CN101497866B - 生产低醇啤酒的酿酒酵母 - Google Patents
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Abstract
生产低醇啤酒的酿酒酵母，属于发酵食品。低醇啤酒既具有啤酒应有的啤酒风味，又具有多饮不醉的优点，同时也符合当今消费者日益重视身体健康的消费趋势。啤酒乙醇的含量是决定低醇啤酒的关键指标，如何解决啤酒中乙醇的含量是生产低醇啤酒的关键。一种生产低醇啤酒的酿酒酵母，其组成包括：选取工业用酿酒酵母菌株，其特征是：菌株拉丁名：Saccharomyces cerevisiae，保藏在：CCTCC保藏号：M207161。本产品用于生产低醇啤酒。
Description
技术领域：
本发明涉及一种利用生物工程方法构建生产低醇啤酒的酿酒酵母。
背景技术：
低醇啤酒既具有啤酒应有的啤酒风味，又具有多饮不醉的优点，同时也符合当今消费者日益重视身体健康的消费趋势，加上妇女对酒精过敏男士对低醇啤酒的喜爱，低醇啤酒正在走俏。
啤酒乙醇的含量是决定低醇啤酒的关键指标，它直接关系到啤酒的品质。如何解决啤酒中乙醇的含量是生产低醇啤酒的关键。目前，降低啤酒中乙醇含量的办法有很多种，其中最理想的方法之一就是构建低醇啤酒基因工程菌株，通过对工业用酿酒酵母本身进行改造来生产低醇啤酒。
发明内容：
本发明的目的是提供一种通过基因克隆技术，将出发工业用酿酒酵母菌株进行了基因改造的方法，从而构建可用于生产低醇啤酒的基因工程菌株。
上述的目的通过以下的技术方案实现：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，其组成包括：选取工业用酿酒酵母菌株，菌株拉丁名：Saccharomyces cerevisiae，保藏在：CCTCC保藏号：M207161。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，HDY-01(原始菌株)酵母、ΔADH I(缺失乙醇脱氢酶)酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌分别接种于100毫升YPD液体培养基中，30℃，200转/分钟，过夜培养，作为种子液。然后以1∶4的接种量接种于麦芽汁培养基中12℃低温发酵15天，分别测定每天的发酵参数。其中乙醛利用气相色谱Agilen仪6890型号测定，双乙酰利用气象色谱测PE Claus500型号测定，乙醇利用蒸馏密度瓶法测定，残糖利用糖度计(WYT-10-32％)测定，悬浮酵母数利用显微镜直接计数法测定。
结果显示HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌15天发酵的过程中，乙醛含量的平均值分别为1.51毫克/升(mg/L)、1.72mg/L和1.51mg/L，说明我们最后构建的低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I与出发工业菌株是一致的。乙醇含量结果显示，三株菌的乙醇平均值分别为0.38(V/V)、0 (V/V)和0.27(V/V)，这表明，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的乙醇含量较出发菌株低28％，达到了我们构建低醇啤酒酵母的目的。从双乙酰含量来看，三株菌的双乙酰的平均值为17.41纳克/克(ppb)、20.82(ppb)和8.54(ppb)，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的双乙酰含量较出发菌株低了51％。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，菌株大小介于2.0-3.0微米(μm)，圆形。在酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)固体培养基表面生长较快，48小时后菌落大小为2.0-3.0毫米(mm)，菌落乳白色，质地均匀，半透明，粘稠，易挑取，有酒香味。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的初始阶段包括：设计引物并进行扩增，回收纯化的BADH I基因片段与T-载体pGMT-easy在16℃连接过夜，连接产物pGMT-BADH I转化大肠杆菌感受态细胞E.coli DH5α后，使用Sangon MNIQ-200质粒大量抽提试剂盒SK241提取重组质粒DNA，回收。所述的设计引物为：首先进行枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中ADH I基因的克隆(BADHI)包括：根据GeneBank基因文库登陆的枯草芽孢杆菌ADH I基因序列(NC 000964)，设计一对特异性引物，每个引物30个碱基，用于扩增ADH I基因，在上游和下游分别加上酶切工具酶Xba I的识别位点(斜线表示)，BADH上游引物 
BADH下游引物 
所述的扩增为：用灭菌牙签挑取少许对数生长时期的枯草芽孢杆菌，放入PCR管中，利用PCR程序中的90℃扩增过程扩增2小时，即可将枯草芽孢杆菌细胞破碎，使全基因组DNA游离出来，作为模板。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的回收是将PCR产物用上海华舜生物工程有限公司DNA胶回收试剂盒进行回收，回收纯化的BADH I基因片段与T-载体pGMT-easy的16℃连接过夜，连接产物命名为pGMT-BADH I，连接产物pGMT-BADHI转化大肠杆菌E.coli DH5α后，使用Sangon MNIQ-200质粒大量抽提试剂盒(SK241)提取重组质粒DNA，备用。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的构建重组质粒pYC6/CT-BADH I过程中为使BADH I基因与表达载体pYC6/CT进行连接，首先通过Xba I单酶切pGMT-BADHI和pYC6/CT，酶切体系如下表：
| 反应物 | pGMT-BADH(A) | pYC6/CT(B) |
| 质粒DNA(1微克/ 微升)(μg/μL) Xba I(5U/μL) 10×缓冲液 ddH2O(双蒸水) | 5μL 1μL 2μL 12μL | 5μL 1μL 2μL 12μL |
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的构建重组质粒pYC6/CT-BADH I包括的酶切为单酶切产物，容易发生自连，我们将单酶切后的线性pYC6/CT质粒进行去磷酸化处理，防止自连的发生。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR扩增获得ΔADH I酿酒酵母菌株的过程包括：通过PCR扩增两端含有与酵母的乙醇脱氢酶IYADH I同源片段的潮霉素基因片段和PCR产物直接转化酵母菌。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR扩增两端含有与YADH I同源片段的潮霉素基因片段过程是：
设计一对引物L1、L2，此引物是依据酿酒酵母YADH I基因和质粒pCAMBIA(质粒名称，购自Invitrogen公司)中的潮霉素基因设计的，该引物是用来扩增转入的目的基因片段，既带有与YADH I基因序列同源部分的潮霉素基因片段，引物序列如下：
L1(引物名称) 
L2(引物名称)
其中引物两端各有40bp(碱基)序列(斜体部分)是和酿酒酵母HDY-01中YADH I基因同源部分，其他部分是潮霉素引物序列；
将含有质粒pCAMBIA的大肠杆菌于含有潮霉素的LB(Luria-Bertani培养基)液体培养基中37℃，180转/分钟过夜摇床培养；提取pCAMBIA质粒DNA作为 模板，PCR扩增两端含有与YADH I同源片段的潮霉素基因片段，PCR反应体系如下：
| 反应物 | 加入量 | 终浓度 |
| 10×PCR buffer(PCR缓冲液) 2.5mMdNTP(碱基名称) L1 L2 pCAMBIA质粒 2.5mMMgCL2(氯化镁) Taq酶(来自嗜热菌的扩增酶) ddH2O(双蒸水) | 1μL(微升)0.8μL1μL1μL2μL0.8μL0.2μL3.2μL | 1× 2mM(毫摩尔) 10pmol/μL(皮摩尔/微 升) 10pmol/μL 50ng/μL 2mM 2U/μL 10μL |
94℃ 1分钟，59℃ 1分钟，72℃ 3分钟，35个循环；
获得的重组子通过在含有100微克/毫升潮霉素平板上培养进行抗性验证，通过PCR扩增进行转化验证；
这对引物为直接扩增潮霉素基因片段引物，两段不含有与YADH I基因片段的同源序列。
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR产物直接转化酵母菌的过程是：
将活化的酿酒酵母HDY-01挑取单菌落接种于YPD液体培养基中，30℃，200转/分钟培养48小时，取100毫升菌液3500转/分钟离心5分钟，弃上清；在离心管中加入40毫升1×TE(即1倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)清洗菌体，然后3500转/分钟离心5分钟，弃上清液；加入2毫升1×LiAc/0.5×TE(即1倍醋酸锂/0.5倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)，室温放置10分钟；制成酵母菌感受态细胞；取一干净的1.5毫升离心管，在其中依次加入10μLPCR产物(含有与YADH I基因同源序列的潮霉素基因片段)，10.7μL鱼鲑精DNA，100μL酵母菌HDY-01感受态细胞，700μL1×LiAc/40PEG-4000/1×TE(即1倍醋酸锂/40％聚乙 二醇/1倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)混合，30℃反应30分钟；反应完毕再离心管中加入88μL二甲基亚砜DMSO原液混合均匀，40℃水浴中热激7分钟；热激结束后，13000转/分钟离心10秒，弃上清，然后再离心管中加入1毫升1×TE清洗2次；13000转/分钟离心10秒弃上清；在离心管中加入50-100μL1×TE，将其涂布于含有潮霉素的酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基YPD平板上，30℃培养48小时。
这个技术方案有以下有益效果：
通过本发明，成功构建了酿酒酵母的ADH I缺失菌株和恢复突变酵母BADHI-ΔADH I。BADH I-ΔADH I经过连续15天发酵实验证明，其乙醇含量、乙醛含量和双乙酰含量均较出发菌株有所降低。
HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母酶活力测定
ADH I在代谢过程中产生的H+可以和NAD+(即氧化的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸结合生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸即NADH，NADH在OD340nm下有最大吸光值，我们通过测定NADH的吸光值变化情况就可以反映出ADH I酶活力大小。酶活定义为单位湿细胞在单位时间使吸光值每发生0.001的改变定义为一个酶活。
测定结果表明在相同条件下HDY-01酵母ADH I酶活力最强，ΔADH I酵母菌酶活力最弱，而BADH I-ΔADH I酵母菌酶活力位于两者之间。这是由于ΔADHI酵母菌酶丧失了ADH I基因不能代谢生成乙醇，所以在检测过程中酶活力处于最低，而BADH I-ΔADH I酵母菌由于转入了枯草芽孢杆菌的BADH I基因，此基因与酿酒酵母的YADH I基因相比，酶活力不如YADH I基因，所以BADH I-ΔADHI酵母菌的酶活力在测定过程中要比HDY-01酵母的酶活力低。
遗传稳定性试验
HDY-01酵母在含有100μg/毫升潮霉素的YPD平板上不能生长，也不能在含有50μg/毫升的Blasticidin的YPD平板上生长，而ΔADH I酵母菌在含有100μg/毫升潮霉素的平板上能够生长，因为其中引物了从质粒pCAMBIA克隆的潮霉素抗性基因片段。BADH I-ΔADH I酵母菌能够在含50μg/毫升的Blasticidin的YPD平板上生长，因为其中转入了pYC6/CT质粒，质粒上带有 Blasticidin抗性标记。将传代的每一代ΔADH I酵母菌均匀涂布在含100μg/毫升潮霉素的YPD平板上，BADH I-ΔADH I酵母菌每一代涂布在含50μg/毫升的Blasticidin的YPD平板上，抗性传代12代后菌株性能保持稳定。酶活力检测表明，连续传代12代后，酶活力保持稳定。
HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母发酵实验
在啤酒发酵产物当中，决定啤酒是否是低醇啤酒的关键指标就是乙醇含量；乙醛含量则是决定啤酒口感的关键指标。双乙酰含量不仅关系到啤酒口味还影响着啤酒发酵的周期。由于以上原因，我们要对发酵液中的乙醇含量，乙醛含量和双乙酰含量，以及其他成分进行测定。
HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌分别接种于100毫升YPD液体培养基中，30℃，200转/分钟，过夜培养，作为种子液。然后以1∶4的接种量接种于麦芽汁培养基中12℃低温发酵15天，分别测定每天的发酵参数。其中乙醛利用气象色谱Agilent 6890型号测定，双乙酰利用气象色谱测PEClaus500型号测定，乙醇利用蒸馏密度瓶法测定，残糖利用糖度计(WYT-10-32％)测定，悬浮酵母数利用显微镜直接计数法测定。
结果显示HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌15天发酵的过程中，乙醛含量的平均值分别为1.51毫克/升(mg/L)、1.72mg/L和1.51mg/L，说明我们最后构建的低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I与出发工业菌株是一致的。乙醇含量结果显示，三株菌的乙醇平均值分别为0.38(V/V)、0(V/V)和0.27(V/V)，这表明，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的乙醇含量较出发菌株低28％，达到了我们构建低醇啤酒酵母的目的。从双乙酰含量来看，三株菌的双乙酰的平均值为17.41纳克/克(ppb)、20.82(ppb)和8.54(ppb)，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的双乙酰含量较出发菌株低了51％。
由此可见，构建的低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I在乙醇、双乙酰和乙醛指标中，均较出发菌株有所改善，说明菌株构建成功。
附图说明：
图1为质粒pGMT-BADH I。
图2为pYC6/CT-BADH I构建过程。
图3ΔADH I酵母的构建过程。
具体实施方式：
实施例1：
本专利用菌种：
所述的生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的初始阶段包括：设计引物并进行扩增，回收纯化的BADH I基因片段与T-载体pGMT-easy的16℃连接过夜，连接产物pGMT-BADH I转化大肠杆菌感受态细胞，以下简称E.coli DH5α后，使用Sangon MNIQ-200质粒大量抽提试剂盒(SK241)提取重组质粒DNA，回收。
酿酒酵母BADH I-ΔADH I(分类命名：酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeBADH I-ΔADH I)保藏在：CCTCC(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：湖北省武汉市武昌珞珈山)保藏号：M207161，保藏日：2007年10月16日。
酿酒酵母BADH I-ΔADH I 30℃培养在酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基，以下简称YPD培养基中，其成分为1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，2％琼脂粉，121℃灭菌30分钟。
实施例2：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，其组成包括：选取工业用酿酒酵母菌株。
实施例3：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，HDY-01(原始菌株)酵母、ΔADH I(缺失乙醇脱氢酶)酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌分别接种于100毫升YPD液体培养基中，30℃，200转/分钟，过夜培养，作为种子液。然后以1∶4的接种量接种于麦芽汁培养基中12℃低温发酵15天，分别测定每天的发酵参数。其中乙醛利用气相色谱Agilen仪6890型号测定，双乙酰利用气象色谱测PE Claus500型号测定，乙醇利用蒸馏密度瓶法测定，残糖利用糖度计(WYT-10-32％)测定，悬浮酵母数利用显微镜直接计数法测定。
结果显示HDY-01酵母、ΔADH I酵母、BADH I-ΔADH I酵母菌15天发酵的过程中，乙醛含量的平均值分别为1.51毫克/升(mg/L)、1.72mg/L和1.51mg/L，说明我们最后构建的低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I与出发工业菌株是一致的。乙醇含量结果显示，三株菌的乙醇平均值分别为0.38(V/V)、0 (V/V)和0.27(V/V)，这表明，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的乙醇含量较出发菌株低28％，达到了我们构建低醇啤酒酵母的目的。从双乙酰含量来看，三株菌的双乙酰的平均值为17.41纳克/克(ppb)、20.82(ppb)和8.54(ppb)，低醇啤酒酵母BADH I-ΔADH I的双乙酰含量较出发菌株低了51％。
实施例4：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，菌株大小介于2.0-3.0微米(μm)，圆形。在酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)固体培养基表面生长较快，48小时后菌落大小为2.0-3.0毫米(mm)，菌落乳白色，质地均匀，半透明，粘稠，易挑取，有酒香味。
实施例5：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的初始阶段包括：设计引物并进行扩增，回收纯化的BADH I基因片段与T-载体pGMT-easy在16℃连接过夜，连接产物pGMT-BADH I转化大肠杆菌感受态细胞E.coli DH5α后，使用Sangon MNIQ-200质粒大量抽提试剂盒SK241提取重组质粒DNA，回收。所述的设计引物为：首先进行枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中ADH I基因的克隆(BADHI)包括：根据GeneBank基因文库登陆的枯草芽孢杆菌ADH I基因序列(NC 000964)，设计一对特异性引物，每个引物30个碱基，用于扩增ADH I基因，在上游和下游分别加上酶切工具酶Xba I的识别位点(斜线表示)，BADH上游引物5’-AGT TCT AGA ATGCAG AAA TTC CAC ACA TTT G-3’；BADH下游引物5’-G GAA TGC AGA TCT GGATTT TGC CAT ATT CAC-3’，所述的扩增为：用灭菌牙签挑取少许对数生长时期的枯草芽孢杆菌，放入PCR管中，利用PCR程序中的90℃扩增过程扩增2小时，即可将枯草芽孢杆菌细胞破碎，使全基因组DNA游离出来，作为模板。
实施例6：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的回收是将PCR产物用上海华舜生物工程有限公司DNA胶回收试剂盒进行回收，回收纯化的BADH I基因片段与T-载体pGMT-easy的16℃连接过夜，连接产物命名为pGMT-BADH I，连接产物pGMT-BADHI转化大肠杆菌E.coli DH5α后，使用Sangon MNIQ-200质粒大量抽提试剂盒(SK241)提取重组质粒DNA，备用。
实施例7：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的构建重组质粒pYC6/CT-BADH I过程中为使 BADH I基因与表达载体pYC6/CT进行连接，首先通过Xba I单酶切pGMT-BADHI和pYC6/CT，酶切体系如下表：
| 反应物 | pGMT-BADH(A) | pYC6/CT(B) |
| 质粒DNA(1微克/ 微升)(μg/μL) Xba I(5U/μL) 10×缓冲液 ddH2O(双蒸水) | 5μL 1μL 2μL 12μL | 5μL 1μL 2μL 12μL |
实施例8：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的构建重组质粒pYC6/CT-BADH I包括的酶切为单酶切产物，容易发生自连，我们将单酶切后的线性pYC6/CT质粒进行去磷酸化处理，防止自连的发生。
实施例9：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR扩增获得ΔADH I酿酒酵母菌株的过程包括：通过PCR扩增两端含有与酵母的乙醇脱氢酶IYADH I同源片段的潮霉素基因片段和PCR产物直接转化酵母菌。
实施例10：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR扩增两端含有与YADH I同源片段的潮霉素基因片段过程是：
设计一对引物L1、L2，此引物是依据酿酒酵母YADH I基因和质粒pCAMBIA(质粒名称，购自Invitrogen公司)中的潮霉素基因设计的，该引物是用来扩增转入的目的基因片段，既带有与YADH I基因序列同源部分的潮霉素基因片段，引物序列如下：
L1(引物名称) 
L2(引物名称)
其中引物两端各有40bp(碱基)序列(斜体部分)是和酿酒酵母HDY-01中YADH I基因同源部分，其他部分是潮霉素引物序列；
将含有质粒pCAMBIA的大肠杆菌于含有潮霉素的LB(Luria-Bertani培养基)液体培养基中37℃，180转/分钟过夜摇床培养；提取pCAMBIA质粒DNA作为模板，PCR扩增两端含有与YADH I同源片段的潮霉素基因片段，PCR反应体系如下：
| 反应物 | 加入量 | 终浓度 |
| 10×PCR buffer(PCR缓冲液) 2.5mMdNTP(碱基名称) L1 L2 pCAMBIA质粒 2.5mMMgCL2(氯化镁) Taq酶(来自嗜热菌的扩增酶) ddH2O(双蒸水) | 1μL(微升) 0.8μL 1μL 1μL 2μL 0.8μL 0.2μL 3.2μL | 1× 2mM(毫摩尔) 10pmol/μL(皮摩尔/微 升) 10pmol/μL 50ng/μL 2mM 2U/μL 10μL |
94℃ 1分钟，59℃ 1分钟，72℃ 3分钟，35个循环；
获得的重组子通过在含有100微克/毫升潮霉素平板上培养进行抗性验证，通过PCR扩增进行转化验证；
这对引物为直接扩增潮霉素基因片段引物，两段不含有与YADH I基因片段的同源序列。
实施例11：
生产低醇啤酒的酿酒酵母，所述的通过PCR产物直接转化酵母菌的过程是：
将活化的酿酒酵母HDY-01挑取单菌落接种于YPD液体培养基中，30℃，200转/分钟培养48小时，取100毫升菌液3500转/分钟离心5分钟，弃上清；在离心 管中加入40毫升1×TE(即1倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)清洗菌体，然后3500转/分钟离心5分钟，弃上清液；加入2毫升1×LiAc/0.5×TE(即1倍醋酸锂/0.5倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)，室温放置10分钟；制成酵母菌感受态细胞；取一干净的1.5毫升离心管，在其中依次加入10μLPCR产物(含有与YADH I基因同源序列的潮霉素基因片段)，10.7μL鱼鲑精DNA，100μL酵母菌HDY-01感受态细胞，700μL1×LiAc/40PEG-4000/1×TE(即1倍醋酸锂/40％聚乙二醇/1倍三羟甲基氨基甲烷，乙二胺四乙酸)混合，30℃反应30分钟；反应完毕再离心管中加入88μL二甲基亚砜DMSO原液混合均匀，40℃水浴中热激7分钟；热激结束后，13000转/分钟离心10秒，弃上清，然后再离心管中加入1毫升1×TE清洗2次；13000转/分钟离心10秒弃上清；在离心管中加入50-100μL1×TE，将其涂布于含有潮霉素的酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基YPD平板上，30℃培养48小时。
序列表
<110>黑龙江大学
<120>生产低醇啤酒的酿酒酵母
<160>4
<210>1
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据Gene Bank基因文库登陆的枯草芽孢杆菌ADH I基因序列设计的BADH上游引物。
<400>1
agttctagaa tgcagaaatt ccacacattt g 31
<210>2
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据Gene Bank基因文库登陆的枯草芽孢杆菌ADH I基因序列设计的BADH下游引物。
<400>2
ggaatgcaga tctggatttt gccatattca c 31
<210>3
<211>67
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据酿酒酵母YADH I基因和质粒pCAMBIA中的潮霉素基因设计的PCR扩增引物L1。
<400>3
tttcaagcta taccaagcat acaatcaact atctcatata caatgatgaa aaagcctgaa 60
ctcaccg 67
<210>4
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据酿酒酵母YADH I基因和质粒pCAMBIA中的潮霉素基因设计的PCR扩增引物L2。
<400>4
aacttattta ataataaaaa tcataaatca taagaaattc gcttactatt tctttgccct 60
cggacg 66
Claims (1)
1.一种生产低醇啤酒的酿酒酵母，其特征在于：其保藏编号为CCTCC M207161，保藏日：2007年10月16日，分类命名：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
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