CN105277705A - 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法 - Google Patents

一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105277705A
CN105277705A CN201410353915.0A CN201410353915A CN105277705A CN 105277705 A CN105277705 A CN 105277705A CN 201410353915 A CN201410353915 A CN 201410353915A CN 105277705 A CN105277705 A CN 105277705A
Authority
CN
China
Prior art keywords
biguanides
preparation
liquid
sample
hole
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410353915.0A
Other languages
English (en)
Inventor
洪霞
薛永来
毛楠楠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Wise Science and Technology Development Co Ltd
Original Assignee
Jiangsu Wise Science and Technology Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Wise Science and Technology Development Co Ltd filed Critical Jiangsu Wise Science and Technology Development Co Ltd
Priority to CN201410353915.0A priority Critical patent/CN105277705A/zh
Publication of CN105277705A publication Critical patent/CN105277705A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明为检测双胍类药物残留的ELISA试剂盒的制备及其检测方法，其检测灵敏、准确、快速，操作简便、特异性强，适用于大批样品的检测。所述试剂盒包括：包被了双胍类药物抗原的酶标板、双胍类药物标准品、双胍类药物抗体工作液、双胍类药物酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩样品稀释液和浓缩洗涤液。双胍类药物检测试剂盒的原理是固相间接竞争酶联免疫反应，把提取的样品、酶标二抗工作液和抗体工作液加入对应的酶标孔中，孵育一段时间后，洗板加入底物液A、底物液B，在酶的作用下孔里将会出现蓝色，加入终止液，颜色由蓝色变为黄色。显色的深浅与标准品或样品中双胍类药物的含量成反比例关系。该方法可直接用于检测保健品或化妆品中的双胍类药物。

Description

一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法
技术领域
本发明涉及酶联免疫检测技术领域，特别是检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒。
背景技术
双胍类药物，如二甲双胍、丁福明、是肥胖的糖尿病病人有效的一线用药。在有些国家还被推荐为非肥胖的糖尿病患者的一线用药。双胍类药物单用不会引起低血糖。是口服降糖药中的元老。降糖作用肯定，不诱发低血糖，具有降糖作用以外的心血管保护作用，如调脂、抗小血板凝集等，但对于有严重心、肝、肺、肾功能不良的患者，不推荐使用。为减轻双胍类药物的胃肠副作用，一般建议餐后服用。双胍类通过促进肌肉等外周组织摄取葡萄糖，抑制葡萄糖异生；抑制或延缓葡萄糖在胃肠道吸收，正常人并无降血糖作用。与磺脲类联合使用可增强降血糖作用。然而蓄积会出现乳酸性酸中毒消化道反应肝、肾损害加重酮症酸中毒等毒副作用。双胍类药物现常会添加到一些保健品或化妆品中，给人们的身体带来了极大的伤害。
目前，双胍类药物的测定方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法、高效液相色谱-质谱联用法等，其检测结果准确可靠，但仪器设备比较昂贵，且样本前处理过程相对复杂。酶联免疫吸附法是一种准确、可靠、快速、特异的检测方法，适合于大批样品的快速筛选，近年来已广泛应用于食品安全检测行业。本发明旨在建立一种检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒及其检测方法。
发明内容
为了克服色谱法的不足，本发明提供一种检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒及其检测方法。该方法灵敏、准确、快速，操作简便、特异性强，适用于大批样品的快速检测。
发明内容
本发明检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒，包括酶标板、双胍类药物标准品、双胍类药物抗体工作液、双胍类药物酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液。
本发明检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒的制备，包括以下步骤：酶标板的制备、双胍类药物标准品的制备、双胍类药物抗体工作液的制备、双胍类药物酶标二抗工作液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备、浓缩稀释液的制备和浓缩洗涤液的制备。
其进一步特征在于：所述的酶标板经由双胍类药物抗原包被制备，具体步骤是将双胍类药物半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联得到包被抗原，用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液，将双胍类药物包被抗原稀释成1：40000比例，100μL/孔，37℃避光孵育2h，取出酶标板甩掉板内液体，加入经稀释的浓缩洗涤液250μL/孔，洗板2次，30s/次，然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭液，150μL/孔，37℃放置1.5h，甩掉封闭液直接拍干，拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干，抽检合格后将酶标板真空密封于4℃条件下保存。
双胍类药物标准品浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10g/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL。
所述双胍类药物抗体工作液是采用双胍类药物人工抗原免疫小鼠得到单克隆抗体，用抗体稀释液稀释成1：60000比例制备。
所述双胍类药物酶标二抗工作液由酶标二抗加稀释液稀释成1：2000比例，所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液，所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液，所述终止液为2mol/L的硫酸，所述浓缩稀释液是10倍浓缩稀释液，为0.1mol/L的PBS，pH值范围7.0-7.5之间，所述浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，为含0.5%吐温-20，0.1mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间。
检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒及其检测方法，基于抗原抗体的间接竞争酶联免疫反应原理，该方法包括以下步骤：
(1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，并将其复溶于样品稀释液中；
(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；
(3)取包被有双胍类药物抗原的酶标板，加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中，加入50μL/孔双胍类药物抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；)小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；
(4)然后加入双胍类药物100μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液260μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；
(5)加入底物液A50μL/孔，底物液B50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min；
(6)加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处或双波长450/630nm检测，测定每孔吸光度值（请在5min内读完数据）；
(7)以的标准品浓度(ppb)的对数为横坐标，标准品百分吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，对照标准曲线计算样品中双胍类药物的含量。
其中，所述待测样品用以下方法进行预处理：
配制样品稀释液（甲醇：0.1M盐酸=9:1）称量2g样品，加8ml样品稀释液，混合，涡旋，以4000r/min,离心10min。取上清液1ml,氮吹。取1ml蒸馏水复溶，混匀，用于分析。
本发明检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒及其检测方法的测定原理：样品中的双胍类药物与酶标板上固定的抗原特异性竞争抗体，加入酶标二抗，与抗体反应，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中双胍类药物的含量。如果样品中的双胍类药物含量少，显色深；反之，则显色浅。本发明的试剂盒检测方法操作简便，检测灵敏、准确、快速，适用于大批量样品的快速检测。
附图说明
图1双胍类的标准曲线。
具体实施方式
双胍类药物蛋白质偶联物的制备：
采用琥珀酸酐法得到带羧基的双胍类药物半抗原衍生物，之后取0.05mmol与载体蛋白BSA按10：1的结合比混合在0.05mol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液(CBS)中，然后加入0.15mmol碳二亚胺，搅拌置室温反应24h，最后于0.2mol/LpH7.6的PBS缓冲液中透析两天，除去未反应的半抗原，将得到的蛋白质偶联物溶液于-20℃保存备用。
双胍类药物抗体的制备：
选用健康成年纯种BALA/C小鼠，取与蛋白质偶联制备的免疫抗原50μg与等量完全弗氏佐剂混合采用腹腔注射进行初次免疫，之后每隔3周用相同剂量免疫抗原加等量不完全弗氏佐剂采用腹腔注射进行二次、三次免疫，每次免疫6天后尾静脉采血测定抗血清效价至一定滴度后，用相同剂量不加佐剂进行末次免疫，3天后取脾制备脾细胞悬浮液与骨髓瘤细胞进行细胞融合，筛选出所需要的杂交瘤细胞系进行克隆化，选择处于对数生长期的杂交瘤细胞进行冻存，用于腹水制备，先腹腔注射0.5ml液体石蜡于BALB/C鼠致敏，2周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7-10天后可产生腹水，待腹水尽可能多时用注射器抽取腹水，反复收集数次，4000rpm离心15min，收集上清，采用辛酸-硫酸铵法纯化腹水对单克隆抗体进行纯化，冷冻干燥得冻干粉后于-20℃保存备用。
制备包被有双胍类药物包被抗原的酶标板：
包被抗原是将双胍类药物半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联得到的，用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液，将双胍类药物抗原稀释成1:40000比例，100μL/孔，37℃放置2h，取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300μL/孔，洗板2次，30s/次，然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭，150μL/孔，37℃放置1.5h，弃去封闭液，拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干，抽检合格后将酶标板真空密封后置4℃下保存。
双胍类药物标准品配制浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL。
双胍类药物抗体工作液的制备：采用双胍类药物人工抗原免疫小鼠得到单克隆抗体，用抗体稀释液稀释成1：60000比例制备。
双胍类药物酶标二抗工作液由酶标二抗加稀释液稀释成1：2000比例，底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液，底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液，终止液为2mol/L的硫酸，浓缩稀释液是10倍浓缩稀释液，为0.1mol/L的PBS，pH值范围7.0-7.5之间，浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，为含0.5%吐温-20，0.01mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间。
基于上述制备的试剂，本发明用于检测双胍类药物的酶联免疫试剂盒包括如下材料：
(1)96孔酶标板×1块；
(2)标准液×6瓶：(1mL/瓶)0ppm、0.05ng/mL、0.15ng/mL、0.45ng/mL、1.35ng/mL、4.05ng/mL；
(3)抗体工作液7mL；
(4)酶标二抗工作液12mL；
(5)底物液A7mL；
(6)底物液B7mL；
(7)终止液7mL；
(8)10×浓缩稀释液40mL；
(9)10×浓缩洗涤液40mL；
本发明的试剂盒用于检测样品中双胍类药物残留量时，通过以下步骤实施：样品预处理、用本发明试剂盒进行检测、分析结果。
(1)样品预处理
配制样品稀释液（甲醇：0.1M盐酸=9:1）称量2g样品，加8ml样品稀释液，混合，涡旋，以4000r/min,离心10min。取上清液1ml,氮吹。取1ml蒸馏水复溶，混匀，用于分析。
(2)用本发明试剂盒检测待测样品中双胍类药物残留量
取取包被有双胍类药物抗原的酶标板，加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中，加入50μL/孔双胍类药物抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；)小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；然后加入双胍类药物100μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；
(3)分析结果
百分吸光度值的计算，标准品或样本的百分吸光度值等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0标准)的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值(%)＝B/B0×100%
其中B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值，B0—0ppb标准溶液的平均吸光度值。
以双胍类药物的标准品浓度(ppb)的对数为横坐标，标准品百分吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。将样本的百分吸光度值代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中双胍类药物的实际浓度。

Claims (8)

1.检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，包括酶标板、双胍类药物标准品、双胍类药物抗体工作液、双胍类药物酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液和浓缩洗涤液。
2.检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，包括以下步骤：酶标板的制备、双胍类药物标准品的制作、双胍类药物单克隆抗体及其工作液的制备、双胍类药物酶标二抗工作液的制备、洗涤液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备。
3.根据权利要求2所述检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，其特征在于：所述的双胍类药物包被抗原是将双胍类药物半抗原与载体蛋白偶联得到的，该载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)；用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液，将双胍类药物抗原稀释成1：10000比例，100μL/孔，37℃放置2h，取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液250μL/孔，洗板2次，30s/次；然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭，150μL/孔，37℃放置1.5h，弃去封闭液，拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干；抽检合格后将酶标板真空密封后置4℃下保存。
4.根据权利要求2所述检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，其特征在于：所述的双胍类药物标准品浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL。
5.根据权利要求2所述的检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，其特征在于：所述的双胍类药物蛋白质偶联物单克隆抗体是采用双胍类药物人工抗原免疫兔所得，该抗体工作液用抗体稀释液稀释成1：40000。
6.根据权利要求2所述检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，其特征在于：所述的双胍类药物酶标二抗工作液用酶标二抗稀释液稀释成1：2000比例；所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液；所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；所述终止液为2mol/L的硫酸；所述浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，其包含0.5%吐温-20，0.01mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间。
7.权利要求2所述的检测双胍类药物的ELISA试剂盒的制备及检测方法，基于抗原抗体进行间接竞争酶联免疫反应，该方法包括以下步骤：
(1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，并将其复溶于样品稀释液工作液中；
(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；
(3)取包被有双胍类药物抗原的酶标板，加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中；
(4)加入抗体工作液，50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液260μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；
(5)加入双胍类药物酶标二抗工作液，100μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液260μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；
(6)加入底物液A50μL/孔，底物液B50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min；
(7)加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处或双波长450/630nm检测，测定每孔吸光度值（请在5min内读完数据）；
(8)以标准品测试的吸光度值与标准品的浓度对数值绘制标准曲线，对照标准曲线计算样品中双胍类药物的含量。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述处理后的样品是经过以下处理的样品：
(1)配制样品稀释液（甲醇：0.1M盐酸=9:1）；
(2)称量2g样品，加8ml样品稀释液，混合，涡旋；
(3)以4000r/min,离心10min，取上清液1ml，氮吹；
(4)取1ml蒸馏水复溶，混匀，用于分析。
CN201410353915.0A 2014-07-24 2014-07-24 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法 Pending CN105277705A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410353915.0A CN105277705A (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410353915.0A CN105277705A (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105277705A true CN105277705A (zh) 2016-01-27

Family

ID=55147073

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410353915.0A Pending CN105277705A (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105277705A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108614109A (zh) * 2016-12-12 2018-10-02 丹阳亿太生物科技发展有限公司 一种检测硫氰酸钠的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN111650150A (zh) * 2020-07-24 2020-09-11 褚培忠 一种检测季铵盐和双胍混合溶液中双胍含量的方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5498547A (en) * 1993-04-28 1996-03-12 Environmental Test Systems, Inc. Method and device for the determination of polymeric biguanides in aqueous fluids
WO2002053090A2 (fr) * 2000-12-29 2002-07-11 Dospharma Association medicamenteuse d'une biguanine (metformine) et d'arginine
WO2005017532A1 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 Ceapro Inc. Diagnostic composition for diabetes type-2 and impaired glucose tolerance, and methods of use
CN1690710A (zh) * 2004-04-30 2005-11-02 中国农业大学 一种检测氯霉素的酶联免疫试剂盒
CN101285802A (zh) * 2008-03-17 2008-10-15 北京市东城区药品检验所 降糖中药类产品中非法掺入高极性降糖化学药物的定性分析检测方法
WO2009057119A2 (en) * 2007-11-01 2009-05-07 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Glycemic control for reduction of cardiovascular disease risk in diabetic patients expressing haptoglobin 2-2
CN101581712A (zh) * 2009-06-19 2009-11-18 广东省药品检验所 一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法及其应用
CN101629942A (zh) * 2009-08-17 2010-01-20 广东省药品检验所 中成药、保健品和食品中掺杂化学降糖成分的筛查方法
CN102539603A (zh) * 2011-12-28 2012-07-04 天津药物研究院 一种检测盐酸二甲双胍与格列美脲复方制剂有关物质的方法
CN103698370A (zh) * 2013-11-17 2014-04-02 大连杰信生物科技有限公司 一种盐酸二甲双胍检测新方法
CN103852499A (zh) * 2012-11-29 2014-06-11 北京市药品检验所 快速检测制品中非法添加双胍类物质的方法
CN104076036A (zh) * 2013-03-28 2014-10-01 北京市药品检验所 检测制品中双胍类物质的方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5498547A (en) * 1993-04-28 1996-03-12 Environmental Test Systems, Inc. Method and device for the determination of polymeric biguanides in aqueous fluids
WO2002053090A2 (fr) * 2000-12-29 2002-07-11 Dospharma Association medicamenteuse d'une biguanine (metformine) et d'arginine
WO2005017532A1 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 Ceapro Inc. Diagnostic composition for diabetes type-2 and impaired glucose tolerance, and methods of use
CN1690710A (zh) * 2004-04-30 2005-11-02 中国农业大学 一种检测氯霉素的酶联免疫试剂盒
WO2009057119A2 (en) * 2007-11-01 2009-05-07 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Glycemic control for reduction of cardiovascular disease risk in diabetic patients expressing haptoglobin 2-2
CN101285802A (zh) * 2008-03-17 2008-10-15 北京市东城区药品检验所 降糖中药类产品中非法掺入高极性降糖化学药物的定性分析检测方法
CN101581712A (zh) * 2009-06-19 2009-11-18 广东省药品检验所 一种降糖类药品、保健品或食品中添加双胍类化合物的快速检测方法及其应用
CN101629942A (zh) * 2009-08-17 2010-01-20 广东省药品检验所 中成药、保健品和食品中掺杂化学降糖成分的筛查方法
CN102539603A (zh) * 2011-12-28 2012-07-04 天津药物研究院 一种检测盐酸二甲双胍与格列美脲复方制剂有关物质的方法
CN103852499A (zh) * 2012-11-29 2014-06-11 北京市药品检验所 快速检测制品中非法添加双胍类物质的方法
CN104076036A (zh) * 2013-03-28 2014-10-01 北京市药品检验所 检测制品中双胍类物质的方法
CN103698370A (zh) * 2013-11-17 2014-04-02 大连杰信生物科技有限公司 一种盐酸二甲双胍检测新方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRZYSZTOF LABUZEK ET AL: "Quantification of metformin by the HPLC method in brain regions, cerebrospinal fluid and plasma of rats treated with lipopolysaccharide", 《PHARMACOLOGICAL REPORTS》 *
OTTING VF.: "Radioimmunoassay of n-butylbiguanide in human serum", 《ARZNEIMITTELFORSCHUNG》 *
VALENTINA PORTA ET AL: "HPLC-UV determination of metformin in human plasma for application in pharmacokinetics and bioequivalence studies", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
张平等: "降糖宁胶囊中掺有西药降糖成分的检测", 《安徽医药》 *
王福安等: "《生物大分子的内化》", 30 June 1995 *
石英等: "LC-MS和HPLC法测定人血浆中格列本脲和二甲双胍方法的建立", 《第三军医大学学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108614109A (zh) * 2016-12-12 2018-10-02 丹阳亿太生物科技发展有限公司 一种检测硫氰酸钠的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN111650150A (zh) * 2020-07-24 2020-09-11 褚培忠 一种检测季铵盐和双胍混合溶液中双胍含量的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104655846A (zh) 一种检测孕酮的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN104655847A (zh) 检测阿德呋啉的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN106932589A (zh) 测定人体血清视黄醇结合蛋白含量的试剂盒及其制备方法
CN103792356A (zh) 检测伏马毒素的elisa试剂盒的制备及检测方法
CN105510589A (zh) 检测多菌灵的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN105319368A (zh) 检测玉米赤霉烯酮的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN104076154A (zh) 检测叶酸的酶联免疫试剂盒及其应用
CN108169479B (zh) 一种检测氟苯尼考的免疫学试剂盒
CN105067599A (zh) 一种检测胃泌素释放肽前体的化学发光免疫检测试剂盒
CN101650368A (zh) 用胶体金免疫层析试检测玉米赤霉烯酮毒素的方法
CN105319354A (zh) 检测甲基对硫磷的化学发光免疫检测试剂盒的制备
CN101196520A (zh) 膝沟藻毒素gtx2,3间接竞争elisa检测方法
CN105572336A (zh) 检测吡虫啉的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN105277705A (zh) 一种检测双胍类药物残留的试剂盒的制备及其检测方法
CN105319353A (zh) 一种检测二氢吡啶类药物残留的酶联免疫试剂盒的制备
CN105301233A (zh) 检测茶叶中吡虫啉残留的酶联免疫试剂盒及使用方法
CN106568961A (zh) 一种检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN103808921A (zh) 检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒及其使用方法
CN109406784A (zh) 一种检测微囊藻毒素mc-lr时间分辨荧光免疫定量poct试纸条
CN105319370A (zh) 一种检测苯二氮卓类药物残留试剂盒的制备
CN106610432A (zh) 一种检测灭多威的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN106610431A (zh) 一种检测苯霜灵的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN103102319A (zh) 三聚氰胺半抗原及其制备方法和应用
CN106645697A (zh) 一种食品中玉米赤霉醇的检测试剂盒
CN105510588A (zh) 一种检测草甘磷的酶联免疫试剂盒及其检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160127

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication