CN101555507A - 一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 - Google Patents
一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101555507A CN101555507A CNA2009100154193A CN200910015419A CN101555507A CN 101555507 A CN101555507 A CN 101555507A CN A2009100154193 A CNA2009100154193 A CN A2009100154193A CN 200910015419 A CN200910015419 A CN 200910015419A CN 101555507 A CN101555507 A CN 101555507A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- storage tank
- pulullan
- membrane
- trisaccharide maltose
- maltotriose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
本发明公开了一种普鲁兰糖制备麦芽三糖的方法，其技术方案在于：(1)采用普鲁兰酶对普鲁兰糖进行酶解；(2)采用超滤膜去除反应液中的大分子蛋白质类物质；(3)采用纳滤膜去除反应液中的小分子盐类物质及浓缩反应液，(4)采用色谱柱分离，收集麦芽三糖纯品，真空干燥得成品麦芽三糖。本发明采用酶法生产麦芽三糖，产物纯度可达99％以上，成本低，生产过程可实现连续化和自动化，可大量制备医药级的麦芽三糖，对于急性胰腺疾病快速诊断试剂的生产以及具有药用前景的糖类化合物的开发都具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种麦芽三糖的制备方法，尤其是涉及一种由普鲁兰糖(pullulan)制备高纯度麦芽三糖的方法。
背景技术
麦芽三糖是一种非常有价值的低聚糖，由三个葡萄糖单元经α-1，4-糖苷键连接而成，其分子量为504.44。α-淀粉酶的测定在临床上应用已有多年，自70年代后期国外开始研制以人工合成底物测定淀粉酶的方法，近年来此类研究发展较快，并取得很大进展，在临床上已广泛应用，其中以对硝基苯酚麦芽寡糖苷(PNP-Gn)和2-氯4-硝基苯酚麦芽糖苷(CNP-Gn)为主要发展趋势，尤其以麦芽三糖连接的底物，因其不用辅助酶、价格低廉、精确度高，而得到广泛的认可和应用。对诊断急性胰腺疾病来说，测定人血清中的胰淀粉酶(一种α-淀粉酶)活性是最实用和最灵敏的方法。最新的研究结果表明，由2-氯4-硝基苯酚与麦芽三糖组成的底物最适于急性胰腺疾病的诊断。
但目前麦芽三糖的生产方法有：(1)以小麦淀粉为原料通过酶解的方式获得含麦芽三糖70％左右的优质糖浆，其纯度较低，分离提取困难，不能作为诊断试剂使用；(2)发酵法，通过发酵方式获得试剂级高纯度的麦芽三糖，同样存在纯度较低提取困难的问题。
发明内容
本发明提供一种由普鲁兰多糖为原料，采用普鲁兰酶酶解，然后经分离纯化制得医药级麦芽三糖的生产方法。本发明所述工艺路线生产麦芽三糖，产品纯度高，得率高，成本低，生产过程可实现连续化和自动化，由普鲁兰糖可大量制备医药级的麦芽三糖，简化了麦芽三糖制备工艺。
普鲁兰多糖是一种由出芽短梗霉产生的胞外水溶性粘质多糖，该多糖是由α-1，4-糖苷键连接的麦芽三糖重复单位经α-1，6-糖苷键聚合而成的直链状高分子多糖。
本发明的技术方案是：(1)采用普鲁兰酶，对普鲁兰多糖进行酶解；(2)采用超滤膜去除反应液中的大分子蛋白质类物质；(3)采用纳滤膜去除反应液中的小分子盐类物质及浓缩反应液，(4)采用色谱柱分离并获得高纯度的麦芽三糖溶液，真空干燥得成品麦芽三糖。
本发明一种由普鲁兰多糖制备高纯度麦芽三糖的方法，包括以下步骤：
(1)将普鲁兰多糖溶解于pH5.7的0.2M的磷酸缓冲液，配置成8％(质量百分浓度)的普鲁兰多糖溶液，按照每1kg普鲁兰多糖溶液加入2.5g普鲁兰酶的比例加入普鲁兰酶，保持温度在45～48℃，反应时间为8小时；
(2)反应结束后，采用超滤膜分离器除去反应液中的大分子蛋白质类物质，所述超滤过程是将反应液从反应罐泵入第一储罐中，由第一储罐泵入膜分离器中，膜的截留分子量为3000-10000D(道尔顿)，截留液返回第一储罐中，透出液流入第二储罐，此过程连续向第一储罐中补充去离子水，直至截留液中麦芽三糖残留量达标。
(3)采用纳滤膜法去除步骤(2)中透出液中的小分子盐类物质，所述膜滤过程是将步骤(2)中第二储罐内的透出液泵入纳滤膜分离器中，膜的截留分子量为180D，截留液返回第二储罐中，此过程连续向第二储罐中补充去离子水，直至溶液的电导率小于200μs/cm，停止补加去离子水，继续进行膜滤操作，直至浓缩液体积达到步骤(1)中反应液体积的二十分之一；
(4)将浓缩液通过色谱柱，收集获得高纯度麦芽三糖组分，直接真空冷冻干燥，粉碎机粉碎，得到麦芽三糖成品，本发明采用的色谱柱为工业用葡聚糖凝胶G25柱，洗脱液为去离子水。
本发明采用的超滤膜分离器可以是商用的板式超滤膜或者卷式超滤膜。膜的孔径以能透过麦芽三糖和通透量为参考，但是必须截留蛋白质分子，通常为3000-10000道尔顿。
本发明采用的纳滤膜分离器可以是商用的板式纳滤膜或者卷式纳滤膜。膜的孔径以能透过水分子及小分子盐类物质和通透量为参考，但是必须截留麦芽三糖分子，通常为180道尔顿。
本发明的效果是：采用本发明所述工艺路线生产麦芽三糖，产品纯度高(大于99％)，得率高(≥85％)，成本低，生产过程可实现连续化和自动化，由普鲁兰多糖可大量制备医药级的麦芽三糖，简化了麦芽三糖制备工艺，对于急性胰腺疾病快速诊断试剂的生产以及具有药用前景的糖类化合物的开发都具有重要意义。
附图说明
本发明附图为本发明制备方法的工艺流程图。
具体实施方式
本发明一种由普鲁兰多糖制备高纯度麦芽三糖的方法的实现过程如下：
实施例1：
(1)将普鲁兰多糖8kg溶解于92kg 0.2M pH5.7的磷酸缓冲液中(溶解及反应在同一罐体中进行，罐体积为150L，带搅拌)，配制成质量百分浓度为8％普鲁兰多糖溶液，然后加入250g普鲁兰酶，保持温度在45～48℃度之间，不断轻轻搅拌，反应时间为8小时；
(2)反应结束后，将反应液泵入第一储罐中，由第一储罐泵入超滤膜分离器中，膜的截留分子量为5000D，截留液返回罐中，麦芽三糖及小分子盐类物质等和水透过膜，将透出液收集于第二储罐中，在此过程中连续向第一储罐中补加去离子水，去离子水的补加量为透出液体积的50％，当截留液中麦芽三糖残留量达标时，停止膜滤操作；
(3)将第二储罐中透出液泵入纳滤膜分离器中，采用纳滤膜分离器对所得透出液进行脱盐和浓缩，所述膜滤过程是将除去蛋白质等大分子物质的透出液从储罐泵入膜分离器中，膜的截留分子量为180D，截留液返回第二储罐中，小分子盐类物质及其他小分子物质和水透过膜，在此过程中连续向第二储罐补充去离子水，去离子水的补加量为透过液体积的50％，当溶液的电导率小于200μs/cm时，停止补加去离子水，继续进行膜滤操作，直到截留液体积浓缩至步骤(1)中反应液体积的二十分之一；
(4)将浓缩液通过色谱柱分离纯化出高纯度麦芽三糖，直接真空冷冻干燥，粉碎机粉碎，得到6.7kg麦芽三糖成品(纯度为99.9％)，采用的色谱柱为葡聚糖凝胶G25柱，洗脱液为去离子水。
实施例2：
(1)将普鲁兰多糖6.4kg溶解于73.6kg 0.2M pH5.7的磷酸缓冲液中(溶解及反应在同一罐体中进行，罐体积为150L，带搅拌)，配制成质量百分浓度为8％普鲁兰多糖溶液，然后加入200g普鲁兰酶，保持温度在45～48℃度之间，不断轻轻搅拌，反应时间为8小时；
(2)反应结束后，将反应液泵入第一储罐中，由第一储罐泵入超滤膜分离器中，膜的截留分子量为7000D，截留液返回罐中，麦芽三糖及小分子盐类物质等和水透过膜，将透出液收集于第二储罐中，在此过程中连续向第一储罐中补加去离子水，去离子水的补加量为透出液体积的50％，当截留液中麦芽三糖残留量达标时，停止膜滤操作；
(3)将第二储罐中透出液泵入纳滤膜分离器中，采用纳滤膜分离器对所得透出液进行脱盐和浓缩，所述膜滤过程是将除去蛋白质等大分子物质的透出液从储罐泵入膜分离器中，膜的截留分子量为180D，截留液返回第二储罐中，小分子盐类物质及其他小分子物质和水透过膜，在此过程中连续向第二储罐补充去离子水，去离子水的补加量为透过液体积的50％，当溶液的电导率小于200μs/cm时，停止补加去离子水，继续进行膜滤操作，直到截留液体积浓缩至步骤(1)中反应液体积的二十分之一；
(4)将浓缩液通过色谱柱分离纯化获得高纯度麦芽三糖溶液，直接真空冷冻干燥，粉碎机粉碎，得到5.6kg麦芽三糖成品(纯度为99.5％)，采用的色谱柱为葡聚糖凝胶G25柱，洗脱液为去离子水。
Claims (3)
1、一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法，包括如下步骤：
(1)将普鲁兰糖溶解于pH5.7的0.2M的磷酸缓冲液，配置成质量百分浓度8％的普鲁兰糖溶液，按照每1kg普鲁兰糖溶液加入2.5g普鲁兰酶的比例加入普鲁兰酶，保持温度在45～48℃，反应时间为8小时；
(2)反应结束后，采用超滤膜分离器除去反应液中的大分子蛋白质类物质，所述超滤过程是将反应液从反应罐泵入第一储罐中，由第一储罐泵入膜分离器中，膜的截留分子量为3000-10000D，截留液返回第一储罐中，透出液流入第二储罐，此过程连续向第一储罐中补充去离子水，直至截留液中麦芽三糖残留量达标；
(3)采用纳滤膜法去除步骤(2)中透出液中的小分子盐类物质，所述膜滤过程是将步骤(2)中第二储罐内的透出液泵入纳滤膜分离器中，膜的截留分子量为180D，截留液返回第二储罐中，此过程连续向第二储罐中补充去离子水，直至溶液的电导率小于200μs/cm，然后停止补加去离子水，继续进行膜滤操作，直至浓缩液体积达到步骤(1)中反应液体积的二十分之一；
(4)将浓缩液通过色谱柱，收集获得高纯度麦芽三糖组分，直接真空冷冻干燥，粉碎机粉碎，得到麦芽三糖成品，所述色谱柱为葡聚糖凝胶G25柱，洗脱液为去离子水。
2、根据权利要求1所述的一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法，其特征是，所述的超滤膜分离器为是商用的板式超滤膜或者卷式超滤膜。
3、根据权利要求1所述的一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法，其特征是，所述纳滤膜分离器是商用的板式纳滤膜或者卷式纳滤膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100154193A CN101555507B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100154193A CN101555507B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101555507A true CN101555507A (zh) | 2009-10-14 |
| CN101555507B CN101555507B (zh) | 2012-03-28 |
Family
ID=41173786
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009100154193A Expired - Fee Related CN101555507B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101555507B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010139100A1 (zh) * | 2009-05-31 | 2010-12-09 | 江南大学 | 一种麦芽三糖基-β-环糊精的酶法制备方法 |
| CN102392064A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-03-28 | 河南永昌飞天淀粉糖有限公司 | 一种生物活性麦芽糖浆或麦芽糊精的生产方法 |
| CN103014097A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-04-03 | 江南大学 | 一种以淀粉为原料的麦芽三糖制备方法及其专用真菌α-淀粉酶 |
| CN103215326A (zh) * | 2013-04-24 | 2013-07-24 | 山东百龙创园生物科技有限公司 | 一种高纯度麦芽三糖的制备方法 |
| CN105713051A (zh) * | 2014-12-04 | 2016-06-29 | 中国科学院生态环境研究中心 | 一种制备麦芽三糖的新方法 |
| CN106799167A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-06-06 | 中国农业大学 | 一种超滤/纳滤双膜高效提纯南瓜低聚糖的方法 |
| US10568839B2 (en) | 2011-01-11 | 2020-02-25 | Capsugel Belgium Nv | Hard capsules |
| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI111959B (fi) * | 2000-12-28 | 2003-10-15 | Danisco Sweeteners Oy | Menetelmä maltoosin puhdistamiseksi |
| CN1208348C (zh) * | 2002-06-26 | 2005-06-29 | 湖南金正方生物科技有限公司 | 芦荟多糖提取工艺 |
| CN1266158C (zh) * | 2004-09-21 | 2006-07-26 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一种利用膜分离技术从发酵液中分离提取d－核糖的方法 |
| CN1289532C (zh) * | 2005-01-11 | 2006-12-13 | 苏理 | 普鲁兰糖的后提取生产工艺 |
| CN100404523C (zh) * | 2006-02-21 | 2008-07-23 | 张守政 | 从茶叶中提取茶多酚、茶氨酸、茶多糖、茶色素的方法 |
-
2009
- 2009-05-18 CN CN2009100154193A patent/CN101555507B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010139100A1 (zh) * | 2009-05-31 | 2010-12-09 | 江南大学 | 一种麦芽三糖基-β-环糊精的酶法制备方法 |
| US10568839B2 (en) | 2011-01-11 | 2020-02-25 | Capsugel Belgium Nv | Hard capsules |
| CN102392064A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-03-28 | 河南永昌飞天淀粉糖有限公司 | 一种生物活性麦芽糖浆或麦芽糊精的生产方法 |
| CN103014097A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-04-03 | 江南大学 | 一种以淀粉为原料的麦芽三糖制备方法及其专用真菌α-淀粉酶 |
| CN103014097B (zh) * | 2012-11-20 | 2014-02-19 | 江南大学 | 一种以淀粉为原料的麦芽三糖制备方法及其专用真菌α-淀粉酶 |
| CN103215326A (zh) * | 2013-04-24 | 2013-07-24 | 山东百龙创园生物科技有限公司 | 一种高纯度麦芽三糖的制备方法 |
| CN105713051A (zh) * | 2014-12-04 | 2016-06-29 | 中国科学院生态环境研究中心 | 一种制备麦芽三糖的新方法 |
| CN106799167A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-06-06 | 中国农业大学 | 一种超滤/纳滤双膜高效提纯南瓜低聚糖的方法 |
| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| US11878079B2 (en) | 2017-04-14 | 2024-01-23 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101555507B (zh) | 2012-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101555507B (zh) | 一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法 | |
| CN105061617B (zh) | 一种桃胶多糖的提取工艺及其应用 | |
| EP1369432B1 (fr) | Polymères solubles de glucose hautement branchés et leur procédé d'obtention | |
| CN103497983B (zh) | 一种使用α-葡萄糖苷酶制备低聚异麦芽糖的方法 | |
| CN105693919B (zh) | 一种可提高胰岛素负载效率的高分子微凝胶及其制备方法 | |
| CN110105460B (zh) | 硒化羧甲基茯苓多糖及其制备方法及应用 | |
| KR102381709B1 (ko) | 식이섬유의 제조방법 | |
| CN102070727B (zh) | 一种肝素钠的提取方法 | |
| CN103266146B (zh) | 双酶固定化耦合多级膜分离制备药用右旋糖酐和果糖的方法 | |
| CN103724445A (zh) | 灰树花多糖f2的制备方法及其降血糖功能 | |
| CN104004799A (zh) | 一种连续制备低聚半乳糖的方法 | |
| CN109221892A (zh) | 果胶低聚糖及其制备方法和作为AGEs抑制剂的应用 | |
| CN111363057A (zh) | 一种基于多级膜分离技术的灵芝多糖分级制备方法 | |
| CN108299547A (zh) | 一种从虎奶菇菌核中制备糖蛋白的方法 | |
| JP3961157B2 (ja) | 高分岐デキストリン及びその製造法 | |
| JP2007031665A (ja) | マイタケから抽出した糖―タンパク複合体 | |
| CN106399428B (zh) | 一种高效分离制备单一分子量透明质酸寡糖的方法 | |
| CN102827306A (zh) | 一种从辣椒渣中制备果胶的方法 | |
| DK173098B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af multiglucosylcyclodextriner | |
| CN108892732B (zh) | 具有免疫调节功能的金昌枣多糖的制备方法及其应用 | |
| JP4098824B2 (ja) | グリコーゲンを物理化学的に製造する方法およびこの方法で得られるグリコーゲン | |
| CN116003645A (zh) | 一种泡叶藻岩藻多糖及其制备和纯化方法 | |
| CN103266149A (zh) | 双酶耦合多级膜分离制备药用右旋糖酐和果糖的方法 | |
| CN115161361A (zh) | 酶分子机器技术制备无支链的直链半乳聚糖的方法及应用 | |
| CN107236054A (zh) | 一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: YANGLING YIZHINONG MICROORGANISM ENGINEERING TECHN Free format text: FORMER OWNER: SU LI Effective date: 20120111 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Su Li Inventor after: Zhao Shuangzhi Inventor after: Lin Chunlan Inventor after: Chou Zhiyu Inventor after: Song Diansheng Inventor after: Zhang Yanhao Inventor before: Su Li Inventor before: Zhao Shuangzhi Inventor before: Wang Jinzhong Inventor before: Lan Wenzhong Inventor before: Lin Chunlan Inventor before: Dong Xueqian Inventor before: Ji Wuke Inventor before: Zhang Yanhao Inventor before: Wei Liansheng |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 250013 JINAN, SHANDONG PROVINCE TO: 712100 XIANYANG, SHAANXI PROVINCE Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: SU LI ZHAO SHUANGZHI WANG JINZHONG LAN WENZHONG LIN CHUNLAN DONG XUEQIAN JI WUKE ZHANG YANHAO WEI LIANSHENG TO: SU LI ZHAO SHUANGZHI LIN CHUNLAN CHOU ZHIYU SONG DIANSHENG ZHANG YANHAO |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20120111 Address after: 712100 Shennong road Pioneer Park, Yangling demonstration area, Xianyang, Shaanxi Applicant after: Yangling Yizhinong Microbe Engineering Technology Institute Co., Ltd. Address before: 250013 Ji'nan, Shandong, Lixia District, Jiefang Road, No. 41 Applicant before: Su Li |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120328 Termination date: 20130518 |