CN101489570A - 从血液制剂中除去异常朊病毒的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供从血液制剂中简单且高效地除去异常朊病毒的方法，进而提供能够同时除去异常朊病毒和白细胞的方法。本发明为一种从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，利用填充了涂覆有聚合物的载体的滤器对血液制剂进行过滤，将该过滤的血液制剂回收，所述聚合物由下述3个单元构成而形成：20摩尔％以上40摩尔％以下的、疏水性聚合性单体来源的单元；5摩尔％以上13摩尔％以下的、含有碱性含氮部分的聚合性单体来源的单元；其余为含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体来源的单元。

Description

从血液制剂中除去异常朊病毒的方法
技术领域
本发明涉及从血液制剂中除去异常朊病毒的方法。更详细地说涉及选择性除去可能存在于全血制剂、浓缩红细胞、血小板浓缩液等血液制剂中的异常朊病毒的方法。
背景技术
传染性海绵状脑病(TSE)或朊病毒病在人和其它哺乳动物种中会引起致命的神经变性疾病。特别是广泛已知绵羊的羊痒病(scrapie)、牛的BSE。人的疾病方式还包括散发性克-雅病(sCJD)、医源性克-雅病、吉斯特曼-施特劳斯(GSS)综合征、致死性家族性失眠症(FFI)和库鲁症(Kuru)。朊病毒病被认为是天然存在的正常朊病毒发生结构变化，变换成变异型的异常朊病毒(成为朊病毒病原因物质的变异型朊病毒蛋白质)，并传染给人和其它哺乳动物。变异型的朊病毒蛋白质与正常型的朊病毒蛋白质相比，由于采用富有β-片层(β-sheet)的结构，因此具有疏水性高、易于形成多聚体、耐受蛋白酶K的特征。
最近指出，以英国为中心发生的变异型CJD是由于消费了来自感染有B SE的牛的牛肉(非专利文献1、2)。变异型CJD除了是由牛向人的牛肉消费所导致的传播之外，还通过在血液制剂的输血或组织的移植物中存在的变异型朊病毒蛋白质的传播，从而具有从人传染给人的危险性。该状况中，在2004年报告了接受献血后患上变异型CJD的给血者的血液输血的受血者感染变异型CJD的2例病例，在2006年报告了第3例病例，因此输血导致的变异型CJD传播的可能性增高。另外指出，还存在相当数量的虽未患变异型CJD、但已经感染的人，来自于这些人的血液制剂有可能使感染扩大。因此，从血液制剂中除去异常朊病毒的方法是必要的。
另一方面，在输血领域中一直进行所谓的除去白细胞的输血，即，除去血液制剂中所含的混入白细胞后进行输血。这是由于，伴随输血的头痛、恶心、发冷、非溶血性发热反应等副作用或者给受血者带来更深刻影响的异型抗原致敏、输血后移植物抗宿主病(GVHD)、病毒感染等严重副作用主要是由在输血所用的血液制剂中混入的白细胞所引起的。在从血液制剂中除去白细胞的方法中，从除去白细胞能力高、操作简单、成本低等理由出发，广泛使用过滤法。过滤法，即利用除去白细胞的滤器进行血液制剂等的处理在近年来为了贯彻除去白细胞的血液制剂的品质管理，通常在保存前在血液中心进行过滤。通常，在血液中心使用除去白细胞的滤器过滤血液时，将装有欲过滤血液制剂的血液袋放置在比回收过滤后血液制剂的袋高70cm到150cm的位置处，通过重力的作用对血液制剂进行过滤。
用于调制除去了白细胞的血液制剂的装置广泛使用SCD型和在线型两种装置。SCD型中，为了将装有欲除去白细胞的血液制剂的袋和装置无菌地接合而除去白细胞，除去白细胞的滤器仅与回收过滤后的血液制剂的血液袋相连。在线型中，为了一体地进行从献血者采血至血液制剂调制，通常在血液袋中含有保存液或抗凝固剂。这些装置的灭菌方法，对于SCD型而言，一般采用用于灭菌的成本低的辐射线灭菌。但是，由于辐射线灭菌会引起保存液或抗凝固剂的分解，因此在线型一般使用高压蒸汽灭菌。
另外，作为测定含有红细胞的血液制剂品质的指标之一，可以举出溶血度，为了提供高品质的含有红细胞的除去白细胞的血液制剂，要求溶血度小于0.8％。(非专利文献3)
对于从血液制剂中除去异常朊病毒的方法而言，考虑到血液中心的操作性、成本、血液的损失量时，优选也同时除去白细胞的方法。
专利文献1公开了由来自疏水性聚合性单体的单元、来自含有碱性含氮部分的聚合性单体的单元和来自含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体的单元构成的除去白细胞的滤器原料涂覆用聚合物作为除去白细胞能力高的原料，但对于异常朊病毒的除去并未提及也未启示。作为保存前除去白细胞的血液过滤，多数情况是在采血后1日以内在室温状态下进行过滤的室温过滤和在冷藏库中保存1～3日左右后进行过滤的冷藏过滤并存，对于室温过滤而言，虽然过滤时间短，但相比较于冷藏保存血液，白细胞更易泄漏；对于冷藏过滤而言，虽然过滤时间长，但有相对地防止白细胞泄漏的倾向。但是，专利文献1中并未进行冷藏过滤的过滤时间的研究。
专利文献2公开了包括结合有亲水性或疏水性或两亲性的官能团的聚合物基质或氧化铝、二氧化硅的朊病毒结合物质与生物体流体中的朊病毒形成复合体的方法。但是，实施例中使官能团与赖氨酸结合，但不进行白细胞除去，在血液中心实际应用时也必须另外使用除去白细胞的滤器。分别实施白细胞和异常朊病毒的除去会增大血液制剂的浪费量、增加在血液中心的工作时间和成本。另外，氧化铝、二氧化硅会引起凝固体系的活化，蛋白质的非选择性吸附性增大，不适于血液制剂。
专利文献3公开了用磷钨酸的金属盐(例如钠)等朊病毒络合剂涂覆洗脱柱(flow through column)等装置、球状聚合物珠粒等的表面，用于从任意液体试样中除去朊病毒等的方法。但是，需将试样暴露于络合剂中长达试样中基本所有的异常朊病毒与朊病毒络合剂形成复合体所需充分的时间。例如，试样在约30℃～45℃(优选37℃)下培养(incubate)约1小时～16小时。但是，作为血液制剂的保存温度，37℃的温度并不合适，另外，现行的除去白细胞的滤器的使用方法中，冷藏或室温过滤或者冷藏过滤是很普通的，且由于是通过重力的作用进行过滤，因此这些方法作为从血液制剂中除去异常朊病毒、或者除去白细胞的方法并不适合。
专利文献4公开了朊病毒结合物质与朊病毒蛋白质形成复合体的方法，该朊病毒结合物质包括含有用于除去和检测朊病毒的亲水性或疏水性或两亲性的官能团的结合物质或者铝、二氧化硅。但是，实施例中使用的朊病毒结合物质不进行白细胞除去，若分别实施白细胞和异常朊病毒的除去，则具有增大血液制剂的浪费量、增加血液中心的工作时间和成本的问题。另外，氧化铝、二氧化硅会引起凝固体系的活化、蛋白质的非选择性吸附性大，不适于血液制剂。
由上可知，以从血液制剂中除去异常朊病毒为目的时，需求能够高效且简便地除去的方法，还期待能够同时除去白细胞。
非专利文献1：G.Chazot，et al.，(1996)Lancet 347：1181
非专利文献2：R.G.Will，et al.，(1996)Lancet 347：921-25
非专利文献3：Guide to the preparation，use and qualityassurance of blood components 9th edition/Council of EuropePublishing
专利文献1：国际公开第03/011924号小册子
专利文献2：美国专利申请公开第2005/0014196号说明书
专利文献3：日本特表2002-539081号公报
专利文献4：日本特表2006-522344号公报
发明内容
发明要解决的问题
鉴于上述现有技术的问题，本发明的课题在于提供简单且高效地从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，进而提供能够将异常朊病毒和白细胞同时除去的方法。
用于解决问题的方法
本发明人等进行了深入研究，结果发现，当使用并非涂布有单独由疏水性聚合性单体、含有碱性含氮部分的聚合性单体或含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体构成的聚合物，而是涂布有它们的3元共聚聚合物的滤器时，可以从血液制剂中令人惊讶地简单且高效地除去异常朊病毒，进而完成了本发明。即，本发明涉及以下内容。
(1)一种从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，利用填充了涂覆有聚合物的载体的滤器对血液制剂进行过滤，将该过滤的血液制剂回收，所述聚合物由下述3个单元构成而形成：20摩尔％以上40摩尔％以下的、疏水性聚合性单体来源的单元；5摩尔％以上13摩尔％以下的、含有碱性含氮部分的聚合性单体来源的单元；其余为含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体来源的单元。
(2)根据(1)所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述血液制剂为全血制剂，所述滤器在辐射线灭菌后经高压蒸汽灭菌。
(3)根据(2)所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述辐射线为γ射线或电子束。
(4)根据(1)～(3)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述聚合物为乙烯基系聚合物。
(5)根据(1)～(4)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述疏水性聚合性单体、含有碱性含氮部分的聚合性单体和含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体为丙烯酸衍生物和/或甲基丙烯酸衍生物。
(6)根据(1)～(5)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述碱性含氮部分为叔氨基。
(7)根据(1)～(6)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述质子性中性亲水性部分为羟基。
(8)根据(1)～(7)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述滤器为除去白细胞的滤器。
(9)根据(8)所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体为纤维状介质或海绵状结构物。
(10)根据(8)或(9)所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的比表面积为1.0m2/g以上5.0m2/g以下。
(11)根据(8)～(10)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的平均孔径为1μm以上60μm以下。
(12)根据(8)～(11)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的填充密度为0.1g/cm3以上0.5g/cm3以下。
(13)根据(8)～(12)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的空隙率为60％以上90％以下。
(14)根据(8)～(13)任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体为无纺布。
(15)根据(14)所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述无纺布的纤维直径为0.3μm以上3.0μm以下。
发明效果
通过使用本发明，可以从血液制剂中简单且高效地除去异常朊病毒，进而还可以将异常朊病毒和白细胞同时除去。而且，使用本发明的方法时，血液制剂的流动性也良好，可获得溶血少的高品质血液制剂。
附图说明
图1为表示用于实施本发明的系统的模式图。
符号说明
1：血液制剂的袋
2：回路
3：滤器
4：回收过滤后的血液制剂的袋
具体实施方式
以下进一步详细地说明本发明。
本发明中提到的聚合物是指由疏水性聚合性单体来源的单元、含有碱性含氮部分的聚合性单体来源的单元和含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体来源的单元构成而形成的聚合物。
本发明中提到的单元是指聚合物分子中各个聚合性单体来源的最小重复单元。对单元进行举例时，对于仅双键打开而进行加成聚合的情况而言，CH2＝CXY(X:H或H以外的取代基、Y:X以外的取代基)所示的乙烯基化合物的聚合性单体的最小重复单元-(CH2-CXY)-即为单元。另外，举例通过缩聚合成聚合物的情况时，作为单元可以举出从聚合物前体的A-(R)-B(R:聚合中不脱离的部分、A、B:聚合中发生反应并脱离的部分)脱离AB而发生聚合时的最小重复单元-(R)-。
作为疏水性聚合性单体，具体地从易于获得、处理的观点出发，可以举出苯乙烯、甲基苯乙烯、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸乙酯、丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸丁酯、丙烯酸苯酯、甲基丙烯酸苯酯、丙烯酸乙基己酯、甲基丙烯酸乙基己酯、丙烯酸三氯乙酯、甲基丙烯酸三氯乙酯等丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯，戊烯、己烯、庚烯、辛烯等烯烃类，硅酮、硅氧烷等有机硅化合物，乙烯的氢原子被1个以上氟原子取代的有机氟聚合性单体等，疏水性聚合性单体并非局限于上述物质。其中，由于单体的获得容易、易于处理等的理由，优选通过加成聚合(乙烯基聚合)获得乙烯基系聚合物的、聚合性部分为乙烯基的单体。其中，作为疏水性聚合性单体更优选丙烯酸衍生物或甲基丙烯酸衍生物。疏水性聚合性单体最优选丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯。
具有碱性含氮官能团的材料在生理性液体中材料表面具有正电荷，这也显示提高异常朊病毒的除去性能的效果。本发明中提到的含有碱性含氮部分的聚合性单体是指具有以下所述的碱性含氮部分的聚合性单体。作为碱性含氮部分，可以举出伯氨基、仲氨基、叔氨基、季氨基及吡啶基、咪唑基等含氮芳香族等。作为碱性含氮部分，特别优选叔氨基。作为含有碱性含氮部分的聚合性单体，具体地从易于获得、处理性的观点出发，可以举出乙烯基胺、2-乙烯基吡啶、4-乙烯基吡啶、2-甲基-5-乙烯基吡啶、4-乙烯基咪唑、N-乙烯基-2-乙基咪唑、N-乙烯基-2-甲基咪唑等含氮芳香族环化合物的乙烯基衍生物，丙烯酸二甲基氨基乙酯、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、丙烯酸二乙基氨基乙酯、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯、丙烯酸3-二甲基氨基-2-羟基丙酯、甲基丙烯酸3-二甲基氨基-2-羟基丙酯等丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯，N，N-二甲基氨基乙基丙烯酰胺、N，N-二甲基氨基乙基甲基丙烯酰胺、N，N-二乙基氨基乙基丙烯酰胺、N，N-二乙基氨基乙基甲基丙烯酰胺、N，N-二甲基氨基丙基丙烯酰胺等丙烯酰胺和甲基丙烯酰胺衍生物，对二甲基氨基甲基苯乙烯、对二乙基氨基乙基苯乙烯等苯乙烯衍生物，以及利用卤代烷基将上述聚合性单体制成季铵盐的衍生物等，但含有碱性含氮部分的聚合性单体并非局限于上述物质。其中，从单体的获得容易、易于处理等理由出发，优选通过加成聚合(乙烯基聚合)获得乙烯基系聚合物的、聚合性部分为乙烯基的单体。作为含有碱性含氮部分的聚合性单体，优选丙烯酸衍生物或甲基丙烯酸衍生物。作为含有碱性含氮部分的聚合性单体，更优选丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯。其中，特别优选丙烯酸二甲基氨基乙酯、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、丙烯酸二乙基氨基乙酯、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯。
本发明中提到的含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体是指非聚合性部分可以解离而释放质子(H+)的物质，为羧酸或碱性氨基这样的不显示极端酸性、碱性的单体。含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体与具有非质子性中性亲水性部分的单体相比，显示更高的亲水性，血液制剂的启动(priming)性、防止血液制剂的偏流优异。作为质子性中性亲水性部分，可以举出羟基、α位存在质子的醛基或α位存在质子的酰胺基、1，3-二羰基等。作为非聚合性的质子性中性亲水性部分，特别优选羟基。作为含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体，可以举出甲基丙烯酸2-羟基乙酯、甲基丙烯酸羟基丙酯、丙烯酸羟基丁酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺等，但含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体并非局限于上述物质。其中，从单体的获得容易、易于处理等理由出发，优选通过加成聚合(乙烯基聚合)获得乙烯基系聚合物的、聚合性部分为乙烯基的单体。其中，含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体优选丙烯酸衍生物或甲基丙烯酸衍生物。作为含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体，最优选丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯。本发明中提到的乙烯基系聚合物是指广义上的乙烯基系聚合物，是指主链为非环式的聚合物。作为其具体例子，可列举出“JBrandrup；E.H.Immergut.1989.“Polymer Hand book ThirdEdition”A Willey-interscience Publication，pVII-5～VII-18”所示的、聚丙烯酸的α-取代体及其衍生物、聚乙烯基醚、聚乙烯醇、聚乙烯基酯、聚苯乙烯及其衍生物、以及含有它们的共聚物等。
为了高度地除去含有血浆成分的血液制剂中的异常朊病毒，必须使用包含下述三者的聚合物：上述疏水性聚合性单体来源的单元、含有碱性含氮部分的聚合性单体来源的单元、含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体来源的单元。利用由各个单独的单元构成的聚合物无法高度地除去异常朊病毒，特别是无法获得从含有血浆成分的血液制剂中高度地除去异常朊病毒的性能。
异常朊病毒具有与带阳性电荷的官能团、带阴性电荷的官能团和疏水性官能团结合的3个不同的结合区域。另一方面，由于异常朊病毒的等电点为pH4.6、血液制剂的pH为约5到7.5之间，因此血液制剂中的异常朊病毒带阴性电荷。因而，通过具有碱性含氮部分的单体和疏水性聚合性单体，可以从血液制剂中高度地除去异常朊病毒。另外，通过具有阴性电荷的材料与血液制剂的接触，会引起舒缓激肽的产生，其中所述舒缓激肽会引起血压降低、面色发红、结膜充血、平滑肌收缩、发痛等过敏现象，所以具有阴性电荷的聚合物不适于过滤血液制剂的载体表面的涂覆。
另一方面，利用滤器对血液制剂进行过滤时，要求提供与利用现有的除去白细胞的滤器进行过滤时相同品质的血液制剂。聚合物的质子性中性亲水性部分是整个滤器中确保用于血液制剂通过的润湿性、特别是在血液制剂的过滤初期用于顺畅地进行将血液制剂充满滤器的启动操作所必需的部分。另外，当具有碱性含氮部分的单体和疏水性聚合性单体在聚合物中的组成超过一定量时，会引起溶血或过滤时间延长这样的品质降低。因此，为了获得高度除去了异常朊病毒的血液制剂，必须适当地设定疏水性聚合性单体、含有碱性含氮部分的聚合性单体和含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体的组成。
本发明的疏水性聚合性单体是指对水的亲和性极低的聚合性单体、并且是分子内既不含碱性含氮部分也不含质子性中性亲水性部分的单体，相对于20℃的水的溶解度为12g/100g水以下的聚合性单体。溶解度超过12g/100g水时，有无法获得像本发明所能获得的这么高的除去异常朊病毒的能力的倾向，因此不优选。更优选的范围是溶解度为2g/100g水以下。溶解度的测定在聚合性单体为固体时，可以利用露点法、热分析法、测定溶液的电动势或电导率的电方法、气相色谱分析法、示踪法等公知的测定方法测定。聚合性单体为液体时，可以利用与固体时相同的测定法测定，还可以通过容量法、光散射法、蒸汽压法等公知的方法测定。另外，作为更为简单的方法，当聚合性单体的沸点充分高于水的沸点时，还可以通过将水从聚合性单体的饱和水溶液中蒸发、测定残量重量的方法来求得。
为了实现更高度的异常朊病毒除去性能、以及白细胞除去性能，构成聚合物的上述各单体的组成(摩尔百分率)优选疏水性聚合性单体为20摩尔％以上40摩尔％以下、且含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成为5摩尔％以上13摩尔％以下、且聚合物中的含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体的组成(摩尔％)为从100摩尔％中减去聚合物中的疏水性聚合性单体的组成(摩尔％)与聚合物中的含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成(摩尔％)之和的余量。聚合物中的疏水性聚合性单体的组成小于20摩尔％或者含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成小于5摩尔％时，有观察不到异常朊病毒除去性能提高的倾向，不优选。聚合物中的疏水性聚合性单体的组成超过40摩尔％时，对于冷藏保存的血液制剂的润湿性变差，结果在用填充了涂覆有本发明聚合物的载体的滤器过滤血液制剂时，观察到血液制剂的过滤速度降低的倾向，不优选。聚合物中的含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成超过13摩尔％时，观察到对于冷藏保存的血液制剂溶血等的倾向，不优选。而且，为了实现更高度的白细胞除去性能和异常朊病毒除去性能，优选构成聚合物的上述各单体的组成(摩尔百分率)是：疏水性聚合性单体为25摩尔％以上35摩尔％以下、且含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成为7摩尔％以上12摩尔％以下、且聚合物中的含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体的组成(摩尔％)为从100摩尔％中减去聚合物中的疏水性聚合性单体的组成(摩尔％)与聚合物中的含有碱性含氮部分的聚合性单体的组成(摩尔％)之和的余量。最优选聚合物中的疏水性聚合性单体的共聚组成为27摩尔％以上33摩尔％以下、且聚合物中的含有碱性含氮部分的聚合性单体的共聚组成为8摩尔％以上11摩尔％以下、且余量为聚合物中的含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体。
聚合物中的单体的组成可以使用一般的物理化学方法测定。对于测定共聚组成的物理化学方法进行举例的话，可以使用核磁共振波谱法(NMR、-1H、-13C)、热解GC质谱法等公知方法测定。还可以确认是否按照投料进行聚合、批料间变动等。另外，还可以使用该聚合物的溶剂等将涂布在载体表面上的聚合物溶解、提取，并使用与上述同样的方法测定作为其提取物质的聚合物中各单体的共聚组成。另外，使用氘代溶剂溶解载体和存在于载体表面的聚合物并使用核磁共振波谱法(NMR、-1H、-13C)的方法进行测定的方法也可作为测定共聚组成的方法来利用。聚合物的分子量可以使用公知的凝胶渗透色谱法测定。优选重均分子量(Mw)范围为5万以上300万以下、更优选10万以上200万以下、最优选为15万以上150万以下。重均分子量Mw小于5万时，在从血液制剂中除去异常朊病毒、进而除去白细胞时有聚合物易于溶出到血液制剂中的倾向，不优选。另外，重均分子量Mw超过300万时，具有在涂布时对溶剂的溶解度降低、另外在聚合时无法稳定制造等顾虑，不优选。另外，聚合物可以是无规共聚物、嵌段共聚物的任一种，嵌段共聚物具有在涂布时对溶剂的溶解度降低的倾向，或在溶液中形成胶束等损害涂布均匀性的倾向，因此优选无规共聚物。无论是直链状聚合物还是支链状聚合物均可，支链状聚合物链有在涂布时对溶剂的溶解度降低的倾向，另外，在溶液中形成胶束等而损害涂布均匀性，因此更优选直链状聚合物链。聚合物的合成方法可以使用一般的聚合法。还可使用作为链反应的加成聚合(乙烯基聚合)等，还可使用异构化聚合、作为逐步反应的消除反应、加聚、缩聚、加成缩聚等。在将聚合物聚合时，作为链载体(chain carrier)可以使用自由基、离子等。聚合方式可以举出溶液聚合、本体聚合、沉淀聚合、乳液聚合等。其中，优选溶液聚合。
以下举出聚合方法。
聚合溶剂使用乙醇，一边在氮气氛围下、乙醇的沸点以下的一定温度下进行搅拌，一边滴加溶解有各单体和重氮类引发剂的乙醇溶液并使其反应。另外，还可以适当添加稳定剂等。反应的收率使用气相色谱法等公知的方法进行测定、确认。为了除去在聚合物中或含有聚合物的反应液中存在的在制剂处理中有溶出可能的低分子量成分、未反应物等杂质，可以通过使用一般的化学纯化方法进行纯化。示例纯化方法时，可以举出注入到溶解杂质、但不溶解聚合物的溶剂中使其沉淀，通过过滤、倾析等分离沉淀的方法；另外，根据需要使用溶解性比沉淀溶剂稍高的溶剂(沉淀溶剂和溶剂的混合物等)洗涤沉淀，利用减压干燥进行干燥直至沉淀达到恒量，获得固体状聚合物的方法。
本发明的载体只要是具有能够过滤血液的细孔的载体则无特别限定，也包括具有任何载体形态的物质，具体地特别优选天然纤维、玻璃纤维、编织布、织布、无纺布等纤维状介质或者多孔膜、具有三维网状连续孔的海绵状结构物。另外，只要是不易对血细胞造成损害则可以没有特别限定地使用各种载体，可以举出有机高分子材料、无机高分子材料、金属等。其中，有机高分子材料由于截断等加工性优异，因此是优选的载体。例如可以举出聚酯、聚烯烃、聚丙烯腈、聚酰胺、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氟化乙烯、聚氨酯、聚乙烯醇、聚乙烯醇缩醛、聚砜、聚偏氟乙烯、聚三氟氯乙烯、偏氟乙烯-四氟乙烯共聚物、聚醚砜、聚丙烯酸酯、丁二烯-丙烯腈共聚物、聚醚-聚酰胺嵌段共聚物、乙烯-乙烯醇共聚物、纤维素、醋酸纤维素等，但本发明的载体并非局限于上述示例。优选聚酯、聚烯烃，特别优选聚酯。
本发明中提到的涂覆有聚合物的载体是指为了使聚合物在制剂处理中不会轻易地溶出而在载体表面上固定聚合物的载体。另外，该聚合物在载体表面上的固定方法可以利用化学共价键、也可以利用物理化学的非共价键。其存在量优选为0.6mg/m2以上83mg/m2以下。相对于载体总表面单位面积，其存在量小于0.6mg/m2时，有除去异常朊病毒的能力、以及除去白细胞的能力降低的倾向，另外，超过83mg/m2时，有涂覆不均所导致的性能不均增大等的倾向，不优选。更优选相对于载体总表面单位面积，存在量为5mg/m2以上50mg/m2以下、进一步优选相对于载体总表面单位面积，存在量为10mg/m2以上40mg/m2以下。进而，载体表面的聚合物的存在量可以使用一般的物理化学方法进行测定。举出测定载体表面的聚合物存在量的方法时，可以举出使用氘代化溶剂同时溶解涂覆载体、存在于表面的聚合物，并使用核磁共振(NMR、-1H、-13C)方法进行测定的方法等。另外，本发明中还将涂覆有聚合物的载体称作涂覆载体。
本发明中将聚合物涂覆在载体上的方法例如可以举出利用化学共价键将上述说明的各聚合性单体或聚合物固定在载体上的方法(接枝等)、利用物理化学的非共价键(离子键、范德华力等)将其固定的方法(涂布等)、包埋等公知的方法。更具体来说，利用辐射线接枝、等离子体接枝等接枝聚合法将各聚合性单体或聚合物直接接枝在载体表面上的方法；或者将载体浸渍于溶解有聚合物的液体中或者将聚合物涂布在辊上转印于载体而涂布到表面的方法，由于可以较容易地制造、且稳定、性能优异，故更优选。本发明的聚合物涂布到载体上的方法只要不会明显堵塞载体的细孔、且载体表面可以在某种程度范围内均匀地涂布则无特别限定，可以使用各种方法。例如，可以举出将载体浸渍于溶解有聚合物的溶液中的方法、将溶解有聚合物的溶液吹拂到载体上的方法、使用凹版印刷辊等将溶解有聚合物的溶液涂布、转印到载体上的方法等，本发明的聚合物涂布到载体上的方法并非局限于上述示例。其中，将载体浸渍于溶解有聚合物的溶液中进行浸渍后将涂覆载体挤干的方法、使用凹版印刷辊等将溶解有该聚合物的溶液涂布、转印到载体上的方法由于连续生产性优异、成本也低，因此是更优选的方法。作为溶解聚合物的溶剂，只要是不会显著地溶解载体则可以没有特别限定地使用各种溶剂，可以举出水和含有无机盐的水溶液、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇类，丙酮、甲乙酮等酮类，乙酸甲酯、乙酸乙酯等酯类、苯、环己烷等烃类，氯仿、二氯甲烷等卤代烃类，二甲基亚砜等含硫溶剂，二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等酰胺类和上述多个溶剂在可溶范围内的混合物等，但本发明的溶解聚合物的溶剂并非局限于上述示例。另外，作为涂布后的干燥，可以采用利用机械压缩、空气或氮气等气体吹拂等除去多余溶液，并在干燥气体中或者减压下常温或加热干燥等的方法。另外，在涂布之前，为了进一步提高本发明聚合物和载体的粘合性，可以用酸、碱等适当药品对载体的表面进行处理或照射等离子体。进而，还可以在聚合物的涂布后实施热处理、照射γ射线、电子束等辐射线的后加工，进一步强化载体和聚合物的粘合性。而且，涂布可以在制造载体时进行，还可以在制造载体后进行。
已知涂覆载体的物理结构对异常朊病毒和白细胞的除去起很大作用，对于提高异常朊病毒和白细胞的除去性能来说，该涂覆载体的选择也成为重要的因子。作为涂覆载体的物理结构，优选其比表面积为1.0m2/g以上5.0m2/g以下、优选为1.1m2/g以上3.0m2/g以下、更优选为1.3m2/g以上2.0m2/g以下。涂覆载体的比表面积小于1.0m2/g时，难以以高效率除去白细胞。涂覆载体的比表面积超过5.0m2/g时，仍无法稳定地制造涂覆载体。另外，在实际的利用血液滤器的制剂处理中，优选将多种平均比表面积的涂覆载体配置成比表面积朝向出口侧变大的方式。
作为涂覆载体的物理结构，优选其空隙率为65％以上90％以下、更优选75％以上88％以下。空隙率小于65％时，具有血液等的过滤速度降低、异常朊病毒和白细胞的除去需要长时间的问题。另外，空隙率超过90％时，易于粘合异常朊病毒和白细胞的纤维与纤维的交织部少、无法获得高的异常朊病毒除去性能和白细胞除去性能。另外，使无纺布等纤维状介质作为涂覆载体时，平均纤维直径为0.3μm以上3.0μm以下、优选为0.5μm以上2.5μm以下、更优选为1μm以上2μm以下。另外，在实际的用血液滤器的制剂处理中，优选将多种平均纤维直径的涂覆载体配置成平均纤维直径朝向出口侧变细的方式。另外，在实际的用血液滤器的制剂处理中，根据需要可以在该涂覆载体的入口侧配置以除去微小凝集体为主要目的的平均纤维直径10μm以上40μm以下的载体。
另外，平均孔径例如是指利用Courter Electronics，Inc制造的Courter R气孔计(Porometer)、使用约50mg试样测定的值(平均流量孔径，Mean Flow Pore size：MFP)。平均孔径优选为为1μm以上60μm以下、优选为1μm以上30μm以下、更优选为1μm以上20μm以下。平均孔径小于1μm时，由于全血制剂难以流动，因此不优选；超过60μm时，有除去白细胞的能力降低的倾向，因此不优选。另外，在实际的用血液滤器的制剂处理中，优选将多种平均孔径的涂覆载体配置成平均孔径朝向出口侧变小的方式。另外，在实际的用血液滤器的制剂处理中，根据需要可以在该滤器原料的入口侧配置以除去微小凝集体为主要目的的平均孔径50μm以上200μm以下的载体。
另外，在实际的用血液滤器的制剂处理中，根据需要可以在该涂覆载体的出口侧配置以防止偏流为主要目的的平均孔径50μm以上200μm以下的载体。
另外，在用于除去异常朊病毒和白细胞的容器内填充该纤维状介质时的填充密度优选为0.1g/cm3以上0.5g/cm3以下、更优选为0.1g/cm3以上0.3g/cm3以下。举出填充密度的测定方法。可以将填充的无纺布剪切为填充剪切尺寸(cm2)，测定其重量(g)，由在实际容器内被压缩的状态下的距离(cm)求得填充密度。
平均纤维直径小于0.3μm、平均孔径小于1μm或者填充密度超过0.5g/cm3时，引起血细胞的堵塞或压力损失的增大；当平均纤维直径超过3.0μm、平均孔径超过60μm或填充密度小于0.1g/cm3时，除去异常朊病毒和白细胞的能力降低，因此不优选。
将多孔质膜、具有三维网状连续孔的海绵状结构物作为涂覆载体时，优选具有1μm以上60μm以下的平均孔径。更优选为5μm以上50μm以下。进一步优选为10μm以上40μm以下。平均孔径小于1μm时，会引起血细胞堵塞、压力损失；平均孔径超过60μm时，除去白细胞的能力降低，因此不优选。
本发明的异常朊病毒是指已知在人和动物中引起被称为海绵状脑病的疾病的变异型的异常朊病毒蛋白质。异常朊病毒虽然具有与正常朊病毒相同的氨基酸序列，但是是富含β-片层的结构变化的蛋白质，对利用蛋白酶K的消化显示抵抗性。异常朊病毒会感染动物，众所周知有作为绵羊和山羊的神经系感染性变性疾病的羊痒病(scrapie)、牛的BSE。人疾病的形态有散发性克-雅病(sCJD)、医源性克-雅病、吉斯特曼-施特劳斯(GSS)综合征、致死性家族性失眠症(FFI)、库鲁症(Kuru)，还有由于BSE的食用肉导致感染的变异型CJD。本发明中使用的异常朊病毒包括引起以上全部疾病或任意1种、或者在任意动物、特别是人和家畜动物中引起疾病的所有类型的异常朊病毒蛋白质。因此，根据在2006年3月公开的Cambridge HealthtechInstitut′s 10th Annual Transmissible Spongiform Encephalopathies-The Definitive American TSE Meeting-的Samuel Coker的发表，羊痒病、变异型CJD和散发性CJD来源的异常朊病毒利用滤器(ポ—ル公司制LAPRF)同样地被除去，其除去率基本没有差别。这表明与滤器除去性能有关的异常朊病毒蛋白质结构即便动物或疾病的种类不同也基本不会不同，可以根据动物来源的异常朊病毒的除去率推测人来源的异常朊病毒的除去率。
本发明的滤器是指在具有血液制剂的入口和出口的容器内填充有本发明涂覆载体的滤器，可以在血液制剂的上游侧具有用于捕获微小凝集物的载体，还可以在下游侧具有载体。
容器的材质可以是硬质树脂或软质树脂的任一种。为硬质树脂时，原料可以举出酚醛树脂、丙烯酸树脂、环氧树脂、甲醛树脂、尿素树脂、硅树脂、ABS树脂、尼龙、硬质的聚氨酯、聚碳酸酯、氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯等。为软质树脂时，使用在可挠性的合成树脂制片材上形成血液制剂的入口和出口、并将其在周边部处熔粘而成的容器，或者具有血液制剂的入口和出口的圆筒状成型物等。关于材质，在与涂覆载体一起与容器熔粘时，优选是热、电性质与涂覆载体类似的物质，例如作为优选的材料可以举出软质聚氯乙烯、聚氨酯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚乙烯和聚丙烯等聚烯烃、苯乙烯-丁二烯-苯乙烯共聚物的加氢物、苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯共聚物或其加氢物等热塑性弹性体以及热塑性弹性体与聚烯烃、乙烯-丙烯酸乙酯等软化剂的混合物等。其中，优选软质氯乙烯、聚氨酯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚烯烃和以它们为主成分的热塑性弹性体，特别优选软质氯乙烯、聚烯烃。
上述容器的形状只要是具有血液制剂的入口和除去了异常朊病毒、进而除去了白细胞的血液制剂的出口的形状则无特别限定，优选为对应载体形状的形状。例如，载体为平板状时，可以使用四边形、六边形等多边形或者由圆形、椭圆形等曲线构成的扁平形状的容器。更详细地说，容器可以举出由具有血液制剂入口的入口侧容器和具有血液制剂出口的出口侧容器构成，并且两者直接或者借助支撑体夹住载体从而将载体内部分为两室、形成扁平状滤器的形状。另外，作为其它的例子，当载体为圆筒形状时，优选容器也同样为圆筒状。更详细地说，容器可以举出由收纳载体的筒状腰身部和具有血液制剂入口的入口侧集管(header)和具有血液制剂出口的出口侧集管构成、利用浇注加工，将容器内部按照从入口导入的液体由圆筒状载体的外周部流向内周部(或由内周部流向外周部)的方式划分成两室，形成圆筒状滤器的形状。
本发明的血液制剂是指有可能含有异常朊病毒的全血或由全血调制而获得的单一或多种血液成分构成的液体、或者在这些液体中添加有抗凝固剂、保存液等的液体。具体例子可以举出全血制剂、红细胞制剂、血小板制剂、血浆制剂、洗涤红细胞悬浮液、解冻红细胞浓缩液、合成血、多血小板血浆、血沉棕黄层(buffy coat)等，但并非局限于这些。
本发明的全血制剂是指在从献血者采血的全血中添加有CPD(Citrate Phosphate Dextrose，枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖)、CPDA-1(Citrate Phosphate Dextrose Adenine-1，枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖-腺嘌呤-1)、CP2D(CitratePhosphate-2-Dextrose，枸橼酸盐-磷酸盐-2-葡萄糖)、ACD-A(Acid Citrate Dextrose Formula-A，酸性枸橼酸盐葡萄糖-A)、ACD-B(Acid Citrate Dextrose Formula-B，酸性枸橼酸盐葡萄糖-B)、肝素等保存液、抗凝固剂的血液制剂。
接着，对于从本发明的血液制剂中除去异常朊病毒的方法而言，主要说明其手法。首先说明调制各种血液制剂的方法的一个方式，但本发明并非局限于这些。
(除去异常朊病毒的全血制剂的调制)
在所采血的全血中添加CPD、CPDA-1、CP2D、ACD-A、ACD-B、肝素等保存液、抗凝固剂，用本发明的滤器进行过滤，从而从全血中除去异常朊病毒，获得除去异常朊病毒的全血制剂。
全血制剂的过滤使用下述系统：通过回路，按顺序无菌地至少连接有装有血液制剂的袋、滤器、用于回收除去了异常朊病毒的血液制剂的袋(图1)。还可以连接采血针、采血袋、离心分离后用于分离为各成分的袋、用于回收残留在滤器中的血液制剂的回路。过滤可以如下进行：血液制剂从设置在高于滤器的位置上的装有血液制剂的袋中利用重力落差经由导管流向滤器，从而进行过滤；另外，还可以通过使用泵等方法将血液制剂从滤器的入口侧加压和/或从滤器的出口侧减压而使其流动，从而进行异常朊病毒的除去。该过滤方法并非局限于全血制剂，其它的血液制剂也同样。
在除去异常朊病毒的全血制剂的调制中，在保存前除去异常朊病毒时，优选在采血后72小时以内、更优选24小时以内、特别优选12小时以内、最优选8小时以内在室温或冷藏下使用本发明的滤器对在室温下或冷藏下保存的全血进行异常朊病毒除去，从而获得除去异常朊病毒的全血制剂。在保存后除去异常朊病毒时，优选在使用前24小时以内使用滤器对在室温下或冷藏下保存的全血除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的全血制剂。本发明中还可以获得与异常朊病毒一起除去了白细胞的全血制剂。
(除去异常朊病毒的红细胞制剂的调制)
在采血的全血中添加CPD、CPDA-1、CP2D、ACD-A、ACD-B、肝素等保存液、抗凝固剂。之后进行的对各血液成分的分离方法有从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离的情况；将全血离心分离后从红细胞或红细胞和血沉棕黄层(以下称作“BC”)除去异常朊病毒的情况。
从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离时，与上述除去异常朊病毒的全血制剂的调制同样地获得除去异常朊病毒的全血后，将除去异常朊病毒的全血离心分离、回收下层的浓缩红细胞，从而获得除去异常朊病毒的红细胞制剂。
在除去异常朊病毒前对全血进行离心分离时，离心条件有分离为红细胞、富血小板血浆(PRP)的弱离心条件和分离为红细胞、BC、乏血小板血浆(PPP)的强离心条件的2种。根据需要在从全血分离回收的红细胞或者含有BC的红细胞中添加SAGM(Saline Adenine Glucose Mannitol solution，氯化钠-腺嘌呤-葡萄糖-甘露醇)、AS-1(Additive solution-1，红细胞保存添加剂-1)、AS-3(Additive solution-3，红细胞保存添加剂-3)、AS-5(Additive solution-5，红细胞保存添加剂-5)、MAP(Mannitol Adenine Phosphate，甘露醇-腺嘌呤-磷酸盐)等保存液后，利用本发明的滤器对红细胞制剂进行过滤，获得除去异常朊病毒的红细胞制剂。
在除去异常朊病毒的红细胞制剂调制中，优选在采血后72小时以内、更优选48小时以内、特别优选24小时以内、最优选12小时以内对室温下或冷藏下保存的全血进行离心分离。另外，在保存前除去异常朊病毒时，优选在采血后120小时以内、更优选72小时以内、特别优选24小时以内、最优选12小时以内在室温下或冷藏下用滤器进行过滤，从室温下或冷藏下保存的红细胞制剂中除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的红细胞制剂。在保存后除去异常朊病毒时，优选在使用前24小时以内利用除去异常朊病毒的滤器进行过滤，从室温下或冷藏下保存的红细胞制剂中除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的红细胞制剂。
(除去异常朊病毒的血小板制剂的调制)
在采血的全血中添加CPD、CPDA-1、CP2D、ACD-A、ACD-B、肝素等保存液、抗凝固剂。
之后进行的分离为各血液成分的分离方法有从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离的情况和将全血离心分离后从PRP或血小板中除去异常朊病毒的情况。
从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离时，与上述除去异常朊病毒的全血制剂的调制同样地获得除去异常朊病毒的全血后，将除去异常朊病毒的全血离心分离，回收上层的PRP，将其进一步离心分离，回收下层的浓缩血小板(PC)，由此获得除去异常朊病毒的血小板制剂。
在除去异常朊病毒之前将全血离心分离时，离心条件有分离为红细胞、PRP的弱离心条件和分离为红细胞、BC、PPP的强离心条件2种。为弱离心条件时，利用滤器对从全血中分离的PRP进行过滤，除去异常朊病毒后，再次离心分离回收下层的PC，从而获得除去异常朊病毒的血小板制剂；或者将PRP离心分离获得血小板和PPP后，用滤器过滤下层的PC，除去异常朊病毒，获得除去异常朊病毒的血小板制剂。为强离心条件时，在将从全血分离的BC一单位或集中几～十几单位的物质中根据需要添加保存液、血浆等进行离心分离，回收上层，获得浓缩血小板，用滤器过滤所得浓缩血小板以除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血小板制剂。
在调制除去异常朊病毒的血小板制剂时，优选在采血后24小时以内、更优选12小时以内、特别优选8小时以内对在室温下保存的全血进行离心分离。另外，在除去异常朊病毒时，优选在采血后120小时以内、更优选78小时以内、特别优选24小时以内、最优选12小时以内在室温下用滤器过滤在室温下保存的血小板制剂，除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血小板制剂。保存后除去异常朊病毒时，优选在使用前24小时以内用滤器从室温下或冷藏下保存的血小板制剂中除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血小板制剂。
(除去异常朊病毒的血浆制剂的调制)
向采血的全血中添加CPD、CPDA-1、CP2D、ACD-A、ACD-B、肝素等保存液、抗凝固剂。
之后进行的各血液成分的分离方法有从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离的情况和将全血离心分离后从PPP或PRP中除去异常朊病毒的情况。
从全血中除去异常朊病毒后进行离心分离时，与上述除去异常朊病毒的全血制剂的调制同样地获得除去异常朊病毒的全血后，将除去异常朊病毒的全血离心分离，回收上层的血浆，由此获得除去白细胞的血浆制剂。
在除去异常朊病毒之前将全血离心分离时，离心条件有分离为红细胞、PRP的弱离心条件和分离为红细胞、BC、PPP的强离心条件2种。为弱离心条件时，利用滤器对PRP过滤，对除去了异常朊病毒的PRP进行过滤后，再次离心分离而回收上清液的PPP，从而获得除去异常朊病毒的血浆制剂；或者利用离心分离将PRP分离为PPP和血小板后，用滤器过滤PPP，除去异常朊病毒，由此获得除去异常朊病毒的血浆制剂。为强离心条件时，通过用滤器过滤PPP而除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血浆制剂。
在调制除去异常朊病毒的血浆制剂时，优选在采血后72小时以内、更优选48小时以内、特别优选24小时以内、最优选12小时以内对在室温下或冷藏下保存的全血进行离心分离。另外，优选在采血后120小时以内、更优选72小时以内、特别优选24小时以内、最优选12小时以内在室温下或冷藏下用滤器进行过滤，从室温下或冷藏下保存的血浆制剂中除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血浆制剂。保存后除去异常朊病毒时，优选在使用前24小时以内用滤器进行过滤从室温下或冷藏下或冷冻下保存的血浆制剂中除去异常朊病毒，从而获得除去异常朊病毒的血浆制剂。
本发明的除去白细胞的滤器是指过滤血液制剂时，可以除去99％以上白细胞数的滤器。优选可以除去99.9％以上、更优选可以除去99.99％以上的滤器。用白细胞除去性能换而言之，是以按照下式(1)计算的值计显示2以上的除去性能的滤器。优选为显示3以上、更优选4以上的除去性能的滤器。
白细胞除去性能＝-Log10{[白细胞浓度(个/μL)(过滤后血)]÷[白细胞浓度(个/μL)(过滤前血)]}              (1)
本发明的滤器的灭菌方法可以使用环氧乙烷气体灭菌、γ射线灭菌或电子束灭菌等辐射线灭菌、高压蒸汽灭菌的任一种。更优选辐射线灭菌或高压蒸汽灭菌。为了获得从全血制剂高度除去异常朊病毒的性能，优选进行辐射线灭菌和高压蒸汽灭菌两者。进行辐射线灭菌和高压蒸汽灭菌的顺序并无特别限定，更优选在辐射线灭菌后进行高压蒸汽灭菌。当使用进行了高压蒸汽灭菌的涂覆有聚合物的载体时，在全血制剂中异常朊病毒在涂覆有聚合物的载体上的吸附量减少。推测这是由于在高压蒸汽灭菌中，在载体表面的聚合物的化学特性不会发生变化，在全血制剂中发生与蛋白质的竞争性吸附。另一方面，利用辐射线灭菌时，即便是全血制剂也可获得高的朊病毒除去性能。其理由还不明确，推测是由于通过对滤器的辐射线灭菌，载体表面的聚合物的化学特性发生变化，构成聚合物的3个单元的带电状态、组成平衡成为对于与异常朊病毒的吸附而言优选的状态。但是，令人惊讶的是，本发明人等发现如果在辐射线灭菌后进行高压蒸汽灭菌，全血制剂也可获得高度的异常朊病毒除去性能。在辐射线灭菌后进行高压蒸汽灭菌时，成为与异常朊病毒的吸附特异性得以保持的状态，尽管进行了高压蒸汽灭菌，但也可以获得高的异常朊病毒除去性能。使用在线型的装置时，通过预先仅对滤器进行辐射线灭菌，即便进行高压蒸汽灭菌也可获得高的异常朊病毒除去性能。
[实施例]
以下利用实施例进一步详细地说明本发明，但本发明并非局限于这些。
在实施例、比较例中使用的各数值通过以下的方法测定。
(滤器原材料的比表面积)
本发明中提到的比表面积(m2/g)是指使用(株)岛津制作所“AccuSorb 2100”或具有与其同样功能的装置，利用气体吸附法(BET法)求得的每单位重量无纺布的表面积。将在0.50g～0.55g的范围内称量的载体填充于试样管中，在上述AccuSorb本体中以1×10-4mmHg的减压度(室温下)进行脱气处理20小时后，作为吸附气体使用已知吸附占有面积的氪气，在液态氮的温度下吸附到无纺布的表面，由该吸附量求出称量的无纺布中的总表面积，除以称量的无纺布重量，从而求得比表面积。
(平均纤维直径的测定)
在无纺布的5个位置上随机地拍摄无纺布的电子显微镜照片，将描绘有格子的透明片材重叠于上述拍摄的照片上，以直径已知的聚苯乙烯胶乳作为对照，测定与格子的交点重叠的100个位置的纤维直径，计算其平均值，作为平均纤维直径。
(原材料总表面的每单位面积的聚合物保持量)
本发明中提到的原材料总表面积(m2)是指由原材料的重量(g)和原材料的比表面积(m2/g)的乘积获得的值。另外，本发明的原材料总表面的每单位面积(m2)的聚合物保持量(mg/m2)通过将一定面积(重量)的原材料溶解于载体和涂覆剂通用的氘代化溶剂中，利用NMR测定而求得。举出具体例子时，将一定重量的在聚酯无纺布上涂布有由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸二甲基氨基乙酯、甲基丙烯酸2-羟基酯构成的聚合物的原材料溶解于氘代1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇中，由明确归属于无纺布的信号(例如苯环的质子)和明确归属于涂覆剂的信号(例如甲基丙烯酸甲酯的酯相邻甲基的质子)的强度比和另外测定的涂覆剂的共聚组成，求得每单位重量无纺布的聚合物保持量。另外，每单位重量无纺布的聚合物保持量可以由填充于滤器的原材料的比表面积换算为原材料总表面的每单位面积的聚合物保持量。
(血液过滤试验：实施例1～13、比较例1～9)
血液评价所使用的血液制剂为红细胞制剂，为在刚采血后的100mL血液中加入14mL作为抗凝固剂的CPD溶液进行混合，在冷藏下保存72小时后进行离心，在所分离的含有BC的红细胞中加入SAGM，静置1小时后的制剂(以下称作“过滤前血”)。
评价中所使用的滤器为将涂布有各实施例、比较例所准备的聚合物的平均纤维直径1.2μm、单位面积质量40g/m2、比表面积1.47m2/g的聚酯无纺布C填充于容器中获得的滤器(比较例6没有涂布)。将8张涂布的无纺布填充于有效过滤面积1.3cm2的柱子中，用内径3mm、外径4.2mm的氯乙烯制管连接填充有过滤前血的注射器和柱的入口后，在冷藏库内使用注射器泵以流速0.175mL/min流入到柱内，回收3mL(以下称作“过滤后血”)。涂布的无纺布(比较例6没有涂布)在实施例1～5和11和比较例1～9中实施25KGy的γ射线灭菌，在实施例8、12中实施30KGy的电子束灭菌，在实施例6、7、10、13中实施115℃、59分钟的高压蒸汽灭菌，在实施例9中实施30KGy电子束灭菌后实施115℃、59分钟的高压蒸汽灭菌，在比较例10中不实施灭菌。
[白细胞除去性能]
由过滤前后的白细胞浓度利用上述(1)式求得白细胞除去性能。白细胞浓度如下测定：采样各血液100μL，使用装有珠粒的Leucocount试剂盒(日本BECTON DICK INSON公司制)，利用流式细胞法(装置：BECTON DICK INSON公司制FACSCalibur)进行测定。
[血液处理压力]
通过在柱入口侧的管上连接压力计，在过滤结束时测定血液处理压力。
[过滤后血的溶血度]
由过滤后经过42天的红细胞制剂的、相对于总血红蛋白量的血浆中的游离血红蛋白量求得过滤后血的溶血度。
溶血度的具体计算方法如下所述。
(1)利用自动血细胞计数装置测量过滤后的红细胞制剂的总血红蛋白浓度(g/dL)和血细胞比容值(％)。
(2)采取过滤后的红细胞制剂样品2mL，将其在1750×g下离心分离10分钟。
(3)利用分光光度计扫描上清液的630nm～500nm波长范围的吸光度来进行测定。
(4)根据Clin.Biochem.8，96-102(1975)的方法计算血浆中的游离血红蛋白浓度。
(5)由下式(2)计算溶血度。
溶血度(％)＝(100-血细胞比容值(％))×(游离血红蛋白浓度(g/dL))/总血红蛋白浓度(g/dL)          (2)
(异常朊病毒除去性能评价：实施例1～13、比较例1、3、5～8、10)
[滤器的制作]
作为滤材，使用平均纤维直径12μm、单位面积质量30g/m2、比表面积0.24m2/g的聚酯制无纺布P；平均纤维直径2.5μm、单位面积质量60g/m2、比表面积0.8m2/g的聚酯制无纺布A；平均纤维直径1.8μm、单位面积质量60g/m2、比表面积1.1m2/g的聚酯制无纺布B；涂布有各实施例、比较例准备的聚合物的平均纤维直径1.2μm、单位面积质量40g/m2、比表面积1.47m2/g的聚酯制无纺布C(比较例6未涂布。)。从上游开始按顺序以P-A-B-C的顺序重叠滤材P、A、B、C，进而在其下游侧重叠与B相同的滤材B’、与A相同的滤材A’、与P相同的滤材P’，制作整体为P-A-B-C-B′-A′-P’这种对称结构的滤材。利用具有成为血液入口或出口的端口的可挠性氯乙烯树脂片材夹住该滤材，使用高频率熔融机，将滤材和可挠性片材的周边部分熔粘、将其一体化，制作有效过滤面积56cm2的滤器。
在实施例1～5和11和比较例1～9中，实施25KGy的γ射线灭菌，在实施例8、12中实施30KGy的电子束灭菌，在实施例6、7、10、13中实施115℃、59分钟高压蒸汽灭菌，在实施例9中实施30KGy的电子束灭菌后实施115℃、59分钟的高压蒸汽灭菌，比较例10中不实施灭菌。
[感染了羊痒病的仓鼠脑的调制]
将发生了羊痒病的263K仓鼠来源的异常朊病毒Sc237接种于仓鼠后，将经过65天～70天的仓鼠脑作为感染羊痒病的仓鼠脑。
[匀浆的调制]
在320mM蔗糖中对感染了羊痒病的仓鼠脑进行超声波粉碎，制作10重量(g)/容量(100ml)％(以下记载为“W/V％”)的匀浆，对该匀浆进一步进行4℃、80×g、1分钟离心，作为添加的匀浆(以下略记为“匀浆”)使用。
[微粒体组分的调制]
对匀浆进行5000×g的20分钟离心，进一步对该上清液进行100000×g的1小时离心。将离心后的沉淀再悬浮于150mMNaCl、20mM Tris-HCl、pH 7.4的溶液中，进而进行100000×g的1小时离心。用pH7.4的PBS(磷酸盐缓冲液)再次悬浮离心后的沉淀，作为添加的微粒体组分(以下略记为“微粒体组分”)使用。
[蛋白酶K的浓度决定方法1：实施例1、2、4、13]
(未进行蛋白酶K处理的样品)
利用450μL的样品缓冲液(sample buffer)分别混合50μL的匀浆和添加有50μL匀浆的红细胞制剂，在100℃±5℃下培养5～10分钟或者在70℃～80℃下培养10～15分钟。
(进行了蛋白酶K处理的样品)
将50μL的匀浆和添加有50μL匀浆的红细胞制剂与浓度不同的蛋白酶K和0.6～1％月桂酰肌氨酸钠(Sarkosyl)混合，在37℃±4℃下反应1小时±5分钟。加入300μL样品缓冲液，在100℃±5℃下培养5～10分钟，或者70℃～80℃下培养10～15分钟。
利用蛋白质印迹法解析未进行蛋白酶K处理的样品和进行了蛋白酶K处理的样品，决定与正常朊病毒和抗体非特异性反应的蛋白质完全被蛋白酶K分解而检测不到并且异常朊病毒被检测到的蛋白酶K的最小浓度。
[蛋白酶K的浓度决定方法2：实施例3、6比较例5、6、10]
(未进行蛋白酶K处理的样品)
对5mL的添加过滤前血或5mL的添加有正常朊病毒的血液制剂分别进行4000×g的20分钟离心。进而对3mL的上清液进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下培养5～10分钟。
(进行了蛋白酶K处理的样品)
对5mL的添加过滤前血或5mL的添加有正常朊病毒的红细胞制剂分别进行4000×g的20分钟离心。在3mL的上清液中混合浓度不同的蛋白酶K，进行100000×g、4℃±2℃、1小时离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
利用蛋白质印迹法解析未进行蛋白酶K处理的样品和进行了蛋白酶K处理的样品，决定与正常朊病毒和抗体非特异性反应的蛋白质完全被蛋白酶K分解而检测不到并且异常朊病毒被检测到的蛋白酶K的最小浓度。
[蛋白酶K的浓度决定方法3：实施例5、比较例1、3、7、8]
(未进行蛋白酶K处理的样品)
用50μL的样品缓冲液分别混合添加有50μL微粒体组分的血浆和50μL的血浆，在100℃±5℃下培养5～10分钟。
(进行了蛋白酶K处理的样品)
在添加有3mL由未感染羊痒病的仓鼠脑调制的匀浆的血浆和添加有3mL由羊痒病感染仓鼠的脑调制的微粒体组分的血浆中混合浓度不同的蛋白酶K，在20000×g、4℃±2℃下离心1小时。在离心后的沉淀中加入100μL样品缓冲液，在100℃±5℃下反应5～10分钟。
利用蛋白质印迹法解析未进行蛋白酶K处理的样品和进行了蛋白酶K处理的样品，决定与正常朊病毒和抗体非特异性反应的蛋白质完全被蛋白酶K分解而检测不到并且异常朊病毒被检测到的蛋白酶K的最小浓度。
[蛋白酶K的浓度决定方法4：实施例7～9]
对除去白细胞后的全血制剂进行4000×g、30分钟的离心，向其11.7ml上清液中添加1.3ml的微粒体组分(以下称作“添加过滤前血”)、在12ml中不添加任何物质(以下称作“未添加过滤前血”)。
(未进行蛋白酶K处理的样品)
对3mL的添加过滤前血或3mL的未添加过滤前血分别进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下培养5～10分钟。
(进行了蛋白酶K处理的样品)
在3mL的添加过滤前血或未添加过滤前血中混合1～2％(w/v)的月桂酰肌氨酸钠和浓度不同的蛋白酶K，进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
利用蛋白质印迹法解析未进行蛋白酶K处理的样品和进行了蛋白酶K处理的样品，决定与正常朊病毒和抗体非特异性反应的蛋白质完全被蛋白酶K分解而检测不到并且异常朊病毒被检测到的蛋白酶K的最小浓度。
[蛋白酶K的浓度决定方法5：实施例10～12]
对除去白细胞后的红细胞制剂进行4000×g、30分钟的离心，向其11.7ml上清液中添加1.3ml的微粒体组分(以下称作“添加过滤前血”)、在12ml中不添加任何物质(以下称作“未添加过滤前血”)。
(未进行蛋白酶K处理的样品)
对3mL的添加过滤前血或3mL的未添加过滤前血分别进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下培养5～10分钟。
(进行了蛋白酶K处理的样品)
在3mL的添加过滤前血或未添加过滤前血中混合1～2％(w/v)的月桂酰肌氨酸钠和浓度不同的蛋白酶K，进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
利用蛋白质印迹法解析未进行蛋白酶K处理的样品和进行了蛋白酶K处理的样品，决定与正常朊病毒和抗体非特异性反应的蛋白质完全被蛋白酶K分解而检测不到并且异常朊病毒被检测到的蛋白酶K的最小浓度。
[异常朊病毒除去性能试验1：实施例1、2、4、13]
购入根据欧州标准调制的红细胞制剂进行使用。在室温下向红细胞制剂中相对于1单位红细胞制剂添加13mL匀浆，制作添加过滤前血。使用含有涂布有实施例1、2、4和13中准备的聚合物的聚酯制无纺布C的滤器，以高度差100cm的自然高度差对其进行过滤，回收血液，作为添加过滤后血。首先用细胞溶解液(在1L的注射用蒸留水中溶解11.45g草酸铵盐和433mg磷酸二氢钾和567mg磷酸一氢二钠进行制作)溶解该添加过滤前后血。以体积比1:3混合添加过滤前后血和细胞溶解液，在室温下溶解30分钟。溶解后，以30±10秒的间隔进行1次15±5秒、50±10％功率的超声波粉碎，进行3次。将由蛋白酶K的浓度决定方法1决定的浓度的蛋白酶K和0.6～1％月桂酰肌氨酸钠加入到添加过滤前后血，在37℃±3℃下、进行1小时±5分钟的利用蛋白酶K的分解，加入10mM蛋白酶抑制剂(Pefabloc)停止分解。之后，在100000×g、4℃±2℃下离心1小时，在该沉淀中加入500μl样品缓冲液，在100℃±5℃下培养5～10分钟或者70～80℃下培养10～15分钟。
[异常朊病毒除去性能试验2：实施例3、比较例5、6]
购入根据欧州标准调制的除去白细胞的红细胞制剂进行使用。在4℃冷藏库内保存1天或2天后，在室温下在1单位除去白细胞的红细胞制剂中添加12mL微粒体组分，制作添加过滤前血。使用含有涂布有实施例3和比较例5、6中准备的聚合物的聚酯制无纺布C(比较例6未涂布)的滤器以高度差100cm的自然高度差对其进行过滤，回收血液，作为添加过滤后血。对该添加过滤前血和添加过滤后血进行4000×g、30分钟离心，分注上清液。在这些上清液中添加蛋白酶K直至变为1000μg/mL，进行100000×g、4℃±2℃、1小时的离心。在离心后用100μL的样品缓冲液再悬浮沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
[异常朊病毒除去性能试验3：实施例5比较例1、3、7、8]
购入根据欧州标准调制的新鲜冷冻血浆，过滤当日在37℃下溶解，在室温下添加相对于血浆重量为8.6％体积的微粒体组分，制作添加过滤前血。使用含有涂布有实施例5和比较例1、3、7、8中准备的聚合物的聚酯制无纺布C的滤器以高度差100cm的自然高度差过滤该150g±2g添加过滤前血，回收血液，作为添加过滤后血。在该100μL添加过滤前后血中加入600μg/mL的蛋白酶K，在20000×g、4℃±2℃下离心1小时。用100μL的样品缓冲液再悬浮该沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
[异常朊病毒除去性能试验4：实施例6、比较例10]
购入根据欧州标准调制的除去白细胞的全血制剂进行使用。在4℃冷藏库内保存如此获得的除去白细胞后的全血制剂1天后，在室温下相对于1单位除去白细胞的全血制剂添加28mL微粒体组分，制作添加过滤前血。使用含有涂布有实施例6中准备的聚合物的聚酯制无纺布的滤器和比较例10的滤器以高度差100cm的自然高度差对其进行过滤，回收血液，作为添加过滤后血。在4000×g下对该添加过滤前血和添加过滤后血离心30分钟，分注上清液。在这些上清液中加入蛋白酶K使得达到1000μg/mL，在100000×g、4℃±2℃下离心1小时。离心后用100μL的样品缓冲液再悬浮沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
[异常朊病毒除去性能试验5：实施例7、8、9]
购入根据欧州标准调制的除去白细胞的全血细胞制剂进行使用。在4℃冷藏库内保存1～3天后，将3单位除去白细胞的红细胞制剂集中到1个血液袋中，室温下向其中添加84mL微粒体组分，制作添加过滤前血。将该添加过滤前血3等分，使用含有涂布有实施例7、8、9中准备的聚合物的聚酯制无纺布C的滤器以高度差100cm的自然高度差分别过滤该等分的添加过滤前血，回收血液，作为添加过滤后血。对该添加过滤前血和添加过滤后血进行4000×g、30分钟的离心，分注上清液。向这些上清液中加入蛋白酶K使得达到25U/mL，在100000×g、4℃±2℃下离心1小时。离心后用100μL的样品缓冲液再悬浮沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
[异常朊病毒除去性能试验6：实施例10、11、12]
购入根据欧州标准调制的除去白细胞的红细胞制剂进行使用。在4℃冷藏库内保存2～4天后，在室温下向1单位除去白细胞的红细胞制剂中添加9.5mL微粒体组分，制作添加过滤前血。使用含有涂布有实施例10、11、12中准备的聚合物的聚酯制无纺布C的滤器以高度差100cm的自然高度差对其进行过滤，回收血液，作为添加过滤后血。对该添加过滤前血和添加过滤后血进行4000×g、30分钟的离心，分注上清液。向这些上清液中加入蛋白酶K使得达到25U/mL，在100000×g、4℃±2℃下离心1小时。离心后用100μL的样品缓冲液再悬浮沉淀，在100℃±5℃下保持5～10分钟。
[异常朊病毒效价的解析]
对于加入样品缓冲液并进行加热的添加过滤前后的血液制剂，使用特异性结合于朊病毒蛋白的3F4作为一次抗体，利用普通的蛋白印迹(Western blot)方法检测异常朊病毒。以连续的3倍稀释系列分别多次重复进行所有的添加过滤前后血的检测，利用Spearman(Brit.J.of Psychology 1908；2：227 ff.)和Kaerber(Naunyn Schmiedeberg′s Arhc.Exp.Path.Pharmak.1931；152：380ff.)的方法求得ED50后，换算为每单位体积(1mL)的ED50，将其对数值作为效价。ED50的计算方法如下所述。
[式1]
ED 50 = 10 - Y 0 - d / 2 + d · Σ Y i - - - ( 3 )
Y0：所有重复中都检测到异常朊病毒的最大稀释的对数值
d：稀释系列的对数值
∑Yi：稀释Y0以上时的异常朊病毒被检测到的比例之和
[异常朊病毒除去性能]
异常朊病毒除去性能由下述式(4)决定。
异常朊病毒除去性能＝异常朊病毒的效价(添加过滤前血)-异常朊病毒的效价(添加过滤后血)             (4)
实施例1
使用乙醇作为聚合溶剂，在氮气氛围下、78℃下进行搅拌的同时，滴加溶解有上述聚合性单体和重氮类引发剂的乙醇溶液，进行聚合。各聚合性单体的投入是：作为疏水性聚合性单体的甲基丙烯酸甲酯(以下略记为“MMA”)20摩尔％、作为含有碱性含氮部分的聚合性单体的甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(以下略记为“DM”)5摩尔％、作为含有质子性中性亲水性部分的单体的甲基丙烯酸2-羟基乙酯(以下略记为“HEMA”)75摩尔％。使用过量的水纯化聚合液，进行减压干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。结果基本按照投入比，聚合物中的MMA的共聚组成为20摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为5摩尔％、聚合物中的HEMA为75摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，聚合物浓度为0.8W/V％。在作为原材料的聚酯制无纺布上以上述聚合物浓度进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为21mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验1时，白细胞除去性能为4.12、血液处理压力为9.8kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为2.0以上。
实施例2
使各聚合单体的投入比为MMA20摩尔％、DM13摩尔％、HEMA67摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为20摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为13摩尔％、聚合物中的HEMA为67摩尔％。重均分子量Mw为25万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验1。白细胞除去性能为5.68、血液处理压力为8.1kPa、溶血度为0.5％、异常朊病毒除去性能为2.0以上。
实施例3
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验2。白细胞除去性能为5.68、血液处理压力为11.4kPa、溶血度为0.4％、异常朊病毒除去性能为3.8。
实施例4
使各聚合单体的投入比为MMA40摩尔％、DM5摩尔％、HEMA55摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为40摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为5摩尔％、聚合物中的HEMA为55摩尔％。重均分子量Mw为17万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验1。白细胞除去性能为5.17、血液处理压力为12.5kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为2.0以上。
实施例5
使各聚合单体的投入比为MMA40摩尔％、DM13摩尔％、HEMA47摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为40摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为13摩尔％、聚合物中的HEMA为47摩尔％。重均分子量Mw为18万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验3。白细胞除去性能为5.68、血液处理压力为10.9kPa、溶血度为0.5％、异常朊病毒除去性能为2.4。
实施例6
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验4。白细胞除去性能为5.86、血液处理压力为13.2kPa、溶血度为0.4％、异常朊病毒除去性能为1.5。
实施例7
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验5。白细胞除去性能为5.12、血液处理压力为11.5kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为1.2。
实施例8
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验5。白细胞除去性能为4.68、血液处理压力为12.0kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为1.6。
实施例9
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为21万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验5。白细胞除去性能为5.43、血液处理压力为11.8kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为1.7。
实施例10
使各聚合单体的投入比为甲基丙烯酸乙酯(以下略记为“EMA”)30摩尔％、DM10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的EMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为22万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为19mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验6。白细胞除去性能为5.22、血液处理压力为10.5kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为4.1以上。
实施例11
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯(以下略记为“DE”)10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DE的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为20万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验6。白细胞除去性能为4.58、血液处理压力为12.3kPa、溶血度为0.4％、异常朊病毒除去性能为4.1以上。
实施例12
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM10摩尔％、甲基丙烯酸羟基丙酯(以下略记为“HPMA”)60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HPMA为60摩尔％。重均分子量Mw为28万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验6。白细胞除去性能为4.83、血液处理压力为15.0kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为4.1以上。
实施例13
使各聚合单体的投入比为作为疏水性聚合性单体的丙烯酸丁酯(以下略记为“BA”)40摩尔％、作为含有碱性含氮部分的聚合性单体的丙烯酸二乙基氨基乙酯(以下略记为“DEA”)10摩尔％、作为含有质子性中性亲水性部分的单体的丙烯酸羟基丁酯(以下略记为“HBA”)50摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的BA的共聚组成为40摩尔％、聚合物中的DEA的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HBA为50摩尔％。重均分子量Mw为15万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂覆。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为21mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验1。白细胞除去性能为4.75、血液处理压力为11.5kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为2.0以上。
[比较例1]
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM3摩尔％、HEMA67摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为3摩尔％、聚合物中的HEMA为67摩尔％。重均分子量Mw为20万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为19mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验3。白细胞除去性能为4.88、血液处理压力为10.2kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为0.5。当含有碱性含氮部分的聚合性单体的聚合组成为5摩尔％以下时，结果异常朊病毒的吸附减少、异常朊病毒的除去性能降低。
[比较例2]
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、DM16摩尔％、HEMA54摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为16摩尔％、聚合物中的HEMA为54摩尔％。重均分子量Mw为19万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为21mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验。血液处理压力为11.8kPa、溶血度为2.3％。在冷藏过滤中，当含有碱性含氮部分的聚合性单体的聚合组成增加时，结果会发生溶血、无法满足0.8％的标准。
[比较例3]
使各聚合单体的投入比为MMA15摩尔％、DM10摩尔％、HEMA75摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为15摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为75摩尔％。重均分子量Mw为22万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为20mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验3。白细胞除去性能为5.11、血液处理压力为7.8kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为0.5。
[比较例4]
使各聚合单体的投入比为MMA45摩尔％、DM10摩尔％、HEMA45摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为45摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为45摩尔％。重均分子量Mw为18万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验。但是，血液制剂的流动性差，血液处理压力超过60kPa，有管和注射器破损的危险，在中途中止试验，因此无法测定白细胞除去性能和溶血。
[比较例5]
使各聚合单体的投入比为DM3摩尔％、HEMA97摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的DM的共聚组成为3摩尔％、HEMA的共聚组成为97摩尔％。重均分子量Mw为55万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在比表面积1.47m2/g、平均纤维直径1.2μm、40g/m2单位面积质量的聚酯制无纺布上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为7mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验2。白细胞除去性能为4.92、血液处理压力为6.8kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为0.2。
[比较例6]
对比表面积1.47m2/g、平均纤维直径1.2μm、40g/m2单位面积质量的聚酯制无纺布不进行聚合物涂布而直接使用。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验2。白细胞除去性能为4.55、血液处理压力为20.3kPa、溶血度为0.2％、异常朊病毒除去性能为0.0。
[比较例7]
作为酸性单体使用具有羧基的甲基丙烯酸(以下略记为“MAA”)。
使各聚合单体的投入比为MMA30摩尔％、MAA10摩尔％、HEMA60摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为30摩尔％、聚合物中的MAA的共聚组成为10摩尔％、聚合物中的HEMA为60摩尔％。重均分子量Mw为23万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在聚酯制无纺布C上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为22mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验3。白细胞除去性能为5.36、血液处理压力为10.0kPa、溶血度为0.4％、异常朊病毒除去性能为0。结果在具有酸性单体的聚合物中，无法除去异常朊病毒。
[比较例8]
使各聚合单体的投入比为DM10摩尔％、HEMA90摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％、HEMA的共聚组成为90摩尔％。重均分子量Mw为50万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在作为原料的比表面积1.47m2/g、平均纤维直径1.2μm、40g/m2单位面积质量的聚酯制无纺布上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为18mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验和异常朊病毒除去性能试验3。白细胞除去性能为3.75、血液处理压力为15.0kPa、溶血度为0.3％、异常朊病毒除去性能为0.5。
[比较例9]
使各聚合单体的投入比为MMA90摩尔％、DM10摩尔％，在与实施例1同样的条件下进行聚合、纯化、干燥。使用1H-NMR测定聚合物的共聚组成。聚合物中的MMA的共聚组成为90摩尔％、聚合物中的DM的共聚组成为10摩尔％。重均分子量Mw为24万。作为涂布溶剂使用乙醇，以聚合物浓度0.8W/V％在作为原料的比表面积1.47m2/g、平均纤维直径1.2μm、40g/m2单位面积质量的聚酯制无纺布上进行涂布。其保持量是原材料总表面的每单位面积的保持量为21mg/m2。利用上述方法进行白细胞除去性能试验、回收时压力试验、过滤后的溶血试验。但是，血液制剂的流动性差，血液处理压力超过60kPa，有管和注射器破损的危险，在中途中止试验，因此无法测定白细胞除去性能和溶血。
[比较例10]
使用市售的全血制剂用除去白细胞的滤器(ポ—ル公司制WBF2)进行异常朊病毒除去性能试验4，结果异常朊病毒除去性能为0.4。
将实施例和比较例的结果示于表1。表1中，将电子束灭菌表述为E.B.、高压蒸汽灭菌表述为A.C.。
[表1]
Figure A200780026038D00511
产业实用性
本发明所涉及的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法对于防止在输血医疗现场由于异常朊病毒所导致的传染性海绵状脑病(TSE)的输血感染、进而防止白细胞所导致的输血副作用有用。

Claims (15)

1.一种从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，利用填充了涂覆有聚合物的载体的滤器对血液制剂进行过滤，将该过滤的血液制剂回收，所述聚合物由下述3个单元构成而形成：20摩尔％以上40摩尔％以下的、疏水性聚合性单体来源的单元；5摩尔％以上13摩尔％以下的、含有碱性含氮部分的聚合性单体来源的单元；其余为含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体来源的单元。
2.根据权利要求1所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述血液制剂为全血制剂，所述滤器在辐射线灭菌后经高压蒸汽灭菌。
3.根据权利要求2所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述辐射线为γ射线或电子束。
4.根据权利要求1～3任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述聚合物为乙烯基系聚合物。
5.根据权利要求1～4任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述疏水性聚合性单体、含有碱性含氮部分的聚合性单体和含有质子性中性亲水性部分的聚合性单体为丙烯酸衍生物和/或甲基丙烯酸衍生物。
6.根据权利要求1～5任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述碱性含氮部分为叔氨基。
7.根据权利要求1～6任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述质子性中性亲水性部分为羟基。
8.根据权利要求1～7任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其中，所述滤器为除去白细胞的滤器。
9.根据权利要求8所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体为纤维状介质或海绵状结构物。
10.根据权利要求8或9所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的比表面积为1.0m2/g以上5.0m2/g以下。
11.根据权利要求8～10任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的平均孔径为1μm以上60μm以下。
12.根据权利要求8～11任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的填充密度为0.1g/cm3以上0.5g/cm3以下。
13.根据权利要求8～12任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体的空隙率为60％以上90％以下。
14.根据权利要求8～13任一项所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述涂覆有聚合物的载体为无纺布。
15.根据权利要求14所述的从血液制剂中除去异常朊病毒的方法，其特征在于，所述无纺布的纤维直径为0.3μm以上3.0μm以下。
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