CN101558818A - 一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其内容为：先培养菌种，再接种到豆粕发酵原料，然后控制发酵温度、湿度进行固体发酵，干燥粉碎后得到发酵酶解豆粕产品。本发明通过固态发酵酶解豆粕，使豆粕中含有多种消化酶，并降解豆粕中大部分抗原蛋白和低聚糖等抗营养因子，提高粗蛋白和可溶性蛋白含量，并赋予一定量有机酸和特殊风味，能很好的解决畜禽养殖中的消化不良、腹泻、机体抗病能力弱等问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺，是一种对菌种进行种子培养、杂菌抑制，进而控制发酵过程制备饲用发酵酶解豆粕的生产方法。属于饲料生产领域。
背景技术
豆粕作为常用的植物蛋白质原料之一，含有丰富的蛋白质、必需氨基酸、磷脂及多种矿物质等营养成分，在饲料行业中得到广泛应用，约占植物性蛋白质饲料总消费量的64％。但豆粕中大量的抗营养因子物质，如胰蛋白酶抑制剂、大豆抗原蛋白、尿酶、植酸、植物凝集素、寡低聚糖糖和非淀粉多糖等的存在，导致畜禽消化吸收功能失调、紊乱、胀气、腹泻，动物生产性能降低，尤其是对于幼龄动物更是如此。幼龄动物营养性腹泻发生、免疫功能低下等问题的发生多是和豆粕中的抗营养因子有直接关系，这势必造成整个动物生产性能的降低，用药不规范等问题影响到畜禽产品的安全性。对畜禽养殖行业造成很大的损失，甚至影响禽肉蛋类等食品品质。这些抗营养因子还会造成蛋白利用率低，造成原料浪费、环境污染和养殖成本增加等问题。如何解决这些问题已成为国内外研究的热点。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺，以解决用豆粕养殖畜禽时消化不良、腹泻、机体抗病能力弱等问题，提高蛋奶肉的品质，提高饲料利用率，降低养殖成本，改善养殖环境和生态环境。
为解决上述的技术问题，本发明采取的技术方案是，一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其内容为：先培养菌种，再接种到豆粕发酵原料，然后控制发酵温度、湿度进行固体发酵，干燥粉碎后得到发酵酶解豆粕产品。
上述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其内容为：
a、种子培养：以麸皮豆粕配制种子培养基，接入菌种，在30～37℃培养65～72h。
b、发酵豆粕：将豆粕灭菌后添加0.1％～0.5％的乙酸作为发酵原料，将种子以3％的接种量与发酵原料混合均匀，平铺于发酵池，厚度50cm左右，进行固态发酵；通蒸汽保持发酵车间湿度＞70％，发酵温度控制在32℃；发酵至40h，增大蒸汽通量，提高空气湿度；发酵到60h～68h，结束发酵。
c、将发酵的原料干燥粉碎，制得发酵酶解豆粕产品。
上述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其步骤a所述的种子培养基中麸皮与豆粕的比例为6∶4。
上述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，步骤b所述豆粕灭菌为将豆粕在105℃温度下灭菌30min。
上述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，在步骤b所述发酵期间，发酵原料温度上升时，通入过滤冷风控制发酵温度。
经测定，由上述方法生产的发酵酶解豆粕，发酵结束豆粕中含有中性蛋白酶≥1600U/g，酸性蛋白酶≥600U/g，纤维素酶≥450U/g，果胶酶≥3800U/g，木聚糖酶≥2000U/g，α-半乳糖苷酶≥100U/g，粗蛋白含量≥55％，可溶性蛋白含量≥30％，抗原蛋白降解≥80％，胰蛋白酶抑制剂降解率≥90％，尿酶活性抑制率≥90％，水苏糖降解率≥95％，棉籽糖降解率≥90％，有机酸含量≥5％。
本发明通过固态发酵酶解豆粕，使豆粕中含有多种消化酶，并降解豆粕中大部分抗原蛋白和低聚糖等抗营养因子，提高粗蛋白和可溶性蛋白含量，并赋予一定量有机酸和特殊风味，能很好的解决畜禽养殖中的消化不良、腹泻、机体抗病能力弱等问题。能避免因为疾病所带来的损耗和损失，提高蛋奶肉的品质；同时还可以提高饲料利用率，减少不必要的浪费，大大降低养殖成本；还可以改善养殖环境和生态环境。
本发明所用检测方法：发酵酶解豆粕中纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶的检测方法为山东六和农牧科技园有限公司企业标准Q/SLH002-2006；中性蛋白酶、酸性蛋白酶的检测方法为轻工部标准QB/T1803；尿素酶活性检测方法为国家标准GB/T8622-88；胰蛋白酶抑制剂的检测方法为国家标准GB/T21498-2008；可溶性蛋白含量检测方法为国家标准GB/T1205-2006。
本发明所用材料的来源：菌种为山东六和农牧科技园有限公司生产的KD1菌种商品；种子培养基成分为麸皮培养基；固体发酵底料为普通豆粕。
本发明所使用的设备均为本行业常用设备，包括蒸气灭菌器、混合机、粉碎机等。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步详细说明。
实施例1
该工艺步骤为：培养种子，接种子到发酵底料，控制发酵温度、湿度，进行固体发酵，获得发酵酶解豆粕产品。具体内容如下：
种子培养：以麸皮∶豆粕为6∶4的比例配制种子培养基，接种KD1菌种，在30℃培养72h。
发酵：将豆粕于105℃灭菌30min后作为发酵原料，在发酵原料中添加0.1％的乙酸抑制杂菌。种子以3％的接种量与发酵原料混合均匀，平铺于发酵池，厚度45cm，进行固态发酵。通蒸汽保持发酵车间湿度为70％，发酵温度控制在32℃，发酵期间温度上升，通入过滤冷风进行控制。发酵至40h，增大蒸汽通量，提高空气湿度为90％。发酵到60h后结束。
将发酵的豆粕干燥粉碎，制得发酵酶解豆粕产品。
实施例2
该工艺步骤同实施例1，具体内容如下：
种子培养：以麸皮∶豆粕为6∶4的比例配制种子培养基，接种KD1菌种，在37℃培养65h。
发酵：将豆粕于105℃灭菌30min后作为发酵原料，在发酵原料中添加0.5％的乙酸抑制杂菌。种子以3％的接种量与发酵原料混合均匀，平铺于发酵池厚度55cm，进行固态发酵。通蒸汽保持发酵车间湿度为80％，发酵温度控制在32℃，发酵期间温度上升，通过滤冷风控制温度。发酵至40h，增大蒸汽通量，提高空气湿度为95％。发酵到64h结束。
将发酵的豆粕干燥粉碎，制得发酵酶解豆粕产品。
实施例3
该工艺步骤同实施例1，具体内容如下：
种子培养：以麸皮∶豆粕为6∶4的比例配制种子培养基，接种KD1菌种，在32℃培养70h。
发酵：将豆粕于105℃灭菌30min后作为发酵原料，在发酵原料中添加0.3％的乙酸抑制杂菌。种子以3％的接种量与发酵原料混合均匀，平铺于发酵池，厚度50cm，进行固态发酵。通蒸汽保持发酵车间湿度为75％，发酵温度控制在32℃，发酵期间温度上升，通过滤冷风控制温度。发酵至40h，增大蒸汽通量，提高空气湿度85％。发酵到68h结束。
将发酵的豆粕干燥粉碎，制得发酵酶解豆粕产品。
经测定，上述各实施例生产的发酵酶解豆粕，发酵结束后豆粕中含有中性蛋白酶≥1600U/g，酸性蛋白酶≥600U/g，纤维素酶≥450U/g，果胶酶≥3800U/g，木聚糖酶≥2000U/g，α-半乳糖苷酶≥100U/g，粗蛋白含量≥55％，可溶性蛋白含量≥30％，抗原蛋白降解≥80％，胰蛋白酶抑制剂降解率≥90％，尿酶活性抑制率≥90％，水苏糖降解率≥95％，棉籽糖降解率≥90％，有机酸含量≥5％。
发酵酶解豆粕中纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶的检测方法为山东六和农牧科技园有限公司企业标准Q/SLH002-2006。检测方法如下：
A纤维素酶酶活力测定方法
A1 酶活力定义
1g酶粉于40℃，pH＝4.8条件下，1min水解CMC生成相当于1μg葡萄糖还原物质，即为1个酶活力单位，以u/g表示。
A2 试剂和溶液
本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
A2.1 pH4.8磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)17.56g，柠檬酸(C6H8O7·H2O)10.65g，分别用蒸馏水溶解后混合均匀定容至1000ml。用精密pH计测定其pH值，必要时用3M盐酸溶液或3M氢氧化钠溶液调节pH值为4.8。
A2.2 DNS试剂
称取酒石酸钾钠182.0g，溶于500ml蒸馏水中，加热(不得超过50℃)，依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3g，氢氧化钠21.0g(21.0g NaoH/300ml蒸馏水)，苯酚5.0g，无水亚硫酸钠5.0g，搅拌至溶液清澈透明。冷却后用蒸馏水定容至1000ml，储存于棕色瓶中，室温保存7～10天后使用。如需要可用烧结玻璃过滤器过滤。
A2.3 10.00mg/mlCMC溶液
准确称量1.000g羟甲基纤维素钠(CMC-Na)(中国医药公司上海化学试剂公司出品，规格300～800厘泊)用适量的缓冲液溶解，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液定容至100ml。此溶液在冰箱内贮存，有效期为一周。
A2.4 1mg/ml葡萄糖标准液
准确称量100mg葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重)用少量蒸馏水溶解，定容至100ml。
A3 分析步骤
A3.1 葡萄糖标准曲线的绘制
分别取1mg/ml葡萄糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2依次加入七支25ml比色管中，以蒸馏水补加到2.0ml，再各加入DNS试剂1.5ml，在沸水中煮沸7min，流水冷却。加蒸馏水21.5ml摇匀，在550nm处进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录吸光度值。以葡萄糖浓度(μg/ml)为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制曲线。每一次配置DNS试剂，都要重新绘制标准曲线。
A3.2 待测酶液的制备
精确称取酶粉1.0g先用少量pH4.8的缓冲液溶解，并用玻璃棒捣碎，将上层清液倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再用上述缓冲液溶解，如此反复3～4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，过滤，滤液供测定用。吸光度控制在0.24～0.28范围内。
A4 测定
于25ml比色管中加入1ml适当稀释的酶液(每个样品三个平行)在40℃水浴锅中预热2min后加入1.00ml经预热的CMC溶液，计时，40℃水浴保温30min后立即加入1.5ml DNS试剂终止反应，再置沸水中煮沸7min(样品放入重新沸腾时算起)，流水冷却，加蒸馏水21.5ml摇匀。同时进行空白对照测定，于25ml比色管中加入1ml酶液，1.5ml DNS试剂，摇匀，在40℃水浴锅中预热2min后加入1.00ml经预热的CMC溶液，计时，40℃30min后立即置沸水中煮沸7min，流水冷却，加蒸馏水21.5ml摇匀。按照作标准曲线时同样的操作测定吸光度值，用回归方程计算出相应的葡萄糖含量。
A5 计算
X＝(W×N)÷(T×M)
式中
X-样品的酶活力(u/g)
W-用回归方程计算出相当的葡萄糖还原物μg数W＝(A-b)÷K
N-酶液的稀释倍数
T-反应时间30min，以1min计
M-样品重量(g)
所得结果表示至整数。
B果胶酶酶活力测定方法
B1 酶活力定义
1g酶粉于40℃，pH＝5.0条件下，1min水解果胶生成相当于1μg半乳糖醛酸还原物质，即为1个酶活力单位，以u/g表示。
B2 试剂和溶液
本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
B2.1 pH5.00磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
A液(0.05M柠檬酸溶液)：称取10.51g柠檬酸(C6H8O7·H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
B液(0.1M磷酸氢二钠溶液)：称取35.81g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
将A、B两液混合，用精密pH计测定其pH值，必要时用3M盐酸溶液或3M氢氧化钠溶液调节pH值为5.00。
B2.2 DNS试剂
称取20.0g 3，5-二硝基水杨酸溶解于约800ml蒸馏水中，不断搅拌下逐渐加入300ml氢氧化钠溶液(32.0g NaoH/300ml蒸馏水)，同时不断搅拌，水浴加热(溶液温度不要超过48℃)直到溶液清澈透明。在不断搅拌下逐渐加入600g酒石酸钾钠。如需要可加热(溶液温度不要超过48℃)直到溶液清澈透明。用蒸馏水定容至2000ml。置深色瓶中室温保存7～10天后使用，如需要可用烧结玻璃过滤器过滤。有效期为6个月。
DNS试剂在使用前，每100ml DNS溶液中加入0.3ml葡萄糖溶液(1.5g无水葡萄糖用蒸馏水溶解、定容至100ml)。现用现配。
B2.3 2％(w/v)果胶底物
准确称2.000g果胶(SIGMA P9135 Pectin，From Citrus Fruits)于100ml容量瓶中，用适量磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(C2.1)磁力搅拌直至完全溶解，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(C2.1)定容至100ml。
B3 仪器、设备
分析天平，磁力搅拌器，恒温水浴锅40±0.2℃，分光光度计，秒表
B4 测定步骤
B4.1 标准曲线
准确称取1.0000g D-半乳糖醛酸(C6H10O7·H2O)于100ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至100ml，制备成浓度为10mg/ml标准贮备液。用蒸馏水稀释标准贮备液制备成浓度为0～8000μg/ml的标准液，按如下所示：
0μg/ml 0ml贮备液用蒸馏水定容至10ml；
1000μg/ml 1ml贮备液用蒸馏水定容至10ml；
3000μg/ml 3ml贮备液用蒸馏水定容至10ml；
5000μg/ml 5ml贮备液用蒸馏水定容至10ml；
8000μg/ml 8ml贮备液用蒸馏水定容至10ml；
精密量取0.2ml标准液和2.0ml缓冲液于25ml比色管中，混匀。加3.0mlDNS试剂，混匀并放入强烈沸腾的水浴中煮沸整五分钟，迅速将比色管流水冷却终止显色反应，加10ml蒸馏水，混匀。以试剂空白为对照于540nm测定其吸光度值。
以半乳糖醛酸的浓度(μg/ml)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。每次配制新的DNS试剂需做新的标准曲线。
B4.2 测定
精确称取酶粉1.0g先用少量pH5.0缓冲液溶解，并用玻璃棒捣碎，将上层清液倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再用上述缓冲液溶解，如此反复3～4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，过滤，滤液供测定用。吸光度控制在0.2～0.4范围内。
精密量取0.2ml酶液于25ml比色管中。加入2.0ml经40℃水浴预热的果胶底物(C2.3)并混匀，40℃水浴保温30min。加入3.0ml DNS试剂，混匀并放入强烈沸腾的水浴中煮沸整5分钟。迅速将比色管流水冷却终止显色反应。加10ml蒸馏水，混匀，4000rpm离心10min，上清液于540nm测定其吸光度值。
酶空白：0.2ml酶液加入3.0ml DNS试剂并混匀，再加入2.0ml果胶底物，混匀，40℃水浴保温30min后，放入强烈沸腾的水浴中煮沸整五分钟。迅速将比色管流水冷却终止显色反应。加入10ml蒸馏水，混匀，4000rpm离心10min，上清液于540nm测定其吸光度值。
B5 计算
X＝(W×N)÷(T×M)
式中
X-样品的酶活力(u/g)
W-用回归方程计算出相当的半乳糖醛酸还原物μg数W＝(A-b)÷K
N-酶液的稀释倍数
T-反应时间30min，以1min计
M-样品重量(g)
所得结果表示至整数。
C木聚糖酶酶活力测定方法
C1 酶活力定义
1g酶粉于40℃，pH＝5.0条件下，1min水解木聚糖生成相当于1μg木糖还原物质，即为1个酶活力单位，以u/g表示。
C2 试剂和溶液
本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
C2.1 pH5.00磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
A液(0.05M柠檬酸溶液)：称取10.51g柠檬酸(C6H8O7·H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
B液(0.1M磷酸氢二钠溶液)：称取35.81g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
将A、B两液混合，用精密pH计测定其pH值，必要时用3M盐酸溶液或3M氢氧化钠溶液调节pH值为5.00。
C2.2 DNS试剂
称取酒石酸钾钠182.0g，溶于500ml蒸馏水中，加热(不得超过50℃)，依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3g，氢氧化钠21.0g(21.0g NaoH/300ml蒸馏水)，苯酚5.0g，无水亚硫酸钠5.0g，搅拌至溶液清澈透明。冷却后用蒸馏水定容至1000ml，储存于棕色瓶中，室温保存7～10天后使用。如需要可用烧结玻璃过滤器过滤。
C2.3 木聚糖溶液(10.00mg/ml)
准确称量1.000g木聚糖(SIGMA X4252，山毛榉)，先用80ml缓冲液(A2.1)溶解，搅拌并加热直至完全溶解呈透明，冷却后移入100ml容量瓶，加20ml缓冲液(A2.1)，用蒸馏水定容至100ml。
C2.4 木糖标准液(1mg/ml)
准确称量100mg木糖(含量99％)(预先在105℃干燥至恒重)于100ml容量瓶中，用缓冲液(A2.1)溶解定容至100ml。
C3 仪器、设备
分析天平，恒温水浴锅40±0.2℃，分光光度计，秒表
C4 测定步骤
C4.1 木糖标准曲线的绘制
分别精密量取1mg/ml木糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml依次加入七支25ml比色管中，以缓冲液(A2.1)补加到2.0ml，制备成浓度为0～1200μg/ml的标准液，再各加入DNS试剂1.5ml，在沸水中煮沸7min(样品放入重新沸腾时算起)，流水冷却。加蒸馏水21.5ml摇匀，于550nm波长处进行比色测定，测定吸光度值。以木糖浓度(μg/ml)为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。每一次配制DNS试剂，都要重新绘制标准曲线。
C4.2 测定
精确称取酶粉1.0g先用少量pH5.0缓冲液溶解，并用玻璃棒捣碎，将上层清液倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再用上述缓冲液溶解，如此反复3～4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，过滤，滤液供测定用。吸光度控制在0.2～0.4范围内。
精密量取待测酶液1.0ml于25ml比色管中(每个样品三个平行)，在40℃水浴中预热2min后加入1.0ml经预热的木聚糖溶液(A2.3)并混匀，40℃水浴保温30min后立即加入1.5ml DNS试剂终止反应，迅速放置沸水浴中煮沸7min(样品放入重新沸腾时算起)，流水冷却，加蒸馏水21.5ml，摇匀后于550nm波长处进行比色测定。
酶空白：于25ml比色管中加入1.0ml酶液，再加入1.5ml DNS试剂，摇匀。再加入1.0ml木聚糖溶液并混匀。40℃水浴保温30min后置沸水浴中煮沸7min(样品放入重新沸腾时算起)，流水冷却，加蒸馏水21.5ml，摇匀后于550nm波长处进行比色测定。
C4.3 计算
X＝(W×N)÷(T×M)
式中 X-样品的酶活力(u/g)
W-用回归方程计算出相当的木糖μg数W＝(A-b)÷K
N-酶液的稀释倍数
T-反应时间30min，以1min计
M-样品重量(g)
所得结果表示至整数。
D α-半乳糖苷酶活力测定方法
D1 酶活力定义
在40℃，pH为5.0条件下，每分钟从浓度为1.5mg/mL的对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷溶液中降解释放1μg对硝基苯酚所需要的酶量为一个葡萄糖苷酶活力单位(u)。
D2 试剂和溶液
本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
D2.1 pH5.00磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
A液(0.05M柠檬酸溶液)：称取10.51g柠檬酸(C6H8O7·H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
B液(0.1M磷酸氢二钠溶液)：称取35.81g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
将A、B两液混合，用精密pH计测定其pH值，必要时用3M盐酸溶液或3M氢氧化钠溶液调节pH值为5.00。
D2.2 0.5mol/l碳酸钠溶液
准确称取5.3000g无水碳酸钠以蒸馏水溶解并定容至100ml即为0.5mol/l的碳酸钠溶液。
D2.3 1mg/mL对硝基苯酚(C6H5NO3)溶液：
精密称取对硝基苯酚(C6H5NO3)0.1000g置80mL缓冲液(2.1)中搅拌溶解，待完全溶解后以缓冲液(2.1)定容至100mL。即为1mg/mL的标准对硝基苯酚(C6H5NO3)溶液，4℃条件下保存。
D2.4 3.0mg/mL对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷溶液：
精密称取对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷0.1500g缓慢加入到40mL缓冲液(2.1)中，磁力搅拌至完全溶解。用3M盐酸溶液或3M氢氧化钠溶液调pH值至5.50，再用缓冲液(2.1)定容至50mL。即为3.0mg/mL对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷溶液，于4℃条件下保存。
D3 仪器、设备
D3.1 分析天平：感量0.0001g
D3.2 精密pH计：精确至0.01
D3.3 磁力加热搅拌器
D3.4 分光光度计：应符合GB9721有关规定，10mm比色皿分光光度计
D3.5 电热恒温水浴锅：恒温水浴锅40±0.2℃
D3.6 移液器：10～5000μl
D4 测定步骤
D4.1 标准曲线的绘制：
精密量取1mg/mL的对硝基苯酚溶液(F2.3)1ml，以缓冲液(F2.1)稀释定容至25ml。取8支试管标记为0、1、2、3、4、5、6、7，分别精密量取稀释好的对硝基苯酚溶液0、0.25、0.375、0.5、0.625、0.75、0.875、1.0ml依次加入0～7号试管中，以缓冲液(F2.1)补足至1ml，然后往每支试管中加入0.5mol/l碳酸钠溶液4.00ml充分摇匀。用0号试管液体作对照在405nm波长下，进行比色测定。以吸光度值为纵坐标，以对硝基苯酚含量为横坐标绘制标准曲线y＝Kx+b。每一次配制碳酸钠溶液都要重新绘制标准曲线。
D4.2 待测酶液的制备：
用缓冲液(F2.1)稀释原酶样，使吸光度控制在0.3～0.8之间。
D4.3 酶活力的测定：
D4.3.1 酶样测定
精密量取0.5mL待测酶液于试管中(每个样品三个平行)，40℃水浴预热5min，加入0.5ml预热过的对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷溶液(F2.4)迅速摇匀，于40℃水浴中准确反应10min，反应结束后立即加入4.0mL 0.5mol/l的Na2CO3溶液摇匀，冷却至室温后以酶空白作为对照于405nm波长测定其吸光度A。
D4.3.2 酶空白
精密量取0.5ml待测酶液于试管中40℃水浴预热5min，加入4.0ml 0.5mol/l的Na2CO3溶液摇匀反应10min，立即加入0.5ml对硝基苯酚-α-D-吡喃半乳糖苷溶液摇匀，冷却至室温后即为酶空白。
D4.4 计算
酶活力的计算：
酶活力(u/g)＝(R×n)÷(10×0.5×m)
式中：
R：用回归方程计算出相当的对硝基苯酚的μg数R＝(A-b)÷K
10：待测酶液与底物的反应时间
0.5：加入反应的待测酶液量
n：酶样的稀释倍数
m：酶样重量(g)
D4.5 分析结果
所得结果表示至整数，两次取样检测结果相对误差小于8％。
Claims (5)
1、一种固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其内容为：先培养菌种，再接种到豆粕发酵原料，然后控制发酵温度、湿度进行固体发酵，干燥粉碎后得到发酵酶解豆粕产品。
2、根据权利要求1所述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其内容为：
a、种子培养：以麸皮豆粕配制种子培养基，接入菌种，在30～37℃培养65～72h；
b、发酵豆粕：将豆粕灭菌后添加0.1％～0.5％的乙酸作为发酵原料，将种子以3％的接种量与发酵原料混合均匀，平铺于发酵池，厚度50cm左右，进行固态发酵；通蒸汽保持发酵车间湿度＞70％，发酵温度控制在32℃；发酵至40h，增大蒸汽通量，提高空气湿度；发酵到60h～68h，结束发酵；
c、将发酵的原料干燥粉碎，制得发酵酶解豆粕产品。
3、根据权利要求2所述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其特征在于：其步骤a所述的种子培养基中麸皮与豆粕的比例为6∶4。
4、根据权利要求3所述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其特征在于：步骤b所述豆粕灭菌为将豆粕在105℃温度下灭菌30min。
5、根据权利要求3所述的固体发酵酶解豆粕的生产工艺，其特征在于：在步骤b所述发酵期间，发酵原料温度上升时，通入过滤冷风控制发酵温度。
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