CN101502571B - 一种活血、镇痛和抗炎的药物和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物领域，公开了一种活血、镇痛和抗炎的药物，包括三七、制草乌、淫羊藿、娑罗子、青风藤、延胡索和甘草的提取物，各药材的重量百分比为：三七10％～50％，制草乌10％～50％，淫羊藿5％～30％，娑罗子5％～30％，青风藤0％～20％，延胡索0％～20％，甘草0％～20％。具有活血化瘀、镇痛抗炎作用，特别适用于治疗腰椎间盘突出症等疾病。
Description
技术领域
本发明涉及中药制药技术领域，具体涉及一种具有活血、镇痛和抗炎功效的治疗腰椎间盘突出症的中药组合物及其制备方法。
背景技术
腰椎间盘突出症是脊柱外科疾病中发病率最高的疾患，是由于椎间盘病变、纤维环破裂、髓核突出刺激或压迫神经根、马尾神经所表现的一种综合症，以腰及下肢痛为最主要的临床表现。
目前临床上采用手术治疗和非手术治疗两类疗法，两者的远期疗效相似。国内外学者均认为对于本病治疗方法的选择取决于不同的病理阶段和临床表现，其中80％～90％的患者可经非手术疗法得到治愈或缓解，而且由于手术疗法本身存在许多弊端，比如容易出现术中感染、术后并发症和术后复发等情况。所以由药物和推拿、牵引、理疗等组成的非手术综合疗法，显示了其独特的优势。非手术治疗方法分药物治疗、非药物治疗两种方法。药物作为非手术疗法中主要的组成部分，长期以来在腰椎间盘突出症治疗中起着重要作用，其中应用较多的有非甾体类抗炎药(NSAIDs)、糖皮质激素、β-七叶皂苷钠、胶原酶以及中成药和各种中药方剂。
中医认为肝肾亏虚、气血不足是腰椎间盘突出症发生的内因，而风、寒、湿、瘀诸邪侵袭留滞乃其外因。因此，在治疗上多主张补肝肾、养气血，祛风除湿散寒、活血化瘀止痛。由此辨证施治产生众多方剂，进而产生基于中医理论的中成药，其中主要有腰痛宁胶囊、腰痹通胶囊和痹祺胶囊等，使用最多的是腰痛宁胶囊。
腰痛宁胶囊是由马钱子、土鳖虫、全蝎、川牛膝等十几味中药组成的复方制剂，日服4～6粒(1.2～1.8g)外加10ml黄酒，处方中含有多种毒性中药，为毒 性最大的中药成方制剂之一，其中马钱子有效成分士的宁的有效量接近中毒量。口服腰痛宁胶囊的急性毒性研究表明，昆明种小鼠LD50为640.44mg/kg，BALB/C小鼠的LD50为448.34mg/kg。
腰痹通胶囊由三七、川芎、甘草、白芍、牛膝、熟大黄等经醇提取得到的中药复方制剂，日服9粒(3.8g)，2003年申请发明专利，专利号为03138025。
痹祺胶囊由党参、白术、丹参、川芎、三七、马钱子等10味中药组成，日服8～10粒(2.4～3.0g)，1991年批准生产。以上述三药为代表的治疗腰突症的中药成方制剂大多为10味以上的大复方，采用传统水提醇沉、醇提工艺或药材原粉直接入药，制备工艺陈旧、服用剂量大、产品中成分复杂、质量可控性差，疗效不稳定，且含马钱子等剧毒中药，药品毒性大、安全性差。
发明内容
本发明目的在于提供一种具有活血、抗炎和镇痛作用的药物。
本发明还提供了上述药物的制备方法。
本发明的另一个目的在于将这种活血、抗炎和镇痛的药物应用于制备治疗腰椎间盘突出的药物制剂。本发明是按照治疗腰椎间盘突出症的中医药理论，以中药材为原料合理配伍，采用现代制药工艺制备而成的一种具有显著活血、抗炎和镇痛作用药物，可用于治疗腰椎间盘突出症。
一种具有活血、抗炎和镇痛作用的药物，其成分包括三七、制草乌、淫羊藿、娑罗子、青风藤、延胡索和甘草的提取物，各药材的重量百分比为：
三七 10％～50％
制草乌 10％～50％
淫羊藿 5％～30％
娑罗子 5％～30％
青风藤 0％～20％
延胡索 0％～20％
甘草 0％～20％；
所述的提取物通过以下方法之一制备：
A.步骤包括：将药材按重量配比粉碎后用体积浓度为40～80％乙醇水溶液提 取，提取液于50～80℃减压浓缩和干燥，乙醇水溶液与药材的质量体积比为6～14L/kg；或者，
B.步骤包括：
(1)将药材按重量配比粉碎后用体积浓度为40～80％的乙醇水溶液提取，提取液于50～80℃减压浓缩，乙醇水溶液与药材的质量体积比为6～14L/kg；
(2)浓缩液过滤或离心除去沉淀，经大孔吸附树脂吸附纯化，大孔吸附树脂用量为药材重量0.5～5倍，2～4倍树脂柱床体积的纯水洗脱杂质，3～6倍柱床体积的40～80％体积浓度乙醇水溶液洗脱有效部位，洗脱液在50～80℃减压干燥。
提取方法包括浸泡、回流和渗漉三种方法中的一种。
所用的大孔吸附树脂选自非极性、弱极性和中等极性的大孔吸附树脂，包括D101、HPD100、HPD400、HPD450、HPD700、AB-8、ALS-5型大孔吸附树脂。
这种活血、抗炎和镇痛作用的药物还包括药学上可接受的载体。可与各种药用辅料配制成医学上可接受的不同给药途径的药物制剂，尤其适于制备成口服制剂，包括各种片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂和口服液；还可制成凝胶剂。
本发明的活血、镇痛和抗炎的药物可应用于制备治疗各种腰痛、背痛、肩痛和关节痛等各种疼痛的药物制剂，尤其适用于制备腰椎间盘突出症的药物。
相关药效学试验结果表明：本发明药物具有显著的活血化瘀、抗炎、镇痛作用，对腰椎间盘突出症的治疗具有显著效果。加入青风藤、延胡索和甘草，进一步增加疗效和减少毒副作用。
小鼠急性毒性试验结果表明：本发明药物的LD50≥4600mg/kg。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的配方、制备工艺和药效作用作进一步的描述。
实施例1
按配比取三七1kg、制草乌1kg、淫羊藿1kg、娑罗子3kg、青风藤2kg、甘草2kg，粉碎成粗粉，分别用60升、40升体积浓度为70％乙醇水溶液回流提取两次，提取液过滤后合并，于60℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例2
按配比取三七5kg、制草乌1.5kg、淫羊藿0.5kg、娑罗子1kg、延胡索1kg、 甘草1kg，粉碎成粗粉，用60升体积浓度为80％乙醇水溶液渗漉提取，提取液于50℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例3
按配比取三七1kg、制草乌5kg、淫羊藿3kg、娑罗子0.5kg、青风藤0.5kg，粉碎成粗粉，分别用60、50、30升体积浓度为40％乙醇水溶液分三次浸泡提取，提取液过滤后合并，于80℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例4
按配比取三七2kg、制草乌2kg、淫羊藿2kg、延胡索2kg、娑罗子1kg、青风藤1kg，粉碎成粗粉，用120升体积浓度为70％乙醇水溶液渗漉提取，提取液于70℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例5
将实施例1制备得到的浓缩液离心除去沉淀，上清液上10L D101型大孔吸附树脂吸附，20升纯水洗除杂质，30升体积浓度为80％乙醇水溶液洗脱有效部位，洗脱液于50℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例6
将实施例2制备得到的浓缩液加水稀释，过滤除去沉淀，上清液上40L AB8型大孔吸附树脂吸附，200升纯水洗除杂质，240升体积浓度为40％乙醇水溶液洗脱有效部位，洗脱液于80℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例7
将实施例4制备得到的浓缩液离心除去沉淀，取上清液上20L HPD700型大孔吸附树脂吸附，80升纯水洗除杂质，80升60％乙醇水溶液洗脱有效部位，洗脱液于70℃减压浓缩和干燥，粉碎。
实施例8
称取实施例1制备得到的产品1kg，加入淀粉0.4kg，维晶纤维素0.2kg，加入0.8升10％聚乙烯吡咯烷酮水溶液，混合均匀，过16目筛制成湿颗粒，55℃干燥，14目整粒，加入硬脂酸镁0.06kg，总混，压片。
实施例9
将实施例4制备得到的产品1kg，加入淀粉0.2kg，维晶纤维素0.3kg，硬脂酸镁0.06kg，混合均匀，灌装胶囊。
实施例10
取对羟基苯甲酸乙酯0.05kg、卡波普9401kg加入50kg蒸馏水中，于80℃水浴加热溶解，冷却后加入实施例4制备得到的产品2kg和甘油5kg，搅拌溶解，最后加入三乙醇胺1kg，蒸馏水加至100kg，即得透明凝胶剂。
实施例11对腰椎间盘突出症模型大鼠的治疗作用
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例4产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.4g、0.2g和0.1g提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.040g、0.020g和0.010g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.48g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物，加蒸馏水配成0.048g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.20g/kg.d-1。
1.3其他药物和试剂
注射用青霉素钠：华北制药股份有限公司，批号：0506108，规格：80万单位/瓶。
配制方法：每瓶用生理盐水配制至5ml，即16万单位/ml。
戊巴比妥钠：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F20030816，规格：25g/瓶。
配制方法：称取戊巴比妥钠用生理盐水配成4mg/ml。
肝素钠注射液：上海第一生化药业有限公司，批号：040706，规格：12500单位/瓶。
配制方法：每瓶用生理盐水配制至125ml，即100单位/ml。
sPLA(ELISA)试剂盒：R&D公司生产，批号：060712。
PGE2(ELISA)试剂盒：CayMan公司生产，批号：060720。
VEGF(ELISA)试剂盒：购自上海钰森生物有限公司，CayMan公司生产，批号：060615。
TXB2(放免)试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所，批号：060421。
6-keto-PGF1α(放免)试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所，批号：060421。
1.4动物
SD大鼠，体重280～300g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
2方法
2.1腰神经根压迫模型的建立：
取SD大鼠，采用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉后，固定、剪毛、消毒、大鼠后背正中部位铺巾。以L5神经孔为中心，取后背正中切口，长约4cm。逐层切开，钝性剥离背伸肌达椎板，神经根自动拉钩牵开组织，咬除L5棘突，钝性分离肌肉后充分暴露右侧L5神经根，将30土1.5mg的硅胶管片置于L5神经根与硬膜囊交界处的L5神经根腋部，局部固定。假手术组动物只做切开手术，无损伤棘突L5神经根等操作，各组动物逐层缝合后，腹腔注射青霉素0.2ml/只抗感染，连续2天。术后待动物苏醒后，放入笼中饲养观察。
2.2分组：
造模后大鼠采用Siegal推荐的神经功能判断六级分法观察造模情况，每日观察2次。造模后第15天根据动物运动情况进行分级：0级，正常；1级，尾无力；2级：后肢无力，行走具有轻度因难；3级：后肢无力，行走具有明显不稳定性；4级：站立不稳，后肢能够移动；5级：瘫痪，后肢无自主移动。并根据Siegal标准进行评分；0级-2分，1级-4分，2级-6分，3级-8分，4级-10分，5级-12分。选择2-4级的SD大鼠50只，作为造模成功动物进行分组，分为5组，每组10只，雌雄各半， 即模型组，供试药品大、中、小剂量组，腰痛宁组；另设假手术组SD大鼠10只。分组后各组具体情况为：假手术组大鼠活动正常，后肢伸展顺利，Siegal评分0级；模型组、供试药品大、中、小剂量组大鼠出现造模侧后肢无力、伸展不顺利，伴有不同程度的行走不稳定，Siegal评分2-4级，经测定，各组神经功能分值相近。
2.3给药：
供试药品大、中、小剂量组分别灌服供试药品混悬液0.4g提取物/kg、0.2g提取物/kg、0.1g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.48g/kg，以上各组大鼠分别按10ml/kg灌胃给药，假手术组及模型组灌服等容量蒸馏水10ml/kg，每天1次，连续30天。
2.4检测指标：给药30天后依次对大鼠进行如下检测：
2.4.1对LIDP模型大鼠步态恢复的影响
观察各组动物行走步态及功能恢复率，按照SPI功能恢复评分标准：SPI评分-15～0为功能恢复，-100～-16为功能未恢复。
SPI评分公式：
SFI＝-38.3×(EPL-NPL)/NPL+109.5(ETS-NTS)/NTS+13.3(EIT-NIT)/NIT-8.8
PL：后足跟至前足趾之间距离(足印长)，EPL为：手术侧，NPL为：正常侧。TS：第1个足趾至第5个足趾之间的距离(足印宽)，ETS为：手术侧，NTS为：正常侧。IT：第2个足趾至第4个足趾之间的距离(足中间三趾宽)，EIT为：手术侧，NIT为：正常侧。
2.4.2病理形态学观察：
2.4.2.1光镜观察
动物麻醉后，逐层分离背部皮肤、肌肉，暴露并分离手术侧L5神经根等，HE染色，光镜观察包括大鼠受压迫腰神经根纤维、髓鞘、轴突、神经元，受压迫神经根周围组织的粘连情况等。
观察方法：光学显微镜下(×400)观察各组切片，参照Sunderland法周围神经损伤程度病理分类标准，将损伤程度分为4度：
I度(0分)：神经轴索等结构清晰、完整，连续性正常，神经纤维髓鞘无肿胀粗细均匀，神经内膜完整，无纤维化。
II度(1分)：部分神经轴索等结构轻微模糊，结构不完整，神经内膜较完 整，无明显纤维化。
III度(2分)：较多神经轴索等结构较模糊，结构不完整，有神经纤维髓鞘出现断裂、肿胀，神经内膜略增厚，部分纤维化，单位面积有髓纤维数较度减少近1/2，神经内膜略增厚，部分纤维化。
IV度(3分)：广泛神经轴索轴索断裂，有髓神经纤维髓鞘大量变性，裂解，单位面积有髓纤维数较度减少近2/3，神经内膜明显增厚、纤维化。
2.4.2.2电镜观察
取部分手术侧L5神经根，15min内用(PH7.0)0.1M二甲胂酸钠缓冲液，(2％戊二醛)固定样品，放入4℃冰箱内固定2h，然后用0.1M二甲胂酸钠缓冲液充分洗涤，再用1％锇酸溶液后固定2h，再经过梯级酒精脱水，浸透环氧树脂包埋，烘干聚合，用LKB三菱超薄切片机切片，厚度为70-80nm，双重染色后电镜观察。
2.4.3血液学相关细胞因子指标检测：
以戊巴比妥钠4mg/ml腹腔麻醉大鼠，经腹主动脉取血，然后进行检测。
2.4.3.1对LIDP模型大鼠血清PGE2、VEGF水平的影响：
(1)样品制备
取动物全血3ml，4℃3500rpm离心15min，分离血清，放4℃保存备用。参照试剂盒说明书，应用ELISA法检测PGE2、VEGF水平。
(2)试剂配制
①缓冲液：用90ml重蒸水稀释缓冲原液。
②冲洗液：用重蒸水稀释冲洗液原液，然后加入1ml Tween20。
③标准品：取8个试管，标记1-8号，1号管中加入900μl缓冲液，2至8号管中加入500μl缓冲液。加100μl标准品至1号管中，混匀，此浓度作为标准曲线的第一个浓度，然后从1号管中移取500μl加入2号管，依次稀释混匀到8号管中。
④示踪物：加6ml缓冲液稀释100dtn，4℃保存。
⑤单抗体：加6ml缓冲液稀释100dtn，4℃保存。
⑥Ellman’s试剂：20ml重蒸水稀释100dtnEllman’s试剂(现用现配)。
(3)加样
按表1顺序加样(VEGF加样程序与此相似)，用薄膜塑料覆盖保护，避光保 存60-90min。
表1PGE2加液程序(μl)
注：Blk-Blank.TA-Total Activity.NSB-Non-Specific Binding.B0-Maximum Binding.
(3)结果分析
①读取吸光光度值：用酶标仪在波长405nm处测吸光值。
②绘制PGE2、VEGF标准曲线。
2.4.3.2对LIDP模型大鼠血浆TXB2水平的影响：
(1)样品制备：取动物全血3ml加入0.2mlEDTA抗凝处理，混匀后注入试管内，4℃3500rpm离心15min，分离血浆，放-20℃保存备用。参照试剂盒说明书，应用放免法检测TXB2水平值。
(2)试剂配制：
①抗血清：加缓冲液B 10.0ml溶解。
②125I-TXB2：加缓冲液B溶解，药盒加缓冲液B 10.5ml溶解。
③标准品：加缓冲液A 2ml，浓度为1600PG/ml作为S7，另取试管6支，编号S1-S6。
④缓冲液A 1ml，由S7中取1ml加到S6，依次倍比稀释至S1，S1至S6的浓度分别为25，50，100，200，400，800PG/ml。
(3)加样：
按试剂盒说明书规定顺序加样，各管加入PR试剂后，混匀，室温15min，4℃3500rpm离心20min，任取其中两管cpm数为T管，吸出上清，用r记数器测各管沉淀cpm。
(4)结果分析：
①由自动r记数器预先编制程序，直接给出有关参数，制备TXB2标准曲线。
②根据血浆样品测得的cpm，计算出每mlTXB2的含量。
2.4.3.3对LIDP模型大鼠血浆6-keto-PGF1α水平的影响：
参照试剂盒说明书，应用放免法检测并计算TXB2/6-keto-PGF1α值。
(1)样品制备：
动物全血3ml加入0.2mlEDTA抗凝处理，颠倒混匀后注入试管内，4℃离心3500rpm，15min，分离血浆，放-20℃保存备用，检测时取出。
(2)标准品制备：标准管加缓冲液A 2ml，浓度为1600PG/ml作为S7，另取试管6支，编号S1-S6。各管加缓冲液A 1ml，由S7中取1ml加到S6，依次倍比稀释至S1，S1-S6浓度依次为25，50，100，200，400，800PG/ml。
(3)试剂配制
①抗血清：加入缓冲液B 10.0ml溶解。
②125I-6-Keto-PGF1α：加缓冲液B 10.5ml溶解。
(4)加样
按表2顺序加样，各管加入PR试剂后，混匀，室温15min，4℃3500rpm离心20min，任取其中两管cpm数为T管，吸出上清，用r记数器测各管沉淀cpm。
(5)结果分析：
①由自动r记数器预先编制程序，直接给出有关参数，制备6-keto-PGF1α标准曲线。
②根据血浆样品测得的cpm，计算出每ml6-Keto-PGF1α的含量。
表2 125I-6-Keto-PGF1α加液程序(μl)
2.4.4对LIDP模型大鼠受压迫神经周围组织PLA2水平的影响：
(1)样品制备
找出各组动物造模区域，取受压迫神经根及其周围肌肉组织，所取神经部位一致，所取组织部位及重量亦一致(0.5g)，经匀浆后应用ELISA法检测磷脂酶A2(PLA2)水平。
(2)其他样品制备：
①缓冲液：用重蒸水稀释15ml缓冲液至75ml。
②底物：用3ml重蒸水溶解底物。
③标准品：取950μl缓冲液至80U/ml管中，吸取500μl缓冲液加入剩下的管中，然后往80U/ml管中加入50μl标准品，涡旋混匀后吸取500μl加入第2管中，涡旋混匀后再吸取500μl加入第3管中，依80U/ml次进行，这样得到5个不同浓度的标准品，1-5管浓度分别为80U/ml、40U/ml、20U/ml、10U/ml、5U/ml。
(3)加样：
按下述顺序加样。
①样品：每孔加入样品(标准品)50μl。
②酶标工作液：每孔加入酶标工作液100μl，摇匀。
③底物：每孔加入底物工作液50μl，摇匀，密封，37℃下保存30min。
④反应终止液：每孔加入反应终止液25μl。
⑤染色剂：每孔加入染色剂25μl，室温下10min。
(4)结果分析：
1.读取吸光光度值：使用酶标仪迅速在波长405nm处测吸光值。
2.绘制PLA2标准曲线。
3统计方法：
各组数据SPI均值、PGE2、VEGF、TXB2、6-Keto-PGF1α、PLA2均以均值(x)±标准差(S)表示，采用统计软件SPSS13.0进行one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后 进行分析。sunderland评分采用Ridid值比较法进行分析。
4结果
4.1对LIDP模型大鼠步态恢复的影响
给蒸馏水或给药30天后，SPI评分结果显示，假手术组大鼠SPI均值为-10.7，模型组大鼠SPI均值为-40.1，供试药品大、中、小剂量组大鼠SPI均值均明显高于模型组，分别为-12.6、-22.0、-24.7，与模型组相比较，有显著性差异(P＜0.05)；腰痛宁组大鼠SPI均值为-21.2，与模型组相比较，有显著性差异(P＜0.05)。结果见表3，表4。
表3供试药品对LIDP模型大鼠步态恢复的影响(SPI评分，x±s)
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
表4供试药品对LIDP模型大鼠步态恢复的影响(功能恢复数)
注：SPI评分-15～0为功能恢复，-100～-16为功能未恢复。
4.2病理形态学观察：
4.2.1光镜观察
光镜下对各组大鼠受压迫神经病理形态观察并比较，结果如下：
假手术组：神经轴索粗细均匀，排列整齐，神经纤维髓鞘完整，无内膜纤维化。
模型组：与假手术组相比，大部分神经轴索肿胀增粗，粗细不均，扭曲，破坏、断裂消失，神经纤维髓鞘崩解。
供试药品大剂量组：与模型组比较，神经轴索肿胀较轻，部分断裂消失，神经纤维髓鞘较完整，少部分纤维化。
供试药品中剂量组：与模型组比较，神经轴索无明显肿胀，粗细较均匀，少部分断裂消失，神经纤维髓鞘较完整，无明显纤维化。
供试药品小剂量组：与模型组比较，神经轴索略微肿胀，部分断裂消失，神经纤维髓鞘大体较完整，部分纤维出现纤维化。
腰痛宁组：与模型组比较，周围神经粗细程度、神经纤维髓鞘完整性方面有明显的减轻，与大剂量组相比较略重。
对LIDP模型大鼠神经病理学的影响，参照Sunderland法周围神经损伤程度病理分类标准进行评分，结果见表5。
以上结果显示，供试药品大、中、小剂量组大鼠的神经病理形态均在不同程度上较模型组有所改善，表明供试药品对LIDP模型大鼠受损伤的神经具有一定修复作用。
表5对LIDP模型大鼠神经病理的影响
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05。
4.2.2电镜观察
电镜下对各组大鼠受压迫神经超微结构形态观察并进行比较，结果如下：
假手术组：与模型组比较，神经元细胞结构完整，少见胶原纤维，神经纤维髓鞘未见肿胀，较完整。
模型组：神经元细胞膜有缺损，细胞核核周间隙增宽，染色质严重聚集，胶原纤维显著增多，神经纤维髓鞘明显肿胀。
供试药品大剂量组：与模型组比较，神经元细胞结构较完整，少见胶原纤维，神经纤维髓鞘未见肿胀，较完整。
供试药品中剂量组：与模型组比较，神经元细胞结构较完整，可见胶原纤维，神经纤维髓鞘少见肿胀，较完整，比大剂量组略重。
供试药品小剂量组：与模型组比较，部分神经元细胞膜有缺损，程度较轻，核染色质可见聚集，胶原纤维较多，神经纤维髓鞘轻微肿胀，比中剂量组略重。
腰痛宁组：与模型组比较，神经元细胞结构较完整，可见少量胶原纤维，部分神经纤维髓鞘肿胀，较大剂量组略重。
以上结果显示，供试药品大、中、小剂量组大鼠的神经超微结构均在不同程度上较模型组有所改善，提示本发明产品对LIDP模型大鼠受损伤的神经具有一定修复作用。
4.3血液学相关细胞因子指标检测：
4.3.1对LIDP模型大鼠血清PGE2水平的影响：
结果显示，与假手术组相比，模型组PGE2血清水平明显增高，有显著性差异(P＜0.05)；与模型组相比，供试药品大、中、小剂量组PGE2水平明显降低，有显著性差异(P＜0.05)。与模型组比较，腰痛宁组PGE2水平略有降低，无显著性差异(P＞0.05)，结果见表6。
4.3.2对LIDP模型大鼠血清VEGF水平的影响：
结果显示，与假手术组相比，模型组血清VEGF水平升高，但无显著性差异(P＞0.05)；与模型组比较，供试药品大、中剂量组VEGF水平明显升高，其中 中剂量组有显著性差异(P＜0.05)。与模型组比较，腰痛宁组血清VEGF水平有升高趋势，结果见表6。
表6供试药品对LIDP模型大鼠血清PGE2、VEGF水平的影响(x±s)
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
4.3.3对LIDP模型大鼠血浆TXB2、6-keto-PGF1α水平的影响
结果显示，与假手术组相比，模型组血浆TXB2水平升高，6-keto-PGF1α水平降低，TXB2/6-keto-PGF1α有升高趋势，但无显著性差异(P＞0.05)。与模型组比较，供试药品大、中、小剂量组有降低血浆TXB2水平的趋势，但无显著性差异；有升高血浆6-keto-PGF1α水平的趋势，大、中剂量组有显著性差异(P＜0.05)；小剂量组TXB2/6-keto-PGF1α降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。与模型组比较，腰痛宁组有降低TXB2水平的趋势、6-keto-PGF1α含量明显增高(P＜0.05)，TXB2/6-keto-PGF1α低于模型组，但与模型组比较无显著性差异(P＞0.05)，结果见表7。
表7供试药品对LIDP模型大鼠血浆TXB2、6-keto-PGF1α水平的影响(x±s)
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05。
4.4对LIDP模型大鼠受压迫神经周围肌肉组织中PLA2水平的影响：
结果显示，与假手术组相比，模型组肌肉组织中PLA2水平明显增高，有显著性差异(P＜0.05)；与模型组比较，供试药品大、中、小剂量组的肌肉组织PLA2水平明显降低，其中大、小剂量组有极显著性差异(P＜0.01)。与模型组比较，腰痛宁组肌肉组织PLA2水平明显降低，有极显著性差异(P＜0.01)，结果见表8。
表8对LIDP模型大鼠受压迫神经周围肌肉组织PLA2水平的影响(x±s)
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
5.小结
结合LIDP的发病机理，本实验主要从以下几方面观察本发明产品对LIDP大鼠的影响：
1.行走功能：本实验研究中，依据LIDP临床特征，采用SD大鼠进行造模，造模成功后给药，然后利用SPI评分、图片、图像等方法观察LIDP大鼠行走功能恢复情况。通过模型组与各组大鼠行走步态的比较，结果显示供试药品组大鼠的行走功能恢复情况观察均明显好于模型组，表明本发明产品通过恢复LIDP大鼠的行走功 能而起到治疗LIDP的作用。
2.受压迫神经组织的病理学检测：病理学光镜下观察发现，在神经纤维的肿胀程度、粗细均匀程度、纤维髓鞘的完整性以及内膜的纤维化程度等方面，供试药品组、腰痛宁组均较模型组有所改善。
电镜下超微结构结果显示，假手术组神经元细胞结构完整，少见胶原纤维，神经纤维髓鞘未见肿胀，较完整。模型组大鼠神经元细胞胞膜严重缺损，核周间隙增宽，染色质聚集，胶原纤维显著增多，神经纤维髓鞘明显肿胀，结构不完整。与模型组比较，供试药品组大鼠神经元细胞结构较完整，胶原纤维较少，神经纤维髓鞘肿胀程度轻，结构较完整，其中，大剂量组具有较好完整性，神经细胞再生能力也较强。同时腰痛宁组大鼠神经元细胞结构也较完整，胶原纤维、神经纤维髓鞘肿胀程度等方面较模型组轻。上述结果表明本发明产品通过维护神经髓鞘的相对完整性、促进神经元细胞再生等途径减轻LIDP大鼠受压迫神经组织病变程度，使LIDP模型大鼠行走功能逐渐趋向恢复，从而对LIDP起到治疗作用。
3.血液及组织学指标：大量研究已经证明，椎间盘突出患者血浆内TXB2、6-keto-PGF1α含量会出现异常，表现为TXB2水平的异常增高和6-keto-PGF1α水平的异常降低，两者平衡失调会造成椎间盘组织供不足血或血栓形成，从而加重椎间盘突出患者的病情。在本实验研究中发现，模型组大鼠血浆中的TXB2明显高于假手术组，而6-keto-PGF1α含量则明显低于假手术组，与模型组比较，供试药品组中剂量组大鼠血浆中TXB2含量及T/K明显低于模型组，同时6-keto-PGF1α含量明显高于模型组，其中6-keto-PGF1α含量及T/K与模型组相比较有显著性差异(P＜0.05)，腰痛宁组与模型组相比，血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量有降低和升高趋势。
PGE2除了能引起血管扩张外，还能增强局部血管通透性，从而产生水肿。许多实验研究表明，脊髓持续性慢性损伤后PGE2含量和活性均明显增高，并引起脊髓组织产生继发性炎症，从而加重脊髓的损伤。VEGF在组织生长和再生过程中具有重要调节作用，是一种重要的血管形成刺激因子。VEGF的消失可导致维持椎间盘生物力学特征的胶原和蛋白多糖及水含量降低，最终导致椎间盘退变。因此，检测PGE2、VEGF水平可反映LIDP病程的进展情况。
PLA2对椎间盘具有强烈的刺激作用，是体内一个重要的代谢酶类，它可水解甘油磷酸脂的2位酰基部位，生成溶血磷脂和游离脂肪酸(主要是花生四烯酸)。花 生四烯酸又可进一步转变为前列腺素、白三烯、血栓素和血小板活化因子等炎症介质，可引起神经根炎症，产生明显的痛觉过敏行为，从而使神经根对机械性刺激敏感并产生剧烈疼痛。大量研究已经证实，大多LIDP患者肌肉组织中PLA2含量较之正常明显升高，并与椎间盘组织的病变程度成一定的正相关性。
本实验研究结果显示，模型组大鼠血清和肌肉组织中PGE2、PLA2水平均明显高于假手术组，与文献结果相符，阳性药腰痛宁组大鼠血清和肌肉中PGE2、PLA2水平低于模型组。供试药品组大鼠血清和肌肉组织中PGE2、PLA2水平亦明显低于模型组，与模型组比较具有显著性差异。此外，本实验还发现模型组大鼠血清中VEGF水平高于假手术组，供试药品组大鼠血清中VEGF水平明显高于模型组，与文献结果相符。
上述结果表明，本发明产品通过降低LIDP患者血和肌肉组织中PGE2、TXB2、PLA2的含量，提高VEGF、6-keto-PGF1α的含量来起到抑制LIDP患者病情加重的趋势，促进神经根功能的恢复的作用。
实施例12抗炎作用
(一)抗二甲苯致小鼠耳肿胀作用实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.67g、0.33g和0.17g提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.067g、0.033g和0.017g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.40g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.04g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.20g/kg·d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.02g/ml 混悬液。
1.3其他药物和试剂
二甲苯(分析纯)，由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供，批号：F 20050规格：500ml/瓶。
1.4动物
雄性昆明种小鼠，体重18～22g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
2方法
取雄性小鼠60只，称重，随机分组。分为空白对照组，供试药品大、中、小剂量组，腰痛宁组，阿司匹林组。每组10只。使用供试药品大、中、小剂量组分别灌服使用供试药品混悬液0.67提取物/kg、0.33g提取物/kg、0.17g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.40g/kg，阿司匹林组灌服阿司匹林混悬液0.20g/kg，小鼠均按10ml/kg灌胃给药，空白对照组灌服等容量蒸馏水(10ml/kg)，每天1次，连续5天。末次给药或蒸馏水1h后，各小鼠右耳涂以二甲苯50μl/只，20min后颈椎脱臼处死，用直径7mm的打孔器将双耳同部位切下，用精密电子天平分别称重，计算各鼠耳肿胀度及肿胀抑制百分率。
公式：
肿胀度＝右耳片重量-左耳片重量
3统计方法：肿胀度以x±s表示，小鼠耳肿胀抑制率数据以百分数(％)表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进行one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后进行分析。
4结果
结果显示，空白对照组小鼠右耳出现红肿，耳肿胀度高达15.5±3.4mg。与空白对照组比较，使用供试药品大、中、小剂量组小鼠的耳肿胀程度明显减轻，均有极 显著性差异(P＜0.01)，肿胀抑制率分别为64.1％、52.5％、57.3％。与空白对照组比较，腰痛宁组、阿司匹林组小鼠的耳肿胀度亦减轻，有极显著性差异(P＜0.01)。见表9。
表9对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x±s)
注：与空白对照组比较，＊＊表示p＜0.01。
(二)抗角叉菜胶致大鼠足跖肿胀作用实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.67g、0.33g和0.17g提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.067g、0.033g和0.017g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.40g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.04g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.24g/kg·d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.024g/ml混悬液。
1.3试剂
角叉菜胶：Sigma公司，批号：018H3798。规格：1mg/瓶。
配制：角叉菜胶加生理盐水配成10mg/ml。
1.4动物
雄性SD大鼠，体重90～100g，上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
1.5仪器
电子天平：上海天平仪器厂产品，型号：FA-1004。
2方法
取雄性SD大鼠60只，随机分为空白对照组，供试药品大、中、小剂量，腰痛宁组，阿司匹林组，每组10只。供试药品大、中、小剂量组分别灌服供试药品混悬液：0.4提取物/kg、0.2g提取物/kg、0.1g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.48g/kg，阿司匹林组灌服阿司匹林混悬液0.24g/kg，以上各组大鼠分别按10ml/kg灌胃给药，空白对照组灌服等容量蒸馏水(10ml/kg)，每天1次，连续5天。第5天采用容积法测定大鼠足跖容积2次，取平均值作为致炎前容积。末次给药后1h在大鼠右足跖部皮下注入1％角叉菜胶0.1ml/只。在注射后1、2、4、6、8、24h分别测定大鼠足跖容积，计算肿胀率、肿胀抑制率。
3统计方法：各组数据以x±s表示，足趾肿胀抑制率数据以百分数(％)表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进行one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后进行分析。
4结果
结果显示，空白对照组大鼠足跖明显肿胀，肿胀率为47％；与空白对照组比较，供试药品大、中剂量组大鼠的足跖肿胀程度明显减轻，有极显著性差异(P＜0.01)，其中，大剂量组作用可维持至4h。与空白对照组比较，腰痛宁组、阿斯匹林组大鼠的足跖肿胀程度亦减轻，有极显著性差异(P＜0.01)，见表10，表11。
表10供试药品对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀率的影响(x±s)
注：每组动物数为10，与空白对照组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
表11供试药品对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀抑制率的影响
注：每组动物数为10，与空白对照组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
实施例13镇痛作用试验
(一)抗冰醋酸致小鼠扭体作用实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.67g、0.33g和0.17g提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.067g、0.033g和0.017g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.40g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.04g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.20g/kg·d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.02g/ml混悬液。
1.3试剂
冰醋酸(分析纯)：由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供，规格：500ml/瓶，批号：20050724。
配制：取冰醋酸加生理盐水配成浓度10mg/ml。
1.4动物
昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
1.5仪器
电子天平，奥豪斯上海公司，型号：SR6010。
2方法
取小鼠60只，体重18～22g，随机分为空白对照组，供试药品大、中、小剂量组，阳性药腰痛宁组，阿司匹林组，每组10只，雌雄各半。供试药品大、中、小剂量组分别灌服供试药品混悬液：0.67提取物/kg、0.33g提取物/kg、0.17g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.40mg/kg，阿司匹林组灌胃阿司匹林混悬液0.20g/kg，小鼠按10ml/kg灌胃给药，空白对照组灌服等容量蒸馏水(10ml/kg)，每天1次，连续5天。末次给药或蒸馏水后1h，小鼠腹腔注射1.0％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察20min内小鼠的扭体次数。
3统计方法：小鼠扭体抑制率用百分数(％)表示，扭体次数以x±s表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进行one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法进行分析。
4结果
结果显示，空白对照组小鼠扭体表现为腹部凹陷、收缩，拱背，四肢伸展，呈角弓反张状，扭体次数为46.2±16.7次；与空白对照组比较，供试药品大、中、小剂量组小鼠扭体次数明显减少，有极显著性差异(P＜0.01)，抑制率分别为44.9％、66.8％、57.0％。与空白对照组比较，腰痛宁组、阿司匹林组小鼠的扭体次数亦明显减少，有极显著性差异(P＜0.01)，见表12。
表12供试药品对冰醋酸致小鼠扭体的影响(x±s)
注：与空白对照组比较，＊＊表示p＜0.01.
(二)小鼠热板法实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.67g、0.33g和0.17g提取物/kg。
配制方法：分别称供试药品，加蒸馏水配成0.067g、0.033g和0.017g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.40g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.04g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.20g/kg·d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.02g/ml混悬液。
1.3动物
雌性昆明种小鼠，体重18～22g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
1.4仪器
电子天平，奥豪斯上海公司，型号：SR6010。
超级恒温器：上海实验仪器厂有限公司，型号：501。
2方法
取雌性昆明种小鼠，60只，体重18～20g，在18～20℃外周环境下，调节恒温水浴温度至55±0.5℃，金属盘的底部接触水面。然后将小鼠放在热板上，用秒表记录自小鼠放入热板至出现舔后足的反应时间(潜伏期)作为该小鼠的痛阈值。给药前先测定并筛选小鼠的痛阈值(共测2次，以平均值为5s～30s者为合格)。选取痛阈合格小鼠分为6组，即空白对照组，三元大、中、小剂量组，腰痛宁组和阿司匹林组，每组10只。供试药品大、中、小剂量组分别灌服供试药品0.67提取物/kg、0.33g提取物/kg、0.17g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.40g/kg，阿司匹林组灌服阿司匹林混悬液0.20g/kg，以上各组小鼠分别按10ml/kg灌胃给药，空白对照组给予等容量蒸馏水(10ml/kg)，连续5天。末次给药后1、2、3、4h分别测定小鼠痛阈值，如痛阈值超过60s，即停止测试而按60s计，观察痛阈值并记录。
3统计方法：各组数据以x±s表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进行 one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后进行分析。
4实验结果
结果显示，与空白对照组及给药前相比，供试药品大、中、小剂量组小鼠在给药后第1h痛阈值明显增高，有极显著的差异(P＜0.01)，其中大剂量组镇痛作用时间较长，可维持3h。与空白对照组及给药前相比，腰痛宁组、阿司匹林组给药后痛阈值亦明显增高，亦有显著性差异(P＜0.01)，见表13。
表13供试药品对小鼠热痛阈值的影响(x±s)
注：各组动物数为10；与空白对照组比较，*表示p＜0.05，**表示p＜0.01；与给药前比较，△表示p＜0.05，△△表示p＜0.01。
(三)小结
本实验结果显示，腰痛宁、阿斯匹林组可提高小鼠的热痛阈值及减少冰醋酸致小鼠扭体次数，与文献报道一致。供试药品大、中、小剂量可提高小鼠的热痛阈值，可减少冰醋酸致小鼠扭体次数，表明本发明产品具有显著镇痛作用。
实施例14活血化瘀作用
(一)大鼠体内静脉血栓形成实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.4g、0.2g和0.1g 提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.04g、0.02g和0.01g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.48g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.048g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验用量为0.48g/kg·d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.048g/ml混悬液。
1.3动物
SD大鼠，体重190～200g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
1.4仪器
电子天平，上海天平仪器厂产品，型号：FA-1004。
电子精密天平，奥豪斯上海公司，型号：AR2130。
2方法
取SD大鼠，60只，体重190～200g，随机分为空白对照组，模型组，供试药品大、中、小剂量组，腰痛宁组，阿司匹林组，每组10只，雌雄各半。供试药品大、中、小剂量组分别灌服供试药品0.40g提取物/kg、0.20g提取物/kg、0.10g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁0.48g/kg，阿司匹林组灌服阿司匹林0.48g/kg，大鼠分别按10ml/kg灌胃给药，空白对照组、模型组灌服等容量蒸馏水(10ml/kg)，每天1次，连续10天。末次给药后1h各组大鼠用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，分离出下腔静脉在近心端结扎，关腹。2h后重新打开腹腔，在距结扎2cm处剪下下腔静脉，倾出血栓，称血栓湿重，将血栓条置80℃烘箱1h，恒重后称血栓干重并记录。
3统计方法：各组数据以x±s表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进one-wayANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后进行分析。
4结果
结果显示，与对照组比较，供试药品大、中、小剂量组血栓湿、干重明显减轻，有极显著性差异(P＜0.01)。腰痛宁组、阿司匹林组血栓湿、干重亦明显减轻，有极显著性差异(P＜0.01)，见表14。
表14供试药品对模型大鼠静脉血栓形成的影响(x±s)
注：与空白对照组比较，＊＊表示p＜0.01。
(二)大鼠冰水-肾上腺素型体外血栓形成实验
1药物及试剂
1.1供试药品、剂量设定依据及药物配制
供试药品：实施例7产品，小鼠口服给药的大中小剂量分别为0.4g、0.2g和0.1g提取物/kg。
配制方法：分别称取供试药品，加蒸馏水配成0.04g、0.02g和0.01g提取物/ml的混悬液。
1.2阳性药
腰痛宁胶囊：河北承德颈复康集团有限公司生产，规格：0.3g/粒，批号：050714，试验用量为0.48g/kg·d-1。
配制方法：称取腰痛宁胶囊内容物适量，加蒸馏水配成0.048g/ml混悬液。
阿司匹林肠溶片：上海信谊百路达药业有限公司生产，批号：0554014，实验 用量为0.24g/kg.d-1。
配制方法：取阿司匹林肠溶片，碾碎，称取粉末适量，加蒸馏水配成0.024g/ml混悬液。
1.3其他药物和试剂
盐酸肾上腺素(Adr)注射液，上海禾丰制药有限公司提供，批号：5A09004规格：1ml/瓶。
戊巴比妥钠：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F20030816。规格：25g/瓶。
配制：称取戊巴比妥钠用生理盐水配成4mg/ml。
1.4动物
SD大鼠，体重190～200g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003。上海中医药大学实验动物中心，SPF级饲养室，温度20～25℃，湿度40％～70％，噪声≤60分贝，换气次数10～20次/小时，工作照明12h明12h暗。
1.5仪器
电子天平，上海天平仪器厂产品，型号：FA-1004。
电子精密天平，奥豪斯上海公司，型号：AR2130。
模拟血栓仪，上海杉达实业有限公司，型号：MX-300。
2方法
取SD大鼠，70只，190～210g，随机分为7组，即空白对照组，模型组，供试药品大、中、小剂量组，腰痛宁组，阿司匹林组，每组10只，雌雄各半。大、中、小剂量组分别灌服供试药品混悬液，0.4提取物/kg、0.2g提取物/kg、0.1g提取物/kg，腰痛宁组灌服腰痛宁混悬液0.48g/kg，阿司匹林组灌服阿司匹林混悬液0.24g/kg，大鼠分别按10ml/kg灌胃给药，空白对照组、模型组灌服等容量蒸馏水(10ml/kg)，每天1次，连续10天。于第9日除正常组外，其余各组大鼠皮下注射Adr，每次0.01mg/kg，共2次，中间间隔4h；正常组皮下注射等容量生理盐水，处置后禁食不禁水过夜。第10日末次给药或蒸馏水1h后，除正常组外，其余各组大鼠皮下注射Adr0.01mg/kg，20min后浸入4℃冰水中5min。正常组仅皮下注射等容量生理盐水。然后，大鼠用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉， 腹主动脉取血，按照Chandler法立刻将血注入旋转环内，迅速置于血栓形成仪上，旋转10分钟后倾出血栓，用滤纸吸干表面鲜血，称血栓湿重，将血栓条置80℃烘箱1h，恒重后称血栓干重。
3统计方法：各组数据以x±s表示，组间比较采用统计软件SPSS13.0进行one-way ANOVA方差分析，组间方差齐性时的比较用LSD法进行分析，方差非齐性时的比较用tamhane’s法校正后进行分析。
4实验结果：
结果显示，与空白对照组比较，模型组大鼠血栓湿、干重、干湿重差均明显增高，有极显著性差异(P＜0.01)，表明血瘀模型制备成功；与模型组相比，供试药品大、中剂量组血栓湿重、干重、干湿重差均明显降低，有极显著性差异(P＜0.01)。与模型组相比，腰痛宁组、阿司匹林组血栓湿重、干重、干湿重差亦明显降低，有极显著性差异(P＜0.01)，见表15。
表15供试药品对冰水-肾上腺素型血瘀模型大鼠体外血栓形成的影响(x±s)
注：与模型组比较，＊表示p＜0.05，＊＊表示p＜0.01。
(三)小结
本实验结果表明，本发明产品的大、中剂量可抑制大鼠静脉血栓的形成，大、中、小剂量可抑制大鼠冰水-肾上腺素型体外血栓的形成，表明本发明产品具有显著的活血化瘀作用。
Claims (6)
1.一种活血、镇痛和抗炎的药物，其特征在于，包括三七、制草乌、淫羊藿、娑罗子、青风藤、延胡索和甘草的提取物，各药材的重量百分比为：
三七 10％～50％
制草乌 10％～50％
淫羊藿 5％～30％
娑罗子 5％～30％
青风藤 0％～20％
延胡索 0％～20％
甘草 0％～20％；
所述的提取物通过以下方法之一制备：
A.步骤包括：将药材按重量配比粉碎后用体积浓度为40～80％乙醇水溶液提取，提取液于50～80℃减压浓缩和干燥，乙醇水溶液与药材的质量体积比为6～14L/kg；或者，
B.步骤包括：
(1)将药材按重量配比粉碎后用体积浓度为40～80％的乙醇水溶液提取，提取液于50～80℃减压浓缩，乙醇水溶液与药材的质量体积比为6～14L/kg；
(2)浓缩液过滤或离心除去沉淀，经大孔吸附树脂吸附纯化，洗脱液在50～80℃减压干燥。
2.权利要求1所述的一种活血、镇痛和抗炎的药物，其特征在于，提取的方法包括浸泡、回流、渗漉提取方法中的一种。
3.权利要求1所述的一种活血、镇痛和抗炎的药物，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中等极性的大孔吸附树脂。
4.权利要求1～3任一项所述的一种活血、镇痛和抗炎的药物，其特征在于，还包括药学上可接受的载体。
5.权利要求4所述的一种活血、镇痛和抗炎的药物，其特征在于，其剂型为片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、粉剂或凝胶剂。
6.权利要求1～5任一项所述一种活血、镇痛和抗炎的药物应用于制备治疗腰椎间盘突出症的药物制剂。
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| CN1312098A (zh) * | 2001-02-21 | 2001-09-12 | 杨玉明 | 一种治疗风湿、类风湿等痹症的药酒 |
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| CN101284057A (zh) * | 2007-04-13 | 2008-10-15 | 李毅 | 腰痛宁药物及其制备方法 |
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2009
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