CN101581712B - 一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法及其应用,该方法是先从降糖类药品、保健品或食品中提取双胍类化合物,收集提取液;然后向提取液中加入显色剂,根据显色结果判断降糖类药品、保健品或食品中是否添加有双胍类化合物。本发明的方法其分析成本低、抗共存物质干扰能力强、无需专门设备、灵敏度高、显色结果明显易于观察判断、检验结论正确率高、适用于现场对降糖类药品、保健品和食品中是否添加有双胍类化合物进行快速检测。根据本发明的快速检测方法,制备双胍类化合物的快速检测试剂盒,能满足农村地区开展相关的食品药品监督检验的需要。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域,具体涉及降糖类药品、保健品和食品中非法添加化合物的检测领域,尤其涉及一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法及其应用。
背景技术
双胍类化合物是降糖药家族的元老之一,主要包括盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和盐酸丁二胍,双胍类化合物价格低廉,与其他化学降糖药联合使用可增强降血糖作用,故在非法添加中出现频率高,但双胍类化合物作为药物用于降糖时,存在严重不良反应包括乳酸中毒,是一种死亡率高的不良反应,尤其以老年人慎用。
盐酸二甲双胍的英文名称为“Metformin Hydrochloride”,商品名称有“降糖片”、“甲福明”、“迪化糖锭”、“格华止”、“美迪康”、“君力达”等,化学名称为:1,1-二甲基双胍盐酸盐,其结构式如式(I)所示。
盐酸苯乙双胍又称“降糖灵”,英文名称为“Phenformin Hydrochloride”,化学名称为:1-(2-苯乙基)双胍盐酸盐,其结构式如式(II)所示。
盐酸丁二胍,又称为“丁福明”,化学名称为1-丁基二胍,其结构式如式(III)所示。
盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍在我国为处方药,患者需要在医生的指导下方能服用,国家对其生产、经营及使用进行了严格的规定;盐酸丁二胍属淘汰药,在我国和大部分发达国家均未批准上市。关于盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍引起的药物不良反应已有不少报道。近年来,在降糖类药品、保健品和食品中非法添加盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍的情况甚为严重,对于降糖类药品、保健品和食品中非法添加双胍类降糖药进行监督检测是一项长期的任务,它涉及范围广,需要进行大量的检验,在广大的农村地区和经济欠发达的中小城市开展这项检验活动有较大的难度。
目前,检验药品、保健品和食品中非法添加双胍类降糖药的方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法和高效液相色谱液-质谱联用法等,薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器,但该方法受外界条件影响大,比移值不稳定,存在边缘效应,色谱展开和晾干的时间长,不能满足快速测定的要求,并且对仪器以及周围环境要求高,同时还对实验人员技术要求也高;高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高,灵敏度高,但其缺点是仪器价格昂贵,样品前处理时间长,色谱柱易受污染,分析成本高,当共存成分的色谱保留时间与盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍的色谱保留时间接近时容易作出错误的判断,仪器对使用环境要求高,需要固定摆放,不适合作流动性大的现场检测;高效液相色谱液-质谱联用法适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析,这种分析方法可提高检测结果的可靠性,但是该方法操作更加复杂,仪器对使用环境要求更高,需要固定摆放,不适合作流动性大的现场检测。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足,提供一种分析成本低、专属性强、灵敏度高、抗共存物质干扰能力强、试验现象明显、检验结论正确率高、操作简便且不需要使用贵重分析仪器,可实现现场对降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法。
本发明的另一目的在于提供上述快速检测方法在制备双胍类化合物快速检测试剂盒中的应用。
本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的:
目前,在降糖类药品、降糖类保健品和降糖类食品中添加的双胍类化合物为盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍,通过对比盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和盐酸丁二胍的结构式可以看出,这三个物质在结构上都有共同的双胍特征基团,因此本发明针对该双胍特征基团,提供一种双胍类化合物的快速检测方法,该方法是将双胍类化合物从待测的降糖类药品、降糖类保健品和降糖类食品中先提取出来,然后用显色剂对提取液进行显色,通过最后的显色结果就能准确判断出待测降糖类药品、保健品或食品中是否添加了双胍类化合物,本发明的快速检测方法具体包括如下步骤:
(1)从降糖类药品、保健品或食品中提取双胍类化合物,收集提取液;
(2)将提取液和显色剂进行显色反应,根据显色结果即可判断出降糖类药品、保健品或食品中是否添加有双胍类化合物。
降糖类药品、保健品或食品在采用上述方法进行检测前,可先进行一些处理,如片剂和颗粒剂可先研细,胶囊剂则取出内容物。
上述步骤(1)中,为了保证提取效果,使得提取液中杂质更少,在对降糖类药品、保健品或食品进行双胍类化合物的提取前,可先进行预处理:先向降糖类药品、保健品或食品中加入乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷,振摇使分散,过滤,弃滤液,收集过滤物再进行后续的提取处理;乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷可以将降糖类药品、保健品或食品中的脂溶性杂质去除,同时也能带走部分水分起到脱水处理的作用;由于三氯甲烷具有一定的毒性,因此对降糖类药品、保健品或食品进行预处理优选乙酸乙酯或二氯甲烷。
上述步骤(1)中,可采用质量百分比浓度为90%~100%的乙醇溶液作为提取试剂,将降糖类药品、保健品或食品中的双胍类化合物提取出来,具体操作为:向降糖类药品、保健品或食品(或经过预处理后的过滤物)中加入质量百分比浓度为90%~100%的乙醇溶液,振摇使分散,过滤,收集滤液,该滤液即为所需提取液,可用于后续的显色检测;作为提取剂的乙醇溶液优选无水乙醇。
上述步骤(2)中,将提取液和显色剂进行显色反应,可将提取液和显色剂都加入试管中进行显色反应,也可以将提取液和显色剂都加在反应载板上进行显色反应,但本发明人经试验发现采用试管中进行显色其显色效果不理想,而采用薄层色谱用的硅胶类薄层板作为反应载板进行显色反应,会得到很好的显色效果,结果观察清晰准确,因为硅胶作为固定相,而作为提取剂的乙醇溶液为流动相,当提取液滴加到硅胶板上后,乙醇溶液快速扩散、挥发,而双胍成分紧密吸附在孔径平面上不随溶剂扩散而得到浓集(在待测组分的量大、超过吸附容量时才扩散,溶液越稀浓集效率越高);其它在板材例如滤纸,扩散更严重,有的板材反应速度慢,颜色较浅。薄层色谱用的硅胶类薄层板具有普及易于获取、成本低等优点。
因此本发明在显色时优选采用硅胶类薄层板作为反应载板进行显色反应,可大幅度提高检测灵敏度,反应速度比溶液明显提高。
此外本发明人发现当提取剂为无水乙醇时,其显色效果最好。
上述步骤(2)中,显色剂选择10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,该混合液是10%亚硝酰铁氰化钠溶液、10%铁氰化钾溶液和10%氢氧化钠溶液的等体积比混合液,所述百分比均为质量/体积百分比。
上述步骤(2)中,将提取液点在反应载板上,然后将反应载板浸入显色剂中,或者将显色剂加在反应载板上显色,显色反应的速度以及颜色深浅往往会和点样溶液的浓度有关。本方法显色的灵敏度可以达到双胍类物质浓度0.05mg/ml,在存在样品基质的溶液中,1mg/ml的双胍类物质检测非常明显,此浓度对应低于临床有效剂量的1/20,因此显色灵敏度足够保证不会漏检降糖类药品、保健品或食品中双胍类化合物。在进行显色反应时,通常会平行进行阳性对照反应(采用盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍或盐酸丁二胍作为阳性对照品),或配备彩色照片供对照判断。显色结果判断依据如下:
a.加入显色剂后,如果提取液点样位置不出现斑点,则待测降糖类药品、保健品或食品中不含双胍类化合物;
b.加入显色剂后,如果提取液点样位置出现斑点,且斑点颜色为黄棕色,与阳性对照品颜色不一致,则待测降糖类药品、保健品或食品中不含双胍类化合物;
c.加入显色剂后,如果提取液点样位置出现斑点,斑点颜色为棕红或红褐色,5分钟内褪为黄棕色,与阳性对照品颜色不一致,则待测降糖类药品、保健品或食品中不含双胍类化合物;
d.加入显色剂后,如果提取液点样位置出现斑点,斑点颜色为棕红或红褐色,5分钟内棕红或红褐色不发生变化,依然保持棕红或红褐色,与阳性对照品颜色一致,则待测降糖类药品、保健品或食品中含有双胍类化合物;
e.加入显色剂后,如果提取液点样位置出现斑点,斑点颜色为棕红或红褐色,放置30~60分钟后颜色转为蓝色,则待测降糖类药品、保健品或食品中含盐酸二甲双胍。
由于降糖类药品、保健品和食品中的成分非常复杂,因此提取液可能有一定的底色,加入显色剂后,作为阳性对照品的盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和盐酸丁二胍在5分钟时所显颜色比开始时更为清晰,而提取液显色后呈黄棕色,或一开始为棕红或红褐色但3分钟内迅速褪为黄棕色,因此本发明选择在5分钟时对显色结果进行判断,可以使提取液中的干扰成分所呈现的干扰色消褪,从而保证了显色结果判断的准确性。
基于本发明的快速检测方法,可以制备双胍类化合物的快速检测试剂盒,也可以制备成适合药品检测车上使用的双胍类化合物的快速检测套装,用于降糖类药品、保健品和食品的快速检测。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
1.本发明的方法其分析成本低、不需要专门设备、专属性强、灵敏度高,适用于现场对降糖类药品、保健品和食品中是否添加有双胍类化合物进行快速检测,克服了现有技术存在的缺点,满足药品、保健品和食品监督检验的需要;
2.由于降糖类药品、保健品和食品中的成分非常复杂,若采用水作为提取剂时,后期显色反应的干扰色非常深,而本发明采用先乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷进行去除脂溶性杂质和脱水处理,然后用无水乙醇提取,解决了干扰色问题使得显色判断清晰、准确;
3.在溶液中进行显色反应,一般都比较慢而本发明的显色反应采用反应载板,如硅胶板,则显色反应速度快,而且硅胶板使得双胍类成分富集,显色结果更加准确;
4.本发明的方法具有抗共存物质干扰能力强、显色结果明显易于观察判断、检验结论正确率高、操作简便快速,无需对检测人员进行培训,所需检测仪器简单等特点;
5.根据本发明的方法制备快速检测试剂盒,将能满足农村地区开展相关的食品监督检验的需要。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地解释,但具体实施例并不对本发明做任何限定。
实施例1胶囊剂的检测
样品:奈糖TM芙蓉花粉,胶囊剂,HPLC法检测本品每粒含盐酸二甲双胍287mg。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品1粒,将其内容物(约0.32g)置于2ml注射器中,加入1ml二氯甲烷,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将反应载板浸入显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)中,迅速拎起并观察;提取液点样位置上立即可见明显红褐色,5分钟内颜色不褪,由此说明样品中含有双胍类化合物,待30分钟后红褐色转为蓝色,由此说明样品中含有盐酸二甲双胍,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例2胶囊剂的检测
样品:圣首牌荞芪胶囊,胶囊剂,HPLC法检测本品每粒含盐酸苯乙双胍16.6mg。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品1粒,将其内容物(约0.4g)置于2ml注射器中,加入1ml乙酸乙酯,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将反应载板浸入显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)中,迅速拎起并观察;提取液点样位置上立即可见明显红褐色,5分钟内颜色不褪,由此说明样品中含有双胍类化合物,待30分钟后红褐色并未转为蓝色,由此说明样品中含有盐酸苯乙双胍或盐酸丁二胍等双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例3片剂的检测
样品:清血养胰TM苓曲葛根复合植物片,片剂,HPLC法检测本品每粒含盐酸苯乙双胍6.0mg。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品1片,研细,置于2ml注射器中,加入1ml乙酸乙酯,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将反应载板浸入显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)中,迅速拎起并观察;提取液点样位置上立即可见明显红褐色,5分钟内颜色不褪,由此说明样品中含有双胍类化合物,待30分钟后红褐色并未转为蓝色,由此说明样品中含有盐酸苯乙双胍或盐酸丁二胍等双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例4丸剂的检测
样品:六味地黄丸,丸剂,HPLC法检测本品不含盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品研细,约1g,置于2ml注射器中,加入1ml乙酸乙酯,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)加至反应载板上显色;提取液点样位置无有色斑点,由此说明样品中不含有双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例5颗粒剂的检测
样品:糖脉康颗粒,颗粒剂,HPLC-MS检测本品不含盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品研细,约1g,置于2ml注射器中,加入1ml二氯甲烷,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)加至反应载板上显色;提取液点样位置无有色斑点,由此说明样品中不含有双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例6软胶囊的检测
样品:蜂胶软胶囊,HPLC-MS检测本品不含盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品1粒,剪开,挤出内容物约1g,置于2ml注射器中,分三次加入约共5ml二氯甲烷,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径12mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)加至反应载板上显色;提取液点样位置呈淡黄棕色斑点,由此说明样品中不含有双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例7茶剂的检测
样品:苦荞降糖茶,HPLC-MS检测本品不含盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品2g,置于2ml注射器中,加入1ml二氯甲烷,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径13mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)加至反应载板上显色;提取液点样位置呈黄棕色斑点,由此说明样品中不含有双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
实施例8胶囊剂的检测
样品:文糖胶囊,胶囊剂,HPLC法检测本品每粒含盐酸丁二胍12mg。
采用本发明的快速检测方法对样品进行检测,其具体步骤如下:
(1)取样品1粒,将其内容物(约0.4g)置于2ml注射器中,加入1ml乙酸乙酯,过滤,弃去滤液,收集滤渣;向滤渣中加入1ml无水乙醇,以有机滤头(0.45μm孔径,外径13mm)过滤,前5滴滤液弃去,收集后续滤液,即为提取液;
(2)吸取上述提取液2μl,点于反应载板上;将反应载板浸入显色剂(10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,1∶1∶1的体积比)中,迅速拎起并观察;提取液点样位置上立即可见明显红褐色,5分钟内颜色不褪,由此说明样品中含有双胍类化合物,待30分钟后红褐色并未转为蓝色,由此说明样品中含有盐酸苯乙双胍或盐酸丁二胍等双胍类化合物,该结果与HPLC的检测结果一致。
Claims (4)
1.一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法,其特征在于该方法包括如下步骤:
(1)从降糖类药品、保健品或食品中提取双胍类化合物,收集提取液;
(2)将提取液和显色剂进行显色反应,根据显色结果判断降糖类药品、保健品或食品中是否添加有双胍类化合物;
其中,所述步骤(1)中,在从降糖类药品、保健品或食品中提取双胍类化合物前,先向降糖类药品、保健品或食品中加入乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷,振摇使分散,过滤,弃滤液,收集过滤物进行后续提取处理;
所述提取试剂为无水乙醇;
所述显色剂为10%亚硝酰铁氰化钠溶液-10%铁氰化钾溶液-10%氢氧化钠溶液,该混合液是10%亚硝酰铁氰化钠溶液、10%铁氰化钾溶液和10%氢氧化钠溶液的等体积比混合液,所述百分比均为质量/体积百分比。
2.根据权利要求1所述快速检测方法,其特征在于所述步骤(2)中,采用硅胶类薄层板作为反应载板,将提取液和显色剂进行显色反应。
3.根据权利要求1所述快速检测方法,其特征在于所述步骤(2)中,提取液和显色剂进行显色反应,5分钟后判断显色结果。
4.权利要求1所述快速检测方法在制备双胍类化合物的快速检测试剂盒中的应用。
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