CN101507817B

CN101507817B - 一种高安全性注射用聚山梨酯80及其制备方法

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Publication number: CN101507817B
Application number: CN200910014797XA
Authority: CN
Inventors: 黄晓麒; 孙福春
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2009-03-12
Filing date: 2009-03-12
Publication date: 2011-02-09
Anticipated expiration: 2029-03-12
Also published as: CN101507817A

Abstract

本发明涉及一种高安全性注射用聚山梨酯80及其制备方法，属于药用辅料的制备技术领域。所述的高安全性注射用聚山梨酯80为在10倍体积的醚类中不溶性组分所占比例≥60％的聚山梨酯80。其制备方法可采用萃取法或柱层析法。本发明的有益效果是：在保持聚山梨酯80增溶性能的同时，降低其溶血性、刺激性和组胺释放性，显著提高了聚山梨酯80作为注射用辅料的安全性，制备工艺简单，易于实现。

Description

一种高安全性注射用聚山梨酯80及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种高安全性注射用聚山梨酯80及其制备方法，属于药用辅料的制备技术领域。

背景技术

聚山梨酯80(Tween 80，polyoxyethylene 80 sorbitan monooleate)化学名称为失水山梨醇油酸酯聚氧乙烯醚，又称聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、乳化剂-80，俗称T-80、吐温-80，是一种非离子型亲水表面活性剂。市售的聚山梨酯80为琥珀色油状液体，有脂肪气味，有特臭，味酸而苦，相对密度1.050～1.10，粘度(25℃)约600cps。溶于水及多数有机溶剂如乙醇、醋酸乙醋及甲醇，不溶于矿物油和植物油。凝固点＜0℃，浊点93℃，无毒。皂化值45～55mgKOH/g，HLB值15.0，羟值80～130mgKOH/g，酸值≤2mgKOH/g，临界胶团浓度(25℃)CMC＝1.4×10^-2g/L。市售的聚山梨酯80是一种复杂的混合物，是多元醇型非离子表面活性剂吐温类中的一种，为失水山梨醇脂肪酸酯(Span-80)与20～26个环氧乙烷缩合而成的醚酯物，其主成分通式为C₆₄H₁₂₄O₂₆，分子量为1309.7，结构式如下：

聚山梨酯80的制备方法主要采用加成法，以失水山梨醇单油酸酯(司盘80)和环氧乙烷为原料，在氢氧化钠等催化剂的催化下制得。

聚山梨酯80广泛应用于食品、药品领域，其含量从不足1％～12％不等，是2005版《中国药典》收载的助溶剂类药用辅料，常用作注射剂的增溶剂及其他剂型的乳化剂和分散剂。它在中草药及化学药品等制剂中主要有七种作用：(1)作为增溶剂：由于中药注射剂所含成分复杂，为了提高澄明度和稳定性，常使用聚山梨酯80作增溶剂，如部颁标准收载的中药注射剂中，使用聚山梨酯80的就有20种之多。(2)作为乳化剂，用于乳浊型制剂的配制。(3)作为稳定剂，提高澄明度，防止药物的氧化和水解。利用药物被增溶在胶团之内，与氧隔绝以及胶团上的电荷排斥或胶团阻碍了促进水解的H+和OH-接近，而防止药物的氧化与水解。(4)作为分散剂，除杂质，一般用量0.5-1％。(5)作为渗透剂，用于有效成分的提取。它可降低溶媒表面张力，增加细胞壁的渗透和解吸作用，利于有效成分的浸出，提高收率。(6)作为润湿剂，增加药物的生理活性。它可作用于吸收膜与药物互相作用，并可改善药物的理化性质。(7)用于剂型改进，提高药效。

由于聚山梨酯80具有上述多种重要作用，许多中草药及化学药品制剂都中都添加聚山梨酯80以提高制剂的性能。但随着近年来聚山梨酯80在药学实践中的广泛应用，其安全性问题也引起了人们的广泛关注。如聚山梨酯80可引起溶血：0.08％的聚山梨酯80生理盐水溶液虽然不诱发血小板聚集，但对ADP诱导的血小板聚集有明显作用。0.01～0.08％的聚山梨酯80可以诱发血小板释放³H一5HT，但作用较弱，同时可对抗凝血酶诱发³H一5HT释放的反应；聚山梨酯80能促进脂类的吸收：以聚山梨酯80和高脂饲类饲养家兔，血脂水平较对照动物高2～3倍，动脉粥样硬化症出现的也早且较为严重；聚山梨酯80可引起类过敏反应：Beagle犬在静脉注射给予聚山梨酯80后最敏感，可引起过敏反应症状，注射后体内碱性粒细胞迅速升高可能是其中的一个毒性作用机制。静脉注射聚山梨酯80量大时即可出现心血管系统抑制现象，对心脏有抑制作用，心率加快；能引起血压轻度下降，体温下降；对红细胞的稳定性尚有影响；聚山梨酯80对粘膜和皮肤等有刺激性作用；聚山梨酯80引起的其他不良反应：有人曾以2％聚山梨酯80注射液给志愿者肌肉注射，它造成的局部的胀痛感能持续24小时以上。

目前国家药典尚未制订该辅料的注射用标准。随着有关含聚山梨酯80的药物静脉注射剂的临床不良反应报道的不断增多，促使人们对聚山梨酯80开展深入的研究。大量研究表明聚山梨酯80的大多数临床不良反应与其溶血性、刺激性和组胺释放特性相关，特别是其组胺释放特性可引起致命的类过敏反应。

因此我们有必要采取相应的措施对聚山梨酯80的安全性、稳定性和质量进行改善，以保证人们的临床用药安全。

发明内容

为解决目前聚山梨酯80存在的安全性问题，本发明提供了一种高安全性注射用聚山梨酯80，显著提高了其作为注射剂辅料使用的安全性。

本发明还提供了上述的聚山梨酯80的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

所述的高安全性注射用聚山梨酯80，其特殊之处是：为在10倍体积的醚类中不溶性组分所占比例≥60％的聚山梨酯80。所述的醚类一般为乙醚、异丙醚、二苯醚、甲醚、甘油醚、丙二醇乙醚、丙二醇丁醚或其混合物。由于本发明的产品去除了现有的聚山梨酯80中的多数醚类溶解性成分，因此可降低溶血反应、类过敏反应、刺激性和其他不良反应的发生。

所述的高安全性注射用聚山梨酯80的制备方法可采用萃取法或柱层析法。

一、萃取法：取聚山梨酯80和醚类溶剂，按体积比为1∶7～15比例充分振摇混合或搅拌混合，静置半小时以上，待两液清晰分层，取下层的液体，即为本发明所述的聚山梨酯80。为使产品达到更好的性能，可同法增加萃取次数至萃取5次，以去除溶于醚类的杂质及其它低极性的分子。

二、柱层析法：将聚山梨酯80按常规方法装柱，先用乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液洗脱，再用甲醇或乙醇洗脱，收集甲醇或乙醇洗脱液，减压浓缩，得到本发明的产品。

所述的乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液的体积为聚山梨酯80体积的30-60倍，由乙酸乙酯、丙酮、水按体积比为11∶7∶2的比例配制而成；甲醇或乙醇的体积为聚山梨酯80体积的30-60倍。

为保证产品的纯度，将收集的甲醇或乙醇洗脱液，用TLC分析，展开剂同乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液，合并展开后Rf值小于0.2的组分，进行减压浓缩，得到本发明的产品。

为更好的去除低极性的成分，在用乙酸乙酯\丙酮\水混合的洗脱液洗脱前，先用乙酸乙酯洗脱，乙酸乙酯的体积为聚山梨酯80体积的2-15倍。

萃取法不限于乙醚也可用异丙醚或其它醚类或混合溶剂，柱层析法不限于硅胶柱层析也可用氧化铝柱层析、反相柱层析，不论采用何种方法但获得的目标产物一定具有在10倍体积的醚类中不溶性成分所占比例为60％～100％的特征，目前已调查各种市面上出现的聚山梨酯80，能够肯定市面上不存在乙醚中不溶解性组分≥60％的聚山梨酯80。

我们通过大量比较研究发现，各种市售聚山梨酯80的溶血性、刺激性和组胺释放特性相差悬殊，其乙醚溶解性组分越多则溶血性、刺激性和组胺释放特性越强，通过我们对聚山梨酯80的分离、纯化、精制的长期研究，获得了增溶性能保持而且安全性能有显著提高的聚山梨酯80。

本发明的有益效果是：在保持聚山梨酯80增溶性能的同时，降低其溶血性、刺激性和组胺释放性，显著提高了聚山梨酯80作为注射用辅料的安全性，制备工艺简单，易于实现。

具体实施方式

下面是本发明的实施例，但是本发明并不局限在下述的实施例范围内。

实施例1

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯8050ml，溶解于500ml乙醚中，充分振摇混合，静置分层，待两液清晰分层，获得下层液体为15ml不溶于乙醚的聚山梨酯80；量取15ml乙醚溶解上述15ml不溶于乙醚的聚山梨酯80，同上萃取，得到12ml不溶于乙醚的吐温-80，量取12ml乙醚溶解上述12ml不溶于乙醚的聚山梨酯80，仍得到12ml不溶于乙醚的聚山梨酯80。

实施例2

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯80 50ml，将此样品按常规方法装于200g硅胶柱上，先用500ml的乙酸乙酯洗脱，再用2500ml按体积比为11∶7∶2的比例混合的乙酸乙酯/丙酮/水的洗脱液洗脱；然后用2500ml的无水乙醇洗脱，收集乙醇洗脱溶液，TLC检测：展开剂：乙酸乙酯(m)/丙酮(m)/水(m)(11∶7∶2)，合并展开后Rf值小于0.2的组份，减压浓缩，得到11.5ml聚山梨酯80。

实施例3

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯8050ml，溶解于350ml乙醚中，充分振摇混合，静置分层，待两液清晰分层，获得的下层液体即为本发明的产品。

实施例4

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯8050ml，将此样品按常规方法装于200g硅胶柱上，先用1500ml按体积比为11∶7∶2的比例混合的乙酸乙酯/丙酮/水的洗脱液洗脱；然后用1500ml的甲醇洗脱，收集甲醇洗脱溶液，TLC检测：展开剂：乙酸乙酯(m)/丙酮(m)/水(m)(11∶7∶2)，合并展开后Rf值小于0.2的组份，减压浓缩，得到本发明的产品。

实施例5

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯8050ml，将此样品按常规方法装于200g硅胶柱上，先用750ml的乙酸乙酯洗脱，再用3000ml按体积比为11∶7∶2的比例混合的乙酸乙酯/丙酮/水的洗脱液洗脱；然后用2000ml的无水乙醇洗脱，收集乙醇洗脱溶液，TLC检测：展开剂：乙酸乙酯(m)/丙酮(m)/水(m)(11∶7∶2)，合并展开后Rf值小于0.2的组份，减压浓缩，得到本发明的产品。

实施例6

采用萃取法制备本发明所述的高安全性注射用聚山梨酯80。

取一般市售的聚山梨酯8050ml，将此样品按常规方法装于200g硅胶柱上，先用100ml的乙酸乙酯洗脱，再用2000ml按体积比为11∶7∶2的比例混合的乙酸乙酯/丙酮/水的洗脱液洗脱；然后用2500ml的无水乙醇洗脱，收集乙醇洗脱溶液，TLC检测：展开剂：乙酸乙酯(m)/丙酮(m)/水(m)(11∶7∶2)，合并展开后Rf值小于0.2的组份，减压浓缩，得到本发明的产品。

测试例1本发明与市售品理化特性的比较

上述实施例获得的聚山梨酯80是从市售的聚山梨酯80中分离获得的一种聚山梨酯80亚组分，该组分去除了市售的聚山梨酯80中的低极性的醚类溶解性成分，在10倍体积的醚类中不溶性成分所占比例为60％～100％。

按国家规定的标准方法对本发明实施例所得产品的理化特征进行检测，列举以下结果作为参考。

市售吐温-80

实施例1

实施例2

实施例3

实施例4

对比

羟值

65～80

45～60

50～65

48～62

52～64

降低

皂化值

45～60

35～45

35～50

降低

水分

≤3.0％

相同

炽灼残渣

≤0.2％

相同

重金属

≤10ppm

相同

粘度25℃mm²/s

350～550

520～650

500～650

530～650

515～650

增加

相对密度

1.06～1.09

1.07～1.12

1.07～1.11

1.07～1.13

1.07～1.12

增加

碘值

18～24

12～18

降低

酸值

≤2.2

≤1.6

降低

外观

淡黄至橙黄

相同

酸碱度

5.0～8.0

6.5～7.5

变窄

砷量

≤2ppm

相同

过氧化物值

≤10.0

≤7.0

减少

测试例2本发明与市售的聚山梨酯80增溶性能的比较

取20mg多西他赛溶解于1ml无水乙醇中，然后等分为2份，分别加入实施例1和2的产品，旋蒸去除乙醇，再加入1.5ml 13％的乙醇水溶液，最后加入100ml生理盐水，上述溶液能全溶于生理盐水中。说明本发明与市售的聚山梨酯80在对多西他赛的增溶性方面并无区别。

测试例3本发明与市售的聚山梨酯80溶血性能的比较

取家兔心脏血，置有玻璃珠的容器内，振摇数分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血；加生理盐水摇匀，离心，倾去上清液；沉淀的红细胞再用生理盐水洗涤3-4次，至离心后上清液不显红色为止；然后按所得红细胞体积，用生理盐水稀释成2％的混悬液(当天使用，用时摇匀)。取试管36支，分为三组，每组12支，都加入等体积的上述混悬液。编号：每组的1-5号管每个编号2支，为供试品溶液管；第6号管为空白对照管，第7号管为溶血对照管。

取本发明实施例1、实施例2的产品和市售的聚山梨酯80，分别配成含聚山梨酯80的质量浓度为0.5％、1％、2％、4％、8％的水溶液，做为供试品溶液。每组按附表加入等体积的上述供试品溶液，空白对照管和溶血对照管分别以等体积的生理盐水或蒸馏水替代。轻轻摇匀后置36.5±0.5℃的恒温箱中保温3小时，观察结果。

试管	2％红细胞混悬液(ml)	供试品溶液浓度(2.5ml)	供试品溶液最终浓度	实施例1	实施例2	市售品
							1	2.5	8％	4％	-	-	+
2	2.5	4％	2％	-	-	+
							3	2.5	2％	1％	-	-	+
4	2.5	1％	0.5％	-	-	+
							5	2.5	0.5％	0.25％	-	-	-
6	2.5	生理盐水		-	-	-
							7	2.5	蒸馏水		+	+	+

注：“-”表示不溶血，“+”表示溶血。

结果显示：本发明的吐温80组分的溶血性能低于常规市售吐温80的溶血性能10倍以上。

测试例4本发明与市售的聚山梨酯80组胺释放特性的比较

促使大鼠腹腔肥大细胞释放组胺的能力测定：

取雄性大鼠20只，随机分成四组，组1为对照组，组2～组4为实施例1、实施例2和市售的聚山梨酯80组。

将大鼠用二氧化碳麻醉处死，腹腔注射冷磷酸缓冲液15ml/只，打开腹腔后吸出腹腔液至冰浴离心管中，1500rpm离心10分钟，重复洗涤一次后合并沉淀细胞，用适量磷酸缓冲液制成单细胞悬液，用白细胞稀释液稀释20倍后计数有核细胞数。

组2～组4的细胞悬液中分别加入实施例1、实施例2和市售的聚山梨酯80，同组1一起在37℃孵育15分钟，煮沸后冰浴终止反应，离心取上清，用化学发光仪于EX340nm，EM460nm测定荧光强度，根据荧光强度计算组胺的释放百分率，并计算每组的EC50，EC50值越大，则组胺释放副作用越低。

组别	组胺释放测定EC50(mg/ml)
		对照组	46.78
实施例1组	26.96
		实施例2组	30.80
市售的聚山梨酯80组	2.86

结果显示：本发明的实施例组的组胺释放性能显著低于常规市售吐温80的组胺释放性能。可因此初步推断本发明在临床注射使用中将显著降低类过敏反应的发生率。测试例5本发明与市售的聚山梨酯80刺激性的比较

皮肤刺激性实验

1.1研究对象与试剂成年健康家兔36只，体重2.2kg±0.3kg，雌雄均有，雌者未孕。供试药品：上述实施例1和2得到的聚山梨酯80以及未经处理的市售聚山梨酯80的1.0％生理盐水溶液。

1.2方法

取动物随机分成两组，甲组为高剂量组(原液)，乙组为低剂量组(50％)。给药前24小时先将脊柱两侧对称剪刀去毛各一块，每块脱毛面积约5cm²，温水洗净待用。将高、低剂量药液分别滴加约2ml在2层消毒滤纸上，贴于家兔左侧背上，用一层油纸和两层纱布覆盖，再用无刺激性胶布封闭固定，右侧做空白对照。分别于30min、60min、24h和48h观察给药部位皮肤反应情况，按表1和表2评分，并评价刺激强度，结果见表3。

表1皮肤刺激反应评分标准

红斑

评分

水肿

评分

无红斑	0	无水肿	0
				勉强可见	1	勉强可见	1
明显可见	2	皮肤隆起，轮廓清楚	2
				中度到严重红斑	3	皮肤隆起1mm	3
紫红色红斑并病痂形成	4	皮肤隆起超过1mm，并范围扩大	4

表2皮肤刺激性强度评价标准

反应级数	评价
		≤0.5	无刺激性
＞0.5，≤2.0	轻度刺激性
		＞2.0，≤6.0	中度刺激性
＞6.0	重度刺激性

表3本发明的吐温80皮肤刺激性实验结果

由以上结果可知，本发明的吐温80对皮肤未引起任何不良反应，表明它们无刺激性。

Claims

1.一种高安全性注射用聚山梨酯80的制备方法，其特征在于采用柱层析法，将聚山梨酯80按常规方法装柱，先用乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液洗脱，再用甲醇或乙醇洗脱，收集甲醇或乙醇洗脱液，减压浓缩，得到在10倍体积的醚类中不溶性组分所占比例≥60％的高安全性注射用聚山梨酯80；

所述的乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液的体积为聚山梨酯80体积的30-60倍，由乙酸乙酯、丙酮、水按体积比为11∶7∶2的比例配制而成；甲醇或乙醇的体积为聚山梨酯80体积的30-60倍；

所述的柱层析法为硅胶柱层析或氧化铝柱层析。

2.根据权利要求1所述的高安全性注射用聚山梨酯80的制备方法，其特征在于：所述的醚类为乙醚、异丙醚、二苯醚、甲醚、甘油醚、丙二醇乙醚、丙二醇丁醚或其混合物。

3.根据权利要求1所述的高安全性注射用聚山梨酯80的制备方法，其特征在于：收集的甲醇或乙醇洗脱液，用TLC分析，展开剂为上述的乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液，合并展开后Rf值小于0.2的组分，进行减压浓缩，得到高安全性注射用聚山梨酯80。

4.一种高安全性注射用聚山梨酯80的制备方法，其特征在于：采用柱层析法，将聚山梨酯80按常规方法装柱，先用乙酸乙酯进行洗脱，乙酸乙酯的体积为聚山梨酯80体积的2-15倍，然后用乙酸乙酯\丙酮\水的洗脱液洗脱，再用甲醇或乙醇洗脱，收集甲醇或乙醇洗脱液，减压浓缩，得到在10倍体积的醚类中不溶性组分所占比例≥60％的高安全性注射用聚山梨酯80；

所述的柱层析法为硅胶柱层析或氧化铝柱层析。