CN109490292B - 一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，属于保健品检测分析技术领域，其中，包括如下步骤：制备检测试纸、对待测样品进行前处理，将前处理后的样品在检测试纸上进行显色反应，若试纸呈现橙红色，判断样品中存在双胍类化合物。该方法可现场快速检测保健品中的双胍成分，并且能够实现定量检测，误检及漏检率极低，并且检测过程中降低市面上现有快速检测引起的试剂污染性问题。

Description

一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法

技术领域

本发明属于保健品检测分析技术领域，具体涉及一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法。

背景技术

双胍类化合物是降糖药家族的元老之一，主要包括盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和盐酸丁二胍，是肥胖型糖尿病病人有效的一线用药。双胍类化合物价格低廉，与其他化学降糖药联合使用可增强降血糖作用，故在非法添加中出现频率高，但双胍类化合物作为药物用于降糖时，存在严重不良反应包括乳酸中毒，是一种死亡率高的不良反应，尤其对于有严重心、肝、肺、肾功能不良的患者或老年人，不推荐使用。

盐酸二甲双胍商品名称有“降糖片”、“甲福明”、“迪化糖锭”、“格华止”、“美迪康”、“君力达”等，化学名称为：1，1-二甲基双胍盐酸盐。盐酸苯乙双胍又称“降糖灵”，化学名称为：1-(2-苯乙基)双胍盐酸盐。盐酸丁二胍，又称为“丁福明”，化学名称为1-丁基二胍。

盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍在我国为处方药，患者需要在医生的指导下方能服用，国家对其生产、经营及使用进行了严格的规定。其中，盐酸苯乙双胍由于其严重的副作用，在2016年已经被停止其原料药和制剂在我国的生产、销售和使用。盐酸丁二胍属淘汰药，在我国和大部分发达国家均未批准上市。关于盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍引起的药物不良反应已有不少报道。

随着人们对健康越来越重视，安全有效的保健品越来越受到大众的青睐。由于双胍类化合物价格低廉，降糖效果显著，故一些不法商家为谋取巨额利益，夸大产品治疗效果，将双胍类药物非法添加到宣称为纯中药制剂的降糖类保健品中，其产品常被冠以“最新科技成果”或“祖传秘方”。在不知情的情况下肝功能不正常、转氨酶升高的糖尿病病人，长期误用会造成乳酸性酸中毒、加重酮症酸中毒、肝肾衰竭、严重甚至危及生命。

目前，双胍类药物残留的国标检测方法是液相色谱（HPLC）、液相-质谱联用法、电导仪，有的科研机构还推出了薄层色谱（TLC法）、拉曼色谱法、紫外分光法等检测方法。市面上也有一些简单的保健品中双胍类成分的快速筛查方法。

但本申请发明人在实现本申请实施例技术方案的过程中，发现上述技术至少存在如下技术问题：

（1）色谱分析法由于昂贵的仪器设备、繁琐的操作过程、漫长的检测时间、专业能力要求，不适用食品药品监管基层需求；

（2）电导仪、拉曼色谱法对各种繁多的保健品缺乏针对性处理方式，导致出现了假阳性、假阴性等突出问题；

（3）薄层色谱法（TLC法）、紫外分光法在处理过程中需要使用大量的有机溶剂，有毒有害的化学试剂处理是比较值得思量的问题，如操作不当，会产生中毒、易燃易爆等不可估量的后果；

（4）不同生产批次的保健产品添加的配方各不相同，在这些降糖类保健品中富含的吡啶甲酸铬、蜂蜡、明胶、硬脂酸镁、黄芪、茶多酚、油类、糖衣等干扰因素，导致市面上的检测方法对于配方不同的保健产品，误检及漏检率很高；

（5）现有的各种快速检测方法，只能对降糖类保健品进行定性检测，不能进行定量检测；

（6）双胍快速检测方法采用的检测试剂存在中毒、易燃易爆的可能性，对食品药品监管工作以及检测人员的安全均存在较大隐患。

针对上述技术问题，研究出一款保健品中双胍类化合物的快速检测方法，解决食品药品一线监管面临的检测成本高、耗时较长、对检测人员素质要求高、样品基质繁杂带来的干扰、试剂使用带来的隐患等问题，是本领域技术人员研究亟待解决问题。

本发明所采用定量检测的仪器见专利号201410312815.3，专利名称为《一种智能化免疫层析及光谱分析一体化装置及其分析方法》中所述的智能化免疫层析及光谱分析一体化装置，简称手持机。

发明内容

为了克服现有的技术对保健品中双胍成分检测过程中存在检测成本高、耗时较长、对检测人员素质要求高、样品基质繁杂带来的干扰、试剂使用带来的隐患等不足, 本申请实施例提供了一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，该方法可现场快速检测保健品中的双胍成分，并且能够实现定量检测，误检及漏检率极低，并且检测过程中降低市面上现有快速检测引起的试剂污染性问题。

本申请实施例解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，包括如下步骤：

（1）取可降解的试纸，置入浸泡液中浸泡，烘干，即可得到检测试纸；

（2）取待测样品，置入提取液中搅拌混合均匀，离心处理，取上清液，将保健品除杂后中提取出双胍成分；

（3）将步骤（2）中的上清液滴到步骤（1）制备的检测试纸上进行显色反应，若试纸呈现橙红色，判断样品中存在双胍类化合物；

在碱性条件下，检测卡上的检测试剂，遇到双胍类成分中的具备三个氨基的胍鎓离子，立即抢夺其中的氰基进行配位，释放出的铁离子呈紫红色，而氢氧根离子与铁离子结合生成红褐色的氢氧化铁，反应非常迅速、非常专属。

采用可降解试纸，避免了检测后的二次污染。

其中，步骤（1）中，所述的浸泡液包括硝普钠、铁氰化钾、聚乙二醇和曲拉通X-100。

其中，硝普钠作为检测剂，参与反应；铁氰化钾作为检测剂，参与反应，提供铁离子；聚乙二醇作为表面活性剂，为粘度调节剂，能帮助反应产物均一的扩展到检测试纸上；曲拉通X-100作为非离子表面活化剂，与聚二乙醇配合可提升检测产物的扩展均一性，形成空间构型，降低不稳定易燃的检测剂危险性。

步骤（2）中，所述的提取液为无水乙醇与氢氧化钾混合溶液。

提取液碱化乙醇提供碱性环境，利用OH^-与吡啶甲酸铬、蜂蜡、明胶、硬脂酸镁、黄芪、茶多酚、油类、糖衣通过配位键形成不同性质的的沉降物，将不同基质引起的干扰降至最低。

优选的，步骤（1）中，所述的浸泡液中各组分的质量百分浓度为1%的硝普钠、2.2%的铁氰化钾、3%的聚乙二醇、1%的曲拉通X-100。

其中硝普钠质量百分浓度低于1%时，快检显色区分不明显，定量效果差，当硝普钠质量百分浓度高于1%时，硝普钠不稳定性凸显，三价铁离子易被氧化成二价铁离子，后与铁氰化钾形成蓝色沉淀。

其中铁氰化钾的质量百分比浓度低于2.2%时，不能完全将双胍中胍鎓离子全部夺取，双胍含量区分度较差；当铁氰化钾浓度高于2.2%时，破坏化学平衡，检测出现先增加后降低的反应趋势，使双胍的区分效果不稳定，导致准确性降低。

其中聚乙二醇的质量百分浓度低于3%时，检测试纸的延展性不足，易出现假阳性的问题；当聚乙二醇质量百分浓度高于3%时，检测时间增加，不适用快速检测。

其中曲拉通X-100的质量百分浓度低于1%时，检测试纸延展性不足，易出现假阳性的问题；当曲拉通X-100的质量百分浓度高于1%时，增加检测时间，不适用基层快速检测。

更优选的，所述的浸泡液中各组分的体积比为：V（硝普钠）：V（铁氰化钾）：V（聚乙二醇）：V（曲拉通X-100）=10:7:2:1。当体积比为以上配比时，与待检样品中的双胍成分混合，反应后的废弃试剂量对环境危害最低。

更优选的，试纸在浸泡液中浸泡的时间为10-20分钟。

更优选的，烘干的温度为50-70℃，烘干的时间为20-40分钟，进一步降低浸泡液在试纸固定的时间，由5小时降至30分钟左右。

优选的，步骤（2）中，提取液中无水乙醇与氢氧化钾溶液的体积比为300：1，对无水乙醇进行碱化，所加的氢氧化钾溶液比例过低，则混合体系中含水量增多，会导致检测双胍类物质时无显色情况出现；比例过高会降低pH值，不能达到去除样品中杂质干扰因素的目的。

更优选的，氢氧化钾溶液的浓度为20 mol/L。氢氧化钾溶液浓度低于20mol/L，提取液中水量增加，破坏微水的环境，导致反应不显色；浓度高于20mol/L配置过程中出现明显放热，易出现爆沸的危险。

优选的，将步骤（3）中，还设置有比色卡，比色卡上设置有橙红色，方便将进行显色反应后的试纸进行对比。

优选的，将步骤（3）中显色反应后的试纸置入手持机进行定量检测。双胍浓度与氢氧化铁的反射灰阶色度值成正比，在手持机内置的曲线判读保健品中双胍浓度，可作为双胍类定量检测快检筛查的判断依据。

优选的，步骤（1）中，还包括制备检测卡；检测卡包括上下对应的上盖和下盖，下盖上表面中央位置设置有凹槽，凹槽相对应的上盖设置有相对应的加样孔，凹槽中放置检测试纸。检测卡由上盖和下盖结合在一起形成，并设置有凹槽，形成稳定的几何结构，将不稳定易燃的检测试纸固定于空间通道中，制备成绿色环保的双胍检测卡。

所述检测卡的检出限为2.5g/kg，检测范围是2.5 g/kg-20 g/kg；所述的双胍检测卡与手持机配套可以对保健品中双胍成分定量分析。

本申请实施例的优点是：

1、由于采用了检测试纸现场进行快速检测的技术手段，所以，有效解决了现有技术中高端仪器在检测降糖类保健品中化学成分双胍时成本高、耗时较长、对检测人员素质要求高等技术问题，进而实现了可现场快速检测降糖类保健品中化学成分双胍的技术效果。

2、由于采用了提取液对样品进行前处理的技术手段，所以，有效解决了现有技术检测双胍成分过程中由于配方不同的保健产品，误检及漏检率很高，不同基质引起的干扰较高的技术问题，进而实现将不同基质引起的干扰降至最低，使得保健品双胍快速检测时干扰因子引起的误检和漏检的程度降到最低的技术效果。

3、由于采用了双胍检测试纸配合手持机的技术手段，所以，有效解决了现有技术检测双胍成分过程中不能定量检测的技术问题，进而实现手持机进行读数，达到定量检测的技术效果。

4、由于采用了可降解检测纸制备检测卡的技术手段，所以，有效解决了现有技术检测双胍成分过程中试剂污染的技术问题，该检测卡为空间构型，达到避免试纸直接接触空气引起的易燃易爆情况，并且在检测后浸泡液与检测目标物中和形成无害的盐类，进一步降低因检测引起的环境问题的技术效果。

具体实施方式

本申请实施例通过提供一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，解决现有技术中对保健品中双胍成分检测过程中存在检测成本高、耗时较长、对检测人员素质要求高、样品基质繁杂带来的干扰、试剂使用带来的隐患等的问题，在检测过程中运用检测试纸进行检测，同时配合使用检测卡，实现现场快速检测保健品中的双胍成分，定量检测，误检及漏检率极低，并且检测过程中降低市面上现有快速检测引起的试剂污染性问题。

本申请实施例中的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：

一、检测试纸的制备：

（1）取可降解的试纸；

（2）制备浸泡液：取体积比为10:7:2:1的硝普钠、铁氰化钾、聚乙二醇和曲拉通X-100，控制各个组分的百分浓度分别为：1%、2.2%、3%、1%，搅拌混合均匀；

（3）将可降解的试纸在浸泡液中浸泡15分钟；

（4）将浸泡后的双胍检测试纸基材放置于60摄氏度干燥器中，烘干30分钟，得到双胍检测试纸。

二、提取液的制备

取无水乙醇和20 mol/L氢氧化钾溶液，体积比为300：1，搅拌混合均匀得到。

三、检测卡的制备：

取上下对应且由PVC板制成的上盖和下盖，下盖上表面中央位置设置有凹槽，凹槽相对应的上盖设置有相对应的加样孔，凹槽中放置检测试纸。

实施例1：软胶囊类降糖保健品双胍快速检测方法

（1）待测样品前处理：

称取0.2g样品于2.0mL离心管中，加入1.0mL提取液，将2.0mL离心管3000r/min离心1min，直接取上清液于1.5mL离心管中。

（2）检测：

取200uL稀释液于另一个1.5mL离心管中，加入130uL上清液，对上清液进行稀释，即得待测液，取70uL待测液滴加到检测卡加样孔中间位置，室温反应30min。

（3）定量测试：

将双胍检测卡放置于手持机上，利用反射光谱法原理读取保健品中双胍的含量。

实施例2：硬胶囊、茶类、片剂类降糖保健品双胍快速检测方法

（1）待测样品前处理：

称取0.2g样品于2.0mL离心管中，加入1.0mL提取液，将2.0mL离心管3000r/min离心1min，直接取上清液于1.5mL离心管中。

（2）检测：

取200uL稀释液于另一个1.5mL离心管中，加入100uL滤液上清液，混匀，即得待测液，取70uL待测液滴加到检测卡加样孔中间位置，室温反应30min。

（3）定量测试：

将双胍检测卡放置于手持机上，利用反射光谱法原理读取保健品中双胍的含量。

实施例3：检测法的特异性实验

选择市场上常用的不同作用机理的降糖药，测定检测方法的交叉反应现象。分别以苯乙双胍、二甲双胍、丁双胍、格列吡嗪、格列本脲与吡格列酮0.5g/kg的溶液为滤液，按照上述样品测定过程检测，观察检测卡颜色，并在手持机上读取检测结果。其结果如下表：

表1交叉反应现象

名称	颜色	检测含量（g/kg）
			苯乙双胍	红色	0.49
二甲双胍	红色	0.51
			丁双胍	红色	0.46
格列吡嗪	黄色	0.01
			格列本脲	黄色	0
吡格列酮	黄色	0.01

由表1结果可以看出，本检测卡与其他降糖类药物无交叉，检测双胍类药物专属性高。

最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (6)

1.一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

取可降解的试纸，置入浸泡液中浸泡，烘干，即可得到检测试纸；

取待测样品，置入提取液中搅拌混合均匀，离心处理，取上清液；

将步骤(2)中的上清液滴到步骤(1)制备的检测试纸上进行显色反应，若试纸呈现橙红色，判断样品中存在双胍类化合物；

其中，步骤(1)中，所述的浸泡液包括硝普钠、铁氰化钾、聚乙二醇和曲拉通X-100；

步骤(2)中，所述的提取液为无水乙醇与氢氧化钾混合溶液；

步骤(2)中，提取液中无水乙醇与氢氧化钾溶液的体积比为300：1；氢氧化钾溶液的浓度为20mol/L；

步骤(1)中，所述的浸泡液中各组分的质量百分浓度为：1％的硝普钠、2.2％的铁氰化钾、3％的聚乙二醇、1％的曲拉通X-100；

所述的浸泡液中各组分的体积比为：V(硝普钠)：V(铁氰化钾)：V(聚乙二醇)：V(曲拉通X-100)＝10:7:2:1。

2.如权利要求1所述的一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，试纸在浸泡液中浸泡的时间为10-20分钟。

3.如权利要求2所述的一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，烘干的温度为50-70℃，烘干的时间为20-40分钟。

4.如权利要求1所述的一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，将步骤(3)中，还设置有比色卡，比色卡上设置有橙红色。

5.如权利要求1所述的一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，将步骤(3)中显色反应后的试纸置入手持机进行定量检测。

6.如权利要求1所述的一种保健品中双胍类化合物的快速检测方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括制备检测卡；检测卡包括上下对应的上盖和下盖，下盖上表面中央位置设置有凹槽，凹槽相对应的上盖设置有相对应的加样孔，凹槽中放置检测试纸。