CN105232625B - 一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊及其制备方法，所述的制备方法：称取连钱草9.5～28.5重量份，加水煎煮提取，滤过，滤液浓缩后，加乙醇进行沉淀，静置，滤过，取上清液，浓缩，得流浸膏I；称取海金沙2.5～7.5重量份、炒王不留行2.5～7.5重量份和补骨脂1.0～3.0重量份，混合，加入乙醇溶液回流提取，滤过，合并滤液，浓缩，得流浸膏II；将流浸膏I、流浸膏II和滑石粉9.5～28.5重量份混合，干燥，粉碎成粉，过筛，即得提取物干浸膏粉，加入辅料，制成颗粒，装入胶囊内，即得治疗泌尿系统结石的中药胶囊。本发明能够有效地提取出本方中原料药的有效成分，所制得的胶囊比散剂具有更好的药效；可以有效地控制质量，服用和携带方便，储存时间更长。

Description

一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊及其制备方法，属于复方中药制剂技术领域。

背景技术

泌尿系结石(是肾结石、输尿管结石、膀胱结石、及尿道结石的统称，亦称尿石症)它是一个全球性疾病，也是我国常见的泌尿外科疾病之一，尤其在我国南方，发病率极高，是世界上三个主要泌尿系结石流行区之一。近年来，我国泌尿系结石的发病率有增加的趋势。

同时，泌尿系结石患者在同期泌尿外科住院患者中所占的比例也越来越大。例如，北京医学院泌尿外科研究所统计了全国29个省市自治区45所医院的泌尿外科住院患者的总人数10876人，其中泌尿系结石患者2424例，占同期泌尿外科住院患者总数的22.3％。广东佛山地区泌尿系结石患者占同期泌尿外科住院患者的比例高达72.70％。全国性调查也发现在省、市、自治区以上医院平均占泌尿外科住院病人的26％。我国泌尿系结石分布存在着明显的地区差异，总体来说，南方地区发病率高，北方地区发病率低。对泌尿系结石的治疗临床上以手术疗法见效高，但创伤痛苦大。虽然近年来随着科学技术的发展，内腔镜、震波碎石、激光碎石等新技术的运用，为治疗泌尿系结石提供了新的治疗途径，但治疗费用昂贵，和术中有所创伤，易复发。资料显示复发率在15％～50％(实际临床上约30％～70％)，使该病在实际运用过程中受到一定的制约，而中医药恰恰在这方面在治疗上占有绝对优势。

资料显示：传统中药以汤剂为主，从对10家医院的介绍，使用汤剂治愈率在52.2％～78.3％之间，总有效率在63.4％～92％之间。汤剂在治疗上存在着耗时费力，口味差，服用、携带不便等弊端，往往给患者带来诸多麻烦，可能造成患者不能完成疗程治疗，达不到治愈的结果。目前市场上虽有中成药替代，但品种不多，疗效不佳。

我们经过二十多年的探索和研究，以中医理论为指导，结合自己的临床经验，由连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉共5味药材组方，研制了散剂。

连钱草，甘淡而平，入肾、膀胱经，功能清热利湿，通淋排石。

海金沙，甘淡而寒，体滑而降，善清湿热，且通淋止痛，二者相伍，俾湿化热清，共为君药。

王不留行，性急下行，功能活血，以化瘀积，《本草述》中言其“讵知血瘀不行，得此则行”，“更司小水，故治淋不可少”，使瘀化积溶，更能利水通淋，以为臣药。

补骨脂，《本草经疏》中云：“能暖水脏，阴中生阳，壮火益土之药也”。壮肾阳，助肾脏之气化，助结石之溶排；能益土，振中宫之健运，防寒滑之致泄，只用少许，以为佐药。

滑石，甘淡而寒，功能利水通淋，使溶碎的结石及时排出，是为佐药；下行膀胱，滑以利窍，以为使药。

本方诸药合用，标本兼顾。以清化为主，使湿化热清；以消为辅，促结石溶碎；以补为佐，鼓肾脏气化，防寒药致泄；以利为助，使溶碎后的砂石得以及早排出。

该方在临床实践中不断修正完善，经过临床上20多年的应用、观察，结果显示散剂有着显著的溶石和排石效果，据统计，治愈率达75％左右，总有效率达85％左右，其研究结果表明已达到国内领先水平，为了使该散剂这一中医研究成果得到广泛的应用，以便使众多患者从中得到受益，有必要对本散剂进一步进行研究。由于该散剂没有经过溶剂提取，成分复杂，质量不易控制，且保存时间较短，因此有必要对该散剂进行剂型改革。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊及其制备方法，其能够克服原来散剂质量不稳定，容易霉变的缺点，在有效成分富集、质量控制、储存时间、携带及疗效等方面优于散剂。

为了达到上述目的，本发明对该方中的药材的制备工艺进行了优化，提供了一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其特征在于，其原料包含连钱草9.5～28.5重量份、海金沙2.5～7.5重量份、炒王不留行2.5～7.5重量份、补骨脂1.0～3.0重量份和滑石粉9.5～28.5重量份。

优选地，所述的连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉的重量比为19∶5∶5∶2∶19。

本发明还提供了上述治疗泌尿系统结石的中药胶囊的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：称取连钱草9.5～28.5重量份，加水煎煮提取至少一次，滤过，合并滤液，滤液浓缩后，加乙醇进行沉淀，静置，滤过，取上清液，浓缩，得流浸膏I；

第二步：称取海金沙2.5～7.5重量份、炒王不留行2.5～7.5重量份和补骨脂1.0～3.0重量份，混合，加入乙醇溶液回流提取至少一次，滤过，合并滤液，浓缩，得流浸膏II；

第三步：将流浸膏I、流浸膏II和滑石粉9.5～28.5重量份混合，干燥，粉碎成粉，过筛，即得提取物干浸膏粉，加入辅料，装入胶囊内，即得治疗泌尿系统结石的中药胶囊(复方石不留胶囊)。

优选地，所述的第一步中的加水煎煮提取共提取两次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次提取均煎煮1小时。

优选地，所述的第一步中的静置时间为12小时～16小时。

优选地，所述的第一步中，加乙醇进行沉淀前，将滤液浓缩至相对密度为1.05～1.09。

优选地，所述的第二步中，加乙醇至含醇量为65vol％进行沉淀。

优选地，所述的第二步中，回流提取所用的乙醇溶液的体积浓度为60％，乙醇溶液的用量为海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍。

优选地，所述的第二步中，加入乙醇溶液回流提取2次，每次1.5小时。

优选地，所述的第一步中所得的流浸膏I的相对密度为1.05～1.09。

优选地，所述的第二步中所得的流浸膏II的相对密度为1.18～1.22。

优选地，所述的第三步中，将流浸膏I、流浸膏II和滑石粉9.5～28.5重量份混合的具体步骤为：将流浸膏I、流浸膏II和滑石粉9.5～28.5重量份合并，再加入体积浓度为60％～70％的乙醇溶液进行混合。

优选地，所述的辅料为微晶纤维素和重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液。

更优选地，所述的微晶纤维素的重量为提取物干浸膏粉重量的10％。

更优选地，所述的重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液的重量为提取物干浸膏粉重量的10～20％。

本发明制定了3种不同的提取工艺(具体步骤参见实施例4)，所制得的浸膏预先经药效筛选，然后根据药效预实验结果选择合适的提取方法。同时根据各药味成份特点并依据药效初筛结果，再对其制备工艺研究进行了研究(具体步骤参见实施例5)。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明的制备方法能够有效地提取出原料药中对治疗泌尿系统结石有疗效的成分，所制得的胶囊比原散剂具有更好的药效；

2、本发明制备的胶囊剂型，可以有效地控制质量，储存时间更长，具有服用方便、剂量准确、便于携带，疗效高等优点。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，对本发明作进一步详细说明。本发明中的相对密度均采用比重计法测量，测量温度为50℃，以水为参照。

实施例1

一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其原料包含连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉，其制备工艺为：

称取经过鉴定的连钱草14.25公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至相对密度为1.080(50℃)，得流浸膏15.12kg，冷却，加2倍量95％乙醇(30.24升)进行沉淀，搅匀，含醇量达65vol％，静置12小时，滤过，上清液回收乙醇浓缩得到流浸膏I，重4.75kg(为A液)，相对密度为1.20，备用。

取经过鉴定的海金沙3.75公斤、补骨脂1.50公斤、炒王不留行3.75公斤，放入布袋内混合，置回流锅内，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍的体积浓度为60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时。回流液冷却过滤，回收乙醇浓缩得流浸膏II，重3.09kg(为B液)，相对密度为1.21，备用。

取流浸膏I和流浸膏II(共7.84公斤)，合并，搅匀，加入到14.25公斤滑石粉中，混合均匀，干燥(70℃)，粉碎成粉，过40目筛，即得提取物干浸膏粉15.73公斤，备用。

取提取物干浸膏粉5.2公斤，加0.5公斤微晶纤维素，混匀，加重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液0.63公斤制成适宜的软材，过20目制粒，65℃干燥至水分在6wt％以下，过30目筛整粒，装入0号胶囊中，每粒装0.57g，共制备得到复方石不留胶囊8520粒，铝塑泡罩包装，每板12粒。每袋装4板(即48粒/袋)，加外包装，即得。

实施例2

一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其原料包含连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉，其制备工艺为：

称取经过鉴定的连钱草14.25公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至相对密度为1.060(50℃)，得流浸膏14.83kg，冷却，加2倍量95％乙醇(29.66升)进行沉淀，搅匀，含醇量达65vol％，静置12小时，滤过，上清液回收乙醇浓缩得到流浸膏I，重4.73kg(为A液)，相对密度为1.19，备用。

取经过鉴定的海金沙3.75公斤、补骨脂1.50公斤、炒王不留行3.75公斤，放入布袋内混合，置回流锅内，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍的体积浓度为60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时。回流液冷却过滤，回收乙醇浓缩得流浸膏II，重2.96kg(为B液)，相对密度为1.19，备用。

取流浸膏I和流浸膏II(共7.69公斤)，合并，搅匀，加入到14.25公斤滑石粉中，混合均匀，干燥(70℃)，粉碎成粉，过40目筛，即得提取物干浸膏粉15.65公斤，备用。

取提取物干浸膏粉5.2公斤，加0.5公斤微晶纤维素，混匀，加重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液0.57公斤制成适宜的软材，过20目制粒，65℃干燥至水分在6wt％以下，过30目筛整粒，装入0号胶囊中，每粒装0.57g，共制备得到复方石不留胶囊8660粒，铝塑泡罩包装，每板12粒。每袋装4板(即48粒/袋)，加外包装，即得。

实施例3

一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其原料包含连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉，其制备工艺为：

称取经过鉴定的连钱草14.25公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至相对密度为1.070(50℃)，得流浸膏15.02kg，冷却，加2倍量95％乙醇(30.04升)进行沉淀，搅匀，含醇量达65vol％，静置12小时，滤过，上清液回收乙醇浓缩得到流浸膏I，重4.68kg(为A液)，相对密度为1.17，备用。

取经过鉴定的海金沙3.75公斤、补骨脂1.50公斤、炒王不留行3.75公斤，放入布袋内混合，置回流锅内，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍的体积浓度为60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时。回流液冷却过滤，回收乙醇浓缩得流浸膏II，重3.03kg(为B液)，相对密度为1.20，备用。

取流浸膏I和流浸膏II(共7.71公斤)，合并，搅匀，加入到14.25公斤滑石粉中，混合均匀，干燥(70℃)，粉碎成粉，过40目筛，即得提取物干浸膏粉15.71公斤，备用。

取提取物干浸膏粉5.2公斤，加0.5公斤微晶纤维素，混匀，加重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液0.71公斤制成适宜的软材，过20目制粒，65℃干燥至水分在6wt％以下，过30目筛整粒装入0号胶囊中，每粒装0.57g，共制备得到复方石不留胶囊8470粒，铝塑泡罩包装，每板12粒。每袋装4板(即48粒/袋)，加外包装，即得。

实施例4：三种不同提取工艺样品的制备方法和药效学研究

工艺A样品的制备(A药)：取连钱草饮片共0.95公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至每ml相当于原药材1g的浓度，冷却；取浸膏加2倍量95％乙醇，搅匀，使含醇量达65vol％，静置12小时，上清液回收乙醇，并浓缩至干，得连钱草干浸膏备用(流浸膏I)。取海金沙0.25公斤，补骨脂0.1公斤，炒王不留行0.25公斤，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物重量的10倍的体积、浓度为70％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时，回流液冷却过滤，回收乙醇并浓缩得到浸膏备用(流浸膏II)。取流浸膏I和流浸膏II合并，加等重量的体积浓度为60％～70％的乙醇溶液，搅匀，加滑石粉0.95公斤，混合均匀，制粒，干燥，过16目筛，制备得到颗粒剂1038克。

工艺B样品的制备(B药)：取连钱草饮片共0.95公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至每ml相当于原药材1g的浓度，冷却，得连钱草浸膏备用(流浸膏I)。取海金沙0.25公斤，补骨脂0.1公斤，炒王不留行0.25公斤，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍的体积、浓度为60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时，回流液冷却过滤，回收乙醇浓缩得到浸膏备用(流浸膏II)。取流浸膏I和流浸膏II合并，加等重量的体积浓度为60％～70％的乙醇溶液，搅匀，加滑石粉0.95公斤，混合均匀，制粒，干燥，过16目筛，共制备得到颗粒剂1290克。

工艺C样品的制备(C药)：取连钱草饮片共0.95公斤，放入煎煮锅内，加入16倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤；残渣再加12倍重量的水煎煮提取1小时，煎煮液过滤，合并2次滤液，常压浓缩至每ml相当于原药材1g的浓度，冷却；取浸膏加2倍量95％乙醇，搅匀，使含醇量达65vol％，静置12小时，上清液回收乙醇浓缩得到得连钱草浸膏备用(流浸膏I)。取海金沙0.25公斤，补骨脂0.1公斤，炒王不留行0.25公斤，加入海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍的体积、浓度为60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时，回流液冷却过滤，回收乙醇浓缩得到浸膏备用(流浸膏II)。取流浸膏I和流浸膏II合并，加等重量的体积浓度为60％～70％的乙醇溶液，搅匀，加滑石粉0.95公斤，混合均匀，制粒，干燥，过16目筛，共制备得到颗粒剂1040克。

3种不同提取工艺所得产物的药效学的预实验：

评价3种不同提取工艺对大鼠的肾结石影响：

实验一：比较三种不同提取工艺浸膏对大鼠肾结石的治疗作用

SD大鼠53只，雄性，随机分成5组，分别为正常组、模型组、A药、B药和C药组，除正常组外5只外，其余每组12只。正常和模型组灌胃给蒸馏水，其余灌胃给药1g/kg，1次/天。同时除正常对照组每天给予正常饮用水和灌服蒸馏水外，其余4组大鼠每天均用含1％乙二醇的冷开水作为饮用水，每日下午另用2％氯化铵按2ml/只灌胃，进行造模，连续4周，末次给药后24h股动脉放血处死大鼠，解剖取出两侧肾脏、输尿管和膀胱进行下列指标检测。

血清指标：取全血分离血清，按试剂盒说明书在半自动生化仪上检测血清BUN、Cr、Ca2+水平。

脏器指数：双侧肾脏称重，按g/100g体重计算脏器系数。

结石发生率：肾脏沿矢状面剖成两半，用解剖镜仔细检查膀胱、输尿管和肾盂等部位是否有颗粒状或尼沙样结石存在，并记录。

肾组织和输尿管钙元素含量：右肾及输尿管和膀胱称重后放入事先标号、称重的坩锅于马弗炉中灰化，称灰重后分别用1N的HCL消化后测定Ca²⁺含量，并计算每克肾组织中钙的含量。

肾组织草酸钙结晶：左肾组织作常规病理切片，40倍物镜下仔细镜检，利用MoticAdvance 3.2图像分析系统拍摄组织中草酸钙结晶，计数整张切片中草酸钙结晶数量，对于草酸钙结晶呈弥漫性分布的则随机选取10个视野拍摄并计数。

模型组肾重量及重量指数均明显提高，提示肾脏可能存在水肿。C组的肾脏重量及重量指数均明显下降，提示水肿程度改善。模型组肾及输尿管和膀胱灰重提高趋势明显，肾组织钙含量显著增加，提示泌尿系统有明显的钙沉积。C组肾、输尿管和膀胱灰中均低于模型组，趋势明显，肾组织钙含量显著低于模型组，和正常组接近，提示泌尿系统内钙沉积明显减轻。见表1。

表1肾、输尿管和膀胱重量、重量指数、灰重和钙含量

和正常组比较：##P＜0.01，和模型组比较：**P＜0.01，*P＜0.05(下同)

模型组血清尿素氮水平明显升高，提示肾功能有一定程度的损害。药B和C组血清，尿素氮水平显著下降，提示肾功能有一定的改善。C组血清钙水平明显上升，C组的血清钙水平明显比模型组低，A组则无明显效果。见表2。

表2血清BUN、Cr和Ca水平

和正常组比较：##P＜0.01，和模型组比较：**P＜0.01，*P＜0.05

解剖镜和光镜下观察，模型组成石为7/12，三个药物组的成石率均有明显降低，尤以C组的结石量最少。见表3。

表3泌尿系统解释形成情况

光镜下观察，模型组有6/12大鼠肾组织出现病变，三个药物组有2～3只大鼠出现肾组织病变，程度有所减轻。见表4。

表4显微镜下肾脏其他病理变化

小结：模型组大鼠血清尿素氮和钙水平显著升高、肾重量及重量指数均明显增加，肾及输尿管和膀胱灰重提高趋势明显，光镜下观察有7/12大鼠出现肾结石，6/12大鼠肾组织存在病变，提示有明显的肾结石形成，并有肾脏炎症、水肿和功能损害。

A药对血清尿素氮和钙水平、肾重量和重量系数及灰重和钙含量均无明显影响，但减少了肾结石率和肾组织病变程度。提示A药对肾结石及由此引起的肾组织病变与功能损害虽有一定的保护作用，但效果并不理想。

B药可降低血清尿素氮和肌酐水平，但对血清钙水平无明显影响，对肾重量和重量系数及灰重和钙含量也均无明显影响，但减少了肾结石率和肾组织病变程度。提示B药对肾结石及由此引起的肾组织病变与功能损害虽有一定的保护作用，但效果并不理想。

C药可明显降低血清尿素氮和钙水平，显著降低肾重量和重量系数，肾及输尿管和膀胱的灰重和钙含量降低趋势明显，肾结石率和肾组织病变程度也显著减轻。提示C药对肾结石及由此引起的肾组织病变与功能损害虽有明显的保护作用。

实验二：三种不同提取工艺浸膏给药后大鼠尿液对草酸钙溶解的影响

SD大鼠，随机分成4组，分别为正常组、A药、B药和C药组，每组4只。正常灌胃给蒸馏水，其余灌胃给药2g/kg，1次/天，共3次。末次给药后1h将大鼠放入代谢笼，自由饮水，不摄食，接取4h的尿液。取尿液1ml放入事先加有约20mg草酸钙的指形管，剧烈震摇30s后37℃超声1h，7000rpm离心5min，取上清按试剂盒说明书在半自动生化仪上检测Ca含量。

结果显示，经服用C药的大鼠尿液草酸钙的溶解度最高(和正常大鼠尿液比较增加82％)。提示C药可能促进结石的溶解。见表5

表5给药后尿液对草酸钙溶解的影响(n＝4)

因此，综合上述研究结果，见表6.

表6三种不同提取工艺的药效结果

无#或*的箭头表示变化趋势明显，但无统计意义；有#或*的箭头表示变化有统计意义。一个或二个箭头代表变化程度

上述结果显示，工艺C制备的样品药效最好，因此，确定工艺C为初步提取工艺：炒王不留行、补骨脂和海金沙采用乙醇提取；连钱草药材单独进行提取纯化，使有效成分富集，而滑石粉在制剂时直接加入。

经过上述化学和药效学研究，本发明治疗泌尿系统结石的中药胶囊的制备方法能够有效地提取出原料药的有效成分，具有较高的药效。

在工艺3的基础上，为了进一步制备成口服胶囊剂，符合大生产的工艺要求，药材经提取浓缩成流浸膏时就可以加入对药效无干扰的微晶纤维素等药用辅料，便于混合均匀，制粒，干燥后再整粒使有效成分均匀，容易分装在空心胶囊中，制成的胶囊成品重量差异小，保证胶囊剂的质量符合中国药典的规定。

实施例5

根据各药味成份特点并依据药效初筛结果，本发明对制备工艺进行了研究。

一、提取工艺路线的优化

连钱草提取工艺条件考察

经药效初筛发现，君药连钱草经水提醇沉工艺药效最佳，因此，对连钱草分别进行水提和醇沉的工艺优化研究。

(一)、水提取工艺的优化研究

(1)药材粒度选择

所购连钱草饮片已为细小枝段，可以直接投料，无需另行处理。

(2)评价指标选择

由文献资料可知，连钱草中的迷迭香酸(rosmarinic acid，下以RA表示)为治疗结石的主要药效成分，并存在量效关系，文献报道迷迭香酸为连钱草中的主要成分之一，按一般经验，单一成分含量的高低，亦可部分反映出其他有效成分的高低，因此，选择迷迭香酸的转移率作为工艺筛选的指标。

(3)迷迭香酸的含量测定方法

采用HPLC法测定迷迭香酸的含量，由于为单味药材提取，可排除其他成分的干扰，具体操作如下：

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(0.1％磷酸)(40∶60)为流动相；检测波长为330nm。理论塔板数按迷迭香酸计算应不低于3000。对照品溶液的制备取迷迭香酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1ml含迷迭香酸30ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备称取提取浸膏适量(约相当于0.5g连钱草药材)，置25ml量瓶中，精密称定，加入水稀释至刻度，摇匀，用水相微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

(4)试验方法和结果

a、提取次数的选择

考虑到工厂的实际生产一般都为提取两次，本发明先对提取次数进行了考察，称取40g药材，加入14倍重量的水，煎煮提取1h，提取3次，过滤，回收，分别称定每次提取的浸膏，并测定RA转移率。结果见表7。

表7连钱草提取次数的考察

结果分析：根据第三次提取浸膏中的RA的量少于3次提取总量的10％，从提取率与经济的角度综合考虑，以提取2次为宜。

b、加水量的选择

药材吸水率的考察：

称取50g连钱草药材，加入20倍重量的水，分别在0.5h～5h量取剩余体积，每隔30min记录，滤除药渣，量取剩余水的体积数。结果见表8。

表8吸收率实验

以上可以看出，药材的最大吸水量约为4倍左右；而在试验中发现，加8倍量水时刚浸没药材，因此，在考虑加水倍量的时候，第一次提取加水倍数应多加4倍。

c、正交试验

根据上述的初步工艺条件筛选，按以下的因素水平进行正交试验，以迷迭香酸的转移率为指标，筛选出最佳的工艺条件。

水提取试验的影响因素主要为提取次数，加水的倍数，提取时间，由于之前已经确定了提取次数，此处的正交试验为双因素三水平试验，考察提取时间和加水的倍数。称取40g药材，按照正交设计表的内容进行试验。见表9。结果结果见表10和11。

表9因素水平表

表10正交试验结果

表11方差分析

注：F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00

经方差分析，A对实验结果有显著性影响，作为药效指标成分，含量越高越好，优选A3；而B无显著性影响，因此，B因素可根据实际条件选择。从生产角度考虑，在不影响提取效果的前提下，提取时间越短，成本越低，因此筛选得的合理组合为A3B1。即：第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次煎煮提取1小时。

综上所述，连钱草的水提取工艺确定为提取两次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次煎煮提取1小时。

d、验证试验

根据正交实验结果筛选的工艺条件，进行三批验证实验：每批连钱草200g，加水提取2次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次煎煮提取1小时，滤过，合并滤液，称重，取样测定RA的转移率及浸膏收率。结果见表12。

表12验证实验结果表

结果显示，3次验证实验的迷迭香酸转移率和浸膏收率数据基本稳定，说明水提取工艺稳定可行。

二、连钱草醇沉工艺的优化研究

1、醇沉工艺的正交试验

影响醇沉工艺的因素有初膏比重、醇沉浓度、静置时间等。醇沉工艺的药液相对密度通常控制在1.05～1.25，密度太低耗用乙醇量多，生产成本高、效率低，太高则有关成分损失严重；醇沉工艺的含醇量(醇沉浓度)以50～80vol％为多用，在该浓度范围内可除去淀粉、树胶、粘液质、叶绿素等杂质；醇沉静置时间根据沉淀形成的难易略有不同，从12小时(即静置过夜)至24小时不等。鉴此，本发明采用正交试验筛选最佳醇沉工艺，以迷迭香酸的转移率为考查指标。因素水平设计见表13，试验结果见表14、15。

表13醇沉工艺因素水平表

表14正交试验结果

表15正交试验结果方差分析表

注：F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00

正交试验结果显示，A为显著因素，B、C为不显著因素，即药液相对密度对RA的转移率有显著影响，最佳条件为A1(药液相对密度＝1.07(50℃))，而B和C无显著影响，可以按实际生产需求定，B(醇沉浓度)无显著差异，直观分析选取转移率高的，A1B1C1和A1B2C2，但醇沉的主要目的是精制，在保证有效成分不损失的情形下，尽可能的去除杂质。除杂率＝(水提浸膏-醇沉浸膏)/水提浸膏×100％，A1B2C2工艺的转移率与A1B1C1接近，但除杂率要明显高于A1B1C1，更能达到提取工艺去粗取精的目的，故选择A1B2C2；C醇沉时间，时间短即可节省生产周期，选择C1最佳；考虑到正交试验设计仅为全面试验的代表性试验，醇沉时间选择C1和C2均可。因此，最佳工艺确定为A1B2C1或A1B2C2，即浓缩提取液至相对密度为1.07(50℃)，加乙醇至含醇量为65vol％进行醇沉，静置12～16h。

2、醇沉工艺的验证试验

根据正交实验结果筛选的工艺条件，进行三批验证实验：每批连钱草500g，加水提取2次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次提取1小时，滤过，合并滤液，浓缩提取液至相对密度为1.07(50℃)，加乙醇至含醇量为65vol％进行醇沉，静置12～16h。滤出上清液，回收乙醇。称重，取样测定RA的转移率及浸膏收率。结果见表16。

表16验证实验结果表

结果显示，3次验证实验的迷迭香酸转移率和浸膏收率数据基本一致，说明工艺稳定可行。

综上所述，连钱草的水提醇沉优化工艺确定为加水煎煮提取2次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次煎煮提取1小时，滤过，合并滤液，浓缩提取液至相对密度1.07(50℃)(相当于原药材1g)，加乙醇至含醇量为65vol％进行醇沉，静置12～16h。

三、补骨脂、海金沙、炒王不留行三味药材的醇提工艺研究

由于三味药材的化学成分研究基础较为薄弱，尚无相关成分证实与治疗结石相关，为保证与原工艺一致性，最大程度保留有效成分，避免出现化学成分指标高，而药效成分丢失的情况，因此本发明采用提取醇溶物的重量来优化工艺考察。

提取次数的考察

称取18g补骨脂，45g海金沙，45g炒王不留行药材，加入体积浓度为70％的乙醇溶液，8倍重量，回流提取1h，过滤，回收乙醇，分别记录每次提取后的浸膏重量。结果见表17。

表17三味药材提取次数的考察

结果分析：根据第三次提取浸膏的重量少于3次提取浸膏总量的10％，从提取率与经济的角度综合考虑，以提取2次为宜。

醇提工艺正交实验

根据上述的初步工艺条件筛选，按以下的因素水平进行正交试验，以醇提物浸膏重量为指标，筛选出最佳的工艺条件。

醇提取试验的影响因素主要为乙醇浓度，加醇的倍数，提取时间，由于之前已经确定了提取次数，此处的正交试验为三因素三水平试验。称取18g补骨脂，45g海金沙，45g炒王不留行药材，按照正交设计表的内容进行试验，见表18，试验结果见表19、20。

表18醇提工艺因素水平表

表19正交试验结果

表20正交试验结果方差分析表

注：F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00

正交试验结果显示，A、B、C均为不显著因素，从直观分析上看，A1B3C3所得浸膏最多，因此，最佳工艺确定为A1B3C3，即10倍重量浓度为60vol％的乙醇溶液回流提取2次，每次回流提取1.5h，过滤，回收乙醇即得。

醇提工艺的验证试验

根据正交实验结果筛选的工艺条件，进行三批验证实验：取90g补骨脂，225g海金沙，225g炒王不留行，10倍重量的浓度为60vol％的乙醇溶液回流提取2次，每次回流提取1.5h。滤过，合并滤液，回收乙醇。称重，计算所得浸膏重量。试验结果见表21。

表21验证实验结果表

结果显示，3次验证实验的浸膏收率数据稳定，说明工艺稳定可行。

四、剂型选择依据

原一日处方用量：连钱草2.85g、海金沙0.75g、补骨脂0.3g、炒王不留行0.75g，滑石粉2.85g(共7.5g药材)。根据中试提取浸膏收率计算，每天服用的总干膏量为：3.15g。由此可见，药材经提取纯化后，服用量大大减少，适应患者的顺从性。同时，便于制剂成型，使携带、服用、贮藏更方便。

原方以散剂服用，现拟改为口服胶囊制剂。散剂稳定性、口感较差；考虑到本处方中滑石粉较多，比较了各种固体口服制剂的优缺点，决定将其开发成胶囊剂。并对复方石不留胶囊进行了制剂成型工艺的研究。

五、复方石不留胶囊制剂成型工艺的研究

1、处方筛选

将浸膏粉末，按表22以等量递增法加入不同稀释剂，混匀，加聚维酮浆适量，20目制粒，65℃烘干，30目整粒，灌装胶囊，试验结果见23。

表22考察的因素和水平

表23正交制剂工艺条件的考察

据以上的处方工艺比较，由休止角和装量差异来看应选用A2B2C3(5号处方)，由崩解时间来看应选用A3B3C1，综合考虑选用C1的处方制得的颗粒偏松，而5号处方能制成较理想的颗粒，崩解也比较快，故最后选择5号处方为中试处方。

2、制粒工艺考查

填装胶囊的颗粒大小应适宜，粗细均匀，否则颗粒太粗，充填胶囊易造成装量差异大，太细则颗粒流动性差，不便于生产操作。根据相关经验，制粒可用20目筛，整粒可用30目筛。

总混粉中提取物约占8％，滑石粉占83％，辅料占9％，应采取等量递增法，逐步混匀。湿颗粒采用低温干燥(65℃)，中国药典规定胶囊剂的水分不高于9％，一般内控在6％以下较为稳妥。

3、制剂成型小结

根据上述试验结果，初步拟定复方石不留胶囊的成型工艺为：取连钱草、海金沙等流浸膏，加等重量的体积浓度为60％-70％的乙醇溶液，混入滑石粉中，干燥，粉碎成细粉，加适量微晶纤维素，混匀，加重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液适量制成适宜的软材，过20目筛制粒，65℃干燥至水分含量在6％(质量分数)以下，过30目筛整粒，装入胶囊，每粒装0.57g，即得。

以上拟定的工艺条件进行试验，结果所得总混颗粒有良好的流动性，经试验，用0号胶囊填装可达到0.57g的装量。用胶囊充填机填装，取设备稳定运行后的样品进行检查，结果所得胶囊的外观、装量差异、崩解时限等均符合要求。

Claims (4)

1.一种治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其特征在于，其原料由连钱草9.5～28.5重量份、海金沙2.5～7.5重量份、炒王不留行2.5～7.5重量份、补骨脂1.0～3.0重量份和滑石粉9.5～28.5重量份制成。

2.如权利要求1所述的治疗泌尿系统结石的中药胶囊，其特征在于，所述的连钱草、海金沙、炒王不留行、补骨脂和滑石粉的重量比为19:5:5:2:19。

3.权利要求1或2所述的治疗泌尿系统结石的中药胶囊的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：称取连钱草9.5～28.5重量份，加水煎煮提取两次，第一次加16倍重量的水，第二次加12倍重量的水，每次提取均煎煮1小时，滤过，合并滤液；将滤液浓缩至相对密度为1.05～1.09；加乙醇至含醇量为65vol％进行沉淀，静置12小时～16小时，滤过，取上清液，回收乙醇浓缩，得流浸膏I；

第二步：称取海金沙2.5～7.5重量份、炒王不留行2.5～7.5重量份和补骨脂1.0～3.0重量份，混合，加入乙醇溶液回流提取两次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩，得流浸膏II；其中，回流提取所用的乙醇溶液的体积浓度为60％，乙醇溶液的用量为海金沙、补骨脂和炒王不留行的混合物的重量的10倍；

第三步：将流浸膏I和流浸膏II合并，加等重量的体积溶度为60％～70％的乙醇溶液，搅匀，加滑石粉9.5～28.5重量份，混合均匀，制粒，干燥，粉碎成粉，过筛，即得提取物干浸膏粉，加入辅料，制成颗粒，装入胶囊内，即得治疗泌尿系统结石的中药胶囊。

4.如权利要求3所述的治疗泌尿系统结石的中药胶囊的制备方法，其特征在于，所述的辅料为微晶纤维素和重量浓度为10％的聚维酮k30水溶液。