离子部分。

通常用以形成药物学上可接受的盐的酸包括无机酸，诸如氢的二硫化物、氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸；和有机酸，诸如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、酸式酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸(besylicacid)、反丁烯二酸、葡(萄)糖酸、葡(萄)糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸(benzenesulfonic acid)、乳酸、草酸、对-溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、醋酸；以及有关无机酸和有机酸。因此，该药物学上可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、酸性亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐(decanoate)、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐(caprate)、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、羟基乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐及其他盐。在一个实施方式中，药物学上可接受的酸加成盐包括与诸如氢氯酸和氢溴酸的无机酸形成的那些盐，特别是与诸如马来酸的有机酸形成的那些盐。

正如本文所用的，术语“水合物”是指进一步包括由非共价的分子间力结合的化学计量或非化学计量的水的化合物。

正如本文所用的，术语“溶剂化物”是指进一步包括由非共价的分子间力结合的化学计量或非化学计量的溶剂诸如水、丙酮、乙醇、甲醇、二氯甲烷、2-丙醇或其类似物的化合物。

本发明的化合物(例如式I或Ia的化合物)可含有例如由于重氢置换或其他情况所形成的不对称碳原子。此时，本发明的化合物可以单一的对映异构体或者两种对映异构体的混合物的形式存在。因而，本发明的化合物可包括两种外消旋混合物以及基本上不含另一可能的立体异构体的各单一立体异构体。本文所用的术语“基本上不含其他立体异构体”是指存在小于25％的其他立体异构体，优选小于10％的其他立体异构体，更优选小于5％的其他立体异构体以及最优选小于2％的其他立体异构体，或者小于X％的其他立体异构体(其中X为介于0至100之间、包括100在内的数)。获得或合成给定化合物的单一对映异构体的方法为本领域所熟知，可实际用于最终化合物或起始原料或中间体。

正如本文所用的，术语“稳定化合物”是指具有足够的稳定性从而可以制备和在用以本文所述目的的足够时段内保持化合物的完整性的化合物(例如，治疗产品的配方、用以制造治疗化合物的中间体、可分离或可储存中间化合物、治疗相应于治疗剂的疾病或症状)。

“²H”和“D”均指重氢。

“立体异构体”指对映异构体和非对映异构体。

“Tert”、“t”和“t-”各指叔的。

“US”指美国。

“FDA”指食品药品管理局。

“NDA”指新药申请。

“肿瘤病”意指由以下情况导致的或导致以下情况的疾病：不适当的高水平细胞分裂、不适当的低水平细胞凋亡或者上述两种情况。例如，癌症是增生疾病的一个实例。癌症的实例包括但不限于：白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性前髓细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)，真性红细胞增多症，淋巴瘤(霍奇金氏病、非霍奇金氏病)，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，重链病，以及实体瘤诸如肉瘤和癌科(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索癌、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管内皮细胞瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、骨髓癌、支气管肺癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室鼓膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。淋巴增殖异常也被视为增生疾病。

在整个说明书中，“各Y”的参考标记独立地包括所用的所有“Y”基团(Y^1a、Y^1b、Y^1c、Y^2a、Y^2b、Y^3a、Y^3b、Y^4a、Y^4b、Y^5a、Y^5b)。

术语“重原子”指原子量比自然界存在的主要同位素要高的同位素。术语“稳定重原子”指非放射性重原子。

治疗性化合物

本发明提供了用以治疗瘤形成的具有优良生物制药学性能的新型的4-氨基喹唑啉。

一方面，本发明提供了式I化合物：

或者其盐；或者其水合物或其溶剂化物；其中：

R为氧，Q为碳以及含有R和Q的环为噁唑；或者

R为氮，Q为硫以及含有R和Q的环为噻唑；

Z为氢或氟；

X为氯或溴；

各Y独立地选自氢和重氢；以及

至少一个Y为重氢。

在一个所选实施方式中，Z为氟。

在另一个实施方式中，R为氧。

还在另一个实施方式中，X为氯。

仍在另一个实施方式中，Z为氢。

在一个所选的实施方式中，本发明提供了式Ia化合物：

或者其盐；或者其水合物或其溶剂化物；其中各Y被定义为上述式I中的Y。

在式I或者Ia的一个实施方式中，与同一个碳原子结合的各Y是相同的。

在式I或者Ia的另一个实施方式中，Y^1a、Y^1c和Y^1c同为重氢。

还在式I或者Ia的另一个实施方式中，Y^2a、Y^2b同为重氢。在一个更具体的实施方式中，与同一个碳原子结合的各Y是相同的；Y^2a、Y^2b同为重氢；以及各Y¹、各Y³、各Y⁴和各Y⁵中的一个或多个为重氢。

在式I或者Ia的另一个实施方式中，Y^3a、Y^3b同为重氢。

仍在式I或者Ia的另一个实施方式中，Y^4a、Y^4b同为重氢。在一个更具体的实施方式中，与同一个碳原子结合的各Y是相同的；Y^4a、Y^4b同为重氢；以及各Y¹、各Y²、各Y³和各Y⁵中的一个或多个为重氢。在另一具体实施方式中，与同一个碳原子结合的各Y是相同的；以及Y^2a、Y^2b、Y^4a和Y^4b同为重氢。

还在式I或者Ia的另一个实施方式中，Y^5a、Y^5b同为重氢。

仍在式I或者Ia的另一个实施方式中，该化合物含有至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个重氢。

在一个实施方式中，式I或者Ia的化合物是孤立的。

在另一个实施方式中，式I或者Ia的化合物的盐为药物学上可接受的盐。在一个更具体的实施方式中，式I或者Ia的化合物的药物学上可接受的盐为甲苯磺酸盐。

还在另一个实施方式中，该化合物为选自表1(见下)所述的任一化合物的式Ia化合物：

表1：式Ia的代表性实施方式

化合物	Y^1a	Y^1b	Y^1c	Y^2a	Y^2b	Y^3a	Y^3b	Y^4a	Y^4b	Y^5a	Y^5b
化合物	Y^1a	Y^1b	Y^1c	Y^2a	Y^2b	Y^3a	Y^3b	Y^4a	Y^4b	Y^5a	Y^5b	100	H	H	H	D	D	H	H	H	H	H	H
101	H	H	H	D	D	D	D	H	H	H	H	100	H	H	H	D	D	H	H	H	H	H	H
101	H	H	H	D	D	D	D	H	H	H	H	102	D	D	D	D	D	D	D	H	H	D	D
103	D	D	D	D	D	H	H	H	H	D	D	102	D	D	D	D	D	D	D	H	H	D	D
103	D	D	D	D	D	H	H	H	H	D	D	104	H	H	H	D	D	D	D	D	D	H	H
105	D	D	D	D	D	D	D	D	D	D	D	104	H	H	H	D	D	D	D	D	D	H	H
105	D	D	D	D	D	D	D	D	D	D	D	106	H	H	H	H	H	D	D	D	D	H	H
107	H	H	H	H	H	H	H	D	D	H	H	106	H	H	H	H	H	D	D	D	D	H	H
107	H	H	H	H	H	H	H	D	D	H	H	108	H	H	H	D	D	H	H	D	D	H	H

在其他组实施方式中，上述任何实施方式中未指定为重氢的任何原子都以其天然同位素丰度存在。

本发明可预见的取代物和可变物的组合仅是最终能形成稳定化合物的那些。

另一方面，本发明提供了含有或基本上由式I化合物组成的混合物；以及式I化合物的更轻的同位素化合物，其中至少50％、60％、75％、80％、85％、90％或95％的该混合物为式I化合物。

化合物的合成

式I化合物可由有机合成领域中所熟知的方法制得。例如，美国专利6,727,256中述及本发明的全氢同位素化合物及其中间体的合成路线。广泛纪录了将重氢合并入目标化合物中的方法。参见例如《标记化合物与放射药物杂志》(由John Wiley and Sons出版)，绝大多数出版物都包含将重氢合并入生物活性的有机小分子方面的详细实验说明。同样参见例如Leis HJ，Curr Org Chem，1998，2：131及其参考内容以及Moebius G，Zfi-Mitteilungen 1989，150：297。重氢标记试剂的合适商业供货商包括Isotec公司(Miamisburg，OH)；剑桥同位素实验室(Andover，MA)；ICON服务公司(位于新泽西州的萨米特)；以及C/D/N同位素公司(位于加拿大魁北克的潘特克莱尔)。一些中间体需或无需纯化(例如过滤、蒸馏、升华、结晶、研制、固相萃取以及色谱法)即可使用。在下文及其实施例中将说明描述其合成的代表性方法。

在方案A中描述了合成式I化合物的简便方法，其中Q、R、X、Z和各Y如上述所定义：

I或Ia(Q为碳，R为氧)

如方案A所示，喹唑啉V与取代的4-(苯氧基)-苯胺VI反应生成化合物VII，该生成物然后与硼酸(VIII)进行偶联(在钯催化剂的存在下)得到中间体IX。IX与胺X进行还原胺化得到式I或Ia的化合物。

并不意味着上述所示的具体方法和化合物具有限制性。此方案的化学结构描述了与本文化合物结构式中相应位置的化学基团定义(官能基、原子等)相适配的本文所定义的可变物，无论是否由相同的可变物名称(即R¹、R²、R³等)来确定。用以合成另一化合物的化合物结构中化学基团的适宜性在本领域普通技术人员的认知范围之内。合成式I化合物及其合成前体(包括在本方案中未明确表示的合成路线中的那些)的其他方法均在本领域具备普通技术的化学家所能想到的方法的范围之内。优化反应条件以及必要时最少化竞争副产物的方法均为本领域所熟知。除了本文所引用的参考文献之外，反应方案和协议可由本领域技术人员通过使用从商业渠道得到的结构搜寻数据库软件而确定，例如

(美国化学协会的化学文摘社)、

(美国化学协会的化学文摘社)，CrossFire

(Elsevier MDL公司开发)或者诸如

的互联网搜索引擎或者诸如美国专利商标局的文本数据库的关键词数据库。

本文所述方法还可包括在本文具体阐述的步骤之前或之后的增加或除去适当保护基以最终能合成本文化合物的步骤。另外，可以替代顺序或次序进行各合成步骤以得到所需化合物。本领域技术人员熟知用以合成所用到的化合物的合成化学转变以及保护基方法学(保护和脱保护)，包括例如下面所述及到的：Larock R，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publishers(1989)；Greene TW et al.，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，3^rd Ed.，John Wiley and Sons(1999)；Fieser L etal.，Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；以及Paquette L，ed.，Encyclopedia of Reagents for OrganicSynthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后来的出版物。

药物组合物

本发明还提供了无热原组合物，所述组合物包含有效量的式I或Ia化合物或者所述化合物的药物学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；以及可接受的载体。优选地，配制本发明的组合物以用于药学应用(药物组合物)，其中载体为药物学上可接受的载体。载体为“可接受的”的意思是与配方中的其他成分相兼容，以及其为药物学上可接受载体时无害于药物所用量中的受体。

可用于本发明的药物组合物的药物学上可接受载体、佐剂和赋形剂包括但不限于：离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、诸如人血白蛋白的血清蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如鱼精蛋白硫酸盐、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、石蜡、聚乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本发明的药物组合物包括适于口腔(oral)、直肠、鼻腔、局部(包括口腔(buccal)和舌下)、阴道或非肠道(包括例如皮下、肌肉、静脉内、鞘内或皮内)给药的那些组合物。在一些实施方式中，该配方中的化合物为透皮给药(例如使用透皮贴剂或离子电渗技术)。其他配方可方便地以例如片剂、缓释胶囊的单元剂量的形式存在，和存在于脂质体内，并且可由药学领域所熟知的任何方法制备。参见例如Remington书籍：《药学科学与实践》(The Science and Practice of Pharmacy)(第20版)，ed.A.R.Gennaro，Lippincott Williams & Wilkins，2000；以及《制药百科全书》，eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan，1988-1999，Marcel Dekker，New York。

为了治疗应用，使用本文所公开的方法得到包含式I化合物的组合物。包含此化合物的药物组合物可系统性给药，例如，在诸如生理盐水的药物学上可接受的缓冲剂中配制。给药的优选途径包括例如皮下、静脉内、腹膜内、肌肉或皮内注射，以给患者体内提供持续恒定水平的药物。可使用生理学上可接受载体内的治疗有效量的式I化合物进行人类或其他动物患者的治疗。在例如由E.W.Martin编写的《Remington′sPharmaceutical Sciences》书籍里述及适当载体及其配方。治疗剂的给药量根据给药方式、患者年龄和体重的不同而变化，并随肿瘤病的临床症状而变化。通常，其量在用以治疗诸如乳腺癌包括转移癌在内的其他肿瘤病的所用的其他药剂的量的范围之内，尽管在一定情况下由于氧化减少和化合物半衰期增加其需要较低的量。按正如本领域技术人员所熟知的诊断方法所确定的肿瘤病的控制临床或生理症状的剂量进行化合物的给药。

药物组合物配方

通过导致与其他成分选择性联用的治疗剂的浓缩的任何合适方式进行治疗肿瘤病的式I化合物的给药，将有效改善、减轻或稳定了诸如乳腺癌特别是转移乳腺癌的肿瘤病。在任何合适载体物质中均可以任何适当量得到该化合物，通常以占有组合物总重量的1-95重量％的量存在。该化合物可提供适合于肠胃外(例如皮下、静脉内、肌肉或腹膜内)给药途径的剂型。可按照常规的药学实践配制该药物组合物(参见例如Remington书籍：《药学科学与实践》(第20版)，ed.A.R.Gennaro，LippincottWilliams & Wilkins，2000；以及《制药百科全书》，eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan，1988-1999，Marcel Dekker，New York)。

可配制本发明中的药物组合物，从而每当给药后基本上立即释放该有效化合物，或者在给药后的任何预定时间或时段内释放该有效化合物。组合物的后面的类型通常作为控制释放的配方而被熟知，其包括：(i)在延长时段内在体内产生基本恒定浓度的药物的配方；(ii)经过预定滞后时间后在延长时段内在体内产生基本恒定浓度的药物的配方；(iii)通过保持其在体内的相对稳定的有效量水平并伴有最低化有关活性物质的血浆水平波动(锯齿状动态模式)的多余副作用，在预定时段内维持其作用的配方；(iv)邻近或在所处理的组织内通过例如空间布置控制释放的组合物使其作用局部化的配方；(v)可用方便剂量的配方，像例如每隔一天、每隔两天或三天或者每一周或每两周给药的剂量；以及(vi)通过使用载体或化学衍生物将治疗剂传递至特定细胞类型以靶向肿瘤癌的配方，诸如存在于乳腺组织的肿瘤细胞或者已由癌原发部位转移的细胞。对于一些应用来说，控制释放的配方有助于治疗化合物代谢速度的降低，并消除当天的频繁剂量需求，以将血浆水平维持在治疗水平上。

为获得其释放速度超过所讨论化合物的代谢速度的控制释放，可采用数个方案中的任何一种。在一个实施例中，通过适当选择包括例如各类控制释放组合物和涂层在内的不同配方参数和成分获得控制释放。因此，将适当赋形剂加入药物组合物中以配制治疗剂，从而每当给药后以控制方式释放治疗剂。其实例包括单个或多个单位片剂或胶囊组合物、油剂、悬浮剂、乳剂、微胶囊、微球、分子配合物、纳米颗粒、药膏和脂质体。

如果需要，可通过本领域熟知方法提高药物组合物中本发明化合物的溶解性和生物药效率。一种方法包括使用配方中的脂质赋形剂。参见“口服脂质基配方：提高微溶于水药物的生物药效率(药物与药学)，”DavidJ.Hauss，ed.Inforna Healthcare，2007；以及“脂质赋形剂在改善口服和胃肠外药物输送中的作用：基本原理和生物学实施例，”Kishor M.Wasan，ed.Wiley-Interscience，2006。

提高生物药效率的另一熟知方法是使用任选地与泊洛沙姆配制的本发明的无定形态的化合物，诸如LUTROL^TM和PLURONIC^TM(巴斯夫公司)，或者乙烯氧化物和丙烯氧化物的嵌段共聚物。参见美国专利7,014,866；以及美国专利出版物20060094744和20060079502。

肠胃外组合物

可以剂型、配方或经含有常规性的非毒性的药物学上可接受的载体和佐剂的适当的输送装置或植入剂通过注射、输注或植入(皮下、静脉内、肌肉或腹膜内等)的方式进行药物组合物的肠胃外给药。该组合物的配制和制备已为药物配方领域的技术人员所熟知。配方可从上述Remington书籍中找到：《药学科学与实践》。

可以单位剂量的形式(例如单剂量的一次用量的针剂)提供肠道外使用的组合物，或者以含有几个剂量的小瓶、其中加入适当防腐剂的形式提供该化合物(参见下文)。组合物可以是溶液、悬浮剂、乳剂、输液装置、植入型输送装置的形式，或者作为使用前与水或另一适当赋形剂再生为干粉料的形式存在。除了式I的活性化合物、治疗剂之外，该组合物可包括适当的肠道外可接受载体和/或赋形剂。可将活性化学疗法剂合并入微球、微胶囊、纳米颗粒、脂质体等中以控制释放。而且，该组合物可包括悬浮剂、增溶剂、稳定剂、pH调节剂、渗涨度调节剂和/或分散剂。

如上所示，本发明中的药物组合物可以是适于灭菌注射的形式。为了制备该组合物，将适当的活性治疗剂溶解或悬浮于肠胃外可接受的液体赋形剂里。在可接受的赋形剂和溶剂中可使用的是水，通过加入适当量的盐酸、氢氧化钠或适当缓冲剂、1，3-丁二醇、林格氏液和等渗压氯化钠溶液、葡萄糖溶液，将水调制适当的pH值。该水溶性配方也可包含一种或多种防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯)。当其中一种化合物略溶或微溶于水时，可加入增溶剂或加溶剂，或者该溶剂可包括10-60％w/w的丙二醇或其类似物。

控制释放的肠胃外组合物

控制释放的肠胃外组合物可以是水溶性悬浮剂、微球、微胶囊、磁性微球、油剂、油悬浮体或乳剂。可选地，可将活性药物合并入生物相容性载体、脂质体、纳米颗粒、植入剂或输送装置中。

用以制备微球和/或微胶囊的材料是例如可生物降解和/或生物腐蚀聚合物，诸如聚半乳凝素、聚(异丁基氰基丙烯酸酯)、聚(2-羟基乙基-L-谷氨酸(glutam-nine))以及聚(乳酸)。在配制控释释放肠胃外配方时，可用的生物相容性载体为糖类(例如右旋糖苷)、蛋白质(例如白蛋白)、脂蛋白或者抗体。用于植入剂中的材料可以是非生物降解性的(例如聚二甲基硅氧烷)或者可生物降解性的(例如聚已酸内酯、聚乳酸、聚乙醇酸、或聚原酸酯或其组合物)。

口服用固体剂型

口服用配方包括含有活性成分的片剂，该片剂存于含有非毒性药物学上可接受的赋形剂的混合物中。该配方被本领域技术人员所熟知。赋形剂可以是：例如惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；造粒和崩解剂(例如包括微晶纤维素在内的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、交联羟甲纤维素钠、海藻酸盐或海藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯树胶、褐藻酸、海藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、铝镁硅酸盐、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂和防粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、硅石、氢化植物油或滑石)。其他药物学上可接受的赋形剂可以是着色剂、调味剂、增塑剂，湿润剂、缓冲剂等。

片剂可以是非涂布的，或通过熟知技术涂布片剂，在胃肠道内任选地延迟分解和吸收，从而提供更长期的持续作用。可采用涂层以预定模式释放活性药物(例如为获得控制释放的配方)，或者采用它直至经过胃之后再释放活性药物(肠溶衣)。该涂层可以是糖衣、涂膜(例如，基于羟基丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或者肠溶衣(例如，基于甲基丙烯酸共聚物、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯酞酸酯、虫漆和/或乙基纤维素)。而且，可使用时间延迟材料，诸如例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。

固体片剂组合物可包括适于避免组合物进行非所要化学变化的涂层，(例如在释放活性治疗物质之前的化学降解)。正如上述《制药百科全书》所述，可以类似方式将涂层用于固体剂型之上。

可将本发明的化合物与一种或多种活性治疗剂一起混合于片剂中，以治疗瘤形成，或者在片剂里面将两种或多种治疗剂分隔开。在一个实施例中，第一活性化学疗法剂含于片剂内侧之上，而第二活性化学疗法剂在其外侧，以致第二活性治疗剂的绝大部分先于第一治疗剂而释放。

口服用配方也可作为咀嚼片而存在，或者作为其活性成分与惰性固体稀释剂混合的硬胶囊(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)，或者作为其活性成分与水或例如花生油、液体石蜡或橄榄油的油类介质混合的凝胶胶囊。利用例如搅拌器、流化床设备或喷雾干燥设备，以常规方式使用上述片剂或胶囊内的成分制备粉末和颗粒。

控制释放的口服剂型

通过控制活性物质的分解和/或扩散，可例如构成用于口服用控制释放的组合物，以释放本文所述的活性治疗剂。通过适当涂布化合物的片剂、胶襄、小丸剂、粒剂配方，或者通过将该化合物合并入适当基质中，可实现分解或扩散的控制释放。控制释放的涂层可包括一种或多种上述涂层物质，和/或虫漆、蜂蜡、甘油蜡(glycowax)、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、甘油二硬脂酸酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、DL-聚乳酸、醋酸纤维素丁酸酯、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1，3-丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯和/或聚乙二醇。在控制释放的基质配方中，基质材料也可包括例如，水合甲基纤维素、巴西棕榈蜡和硬脂醇、卡波姆934、硅树脂、三硬脂酸甘油酯、甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤化碳氟化合物。

含有一种或多种治疗化合物的控制释放组合物也可以是漂浮型片剂或胶囊的形式(即口服后在一定时间内漂浮于胃内容物之上的片剂或胶囊)。通过将含有该化合物与赋形剂和诸如羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素或羟基丙基甲基纤维素的20-75％w/w的亲水胶体的混合物粒化，可制备该化合物的漂浮型片剂配方。然后可将所得颗粒压制成片剂。当接触到胃液时，片剂在其表面周围形成基本上不透水的胶阻挡层。该胶阻挡层参与保持小于1的密度，从而使片剂在胃液中保持漂浮状态。

药物配方可以单位剂量的形式存在，其每单元剂量中有预定量的活性成分。该单位可含有例如0.5mg至1200mg、优选1mg至1000mg、更优选5mg至400mg的式I或Ia化合物，这要取决于治疗条件、给药途径以及患者的年龄、体重和身体状况，或者药物配方可以单位剂量的形式存在，其每单元剂量中有预定量的活性成分。在一替代实施方式中，本发明化合物的单位剂量配方可含有介于约100mg至2,000mg之间的式I或Ia化合物；或者介于约250mg至1500mg之间的式I或Ia化合物。优选的单位剂量配方是正如本文上面所述的含日剂量或亚剂量的那些配方，或者活性成分的其适当小部分。而且，可通过药学领域所熟知的任何方法制备该药物配方。

在任何上述配方中，式I或Ia化合物可以单个剂量的形式与一种或多种第二治疗剂联用。该第二治疗剂包括但不限于其他抗肿瘤剂和免疫抑制剂。用于该组合剂型的第二治疗剂的实例包括但不限于：卡培他滨、帕唑帕尼、搓拉滋美、多西他赛、来曲唑、它莫西芬、氟维司群、紫杉醇、卡铂、贝伐单抗、多柔比星、环磷酰胺、顺铂、长春瑞滨、依维莫司、丙戊酸、拓扑特肯、奥沙利铂和吉西他滨。

治疗方法

在一个实施方式中，本发明提供了包含细胞与式I或Ia化合物接触步骤的抑制细胞内ErbB-1、ErbB-2或ErbB-4有关的蛋白激酶活性的方法。

在另一实施方式中，本发明提供了治疗患有或易患肿瘤病的受试者的方法。式I或Ia化合物在特定用于治疗乳腺癌、特别是转移性乳腺癌的同时，本发明并不因此而受限。用于本发明的例证性(illustrative)瘤包括但不限于：白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性前髓细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)，真性红细胞增多症，淋巴瘤(霍奇金氏病、非霍奇金氏病)，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，重链病，以及实体瘤诸如肉瘤和癌科(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索癌、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管内皮细胞瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、骨髓癌、支气管肺癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室鼓膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。

在一个具体实施方式中，受试者患有或易患：乳腺癌，食管腺癌，食管鳞状细胞癌，子宫颈癌，头颈癌、实体瘤，非霍奇金淋巴瘤，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，脑瘤和中枢神经系统肿瘤(神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质肉瘤)，前列腺癌，子宫内膜癌，直肠癌，非小细胞肺癌，肝癌，肾癌和胰腺癌。

本发明的另一方面提供了治疗哺乳动物体内erB2、erB4或EGF(erB1)受体阳性瘤形成的方法。在一具体实施方式中，受试者患有或易患erB阳性乳腺癌。在一更具体的实施方式中，乳腺癌为erB2、erB4或EGF受体阳性或过表达。在进一步更具体的实施方式中，乳腺癌为erB2或EGF受体阳性。在另一更具体的实施方式中，乳腺癌未响应于其常规化学疗法和/或异常或症状。这些方法包括对有需要的受试者(例如哺乳动物诸如人类)进行包含式I或Ia化合物的治疗有效量的药物组合物的给药。本文化合物的“治疗有效量”是指足以治疗其疾病或异常或症状的量。

本文方法包括使受试者(包括确认为需要该治疗的受试者)服用本文所述的有效量化合物或本文所述组合物，以产生此效果。确认受试者需要该治疗可以是受试者或卫生保健职业者的判断，可以是主观的(例如判断)或客观的(例如通过测试或诊断方法可测得的)。通过诊断测试或受试者或卫生保健职业者的判断(例如，基因检测、酶或蛋白质标记(诸如磷酸化EGF受体、c-ErbB-2或c-erbB-4)、家族史等)，通过任何主观或客观确定以获得确认其为“较易患”或者易患疾病、异常或症状的受试者。

正如本文所用的，术语“治疗”、“处理”、“处理或治疗”等是指减轻或改善与此相关的异常和/或症状。可以理解为，尽管不能排除，处理异常或病状无需完全排除与此相关的异常、病状或症状。

联合治疗

可选地，将进行本发明的化合物的给药与任何其他标准的活性抗肿瘤治疗联合使用。该治疗为本领域技术人员所熟知，其包括抗肿瘤治疗、与其他化学疗法、激素、抗体或免疫抑制剂的联合治疗、以及与外科和/或放射治疗的联合治疗。

例如在2002年1月14日提交的国际申请PCT US 02/01130中述及抗肿瘤治疗。其描述到抗肿瘤治疗包括但不限于：诸如二萜化合物和长春新碱的微管抑制剂；铂的配合物；诸如氮芥、氧氮磷环类(oxazaphosphorines)、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯的烷化剂；诸如蒽环类药、放射菌素和博莱霉素的抗生素；诸如鬼臼素的拓扑异构酶II抑制剂；诸如嘌呤、嘧啶类似物和抗叶酸化合物的抗代谢物；诸如喜树碱的拓扑异构酶I抑制剂；激素和激素类似物；信号转导抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；细胞周期信号抑制剂。

微管抑制剂或有丝分裂抑制剂为积极抵抗M期或细胞周期的有丝分裂期的肿瘤细胞微管的时相特异性药物。微管抑制剂的实例包括但不限于二萜化合物和长春新碱。源自于自然资源的二萜化合物是在细胞周期G2/M期奏效的时相特异性抗癌剂。可以认为，二萜化合物通过与该蛋白质结合稳定了微管的β-微管蛋白亚基。随着有丝分裂被阻止以及接下来的细胞死亡，出现的蛋白质分解得到抑制。二萜化合物的实例包括但不限于紫杉醇及其类似的多烯紫杉醇。紫杉醇，5[β]，20-环氧-1，2[α]，4，7[β]，10[β]，13[α]-六-羟基紫杉烷-11-烯-9-酮4，10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R，3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯；是从太平洋紫杉分离出的一种二萜类天然物，可作为注射溶液

而从商业渠道获得。多烯紫杉醇，(2R，3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸，N-叔丁基酯，13-酯和5[β]-20-环氧-1，2[α]，4，7[β]，10[β]，13[α]-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯三水合物；可作为注射溶液

而从商业渠道获得。长春新碱为源自长春花的时相特异性抗肿瘤剂。长春新碱的实例包括但不限于长春碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春碱、硫酸长春碱，作为

的一种注射溶液可从商业渠道获得。长春新碱、22-氧代硫酸长春碱，作为的一种注射溶液可从商业渠道获得。长春瑞滨，3′，4′-二去氢-4′-去氧-8′-去甲长春花碱二酒石酸盐，可作为酒石酸长春瑞滨

的一种注射溶液可从商业渠道获得，是一种半合成的长春花生物碱。铂配合物为与DNA交序的非时相特异性抗癌剂。铂配合物的实例包括但不限于顺铂、奥沙利铂和卡铂。顺铂，顺式二氨二氯铂，作为

的一种注射溶液可从商业渠道获得。卡铂、二氨[1，1-环丁烷-二羧酸酯(2-)-O，O′]-铂(platinum，diammine[1，1-cyclobutane-dicarboxylate(2-)-O，O′])，可作为

的一种注射溶液可从商业渠道获得。烷化剂为非时相抗癌特异性药物和强亲电试剂。烷化剂的实例包括但不限于：诸如环磷酰胺的氮芥；美法仑和苯丁酸氮芥；诸如白消安的烷基磺酸酯；诸如卡氯芥的亚硝基脲；诸如达卡巴嗪的三氮烯。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四羟基-2H-1，3，2-噁磷-2-氧化物一水合物，可作为

的注射溶液或片剂而从商业渠道获得。美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，可作为

的注射溶液或片剂而从商业渠道获得。苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，作为

片剂可从商业渠道获得。白消安，1，4-丁二醇二甲烷磺酸酯，作为

片剂可从商业渠道获得。卡氯芥，1，3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，可作为

的单个小瓶的冻干材料而从商业渠道获得。达卡巴嗪，5-(3，3-二甲基-1-三氮烯)咪唑-4-羧酰胺，可作为DTIC-

的单个小瓶的冻干材料而从商业渠道获得。

抗菌抗肿瘤药为与DNA结合或插入DNA的非时相特异性剂。抗菌抗肿瘤药的实例包括但不限于诸如更生霉素的放射菌素，诸如道诺霉素和阿霉素的蒽环类药；以及博来霉素。更生霉素，也称作放射菌素D，可作为

以注射形式从商业渠道获得。道诺霉素，(8S-顺式)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2，3，6-三去氧-a-L-来苏己吡喃基)-氧]-7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基-1-甲氧基-5，12-并四苯二酮盐酸盐，作为

的脂质体注射形式或作为

的注射形式，可从商业渠道获得。阿霉素，(8S，10S)-10-[(3-氨基-2，3，6-三去氧-a-L-来苏己吡喃基)-氧]-8-乙醇酰，7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基-1-甲氧基-5，12-并四苯二酮盐酸盐，作为

或ADRIAMYCIN

的注射形式可从商业渠道获得。博来霉素，一种从轮枝链霉菌种类分离出来的细胞毒性糖肽类抗生素混合物，可作为从商业渠道获得。

拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于鬼臼乙叉甙。鬼臼乙叉甙的实例包括但不限于依托泊甙和替尼泊甙。依托泊甙，4′-去甲基-表鬼臼毒素9[4，6-0-(R)-亚乙基-[β]-D-葡萄糖苷]，可作为

的注射溶液或胶囊而从商业渠道获得，其通称为VP-16。替尼泊甙，4′-去甲基-表鬼臼毒素9[4，6-0-(R)-噻吩亚甲基-[β]-D-葡萄糖苷]，可作为

的注射溶液而从商业渠道获得，其通称为VM-26。

抗代谢肿瘤剂为时相特异性抗癌剂，其在细胞周期的S期(DNA合成)起作用，通过抑制DNA合成或者通过抑制嘌呤或嘧啶碱基合成从而限制DNA合成。抗代谢抗肿瘤剂包括但不限于：氟脲嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、颈基嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。5-氟脲嘧啶，5-氟-2，4-(1H，3H)嘧啶二酮，可作为氟脲嘧啶而从商业渠道获得。其他的氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿苷(氟尿苷)以及5-氟脱氧尿苷一磷酸。P阿糖胞苷，1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(1H)-嘧啶酮，可作为

而从商业渠道获得，其通称为Ara-C。其他胞啶类似物包括5-氮杂胞苷和2，2-二氟脱氧胞嘧啶核苷(吉西他滨)。吉西他滨诱发白血球减少症、血小板减少症和黏膜炎。

颈基嘌呤，1，7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮单水合物，可作为而从商业渠道获得。有用的颈基嘌呤类似物是咪唑硫嘌呤。硫鸟嘌呤，2-氨基-1，7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，可作为

而从商业渠道获得。其他嘌呤类似物包括喷司他丁、红羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、氟达拉滨磷酸盐和克拉屈滨。吉西他滨，2′-脱氧-2，2′-二氟胞嘧啶的单盐酸盐([β]-异构体)，可作为而从商业渠道获得。

甲氨蝶呤，N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸，可作为甲氨蝶呤钠而从商业渠道获得。

包括喜树碱和喜树碱衍生物在内的喜树碱，可作为拓扑异构酶I抑制剂而获得或者是在研药物。喜树碱的实例包括但不限于依立替康、拓扑替康以及下述7-(4-甲基哌嗪-亚甲基)-10，11-乙烯二氧-20-喜树碱的不同光学形式。

盐酸依立替康，(4S)-4，11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶)甲酰氧基-1H-吡喃并[3′，4′，6，7]氮茚并[1，2-b]喹啉3，14(4H，12H)-二酮单盐酸盐，可作为

的注射溶液而从商业渠道获得。依立替康为喜树碱的一种衍生物，与其活性代谢物SN-38一起与拓扑异构酶I-DNA络合物结合。盐酸拓扑替康，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4，9-二羟基-1H-吡喃并[3′，4′，6，7]氮茚并[1，2-b]喹啉-3，14-(4H，12H)-二酮单盐酸盐，可作为

的注射溶液而从商业渠道获得。同样令人感兴趣的是目前在研的喜树碱衍生物，其包括(R，S)形式的外消旋混合物以及其R和S对映异构体：由化学名称“7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10，11-乙烯二氧-20(R，S)-喜树碱(外消旋混合物)”或“7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10，11-乙烯二氧-20(R)-喜树碱(R对映异构体)”或“7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10，11-乙烯二氧-20(S)-喜树碱(S对映异构体)”所得知的EMI5.0。在美国专利6,063,923、5,342,947、5,559,235、5,491,237以及于1997年11月24日提交的序列号为08/977,217的美国专利申请中述及该化合物和相关化合物，包括其制造方法。

激素和激素类似物是治疗癌症的有用化合物，其中在激素和癌症生长与其生长缺乏之间有关联。用于癌症治疗的激素和激素类似物的实例包括但不限于：用于治疗儿童体内恶性淋巴瘤和急性白血病的诸如泼尼松和波尼松龙的肾上腺皮质类固醇；用于治疗肾上腺皮质癌和含有雌激素受体的激素依赖性乳腺癌的诸如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦的氨鲁米特和其他芳香酶抑制剂；用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌的诸如醋酸甲地孕酮的孕酮；用于治疗前列腺癌和良性前列腺增生的雌激素、雄性激素和诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙氯地孕酮的抗雄激素以及诸如普罗斯佳和度他雄胺的5[α]还原酶；用于治疗激素依赖性乳腺癌和其他易患癌症的诸如它莫西芬、托瑞米芬、雷诺芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、氟维斯群的抗雌激素，和在美国专利5,681,835、5,877,219和6,207,716中所述的那些选择性雌激素受体调节剂(SERMS)；用于治疗前列腺癌的其刺激释放促黄体生成素(LH)和/或卵泡刺激素(FSH)的促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物，例如诸如醋酸戈舍瑞林和亮丙瑞林的LHRH促效剂与拮抗剂。

用于治疗瘤形成的单克隆抗体包括曲妥珠单抗(赫赛

)、抗Her2抗体、贝伐单抗(阿瓦斯

)和抗VEGF抗体。用于与本发明化合物联用的其他抗肿瘤剂包括帕唑帕尼、VEGF抑制剂和被认为具有抑制血管生成性能的丙戊酸。

因而，本发明中的联合治疗包括进行至少一种式I化合物的给药，以及选择性使用包括诸如免疫抑制剂依维莫司的其他抗肿瘤剂在内的其他治疗剂。这些剂的联用可以是联合或分别给药，当分别给药时，该联用可在接近的时间和相距较远的时间内同时发生或按任何次序的相继出现。可选择式I化合物的量和其他药用活性剂给药的相对定时，以实现想要的组合治疗效果。

在一个实施方式中，治疗患有或易患癌症的受试者的方法包含向需要的受试者进行选自抗肿瘤治疗剂而不是式I或Ia化合物的第二治疗剂、免疫抑制剂的给药的附加步骤。

在一个具体实施方式中，受试者患有或易患乳腺癌，该第二治疗剂选自卡培他滨、帕唑帕尼、曲妥珠单抗、多西紫杉醇、来曲唑、它莫西芬、氟维斯群、紫杉醇、卡铂、贝伐单抗、阿霉素和环磷酰胺。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患子宫颈癌，该第二治疗剂为帕唑帕尼。

仍在另一具体实施方式中，受试者患有或易患头颈癌，该第二治疗剂选自放射治疗和顺铂。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患实体瘤，该第二治疗剂选自去甲长春花碱、依维莫司、紫杉醇、丙戊酸、多西紫杉醇和拓扑特肯。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患非霍奇金淋巴瘤，该第二治疗剂为依维莫司。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患胃癌，该第二治疗剂为紫杉醇。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患卵巢癌，该第二治疗剂选自卡铂和拓扑特肯。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患恶性胶质瘤，该第二治疗剂为帕唑帕尼。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患腹膜癌，该第二治疗剂为拓扑特肯。

在另一具体实施方式中，受试者患有或易患胰腺癌，该第二治疗剂选自奥沙利铂和吉西他滨。

检测具有抗肿瘤活性的化合物

任选的，利用本领域技术人员所熟知的标准检测方法，检测本文所述化合物的减缓、稳定或者降低肿瘤细胞的生存、繁殖或侵袭的能力。肿瘤细胞的生长不受控制正常细胞生长或繁殖的相同调节机制的支配。降低肿瘤生长或繁殖的化合物对治疗肿瘤有用。检测细胞生长和繁殖的方法为本领域所熟知。参见例如：Kittler et a1.，Nature，2004，432(7020)：1036-40以及Miyamoto et al.，Nature，2002，416(6883)：865-9。细胞繁殖的检测通常包括测定细胞复制过程中DNA的合成。在一个实施方式中，利用带标记的DNA前体检测DNA的合成，诸如[³H]-胸腺嘧啶核苷或5-溴-2*-脱氧尿嘧啶核苷[BrdU]，将其加入细胞(或动物体内)，然后在检测细胞周期(复制)S期的过程中将这些前体合并入基因组DNA(Ruefli-Brasse et al.，Science，2003，302(5650)：1581-4；Gu et al.，Science，2003，302(5644)：445-9)。降低肿瘤细胞生存能力的化合物作为抗肿瘤治疗剂是有用的。用以测量细胞活性的检测方法为本领域技术人员所熟知，并在例如下述文献中述及：Crouch et al.，J Immunol Meth，160：81-8；Kangas et al.，Med Biol，1984，62：338-43；Lundin et al.，Meth Enzymol，1986，133：27-42；Petty et al.，J Biolumin Chemilumin，1995，10：29-34；以及Creeet al.Anticancer Drugs，1995，6：398-404。可利用包括MTT(3-(4，5-二甲基噻唑基)-2，5-二苯基四唑溴化物)法在内的各种方法检测细胞活性，参见：Barltrop，Bioorg Med Chem Lett，1991，1：611；Cory et al.，Cancer Comm1991，3：207-12，；Paull，J Heterocyclic Chem，1988，25：911。细胞活性的检测方法也可通过商业渠道获得。这些检测方法包括但不限于：利用荧光素酶技术来检测ATP和量化培育物中细胞的健康或数量的CELLTITER-

萤光细胞活性检测系统(Promega)，以及为乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒素检测的CELLTITER-

萤光细胞活性检测系统(Promega)。

促使肿瘤细胞死亡(例如促使凋亡)的化合物作为抗肿瘤治疗剂尤其有用。用以测定细胞凋亡的检测方法为本领域技术人员所熟知。通过特性化的形态改变来表征凋亡细胞；包括利用光显微镜可清晰地观察到的染色质凝聚、细胞皱缩、膜发泡。凋亡的生化特征包括DNA片段化、特定位置蛋白质的裂解、增强的线粒体膜的通透性以及在细胞膜表面上出现磷脂酰丝氨酸。凋亡的检测方法为本领域技术人员所熟知。代表性的检测方法包括TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法)检测法、半胱天冬酶活性(特别是半胱天冬酶-3)检测法以及fas配体和annexin V检测法。从商业渠道可获得的检测细胞凋亡的产品包括例如Apo-

均质caspase-3/7检测、FragEL TUNEL成套用具(加利福尼亚大学圣地亚哥分校的致癌基因科研产品)，ApoBrdU DNA片段检测(出自加州山景城的BIOVISION公司)，以及凋亡DNA梯状条带快速检测成套用具(出自加州山景城的BIOVISION公司)。

肿瘤细胞具有自其原发地向全身的远点转移或扩散的倾向。检测转移潜能或侵袭性的方法为本领域技术人员所熟知。此检测方法包括体外检测接触抑制消失(Kim et al.，Proc Natl Acad Sci U S A，2004，101：16251-6)，体外增强的软琼脂集落形成(Zhong et al.，Int J Oncol，2004，24(6)：1573-9)，Lewis肺癌3LL细胞肺转移癌模型(Datta et al.，In Vivo，2002，16：451-7)以及Matrigel基细胞侵袭检测(Hagemann et al.Carcinogenesis，2004，25：1543-1549)。细胞侵袭的体内筛选方法为本领域技术人员所熟知，其包括例如无胸腺裸鼠体内的肿瘤生长筛选。通常使用的评价转移的体内检测为Matrigel基细胞侵袭检测(新泽西州富兰克林湖的BD生物科学事业部)。

如果需要，可检测利用本文所述的任何筛选方法所选出的化合物的使用肿瘤动物模型的功效。在一个实施方式中，鼠注射有人类肿瘤细胞。然后每天在根据经验确定的时段内对含肿瘤细胞的鼠注射(例如腹膜内)赋形剂(PBS)或候选化合物。然后对鼠施用安乐死，采集其肿瘤组织，并且使用本文所述方法分析erB2、erB4或EGF受体mRNA或蛋白质的水平。期望以降低有关控制水平的erbB2或erbB4mRNA或蛋白质表达的化合物对治疗受试者(例如人类患者)体内的肿瘤是有效的。另外，减弱EGF受体磷酸化或降低EGF受体活性的化合物对于治疗诸如乳腺癌的肿瘤疾病是有用的。

如果需要，分析注射有人类肿瘤细胞的鼠体内的肿瘤负荷上的候选化合物的疗效。使肿瘤细胞生长成块。然后每天在根据经验确定的时段内用式I或Ia化合物或者赋形剂(PBS)对鼠进行治疗。对鼠施用安乐死并采集其肿瘤组织。将用所选的候选化合物治疗鼠体内肿瘤组织的块与相应控制下的鼠体内的肿瘤组织的块进行比较。

诊断方法和成套用具

本发明中的化合物和组合物，作为测定溶液中或诸如血浆的生物样品中的拉帕替尼的浓度、检验拉帕替尼的新陈代谢及其他分析研究的方法的试剂也是有用的。

本发明的一个实施方式提供了测定溶液中或生物样品中拉帕替尼的浓度的方法，该方法包括以下步骤：

a)向生物样品的溶液中加入已知浓度的式Ia化合物；

b)使该溶液或生物样品经过将拉帕替尼与式Ia化合物区别开来的测量装置；

c)校准该测量装置，以使Ia化合物的被检测量与加入生物样品或溶液中的Ia化合物的已知浓度相关联；

d)用所述校准的测量装置测量生物样品中拉帕替尼的量；以及

e)利用Ia化合物的被检测量与所得浓度之间的关联性确定样品溶液中拉帕替尼的浓度。

可将拉帕替尼与相应式Ia化合物区别开来的测量装置包括可将相互之间仅仅同位素丰度不同的两种化合物区别开来的任何测量装置。代表性的测量装置包括质谱仪、核磁共振波谱仪或红外光谱仪。

本发明的另一实施方式提供了评价式I或Ia化合物的代谢稳定性的方法，该方法包括在一时段内将代谢酶源与化合物接触以及将I或Ia化合物的量与该时段后的其代谢产物进行比较的步骤。

本发明的相关实施方式提供了评价紧随对该化合物进行给药之后患者体内式I或Ia化合物的代谢稳定性的方法。该方法包括：紧随对受试者进行式I或Ia化合物的给药之后在一时间段内从患者身上获得血清、尿或粪便样品的步骤；以及将该化合物的量与血清、尿或粪便样品中该化合物的代谢产物进行比较的步骤。

本发明还提供了用以治疗肿瘤(癌症)的成套用具。这些成套用具包含(a)含有式I或Ia化合物、其盐、水合物或溶剂化物的药物组合物，其中所述药物组合物在容器里；以及(b)描述使用药物组合物治疗肿瘤(癌症)的方法的说明书。在具体实施方式中，该成套用具用以治疗HER-2阳性乳腺癌。

该容器可以是能够盛放所述药物组合物的任何器皿或者其他密封或可密封装置。其实例包括瓶、安瓿瓶、其中各分部或室内包含单剂量所述组合物的分开的或多室套瓶、其中各分部包含单剂量所述组合物的分开的箔袋或者配有单剂量所述组合物的分配器。该容器可以是本领域技术人员所熟知的任何常规外形或形状，可由药物学上可接受的材料构成，例如纸盒或硬纸壳盒、玻璃或塑料瓶或罐、可再密封袋(例如，将片剂的“再装品”盛放至不同容器中)、或者根据治疗方案压紧包装的单剂量泡罩包装。所用的容器取决于所涉及到的准确剂型，例如常规硬纸壳盒通常不用于盛放液体悬浮液。在单个包装中将一个以上的容器一起使用以出售单个剂型是可实行的。例如，片剂可容纳于瓶内，相反其可容纳于盒内。在一个实施方式中，该容器是泡罩包装。

本发明的成套用具也可包括进行给药或按量配给单元剂量的药物组合物的装置。如果所述组合物为可吸入性组合物，则该装置可包括吸入器；如果所述组合物为可注射性组合物，则该装置可包括注射器和针头；如果所述组合物为口服液体组合物，则其包括带有或不带有体积标识的注射器、匙、泵或器皿；或者适于该成套用具内所存有的组合物的剂量配方的任何其他测量或输送装置。

在一定的实施方式中，本发明的成套用具可在容器的各器皿中包含含有第二治疗剂的药物组合物，诸如用于与本发明的化合物共同给药的上述那些药物之一。

参考下述实施例，将更容易理解概述的此本发明；包括其目的仅在于说明本发明的一些方面和实施方式，并不旨在以任何方式限制本发明。

附图说明

图1描述了CYP3A4 SUPERSOMES^TM中本发明的不同化合物对比于拉帕替尼的稳定性；

图2描述了老鼠体内静脉给药后本发明的不同化合物对比拉帕替尼的药物动力学；

图3描述了检验在老鼠体内静脉给药后对比拉帕替尼的本发明的不同种化合物的药物动力学的分离实验。

具体实施方式

实施例1：制备不含重氢的中间体17

方案1.

方案1描述了合成用于制备其中Y^3a、Y^4a和Y^4b均为氢的本发明化合物的确定中间体。下面将进一步描述综合方案1。

制取2-氯-1-(3-氟苄氧基-4-硝基苯)(12)。向DMF(300ml)中有2-氯-4-硝基酚(10)(77.6g，0.4484mol，1.1当量)的溶液中缓慢加入粉末状碳酸钾(73.1g，0.5300mol，1.3当量)。形成黄色的浓悬浮液，反应温度自23℃升至42℃。将反应混合物加热至80℃，在温度为80℃-85℃时逐滴加入3-氟苄溴(11)(77.1g，50ml，0.4077mol，1.0当量)，耗时约0.5小时，利用DMF(25ml)洗涤附加的漏斗。将浓悬浮液加热至95℃并维持4.5小时。将反应混合物冷却至室温然后至10℃。在温度小于20℃时逐滴加入水(500ml)。用水(750ml)进一步稀释黄色悬浮液，并搅拌1小时。过滤固体，用水(2×1L)洗涤固体，在滤纸上面干燥两小时，然后过夜自然干燥。用10％甲苯/庚烷(500ml)然后用庚烷(500ml)洗涤固体，在滤纸上面干燥1小时，然后在温度为约40℃时在真空烘箱中干燥7小时，得到111.3g(97％)的黄白色固体12，其不用进一步纯化即可使用。

制取3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺(13)。在30psi氢气下氢化由12(56.2g，0.20mol)、5％Pt-C(5.0g，50％水)和THF(500ml)组成的混合物，直至停止吸氢(约2.75小时)。通过铁铝酸四钙石(celite)垫层过滤混合物，然后用THF(750ml)洗涤铁铝酸四钙石垫层。减压浓缩滤液至较小体积，残留THF与甲苯(300ml)共同蒸发。将混合物浓缩至较小体积，然后加入晶种。结晶完毕，将残留甲苯与庚烷(2×300ml)共同蒸发。用庚烷(200ml)将残留固体研磨成粉末状，过滤，干燥得到47.6g(95％)的黄白色固体13，其不用进一步纯化即可使用。

制取4-氯-6-碘喹唑啉(14)。在温度为约165℃时，持续加热由2-氨基-5-碘苯甲酸(101.3g；0.3852mol)和甲酰胺(210ml)组成的悬浮液3.75小时，在温度为约100℃时形成深棕色溶液。将混合物冷却至室温，并用50％的含水乙醇(“EtOH”)(500ml)稀释该浓悬浮液。过滤固体，用50％的含水EtOH(250ml)洗涤，在滤纸上面干燥0.5小时。先用EtOH/庚烷(1∶1，v/v，500ml)再用庚烷(250ml)洗涤该固体。过夜自然干燥该固体，然后在温度为约40℃时在真空烘箱中干燥7小时，得到73.9g(71％)的灰棕色固体6-碘喹唑啉-4-酮，其不用进一步纯化即可使用。

向由6-碘喹唑啉-4-酮(12.6g，46.2mmol，1.0当量)、DMF(0.5ml)和1，2-二氯乙烷(300ml)组成的悬浮液中加入草酰氯(11.8g，8.1ml，92.6mmol，2.0当量)，结果反应温度自21℃升至25℃。在温度为约75℃时过夜加热该混合物。用NaHCO₃淬灭的试样的TLC(50％的乙酸乙酯/庚烷)显示反应未完全。将混合物冷却至室温，向其加入草酰氯(2.0ml，0.5当量)，回流该混合物7小时。将透明的深棕色溶液冷却至室温，并将其非常缓慢地加入10％的含水碳酸钠溶液(500ml)中。用乙酸乙酯(500ml)萃取该含水混合物。分离出绝大多数水相，并过滤剩余混合物，以除去界面处的一些不溶物。对滤液进行分相，用盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。用冷庚烷(约200ml)将所得固体变成粉末状，过滤并干燥，得到11.2g(84％)的淡棕色固体14，其不用进一步纯化即可使用。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-碘喹唑啉-4-基)胺盐酸盐(15)。向2-丙醇(300ml)中有14(12.5g，43.0mmol)的悬浮液中加入13(11.2g，44.3mmol)。将所得悬浮液回流4小时，然后减压除去挥发物，用热丙酮(400ml)将该固体粗品变成粉末状，在温度为60℃时干燥2小时，得到灰黄色固体15(16.4g，70％)。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-甲醛(carbaldehyde)(17)。向乙醇(270ml)中有15(19.4g，35.8mmol)的悬浮液中加入三乙胺(24.9g，179mmol)，然后加入5-甲醛基呋喃-2-硼酸(16)(10.0g，71.6mmol)。用氮气净化所得混合物20分钟，然后加入二氯[1，1’-二茂铁磷酸]钯二氯甲烷(Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂)(1.18g，1.43mmol)。将反应混合物回流2小时，减压除去挥发物。用水(500ml)吸收粗制残留物。过滤沉淀物，用水洗涤，用甲醇(200ml)变成粉末状，在温度为60℃时将其干燥，得到棕褐色固体17(16.0g，94％)。

实施例2：制备化合物100的甲苯磺酸盐和拉帕替尼甲苯磺酸盐。

方案2.

方案2描述了化合物100和拉帕替尼的甲苯磺酸盐的合成。下面将进一步描述综合方案2。

制取2-甲基磺酰基乙胺盐酸盐(18)。将由2-甲磺酰基乙胺(5.0g，54.9mmol，1.0当量)、饱和碳酸氢钠溶液(100ml)和四氢呋喃(200ml)组成的混合物冷却至约13℃，并缓慢加入二碳酸二叔丁酯(13.2g，60.4mmol，1.1当量)，其中伴随有反应温度的略微升高(2℃)。使混合物的温度温热至室温，并搅拌3小时。用水(100ml)和乙酸乙酯(“EtOAc”)(200ml)稀释混合物。用盐水洗涤有机相，硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩。将残留的灰黄色油状物放置于高度真空环境中1小时，得到12.7g的含有残留叔丁醇和/或二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)的油状物(2-甲磺酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯粗品，其不用进一步纯化即可使用。

向二氯甲烷(300ml)中有(2-甲磺酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯粗品(12.7g)和碳酸氢钠(10.1g，120.8mmol)的悬浮液中分批加入缓和冷却(17-20℃)的70-75％的间氯过氧苯甲酸(MCPBA)(27.0g，109.8mmol)。加毕，在室温下搅拌该白色浓悬浮液2小时，其间TLC(乙酸乙酯/庚烷，1∶1，v/v)以及LCMS显示氧化反应已完全。用二氯甲烷(DCM)(200ml)稀释混合物，并且依次用10％的含水碳酸钠(200ml)、水(200ml)和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤，减压浓缩，得到灰黄色油状物。使用晶种诱发结晶。用冷庚烷将固体变成粉末状，过滤，干燥，得到10.6g(86％来自2-甲磺酰基乙胺)的(2-甲磺酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯的白色固体。

将2M氯化氢的二乙醚溶液(50ml)加入乙酸乙酯(250ml)中有(2-甲磺酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯(10.6g，47.5mmol)的溶液中。约0.25小时之后，开始形成沉淀物。在室温下过夜搅拌该悬浮液。TLC和LCMS显示未完全反应。加入2M氯化氢的二乙醚溶液(120ml)，在室温下过夜搅拌该悬浮液。收集固体，用乙酸乙酯(100ml)洗涤，并在氮气气氛中干燥，得到5.9g(78％)白色固体18。

制取2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙胺盐酸盐(18-d₂)。在室温下，向无水四氢呋喃(100ml)中有2-甲磺酰基乙腈(5.95g，50mmol)的溶液中逐滴加入1.0M BD₃的四氢呋喃溶液(50ml，50mmol)。加毕，在温度为50℃时过夜加热该反应，冷却至室温，然后用甲醇(300ml)缓慢淬灭。将所得溶液回流3小时并真空蒸发。用四氢呋喃(300ml)和饱和碳酸氢钠(300ml)吸收粗制残留物，并向其中加入二碳酸二叔丁酯(10.9g，50mmol)。过夜搅拌所得溶液，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到粘性油状物(13g)。将油状物粗品溶于1，4-二氧六环(100ml)中，并加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(100ml)。室温搅拌该溶液2小时，真空蒸发，并用甲醇驱赶(chase)，得到白色固体2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙胺盐酸盐(4.7g，75％)，其不用进一步纯化即可使用。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-基甲基-(2-甲磺酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯(20)。将三乙胺(4.4ml，31.8mmol)加入二氯甲烷(500ml)中有18(4.0g，25.05mmol)的悬浮液中，室温搅拌该悬浮液1小时。加入17(7.1g，15mmol)，室温搅拌该悬浮液1小时，得到澄清的棕黄色溶液。加入NaBH(OAc)₃(9.7g，50.1mmol)，过夜搅拌所得悬浮液，然后通过缓慢加入含水的10％的碳酸钠(300ml)淬灭。30分钟后分离水相，用乙酸乙酯(3×200ml)萃取含水层。用硫酸钠干燥所合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到棕色油状物。用四氢呋喃(300ml)和饱和碳酸氢钠吸收油状物粗品，并加入二碳酸二叔丁酯(6.6g，30mmol)。室温搅拌该所得溶液2小时，用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到油状物粗品，经过以3∶1的乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化该粗品，得到褐色泡状物的化合物20(7.0g，69％)。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-{5-[(2-甲磺酰基乙胺)-甲基]呋喃-2-基}-喹唑啉-4-基)胺4-甲苯磺酸盐(拉帕替尼的甲苯磺酸盐)。在水浴中，向二氯甲烷(240ml)中有20(7.0g，10.3mmol)的溶液中加入三氟乙酸(20ml)。室温下过夜搅拌该反应混合物，其后减压除去挥发物，得到以碳酸氢钠(200ml)中和的粘性油状物。用乙酸乙酯(3×300ml)萃取该所得悬浮液。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到棕黄色固体(6g)。在温度为65℃时将固体溶于无水乙醇(300ml)中，并在该温度下逐滴加入乙醇(25ml)中有对甲苯磺酸一水合物(1.84g，9.7mmol)的溶液。在回流条件下搅拌该所得悬浮液1小时。将该悬浮液又冷却至室温，过滤，并用少量乙醇洗涤。在温度为70℃时干燥所收集的固体，得到灰黄色固体拉帕替尼的甲苯磺酸盐(6.77g，93％)。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.29(s，3H)，3.14(s，3H)，3.41-3.58(m，4H)，4.41(s，2H)，5.28(s，2H)，6.85(d，J＝3.5Hz，1H)，7.10(dd，J₁＝7.9Hz，J₂＝0.59Hz，2H)，7.16-7.28(m，2H)，7.31-7.35(m，3H)，7.45-7.50(m，3H)，7.73(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.3Hz，1H)，7.87(d，J＝8.8Hz，1H)，8.00(d，J＝2.3Hz，1H)，8.24(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝1.8Hz，1H)，8.61(s，1H)，8.85(s，1H)，10.00(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.62，41.62，43.76，50.68，70.18，108.79，114.57，114.86，115.02，115.27，115.54，115.89，118.31，121.79，123.37，123.98，124.02，125.16，126.14，128.42，128.72，129.48，131.19，131.29，133.34，138.32，140.20，140.30，146.20，150.64，154.01，154.97，158.39，161.19，164.41。¹⁹F-NMR(282MHz，DMSO-d₆)：δ-113.27。保留时间(HPLC，方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，3.3分钟内2-95％ACN和0.1％甲酸，1.7分钟内保留在95％ACN中)：2.71分钟。MS(M+H⁺)：581.1。元素分析(C₃₆H₃₄ClFN₄O₇S₂)：计算值：C＝57.40，H＝4.55，Cl＝4.71，F＝2.52，N＝7.44，S＝8.51。实验值：C＝57.24，H＝4.47，Cl＝4.92，F＝2.62，N＝7.40，S＝8.53。

(5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-基甲基)-(2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙基)氨基甲酸叔丁酯(19)。将三乙胺(4.4ml，31.8mmol)加入二氯甲烷(500ml)中有18-d₂(4.05g，25.05mmol)的悬浮液中，室温搅拌该混合物1小时。加入17(7.1g，15mmol)，室温搅拌该悬浮液1小时，得到澄清的棕黄色溶液。向此溶液中加入NaBH(OAc)₃(9.7g，50.1mmol)。过夜搅拌该悬浮液，通过缓慢加入含水的10％的碳酸钠(300ml)淬灭反应。30分钟后加入二碳酸二叔丁酯(6.6g，30mmol)。室温搅拌该所得溶液2小时。分层，用乙酸乙酯(3×500ml)萃取含水层。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到油状物粗品，经过以3∶1的乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化该粗品，得到褐色泡状物的化合物19(6.0g，59％)。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-{5-[(2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙胺)-甲基]呋喃-2-基}-喹唑啉-4-基)胺4-甲苯磺酸盐(化合物100的甲苯磺酸盐)。在水浴中，向二氯甲烷(240ml)中有19(6.0g，8.8mmol)的溶液中加入三氟乙酸(20ml)。室温下过夜搅拌该反应混合物，其后减压除去挥发物，得到以碳酸氢钠(300ml)中和的粘性油状物。用乙酸乙酯(3×300ml)萃取该所得悬浮液。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到棕黄色固体(5.1g)。在温度为65℃时将固体溶于无水乙醇(300ml)中，并在该温度下加入乙醇(25ml)中有对甲苯磺酸一水合物(1.56g，8.22mmol)的溶液。在回流条件下搅拌该所得悬浮液1小时。将该悬浮液重新冷却至室温，过滤，并用少量乙醇洗涤。在温度为70℃时干燥所收集的固体，得到灰黄色固体的化合物100的甲苯磺酸盐(5.32g，80％)。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.29(s，3H)，3.14(s，3H)，3.54(s，2H)，4.41(s，2H)，5.28(s，2H)，6.85(d，J＝3.2Hz，1H)，7.09-7.20(m，4H)，7.28-7.35(m，3H)，7.47-7.49(m，3H)，7.73(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.0Hz，1H)，7.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.99(d，J＝2.1Hz，1H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H)，8.61(s，1H)，8.85(s，1H)，10.00(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ21.62，41.63，43.70，50.50，70.16，108.79，114.57，114.87，115.02，115.27，115.55，115.90，118.32，121.79，123.36，123.99，124.02，125.16，126.14，128.41，128.71，129.46，131.19，131.30，133.34，138.27，140.20，146.27，150.65，154.02，155.00，158.40，164.41。¹⁹F-NMR(282MHz，DMSO-d₆)：δ-113.27。保留时间(HPLC，方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，3.3分钟内2-95％ACN和0.1％甲酸，1.7分钟内保留在95％ACN中)：2.71分钟。MS(M+H⁺)：582.9。元素分析(C₃₆H₃₂D₂ClFN₄O₇S₂)：计算值：C＝57.25，H＝4.80，Cl＝4.69，F＝2.52，N＝7.42，S＝8.49。实验值：C＝56.87，H＝4.30，Cl＝5.47，F＝2.54，N＝7.31，S＝8.49。

实施例3：合成三丁基甲锡烷基试剂24。

方案3.

方案3描述了用以合成本发明化合物的三丁基甲锡烷基试剂的合成。下面进一步描述综合方案3。

制取5-溴-呋喃-2-羧酸甲氧基-甲基-胺(23)。如方案4所示，在冰/水浴中，向二氯甲烷(“DCM”)中有1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(“EDCI”)盐酸盐(75.0g，391.6mmol)的悬浮液中加入三乙胺(124.8ml，890.0mmol)。五分钟后加入5-溴-2-糠酸(22)(68g，356.0mmol)和无水1-羟基-苯并-三氮唑(HOBt)(52.9g，391.6mmol)。在冰/水浴中另搅拌该反应混合物10分钟，加入邻-甲基-n-甲基羟基氨基盐酸盐(38.2g，391.6mmol)。将该反应温热至室温，过夜。用水(1.5L)淬灭该反应，分层。用DCM(2×500ml)萃取含水层，用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到油状物粗品，经过以1∶4的乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化该粗品，得到灰黄色油状物的化合物23(78g，85％)。

制取5-三丁基甲锡烷-呋喃-2-羧酸甲氧基-甲基-胺(24)。在温度为-20℃时，在20分钟内向无水THF(450ml)中有双三丁基锡(200g，344.8mmol)的溶液中加入正丁基锂(1.6M，在己烷中，210.6ml，336.9mmol)。然后将反应混合物冷却至-50℃，加入溴化亚铜二甲硫醚混合物(34.6g，168.5mmol)。将反应混合物又温热至-40℃，并在此温度下持留20分钟。然后将该反应混合物冷却至-78℃，加入THF(150ml)中有23(26.3g，112.3mmol)的溶液。在温度为-78℃下搅拌该反应3小时，然后在-40℃搅拌1小时。移走冷却槽，用20重量％的氯化铵(1.5L)淬灭该反应，用甲基叔丁基醚(MTBE)(1.0L)稀释。15分钟后出现分层，用MTBE(2×1.0L)萃取含水层。用硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发。用1∶1的MTBE/庚烷吸收该粗制残留物，并将其直接负载于硅胶柱(2kg)上，用1∶1的MTBE/庚烷洗脱，获得灰黄色油状物的化合物24(34.0g，68％)。

实施例4：制备含单一重氢的中间体17。

方案4.

方案4描述了用于制备其中Y^3a为重氢、Y^4a和Y^4b均为氢的本发明化合物的确定中间体的合成。下面进一步描述该综合方案4。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-羧酸甲氧基-甲基-胺(25)。室温下向1，2-二甲氧基乙烷(700ml)中有15(27.0g，53.3mmol)的悬浮液中加入三乙胺(7.5ml，53.3mmol)。搅拌该反应混合物10分钟，用氮气净化30分钟。向上述形成的溶液中加入24(34.0g，76.5mmol)，然后加入双三苯基膦二氯化钯((PPh₃)₂PdCl₂)(2.7g)。将该反应加热至50℃，直至该反应完全(约24-48小时)。当完成反应之后，真空蒸发以除去80％的溶剂，并用MTBE(500ml)稀释。过滤沉淀物，用MTBE(500ml)和水(500ml)洗涤，在温度为50℃时过夜干燥，获得棕黄色固体的化合物25(22.0g，77％)。经过以1∶1至4∶1的乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化少量样品，获得白色固体化合物25。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-甲醛-d(17-d1)。在维持内温低于5℃的同时，向冰/水/盐浴中的25(22.0g，41.3mmol)的THF溶液中分批加入氘代氢化锂铝(1.73g，41.3mmol)。在冷却槽中搅拌该反应1小时，用重水(20ml)淬灭，用乙酸乙酯(1.0L)稀释，硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发，得到棕黄色固体目标化合物(17-d1)，定量收率。

实施例5：合成七氘代胺试剂30。

方案5描述了用于制备其中Y^1a、Y^1b、Y^1c、Y^2a、Y^2b、Y^5a和Y^5b均为重氢的本发明化合物的七氘代氢胺试剂的合成。下面进一步描述该综合方案5。

制取2-(2-溴-1，1，2，2，-d₄-乙基)-异氮(杂)茚-1，3-二酮(27)。在室温下，向无水DMF(580ml)中有1，2-二溴乙烷(重氢4)(100g，521.1mmol)的溶液中加入邻苯二甲酰亚胺钾盐(26)(48.3g，260.6mmol)。室温下搅拌所得混合物48小时，过滤，用少量DMF洗涤。用MTBE(1.6L)稀释该滤液，用水(1.4L)洗涤。用MTBE(2×1.2L)萃取含水层。用水(2×1.0L)洗涤所合并的有机层，硫酸钠干燥，真空干燥，获得白色固体粗品，用庚烷(600ml)将其变成粉末状，得到白色固体化合物27(105g，含双烷基化产物)。

制取2-(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙基)-异氮(杂)茚-1，3-二酮(28)。向0℃的DMF(360ml)中有27(66.8g，258.7mmol)的溶液中加入硫酸氢钠水合物(23.0g，310mmol)。在温度为0℃时搅拌该反应混合物20分钟，在室温下搅拌1小时。在水浴中向上述形成的反应混合物中加入碳酸钾(47.6g，344.9mmol)，然后加入碘甲烷-d₃(50g，344.9mmol)。室温下过夜搅拌该反应，用水(1.5L)淬灭，用MTBE(3×1.0L)萃取。用盐水(1.5L)和水(1.5L)洗涤所合并的有机层，硫酸钠干燥，真空干燥，得到固体粗品，经过以1∶4 MTBE/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化，得到白色固体的化合物28(39.72g，67％)。

制取2-(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(29)。向乙醇(1.3L)中有28(39.7g，174.0mmol)的溶液中加入一水合肼(10.4g，208.8mmol)。在回流条件下过夜搅拌该反应，冷却至室温，用乙醚(1.5L)稀释，过滤，用乙醚(500ml)洗涤。在温度为30℃时真空蒸发该滤液，得到透明油状物。用THF/水(300ml/300ml)吸收该油状物，并加入二碳酸二叔丁酯(45.6g，208.8mmol)。室温下搅拌该反应混合物2小时，用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到油状物粗品，经过以1∶4 MTBE/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化，获得透明油状物(20.0g)。在水浴中将该油状物(20g，101.0mmol)溶于DCM(575ml)中，向其加入碳酸氢钠(19.3g，230.0mmol)。分批加入3-氯过氧苯甲酸(41.5g，201.5mmol)。室温下搅拌该反应混合物2小时，用DCM(1.7L)和水(1.7L)稀释。分层，用DCM(1L)萃取含水层。用10重量％的碳酸钾(1.0L)和水(1.0L)洗涤所合并的有机层，硫酸钠干燥，真空干燥，得到固体，用庚烷(400ml)变成粉末状，得到结晶性白色固体化合物29(25.3g，63％)。

制取2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙胺盐酸盐(30)。向1，4-二氧六环(50ml)中有29(13.0g，56.2mmol)的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(250ml)。室温下过夜搅拌该反应混合物，真空蒸发，获得白色固体的化合物30，定量收率。

实施例6：合成化合物101的甲苯磺酸盐。

方案6.

方案6描述了化合物101的甲苯磺酸盐的合成。下面进一步描述综合方案6。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-基-甲基-d₂)-(2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙基)氨基甲酸叔丁酯(31)。室温下向DCM(400ml)中有上述所得18-d2(4.7g，37.5mmol)的悬浮液中加入三乙胺(8.0ml，50mmol)。10分钟后加入17-d1(6.4g，13.5mmol)和硫酸钠(20g)。室温下搅拌该反应混合物3小时之后，分批加入氘代硼氢化钠(1.88g，45.8mmol)。室温下过夜搅拌该所得混合物，用重水(200ml)中有10重量％的碳酸钾淬灭。20分钟后加入二碳酸二叔丁酯(10.9g，50.0mmol)，室温搅拌该反应2小时。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)萃取该水层。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，获得粗制残留物，经过以乙酸乙酯为洗脱液的硅胶柱纯化，获得粘性油状物的化合物31(6.7g，72％)。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-{5-[(2-甲磺酰基-1，1-d₂-乙胺)-d₂-甲基]呋喃-2-基}-喹唑啉-4-基)胺双甲苯磺酸盐(化合物101的甲苯磺酸盐)。在室温下，向1，4-二氧六环(40ml)中有31(6.7g，9.77mmol)的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(200ml)。室温时搅拌该反应混合物3小时，然后真空蒸发。将所得黄色固体悬浮于乙酸乙酯(300ml)中，用重水(100ml)中有10重量％的碳酸钾中和。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到棕黄色泡状物(3.5g，5.99mmol)。将棕黄色泡状物溶于THF(15ml)中，在温度为60℃时向其中加入无水乙醇(50ml)中有对甲苯磺酸盐的一水合物(2.85g，15.0mmol)。回流该悬浮液1小时，然后冷却至室温。通过抽滤收集沉淀物，用少量无水乙醇洗涤，然后在温度为40℃时干燥4小时，获得黄色固体的目标化合物(化合物101的甲磺酸盐)(3.6g)。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.28(s，6H)，3.13(s，3H)，3.57(s，2H)，5.32(s，2H)，6.90(d，J＝3.5Hz，1H)，7.10(d，J＝7.9Hz，4H)，7.18-7.27(m，2H)，7.31-7.36(m，3H)，7.49(d，J＝7.9，4H)，7.49(m，1H)，7.62(dd，J₁＝8.9Hz，J₂＝2.5Hz，1H)，7.87(d，J＝2.6Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，8.43(d，J＝8.9Hz，1H)，8.94(s，1H)，9.05(s，1H)，9.25(bs，1H)，11.40(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.46，41.37，50.06，70.03，110.15，114.62，114.72，114.84，114.91，115.38，115.67，115.83，119.14，121.93，124.05，124.08，125.35，126.14，127.08，128.82，130.33，130.78，131.30，131.40，132.06，138.60，140.00，140.09，145.88，147.28，152.55，153.04，160.21，161.27，164.51。¹⁹F-NMR(282MHz，DMSO-d₆)：δ-113.37。保留时间(HPLC，方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，3.3分钟内2-95％ACN和0.1％甲酸，1.7分钟内保留在95％ACN中)：2.72分钟。MS(M+H⁺)：585.3。元素分析(C₄₃H₃₈D₄ClFN₄O₁₀S₃)：计算值：C＝55.56，H＝4.55，Cl＝3.81，F＝2.04，N＝6.03，S＝10.35。实验值：C＝55.61，H＝4.45，Cl＝4.22，F＝2.14，N＝5.92，S＝10.37。

实施例7：合成化合物102的甲苯磺酸盐。

方案7.

方案7描述了化合物102的甲苯磺酸盐的合成。下面进一步详述综合方案7。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-基-甲基-d₂)-(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙基)氨基甲酸叔丁酯(33)。向DCM(850ml)中有30(约65.0mmol)的悬浮液中加入三乙胺(9.1ml，65mmol)。10分钟后加入17-d1(12.0g，25.2mmol)和硫酸钠(20g)。室温搅拌该反应混合物3小时之后，分批加入氘代硼氢化钠(3.5g，85.7mmol)。室温下过夜搅拌该所得混合物，用重水(300ml)中有10重量％的碳酸钾淬灭。20分钟后加入二碳酸二叔丁酯(14.2g，65.0mmol)，室温下搅拌该反应2小时。分层，用乙酸乙酯(2×400ml)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机相，真空蒸发，得到粗制残留物，经过以乙酸乙酯为洗脱液的硅胶柱纯化，获得橙色泡状物的化合物33(8.0g，46％)。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-{5-[(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙胺)-d₂-甲基]呋喃-2-基}-喹唑啉-4-基)胺双甲苯磺酸盐(化合物102的甲苯磺酸盐)。室温下，向1，4-二氧六环(50ml)中有33(8.0g，11.6mmol)的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(300ml)。室温时搅拌该反应混合物3小时，然后真空蒸发。将所得黄色固体悬浮于乙酸乙酯(400ml)中，用重水(200ml)中有10重量％的碳酸钾中和。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到棕黄色固体(约11.6mmol)。将固体溶于THF(40ml)中，在温度为60℃时向其中加入无水乙醇(150ml)中有对甲苯磺酸盐的一水合物(5.5g，29.0mmol)。回流该悬浮液1小时，然后冷却至室温。通过抽滤收集沉淀物，用少量无水乙醇洗涤，然后在温度为40℃时干燥4小时，获得黄色固体的目标化合物(化合物102的甲磺酸盐)(7.9g)。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.28(s，6H)，5.31(s，2H)，6.90(d，J＝3.5Hz，1H)，7.10(d，J＝7.9Hz，4H)，7.18-7.25(m，2H)，7.31-7.36(m，3H)，7.48(d，J＝8.2，4H)，7.48(m，1H)，7.62(dd，J₁＝9.1Hz，J₂＝2.3Hz，1H)，7.88(d，J＝2.6Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，8.41(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝1.4Hz，1H)，8.92(s，1H)，9.03(s，1H)，9.28(bs，1H)，11.32(bs，1H)。1³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.45，70.13，110.11，114.59，114.76，114.89，114.93，115.36，115.63，115.80，119.16，122.01，124.02，124.05，125.29，126.15，127.02，128.79，130.32，130.91，131.26，131.38，132.03，138.54，140.02，140.12，145.98，147.26，151.97，152.55，153.11，160.18，161.30，164.53。¹⁹F-NMR(282MHz，DMSO-d₆)：δ-113.40。保留时间(HPLC，方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，3.3分钟内2-95％ACN和0.1％甲酸，1.7分钟内保留在95％ACN中)：2.74分钟。MS(M+H⁺)：590.1。元素分析(C₄₃H₃₃D₉ClFN₄O₁₀S₃)：计算值：C＝55.27，H＝4.53，Cl＝3.79，F＝2.03，N＝6.03，S＝10.29。实验值：C＝55.28，H＝4.56，Cl＝3.90，F＝2.00，N＝6.00，S＝10.16。

实施例8：合成化合物103的甲苯磺酸盐。

方案8.

方案8描述了化合物103的甲苯磺酸盐的合成。下面进一步详述综合方案8。

制取(5-{4-[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-基甲基)-(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙基)氨基甲酸叔丁酯(35)。向DCM(850ml)中有30(约56.2mmol)的悬浮液中加入三乙胺(9.1ml，65mmol)。10分钟后加入17(13.0g，27.4mmol)。室温搅拌该反应混合物1小时之后，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(17.8g，91.5mmol)。室温下过夜搅拌该所得混合物，用重水(300ml)中的10重量％的碳酸钾淬灭。20分钟后加入二碳酸二叔丁酯(14.2g，65.0mmol)，室温下搅拌该反应2小时。分层，用乙酸乙酯(2×400ml)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机相，真空蒸发，得到粗制残留物，经过以乙酸乙酯为洗脱液的硅胶柱纯化，获得橙色泡状物的化合物35(10.5g，56％)。

制取[3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基](6-{5-[(2-d₃-甲磺酰基-1，1，2，2-d₄-乙胺)-甲基]呋喃-2-基}-喹唑啉-4-基)胺双甲苯磺酸盐(化合物103的甲苯磺酸盐)。室温下，向35(10.5g，15.3mmol)的1，4-二氧六环溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(200ml)。室温下搅拌该反应混合物3小时，然后真空蒸发。将所得黄色固体悬浮于乙酸乙酯(300ml)中，用重水(200ml)中的10重量％的碳酸钾中和。分层，用乙酸乙酯(400ml)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到棕黄色固体(6.0g，10.2mmol)。将棕黄色固体溶于THF(20ml)中，在温度为60℃时向其中加入无水乙醇(80ml)中有对甲苯磺酸盐的一水合物(4.9g，25.5mmol)。回流搅拌该悬浮液1小时，然后冷却至室温。通过抽滤收集沉淀物，用少量无水乙醇洗涤，然后在温度为40℃时干燥4小时，获得黄色固体的目标化合物(化合物103的甲磺酸盐)(4.8g)。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.28(s，6H)，4.48(s，2H)，5.31(s，2H)，6.89(d，J＝3.5Hz，1H)，7.10(d，J＝7.9Hz，4H)，7.17-7.35(m，5H)，7.49(d，J＝7.9，4H)，7.49(m，1H)，7.62(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.3Hz，1H)，7.87(d，J＝2.6Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，8.43(d，J＝8.8Hz，1H)，8.93(s，1H)，9.05(s，1H)，9.33(bs，1H)，11.38(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.45，43.34，70.13，110.14，114.59，114.76，114.92，115.35，115.63，115.80，119.14，122.01，124.02，124.05，125.31，126.15，127.04，128.81，130.36，130.90，131.26，131.38，132.08，138.62，139.29，140.03，140.13，145.86，147.33，151.93，152.56，153.10，160.19，161.30，164.53。¹⁹F-NMR(282MHz，DMSO-d₆)：δ-113.39。保留时间(HPLC，方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，3.3分钟内2-95％ ACN和0.1％甲酸，1.7分钟内保留在95％ACN中)：2.72分钟。MS(M+H⁺)：588.3。元素分析(C₄₃H₃₅D₇ClFN₄O₁₀S₃)：计算值：C＝55.38，H＝4.54，Cl＝3.80，F＝2.04，N＝6.01，S＝10.32。实验值：C＝55.07，H＝4.24，Cl＝4.50，F＝2.06，N＝5.86，S＝10.17。

实施例9：制备含双重氢的中间体40。

方案9.

方案9描述了用于制备其中Y^4a和Y^4b均为重氢的本发明化合物的一定中间体的合成。下面进一步描述该综合方案9。

制取3-氟-α，α-d₂-苯甲醇(37)。向THF(2.0L)中有3-氟苯甲酸甲酯(36；182g，1.181mol)的溶液中分批加入LiAlD₄(50g，1.181mol)。将反应温热至室温，然后在室温下过夜搅拌。每当反应完毕，将该反应混合物冷却至0℃，然后用水(50ml)、15重量％的氢氧化钠(50ml)和水(50ml)进行缓慢淬灭。将所得混合物搅拌约2小时，用铁铝酸四钙石过滤，用THF洗涤铁铝酸四钙石。在真空条件下从滤液中除去溶剂，溶解于THF中，然后再真空缩减体积，得到透明油状物37(125.1g)，收率为83％。

制取3-氟-α，α-d₂-苄基溴(38)。在温度为-20℃时，向二氯甲烷(1.64L)中有37(125.1g，976.3mmol)的溶液中逐滴加入溴化磷(165ml，1.753mol)。在温度为-20℃时搅拌该反应3小时，温热至0℃，再搅拌1小时，然后用水(1.5L)淬灭，并用碳酸钾固体将pH值缓慢调至8。分层，用二氯甲烷(2×1.0L)萃取水层。硫酸钠干燥所合并的有机层，真空条件下除去溶剂，得到透明油状物的38(160.5g，86％)。

制取2-氯-1-(3-氟-α，α-d₂-苄氧基-4-硝基苯)(39)。向DMF(650ml)中有2-氯-4-硝基酚(10；160.4g，924.1mmol，1.1当量)的溶液中加入粉末状的碳酸钾(73.1g，0.53mol，1.3当量)，结果出现适度的放热反应。在温度为80-85℃和30分钟内逐滴加入3-氟-α，α-d₂-苄基溴(38；160.5g，840.1mmol，1.0当量)，并用DMF(25ml)冲洗附加的漏斗之前，搅拌所得黄色的浓悬浮液，并加热至80℃。然后将该浓悬浮液加热至～95℃，并在冷却之前搅拌4.5小时，首次冷却至室温，再降至10℃，在保持温度低于20℃的情况下用水(2.7L)进行淬灭。室温下搅拌该悬浮液1小时，过滤除去固体，用水(2×2.1L)洗涤，在滤纸上面干燥2小时，过夜自然干燥，进一步用10％的甲苯/庚烷(1.1L)洗涤，随后用庚烷(1.1L)洗涤，在滤纸上面干燥1小时，然后在温度为40℃下过夜真空干燥，得到黄色固体39，定量收率。

制取3-氯-4-(3-氟-α，α-d2-苄氧基)苯胺(40)。在30psi的氢气氛围下对THF(1.0L)中有39(约420mmol)和5％Pt-C(12.0g，含50％水)的混合物进行加氢，直至停止吸氢(～2.75小时)。通过铁铝酸四钙石垫层过滤混合物，一道过滤相同规模下的复制反应的所得混合物，用THF(2.0L)洗涤铁铝酸四钙石垫层。真空蒸发该滤液，得到固体，用庚烷(1.0L)中10％的MTBE使其变成粉末状，得到黄色固体40(179.3g，84％)。

实施例10：制备含双重氢的中间体43。

方案10.

方案10描述了用于制造其中Y^4a和Y^4b均为重氢而Y^3a为氢的式I化合物的确定中间体的合成。下面进一步描述该具体方案10。

制取[3-氯-4-(3-氟-α，α-d₂-苄氧基)苯基](6-碘喹唑啉-4-基)胺盐酸盐(41)。向2-丙醇(2.2L)中有14(约400mmol)的悬浮液中加入40(104.5g，412.0mmol)。在回流条件下搅拌该反应混合物4小时，冷却至室温，过夜搅拌。过滤除去所得沉淀物，用丙酮(1.2L)洗涤，在温度为60℃时干燥2小时，得到黄色固体41(191g，88％)。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟-α，α-d₂-苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-甲醛(43)。向乙醇(360ml，使用前用氮气净化)中有41(24.2g，47.7mmol)的悬浮液中加入三乙胺(26.8ml，190.8mmol，使用前用氮气净化)，随后加入5-甲酰基呋喃-2-硼酸(42；10.0g，71.6mmol)和Pd(dppf)Cl₂.DCM(1.57g)。在回流条件下搅拌反应混合物2小时，减压除去挥发物。先用水(500ml)然后用甲醇(500ml)使粗制残留物变成粉末状，在温度为60℃时干燥，得到棕黄色固体43(18.0)。

实施例11：合成硼酸试剂46。

方案11.

方案11描述了用以进一步合成本发明化合物的硼酸试剂的合成。下面述及所描述的具体方案。

制取5-溴-呋喃-2-羧酸甲氧基-甲基-胺(45)。向冰/水浴中DCM(800ml)溶有EDCI·HCl(75.0g，391.6mmol)的悬浮液中加入三乙胺(124.8ml，890.0mmol)。5分钟后加入5-溴-2-糠酸(44；68g，356.0mmol)和无水HOBt(52.9g，391.6mmol)。在冰/水浴中再搅拌反应混合物10分钟，加入O-甲基-N-甲基羟基氨基盐酸盐(38.2g，391.6mmol)。过夜反应，使反应自然回升至室温。用水(1.5L)淬灭反应，分层。用DCM(2×500ml)萃取水层，硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发，得到油状物粗品，经过以1∶4乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化，得到灰黄色油状物45(78g，85％)。

制取5-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)呋喃-2-基硼酸(46)。在温度为15℃时，在15分钟内向无水THF(2.0L)有双[2-(N，N-二甲基胺基)乙基]醚(76.8g，480mmol)的悬浮液中加入2.0M的异丙基氯化镁(240ml，480mmol)的THF溶液。将该混合物搅拌10分钟，然后加入THF(100ml)中的45(93.6g，400mmol)，保持其内温低于15℃。室温下搅拌所得混合物20分钟，在温度为0℃时加入硼酸三甲酯(83.2g，800mmol)，并在温度为0℃时持续搅拌30分钟。用1.0M的盐酸淬灭反应，将混合物的pH值调至6，然后用氯化钠使其饱和，用乙酸乙酯(3×1.0L)萃取。无水硫酸钠干燥所合并的有机层，真空蒸发。用1∶1乙酸乙酯/庚烷(1.0L)使油状物粗品变成粉末状，在温度为60℃时真空干燥，得到黄色固体46(33.3g)。

实施例12：合成三重氢中间体48。

方案12.

方案12描述了用以合成其中Y^4a、Y^4b和Y^3a均为重氢的本发明化合物的三重氢中间体的合成。下述具体方案12。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟-α，α-d₂-苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-羧酸甲氧基-甲基-胺(47)。向乙醇(630ml，使用前用氮气净化)中有41(42.5g，83.6mmol)的悬浮液中加入三乙胺(43.9ml，使用前用氮气净化)，随后加入46(33.3g，167.2mmol)和Pd(dppf)Cl₂·DCM(2.75g)。在回流条件下搅拌反应混合物2小时，减压除去挥发物。经过以1∶1乙酸乙酯/庚烷为洗脱液的硅胶柱纯化粗制残留物，得到黄色固体47(9.7g)。

制取5-{4-[3-氯-4-(3-氟-α，α-d₂-苄氧基)苯胺]喹唑啉-6-基}呋喃-2-甲醛-d(48)。在冰/水/盐浴冷却下，向THF(720ml)中有47(9.8g，18.3mmol)的悬浮液中分批加入氘代氢化锂铝(768mg，18.3mmol)，使其内温保持于低于5℃。在冷却槽中搅拌该反应1小时，随后相继用重水(1ml)、重水(1ml)中15重量％的NaOD和重水(1ml)淬灭该反应。经过铁铝酸四钙石过滤该所得混合物，并用THF(300ml)洗涤滤饼。真空浓缩该滤液，得到黄色固体48，定量收率。

实施例13：合成化合物104的甲苯磺酸盐。

方案13.

方案13描述了化合物104的甲苯磺酸盐的制备。下述具体方案13。

制备中间体49。向DCM(300ml)中有胺盐酸盐18-d2(14.0mmol)的悬浮液中加入三乙胺(3.5ml，25.2mmol)。搅拌该悬浮液10分钟，之后加入48(8.4mmol)和硫酸钠(20g)。室温下搅拌该反应混合物3小时，然后逐滴加入氘代硼氢化钠(1.17g，28.06mmol)。室温下过夜搅拌所得混合物，在温度为0℃时用重水(300ml)中有10重量％的碳酸钾进行淬灭。20分钟后加入二碳酸二叔丁酯(14.0mmol)，室温下搅拌该反应2小时。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水层。无水硫酸钠干燥所合并的有机层，真空浓缩，获得粗制残留物，经过以乙酸乙酯为洗脱液的硅胶柱纯化，获得粘性油状物或泡状物49。

制取化合物104的甲苯磺酸盐。向1，4-二氧六环(每毫摩尔3ml)中有49的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环(每毫摩尔10ml)。室温下搅拌该反应混合物3小时，真空浓缩。将所得黄色固体悬浮于乙酸乙酯(300ml)中，用水(100ml)中有10重量％的碳酸钾进行中和。分层，用乙酸乙酯(2x)萃取该水层。无水硫酸钠干燥所合并的有机层，真空浓缩，获得棕黄色泡状物。将该泡状物溶于THF(每毫摩尔4ml)中，在温度为60℃时将其加入无水乙醇(每毫摩尔14ml)中有邻甲苯磺酸盐的一水合物(2.5当量)。回流条件下搅拌悬浮液1小时，然后冷却至室温。抽滤收集沉淀物，用少量无水乙醇洗涤，然后于60℃过夜干燥，获得黄色固体即化合物104的甲苯磺酸盐。由该醛所得的平均收率为～70％。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.25(s，6H)，3.11(s，3H)，3.53(s，2H)，6.87(d，J＝3.5，1H)，7.07(d，J＝8.0，4H)，7.16-7.34(m，5H)，7.45(d，J＝8.2，4H)，7.46(d，J＝8.2，1H)，7.59(dd，J₁＝8.9，J₂＝2.5，1H)，7.85(d，J＝2.3，1H)，7.90(d，J＝8.8，1H)，8.39(dd，J₁＝8.8，J₂＝1.5，1H)，8.91(s，1H)，9.00(s，1H)，9.25(bs，1H)，11.33(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.46，41.37，50.05，110.08，114.67，114.72，114.86，115.40，115.69，115.82，119.10，121.91，124.11，125.24，126.14，126.99，128.80，130.21，130.86，131.29，131.40，138.53，139.87，139.96，145.96，147.25，152.46，153.08，160.12，161.25，164.49。HPLC(方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，4分钟内2-95％ACN，2分钟内保留在95％ACN中，波长：254纳米)：保留时间：4.15分钟。MS(M+H⁺)：587.1。元素分析(C₄₃H₃₆D₆ClFN₄O₁₀S₃·H₂O)：计算值：C＝54.39，H＝4.67，F＝2.00，N＝5.90。实验值：C＝54.19，H＝4.32，F＝2.02，N＝5.76。

实施例14：合成化合物105的甲苯磺酸盐。

方案14.

方案14描述了化合物105的甲苯磺酸盐的制备。下述具体方案15。

制取中间体50。除了用胺盐酸盐30替代18-d2之外，以类似于中间体49的方式合成中间体50。

制取化合物105的甲苯磺酸盐。在室温下，向1，4-二氧六环(每毫摩尔3ml)中有50(1.0当量)的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二氧六环溶液(每毫摩尔10ml)。室温下搅拌该反应混合物3小时，然后真空蒸发。将所得黄色固体悬浮于乙酸乙酯(每毫摩尔40ml)中，用重水(100ml)中的10重量％的碳酸钾进行中和。分层，用乙酸乙酯(2x)萃取水层。无水硫酸钠干燥所合并的有机层，真空浓缩，得到棕黄色泡状物。将泡状物溶于THF(每毫摩尔4ml)中，然后在温度为60C时将其加入无水乙醇(每毫摩尔14ml)中有对甲苯磺酸盐的一水合物(2.5当量)的溶液中。回流条件下搅拌该悬浮液1小时，然后将其冷却至室温。抽滤收集沉淀物，用少量无水乙醇洗涤，然后在温度为60℃时进行干燥，获得黄色固体即化合物105的甲苯磺酸盐。由该醛所得的收率为～70％。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.25(s，6H)，6.87(d，J＝3.5，1H)，7.08(d，J＝8.5，4H)，7.15-7.33(m，5H)，7.45(d，J＝8.2，4H)，7.46(d，J＝8.2，1H)，7.58(dd，J₁＝9.1，J₂＝2.6，1H)，7.84(d，J＝2.6，1H)，7.90(d，J＝8.8，1H)，8.40(dd，J₁＝8.8，J₂＝1.5，1H)，8.92(s，1H)，9.01(s，1H)，9.28(bs，1H)，11.38(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.45，110.13，114.67，114.73，114.85，114.96，115.41，115.69，115.83，119.12，121.92，124.14，125.31，126.14，127.06，128.81，130.30，130.78，131.29，131.40，138.55，139.87，139.97，145.92，147.28，152.536，153.04，160.19，161.26，164.50。HPLC(方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，4分钟内2-95％ACN，2分钟内保留在95％ACN中，波长：254纳米)：保留时间：4.23分钟。MS(M+H⁺)：592.2。

实施例15：合成化合物106的甲苯磺酸盐。

方案15.

方案15描述了化合物106的甲苯磺酸盐的制备。下述具体方案14。

制取中间体51。除了用胺盐酸盐18替代18-d2之外，以类似于中间体49的方式合成中间体51。

制取化合物106的甲苯磺酸盐。除了用中间体51替代49之外，以类似于化合物104的甲苯磺酸盐的方式制造化合物106的甲苯磺酸盐。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.25(s，6H)，3.11(s，3H)，3.52-3.57(m，4H，由于H₂O峰而部分变得模糊)，6.87(d，J＝3.6，1H)，7.07(d，J＝8.5，4H)，7.18-7.34(m，5H)，7.45(d，J＝8.2，4H)，7.46(d，J＝7.9，1H)，7.59(dd，J₁＝8.8，J₂＝2.5，1H)，7.84(d，J＝2.3，1H)，7.90(d，J＝8.8，1H)，8.39(dd，J₁＝8.8，J₂＝1.5，1H)，8.91(s，1H)，9.00(s，1H)，9.26(bs，1H)，11.36(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.46，41.35，50.20，110.05，114.67，114.78，114.86，114.96，115.69，115.84，119.10，121.91，124.14，125.24，126.14，127.00，128.80，130.22，130.87，131.29，131.40，138.54，139.97，145.95，147.25，152.46，153.09，160.12，161.26，164.50。HPLC(方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，4分钟内2-95％ACN，2分钟内保留在95％ACN中，波长：254纳米)：保留时间：4.24分钟。MS(M+H⁺)：585.0。元素分析(C₄₃H₃₈D₄ClFN₄O₁₀S₃)：计算值：C＝55.57，H＝4.55，F＝2.04，N＝6.03。实验值：C＝55.46，H＝4.30，F＝2.07，N＝5.94。

实施例16：合成化合物107的甲苯磺酸盐。

方案16.

方案16描述了化合物107的甲苯磺酸盐的制备。下述具体方案16。

制取中间体52。向DCM(500ml)中有胺盐酸盐18(25mmol)的悬浮液中加入三乙胺(4.7ml，31.8mmol)。搅拌该混合物1小时，其间加入43(7.1g，15.0mmol)，在室温下继续搅拌1小时。分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.7g，40.1mmol)，室温下过夜搅拌所得混合物，在温度为0℃时用水(300ml)中的10重量％的碳酸钾进行淬灭，然后搅拌20分钟。向所得混合物中加入二碳酸二叔丁酯(25mmol)，室温下搅拌2小时。分层，用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水层。无水硫酸钠干燥所合并的有机层，真空浓缩，获得粗制残留物，经过以乙酸乙酯为洗脱液的硅胶柱纯化，获得泡状物52。

制取化合物107的甲苯磺酸盐。除了用中间体52替代49之外，以类似于化合物104的甲苯磺酸盐的方式制造化合物107的甲苯磺酸盐。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.28(s，6H)，3.15(s，3H)，3.43-3.55(m，4H，由于H₂O峰而部分变得模糊)，4.46(s，2H)，6.90(d，J＝3.2，1H)，7.11(d，J＝7.9，4H)，7.18-7.24(m，2H)，7.34-7.37(m，3H)，7.47(d，J＝8.2，4H)，7.52(d，J＝8.2，1H)，7.64(d，J＝9.4，1H)，7.91-7.94(m，2H)，8.38(d，J＝8.8，1H)，8.89(s，1H)，8.99(s，1H)，9.29(bs，1H)，11.14(bs，1H)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.45，41.37，43.35，50.21，109.97，114.68，114.89，115.82，119.07，121.91，124.14，125.10，126.14，126.87，128.77，130.07，131.29，131.40，138.44，139.88，146.12，147.26，152.34，153.16，160.00，161.26，164.50。HPLC(方法：20毫米C18 RP色谱柱，梯度法，4分钟内2-95％ACN，2分钟内保留在95％ACN中，波长：254纳米)：保留时间：4.24分钟。MS(M+H⁺)：583.2。元素分析(C₄₃H₄₀D₂ClFN₄O₁₀S₃·0.1H₂O)：计算值：C＝55.58，H＝4.58，Cl＝3.82，F＝2.04，N＝6.03。实验值：C＝55.25，H＝4.42，Cl＝3.91，F＝2.02，N＝5.95。

实施例17：合成化合物108的甲苯磺酸盐。

方案17.

方案17描述了化合物108的甲苯磺酸盐的制备。下述具体方案17。

制取中间体53。除了用胺盐酸盐18-d2替代18之外，以类似于中间体52的方式合成中间体53。

制取化合物108的甲苯磺酸盐。除了用中间体53替代49之外，以类似于化合物104的甲苯磺酸盐的方式制造化合物108的甲苯磺酸盐。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.29(s，6H)，3.14(s，3H)，3.56(s，2H，由于H₂O峰而部分变得模糊)，4.46，(s，2H)，6.89(s，1H)，7.10(d，J＝7.0，4H)，7.17-7.24(m，2H)，7.31-7.37(m，3H)，7.47(d，J＝8.2，4H)，7.49(d，J＝8.2，1H)，7.64(d，J＝9.1，1H)，7.90-7.94(m，2H)，8.38(d，J＝8.5，1H)，8.88(s，1H)，8.99(s，1H)，9.30(bs)，11.15(bs)。¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ21.46，41.37，50.05，110.09，114.67，114.77，114.86，114.97，115.40，115.69，115.82，119.10，121.91，124.11，125.26，126.14，127.01，128.80，130.23，130.85，131.29，131.40，131.93，138.52，139.87，139.97，145.99，147.32，152.06，152.48，153.07，160.14，161.26，164.49。HPLC(方法：20毫米C18RP色谱柱，梯度法，4分钟内2-95％ACN，2分钟内保留在95％ACN中，波长：254纳米)：保留时间：4.24分钟。MS(M+H⁺)：585.0。元素分析(C₄₃H₃₈D₄ClFN₄O₁₀S₃·1.5H₂O)：计算值：C＝54.00，H＝4.74，Cl＝3.71，F＝1.99，N＝5.86。实验值：C＝53.71，H＝4.41，Cl＝3.89，F＝1.82，N＝5.74。

实施例18：评价人肝微粒体中的代谢稳定性。

可以本领域所熟知的一种或多种微粒体试验评价本化合物的代谢稳定性。参见，例如Obach，R.S.Drug Metab Disp 1999，27，p.1350“从肝微粒体的内在清除率数据预测人类二十九种药物的清除率：体外半衰期方法和与微粒体的非专一性结合的检测”；Houston，J.B.et al.，Drug MetabRev 1997，29，p.891“微粒体、肝细胞、肝切片的肝清除率的预测”；Houston，J.B.Biochem Pharmacol 1994，47，p.1469“利用体外药物代谢数据预测体内代谢清除率”；Iwatsubo，T et al.，Pharmacol Ther 1997，73，p.147“从体外代谢数据预测人类肝脏内体内药物的新陈代谢”；以及Lave，T.et al.，Pharm Res 1997，14，p.152“利用人类肝细胞选择基于其预期的人类肝提取率的化合物”；在此，以其各自的整个内容合并于本文。

该研究目的是：测定库池肝微粒体培育基中试验化合物的代谢稳定性，以及进行全扫描LC-MS分析以检测主要代谢物。利用HPLC-MS(或MS/MS)检测分析暴露于库池人类肝微粒体的试验化合物样品。为了测定代谢稳定性，利用多反应监测(MRM)测定试验化合物的消失。为了代谢物的检测，利用Q1全扫描作为扫描测试以检测主要代谢物。

实验方法步骤：由吸收系统L.P.(Exton，PA)获得人类肝微粒体。下面体现了用于本实验中有关基质的详细内容。按下述制备培育混合物：

反应混合物组成部分：

肝微粒体 0.1-2mg/ml

NADPH 1mM

磷酸钾，pH7.4 100mM

氯化镁 10mM

试验化合物(拉帕替尼和化合物100-108的甲苯磺酸盐)0.1-1.0μM在各单一实验中，使用相同量的化合物和相同量的微粒体。随实验的变化各量也随之变化。

用肝微粒体培育试验化合物：制备减去余因子的反应混合物。在温度为37℃时在水浴摇床中培育等样量的反应混合物3分钟(不含余因子)。制备另一等样量的反应混合物作为负控制系统。将以最终浓度为0.1-1μM的试验混合物加入反应混合物和负控制系统中，所加浓度取决于实验情况。通过加入简单的有机溶剂(不是试验混合物)，制备等样量的反应混合物作为空白值的控制。通过加入余因子引发反应(不加入负控制中)，然后在温度为37℃时在水浴摇床中进行培育。在0、10、20、40和60分钟取回三份试样量(200μL)，结合800μL冰冷的50/50的乙腈/dH₂O结束反应。在各自反应中将正控制(positive controls)、睾丸激素和普萘洛尔与试验化合物同时施用。

利用LC-MS(或MS/MS)分析所有样品。将LC-MRM-MS/MS方法用于代谢稳定性。同样，在空白基质和试验化合物培育样品上执行Q1全扫描LC-MS方法。Q1扫描作为扫描测试以识别可表示可能代谢物的任何样品的独特峰。由该Q1扫描可测定大多数这些可能代谢物。

使用拉帕替尼、化合物101和化合物102的甲苯磺酸盐对鼠肝微粒体进行类似实验。

这些微粒体分析结果(数据未示出)显示：相比于拉帕替尼，这两种氘代的化合物的稳定性之间不存在明显差别。摆脱理论上的束缚，发明人认为：由于本发明化合物和拉帕替尼的微溶性和高蛋白的结合性能，从而混淆了这些微粒体的稳定性实验。

实施例19：评价CYP3A4 SUPERSOMES^TM中的代谢稳定性。由于SUPERSOMES^TM体系不需要作为高浓度的化合物，将其选为研究本发明的化合物和拉帕替尼的对比稳定性的替代物。该较低蛋白浓度避免了拉帕替尼和本发明的化合物与其他微粒体蛋白质的非专一性结合。

人类CYP3A4+P450还原酶SUPERSOMES^TM购自GenTest公司(位于美国马萨诸塞州的沃本市)。在温度为37℃时，培育三份在100mM磷酸钾缓冲液(pH为7.4)中含有25pmole的SUPERSOMES^TM、2.0mM的NADPH、3.0mM的MgCl和0.1μM式I的不同化合物(各化合物101、102、104、105、106、107或108的甲苯磺酸盐)的1.0ml的反应混合物。正控制含有0.1μM拉帕替尼的甲苯磺酸盐而不是式I化合物。负控制使用购自GenTest公司(位于美国马萨诸塞州的沃本市)的Control InsectCell Cytosol(缺少任何人类代谢酶的昆虫细胞微粒体)。从样品中各取等样量(50μL)，在0、2、5、7、12和30分钟时将其置入多孔板的孔内，并各加入50μL含有3μM氟哌啶醇的冰冷乙腈，作为内部标准停止反应。

然后将含有被取走等样量的板置于-20℃的制冷器中冷冻15分钟。冷冻后，将100μL去离子水加入板的所有孔内。使板在离心机里进行3000rpm的旋转10分钟。然后取走一部分上清液(100μL)，将其置入新板内，利用质谱进行分析。

30分钟后，各试验化合物的稳定性如下表2所示。

表2.CYP3A4 SUPERSOMES^TM中式Ia化合物的稳定性。

化合物	30分钟后所剩余的百分数
化合物	30分钟后所剩余的百分数	拉帕替尼	7.28±0.361
101	9.32±0.448	拉帕替尼	7.28±0.361
101	9.32±0.448	102	8.20±0.486
104	10.1±0.365	102	8.20±0.486
104	10.1±0.365	105	13.8±0.493
106	13.1±0.827	105	13.8±0.493
106	13.1±0.827	107	10.4±0.270
108	11.3±0.633	107	10.4±0.270

表1表示出在该分析中拉帕替尼、化合物102、化合物107和化合物108的各甲苯磺酸盐新陈代谢的时间历程。

这些结果证实：本发明中的氘代化合物比拉帕替尼具有更强的抵抗细胞色素P450氧化的能力，因而将其对人类受试者给药时具有更持久的有益效果，和/或在提供同等疗效从而避免非想要的副效应的同时，比拉帕替尼的给药剂量更低。

实施例20：评价鼠体内的药物动力学。将18只Sprague-Dawley鼠每6只分成三组，对各组进行试验，然后比较静脉剂量的拉帕替尼、化合物101、化合物102和化合物104的甲苯磺酸盐的药物动力学命运。

进行化合物的给药之前用戊巴比妥(IP 40mg/kg)将鼠麻痹。制备将拉帕替尼、化合物101和化合物102的甲苯磺酸盐各溶于10％的DMSO/90％水的2mg/ml的溶液。经颈静脉套管对鼠进行单个大药丸的2mg/kg剂量的化合物的给药，随后用盐水冲洗。在给药后的5、15和30分钟以及在1、2、4、6、9、12和24小时从颈静脉提取血样本(0.25ml)。在15分钟内将取自动物体、离心并除去血浆部分的血样本进行离心，将其在温度为-20℃下贮存，直至进行分析。通过LC-MS分析样本。

图2和3表示出这些实验的结果。化合物101和102表示出了比拉帕替尼明显更长的半衰期(见图2)。类似地，化合物104也表示出了比拉帕替尼明显更长的半衰期(见图3)。拉帕替尼半衰期的计算值为1.0±0.05小时。化合物101和104的半衰期分别为2.3±0.2小时和2.3±0.3小时。

使用口服剂量(20mg/kg)的拉帕替尼、化合物101和化合物102的甲苯磺酸盐的类似实验(数据未示出)表示出类似的结果：化合物101和化合物102均呈现出比拉帕替尼更长的半衰期。

实施例22：体外生物活性。对化合物101、102和103以及拉帕替尼的甲苯磺酸盐进行各种酶活性及其对细胞增殖的影响的分析。下述为由Cerep(位于美国西雅图的雷德蒙市)所进行的分析。

根据Weber W et al.，J Biol Chem，1984，259：14631-36中所述的方法进行EGFR激酶检测(Cerep目录参考：768-E)。从A-431细胞中获取检测所用的EGFR激酶。在温度为22℃时，将各浓度的试验化合物(0.1nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1μM)与激酶、ATP和0.1μM的生物素化多肽生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK培育30分钟。通过均相时间分辨荧光

检测磷酸化生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK的产物。

根据Qian X et al.，Proc Natl Acad Sci USA，1992，89：1330-34中所述的方法进行HER2激酶检测(Cerep目录参考：768-her2)。该检测中用到了昆虫细胞中所表达的重组人HER2激酶。在温度为22℃时，将各浓度的试验化合物(0.1nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1μM)与激酶、ATP和0.6μM的生物素化多肽生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK培育30分钟。通过均相时间分辨荧光

检测磷酸化生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK的产物。

根据Plowman GD et al.，Proc Natl Acad Sci USA，1993，90：1746-50中所述的方法进行HER4激酶检测(Cerep目录参考：768-her4)。该检测中用到了昆虫细胞中所表达的重组人HER2激酶。在温度为22℃时，将各浓度的试验化合物(0.1nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1μM)与激酶、ATP和0.6μM的生物素化多肽生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK培育30分钟。通过

检测磷酸化生物素-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK的产物。

根据Handler JA et al.，J Biol Chem，1990，265：3669-73中所述的方法进行细胞增殖检测(Cerep目录参考：791-4)。在重氢胸腺嘧啶核苷和各浓度试验化合物(0.1nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1μM)的存在下，用EGF(1ng/ml)刺激A-431细胞。在温度为37℃下，经过24小时的生长，获得细胞，通过闪烁计数测得重氢胸腺嘧啶核苷结合物。

这些检测结果见下表3：

表3.式Ia化合物的生物活性

化合物	EGFR激酶(nM)	HER2激酶(μM)	HER4激酶(μM)	细胞增殖(nM)
化合物	EGFR激酶(nM)	HER2激酶(μM)	HER4激酶(μM)	细胞增殖(nM)	拉帕替尼	230	4.0	2.3	670
101	120	3.2	2.3	610	拉帕替尼	230	4.0	2.3	670
101	120	3.2	2.3	610	102	260	2.7	1.9	180
103	170	5.0	3.1	330	102	260	2.7	1.9	180

这些结果表明：本发明的化合物具有拉帕替尼抵抗所要的激酶靶物以及抑制细胞增殖的类似潜能。

不用进一步的说明，可以认为，本领域的普通技术人员能够利用上面描述和所述实施例，制造和利用本发明化合物，并实践所要求的方法。应该理解为，上述讨论和实施例仅仅介绍了一些优选实施方式的具体说明。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的精神和保护范围的前提下进行各种修改和等同替换将是显而易见的。

Claims

1.一种式Ia化合物：

或者其盐；或者其水合物或溶剂化物；其中各Y如上述对式I所定义的，其特征在于，各Y独立选自于氢和重氢；并且至少一个Y为重氢。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，与共同碳原子结合的各Y是相同的。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，Y^1a、Y^1b和Y^1c同为重氢。

4.根据权利要求1或3任一项所述的化合物，其特征在于，Y^2a和Y^2c同为重氢。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其特征在于，Y^3a和Y^3b同为重氢。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其特征在于，Y^4a和Y^4b同为重氢。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其特征在于，Y^5a和Y^5b同为重氢。

8.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自下表中所列化合物的任何一种：

化合物 Y^1a Y^1b Y^1c Y^2a Y^2b Y^3a Y^3b Y^4a Y^4b Y^5a Y^5b 100 H H H D D H H H H H H 101 H H H D D D D H H H H 102 D D D D D D D H H D D 103 D D D D D H H H H D D 104 H H H D D D D D D H H 105 D D D D D D D D D D D 106 H H H H H D D D D H H 107 H H H H H H H D D H H 108 H H H D D H H D D H H

或者上表所列任何一种化合物的甲苯磺酸盐。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其特征在于，未指定为重氢的任何原子均以其天然同位素丰度存在。

10.一种组合物，包含权利要求1所述的化合物的无热原组合物；以及一种可接受的载体。

11.根据权利要求10所述的组合物，配制所述组合物用于给药，并且其中所述的载体为药物学上可接受的载体。

12.根据权利要求11所述的组合物，所述组合物另外包含选自抗肿瘤剂和免疫抑制剂的第二治疗剂。

13.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述第二治疗剂选自：卡培他滨、帕唑帕尼、搓拉滋美、多西他赛、来曲唑、它莫西芬、氟维司群、紫杉醇、卡铂、贝伐单抗、多柔比星、环磷酰胺、顺铂、长春瑞滨、依维莫司、丙戊酸、拓扑特肯、奥沙利铂和吉西他滨。

14.一种抑制细胞内erbB-1或erbB-2的酪氨酸激酶活性的方法，所述方法包括将所述细胞与权利要求1所述的化合物接触的步骤。

15.一种治疗患有或易患瘤形成的受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者进行权利要求11所述的组合物的给药的步骤。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述瘤形成选自：白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性前髓细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)，真性红细胞增多症，淋巴瘤(霍奇金氏病、非霍奇金氏病)，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，重链病，以及实体瘤诸如肉瘤和癌科(纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索癌、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管内皮细胞瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、骨髓癌、支气管肺癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室鼓膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，受试者患有或易患选自下述的瘤形成：乳腺癌，食管腺癌，食管鳞状细胞癌，子宫颈癌，头颈癌，实体瘤，非霍奇金淋巴瘤，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，脑瘤和中枢神经系统肿瘤(神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质肉瘤)，前列腺癌，子宫内膜癌，直肠癌，非小细胞肺癌，肝癌，肾癌和胰腺癌。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其特征在于，所述瘤形成为erB2-、erB4-或EGF-受体阳性。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述瘤形成为erB2-或EGF-受体阳性。

20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述瘤形成为乳腺癌。

21.根据权利要求15至20中任一项所述的方法，所述方法包括用其他抗肿瘤治疗、化学疗法剂、激素剂、抗体剂、免疫抑制剂、外科治疗和/或放射治疗来治疗有需要的受试者的另外的步骤。

22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于：

a.所述受试者患有或易患乳腺癌，或者用卡培他滨、帕唑帕尼、搓拉滋美、多西他赛、来曲唑、它莫西芬、氟维司群、紫杉醇、卡铂、贝伐单抗、多柔比星或环磷酰胺对受试者进行另外的治疗；

b.所述受试者患有或易患子宫颈癌，或者用帕唑帕尼对所述受试者进行另外的治疗；

c.所述受试者患有或易患头或颈癌，或者用放射治疗或顺铂对所述受试者进行另外的治疗；

d.所述受试者患有或易患实体瘤，或者用去甲长春花碱、依维莫司、紫杉醇、丙戊酸、多西紫杉醇或拓扑特肯对所述受试者进行另外的治疗；

e.所述受试者患有或易患非霍奇金淋巴瘤，或者用依维莫司对所述受试者进行另外的治疗；

f.所述受试者患有或易患胃癌，或者用紫杉醇对所述受试者进行另外的治疗；

g.所述受试者患有或易患卵巢癌，或者用卡铂或拓扑特肯对所述受试者进行另外的治疗；

h.所述受试者患有或易患恶性胶质瘤，或者用帕唑帕尼对所述受试者行另外的治疗；

i.所述受试者患有或易患腹膜癌，或者用拓扑特肯对所述受试者进行另外的治疗；或者

j.所述受试者患有或易患胰腺癌，或者用奥沙利铂或吉西他滨对所述受试者进行另外的治疗。