CN101498697A - 一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 - Google Patents
一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101498697A CN101498697A CNA200910006854XA CN200910006854A CN101498697A CN 101498697 A CN101498697 A CN 101498697A CN A200910006854X A CNA200910006854X A CN A200910006854XA CN 200910006854 A CN200910006854 A CN 200910006854A CN 101498697 A CN101498697 A CN 101498697A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dga
- impurity
- solution
- carboxymethyl chitosan
- preferred
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用液相色谱法分离测定羧甲基壳聚糖中杂质一缩二乙二醇酸(钠)(DGA)的方法。本发明所说的一种用液相色谱方法分离测定羧甲基壳聚糖类产品中杂质DGA的高效液相色谱方法，是以C18为填料的色谱柱，以缓冲盐(pH值1.5～3.5)与有机相按一定配比组成的混合溶液为流动相，以紫外检测器进行检测定量。该方法能够有效地分离测定羧甲基壳聚糖中的杂质DGA，本发明解决了羧甲基壳聚糖中的杂质DGA的分离测定问题，从而保证了羧甲基壳聚糖的质量可控。
Description
技术领域
本发明涉及一种用液相色谱法分离测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法。
背景技术
甲壳素是自然界存储量仅次于纤维素的第二大天然多糖类化合物，其化学结构为β-(1→4)-2-N-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖，其脱乙酰基的产物为壳聚糖，由于甲壳素和壳聚糖均不能直接溶于水，极大地限制了其应用。壳聚糖在碱性条件下与氯乙酸反应可得羧甲基化壳聚糖，与壳聚糖相比，羧甲基壳聚糖具有更好的水溶性，因此在医药、生物医学工程等领域有着广泛的应用。外科手术后的愈合过程中，由于切口周围纤维组织的增生和渗透，不可避免会发生粘连，会导致肠梗阻、运动障碍、疼痛等后遗症。羧甲基壳聚糖可用来防止术后粘连的发生。由于部分羧甲基壳聚糖类手术防粘连产品在临床应用时少数患者会出现结膜充血的不良反应，研究发现在羧甲基壳聚糖类物质中含有从未见报道的一种杂质，对该杂质采用电喷雾质谱、红外光谱及色谱等方法进行了结构鉴定，证实该杂质为一缩二乙二醇酸(钠)(DGA)。采用兔离体主动脉进行的血管舒张活性研究结果表明，DGA对氯化钾和去甲肾上腺素预收缩主动脉环均有舒张作用，且呈浓度依赖性，因此导致羧甲基壳聚糖类手术防粘连类产品临床上出现结膜充血的不良反应的主要原因是由于产品中含有杂质DGA。
由于在羧甲基壳聚糖类物质研究中从未见有关杂质DGA的报道，因此，建立了该杂质的高效液相色谱(HPLC)检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定羧甲基壳聚糖类产品中杂质DGA的高效液相色谱方法，从而实现对羧甲基壳聚糖类产品中杂质DGA的定量测定。
本发明所说的一种用液相色谱方法分离测定羧甲基壳聚糖类产品中杂质DGA的高效液相色谱方法，采用反相色谱法，以缓冲盐(pH值1.5～3.5)与有机相按一定配比组成的混合溶液为流动相。
上述所说的反相色谱法选用C18为填料的色谱柱。
本发明的流动相中有机相选自下列化合物：甲醇和乙腈。
本发明的缓冲盐溶液主要指磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，优选磷酸二氢钾缓冲溶液。
本发明的缓冲盐溶液的浓度为0.005～0.1mol·L-1，优选0.01mol·L-1。
本发明的缓冲盐溶液的pH值为1.5～3.5，优选为2.0。
本发明的缓冲盐溶液-有机相的体积比为85：15～98：2，优选97：3。
本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：
1)取羧甲基壳聚糖样品适量，加入体积比为7:3的甲醇：水溶液，超声提取10分钟，6000r/min离心10分钟，用流动相稀释制备成待测样品溶液。
2)设置流动相的流速为0.2～1.0ml/min，优选0.5ml/min；检测波长204～220nm，优选210nm；色谱柱柱温为25～50℃，优选30℃。
3)取1)的样品20μl注入高效液相色谱仪，实现DGA的分离测定。
其中：
高效液相色谱仪：WATERS高效液相色谱仪
色谱柱：Symmetry300 C18(4.6 x 150mm)
流动相：(0.01mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液，以磷酸调pH2.0)-甲醇＝97：3
流速：0.5ml/min
检测波长：210nm
进样体积：20μl
本发明采用C18色谱柱，能够有效地分离测定羧甲基壳聚糖中的杂质DGA；
线性试验表明，在一定浓度范围内，DGA的回归方程的相关系数r＝0.9998；
本发明解决了羧甲基壳聚糖中的杂质DGA的分离测定问题，从而保证了羧甲基壳聚糖的质量可控。
附图说明
附图1为(0.010mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液，以磷酸调pH2.0)-甲醇＝97：3条件下，羧甲基壳聚糖中DGA的色谱图，图1中保留时间为3.771min的色谱峰为DGA。
附图2为(0.005mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液，以磷酸调pH2.0)-甲醇＝97：3条件下，羧甲基壳聚糖中DGA的色谱图，图2中保留时间为4.002min的色谱峰为DGA。
具体实施方式：
实施例1
仪器与条件
WATERS高效液相色谱仪；色谱柱：Symmetry300 C18(4.6 x 150mm)；流动相：(0.01mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液，以磷酸调pH2.0)-甲醇＝97：3；流速：0.5ml/min；检测波长：210nm；进样体积：20μl
实施步骤
取羧甲基壳聚糖样品适量，加入体积比为7:3的甲醇：水溶液，超声提取10分钟，6000r/min离心10分钟，用流动相稀释制备成待测样品溶液。
取待测样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。
附图1中保留时间为3.771min的色谱峰为DGA，附图1说明在此条件下羧甲基壳聚糖中DGA杂质能够很好地分离测定。
实施例2
仪器与条件
WATERS高效液相色谱仪；色谱柱：Symmetry300 C18(4.6 x 150mm)；流动相：(0.005mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液，以磷酸调pH2.0)-甲醇＝97：3；流速：0.5ml/min；检测波长：210nm；进样体积：20μl
实施步骤
取羧甲基壳聚糖样品适量，加入体积比为7:3的甲醇：水溶液，超声提取10分钟，6000r/min离心10分钟，用流动相稀释制备成待测样品溶液。
取待测样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。
附图1中保留时间为4.002min的色谱峰为DGA，附图2说明在此条件下羧甲基壳聚糖中DGA杂质能够很好地分离测定。
Claims (7)
1.一种用液相色谱法分离测定羧甲基壳聚糖中杂质一缩二乙二醇酸(钠)(DGA)的方法，其特征在于：以C18柱为分离柱，以缓冲盐溶液与有机相按一定配比组成的混合溶液为流动相。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的有机相选自甲醇和乙腈。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，优选磷酸二氢钾缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液的浓度为0.005～0.1mol·L-1，优选0.01mol·L-1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液的pH值为1.5～3.5，优选为2.0。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液与甲醇的体积比为85：15～98：2，优选97：3。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法包含以下步骤：
1)取羧甲基壳聚糖样品适量，加入体积比为7:3的甲醇：水溶液，超声提取10分钟，6000r/min离心10分钟，用流动相稀释制备成待测样品溶液。
2)设置流动相的流速为0.2～1.0ml/min，优选0.5ml/min；检测波长204～220nm，优选210nm；色谱柱柱温为25～50℃，优选30℃。
3)取1)的样品20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200910006854XA CN101498697A (zh) | 2009-02-25 | 2009-02-25 | 一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200910006854XA CN101498697A (zh) | 2009-02-25 | 2009-02-25 | 一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101498697A true CN101498697A (zh) | 2009-08-05 |
Family
ID=40945864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA200910006854XA Pending CN101498697A (zh) | 2009-02-25 | 2009-02-25 | 一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101498697A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109154604A (zh) * | 2016-04-24 | 2019-01-04 | 沃特世科技公司 | 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法 |
-
2009
- 2009-02-25 CN CNA200910006854XA patent/CN101498697A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109154604A (zh) * | 2016-04-24 | 2019-01-04 | 沃特世科技公司 | 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aehle et al. | Tropane alkaloid analysis by chromatographic and electrophoretic techniques: An update | |
| Hou et al. | Studies on the interactions between ginsenosides and liposome by equilibrium dialysis combined with ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry | |
| CN106932498B (zh) | 一种醋酸加尼瑞克的检测方法 | |
| CN104698101A (zh) | 一种左卡尼汀及其盐类产品中右卡尼汀含量的高效液相检测方法 | |
| CN103852531B (zh) | 一种利用hplc-elsd测定啤酒中麦芽低聚糖的方法 | |
| CN105388225A (zh) | 一种含胞磷胆碱钠的药物制剂中udpc的分析检测方法 | |
| CN107144623B (zh) | 一种在线快速筛选和定量中药中抗氧化活性成分的方法 | |
| CN106610409A (zh) | 一种壳聚糖填充微型基质固相分散方法 | |
| CN101498697A (zh) | 一种用液相色谱法测定羧甲基壳聚糖中杂质的方法 | |
| CN103575830B (zh) | 血浆中4种蒽醌的分析方法及其在药代动力学中的应用 | |
| CN108072712A (zh) | 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法 | |
| CN103969385A (zh) | 荜茇及胡椒中的五种生物碱的鉴定及含量同步测定方法 | |
| CN107632094A (zh) | 一种测定黄连中游离氨基酸的方法 | |
| Xie et al. | Analysis of urinary metabolites for metabolomic study by pressurized CEC | |
| Tyszczuk-Rotko et al. | Voltammetric procedure for the determination of oleanolic and ursolic acids in plant extracts | |
| CN102645501B (zh) | 一种加压毛细管电色谱仪检测对虾中氯霉素、甲砜霉素、甲硝唑残留的方法 | |
| CN103852542A (zh) | 一种基于柱后衍生的低分子量肝素完全降解产物检测方法 | |
| CN104133014B (zh) | 一种考察布洛伪麻缓释制剂释放度的方法 | |
| CN103472153B (zh) | 辣椒原料及其制品中罗丹明b的检测方法 | |
| CN103575820A (zh) | 血浆中5种黄酮苷的分析方法及其在药代动力学中的应用 | |
| CN103869020B (zh) | 一种鉴别天然麝香和人工麝香的方法 | |
| CN102967683B (zh) | 一种(3r)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法 | |
| CN103529141B (zh) | 一种包合后人工牛黄中胆红素的含量测定方法 | |
| CN101455695A (zh) | 细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸a的质量控制方法 | |
| CN101923081B (zh) | 检测尿中吗啡类生物碱的柱切换lc-ms/ms分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090805 |