BRPI0714378A2

BRPI0714378A2 - mÉtodo de remoÇço de uma proteÍna prÍon anormal de um produto de sangue

Info

Publication number: BRPI0714378A2
Application number: BRPI0714378-8A
Authority: BR
Inventors: Hiromi Nirasawa; Morikazu Miura
Original assignee: Asahi Kasei Medical Co Ltd
Priority date: 2006-07-12
Filing date: 2007-07-12
Publication date: 2013-03-12
Also published as: RU2009104705A; CA2657514C; EP2050457A1; TWI412401B; RU2410128C2; CN101489570A; EP2050457A4; EP2050457B1; CN101489570B; TW200812697A; KR20090024219A; MY147456A; CA2657514A1; AU2007273755A1; US8663908B2; US20100062412A1; WO2008007465A1; JPWO2008007465A1; JP5250417B2; KR101170212B1

Abstract

MÉTODO DE REMOÇçO DE UMA PROTEÍNA PRÍON ANORMAL DE UM PRODUTO DE SANGUE. Prover um método de remover de modo conveniente e eficiente proteína príon anormal de uma preparação de sangue. Prover um método pelo qual príon anormal e leucócitos podem ser simultaneamente removidos. O método de remover um príon anormal de uma preparação de sangue caracterizado por compreender filtrar o produto de sangue através de um filtro compactado com um suporte revestido com um polímero, que é composto de três unidades, incluindo 20% em mois ou mais mas não mais do que 40% em mols de uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico, 5% em mols ou mais mas não mais que 13% em mols de uma unidade se originando de um monômero polimerizável tendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável tendo uma parte hidrofilica neutra protônica como o resto, e então recuperar a preparação de sangue filtrado.

Description

"MÉTODO DE REMOÇÃO DE UMA PROTEÍNA PRÍON ANORMAL DE UM PRODUTO DE SANGUE"

Campo Técnico

A presente invenção refere-se a um método de remover uma proteína príon anormal de um produto de sangue. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a um método de remover seletivamente uma proteína príon anormal que pode estar presente em um produto de sangue, como um produto de sangue total, solução de eritrócitos concentrados ou plaquetas concentradas.

Técnica Antecedente

A encefalopatia espongiforme transmissível (TSE) ou doença de príon causa doenças neurodegenerativas fatais em humanos e outros mamíferos. Dentre estes, paraplexia enzoótica dos ovinos ("scrapie") e BSE em gado são particularmente amplamente conhecidas. A doença em humanos inclui doença de Creutzfeldt-Jakob esporádica (sCJD), doença de Creutzfeldt- Jakob iatrogênica, síndrome de Gerstmann-Straeussler-Scheinker (GSS), insônia familiar fatal (FFI), e Kuru. A doença de príon pode ocorrer pela mudança conformacional de um príon normal natural para um príon anormal variante (uma proteína príon variante que pode causar a doença de príon), que infecta humanos e outros mamíferos. A proteína príon variante tem uma estrutura rica em β-folha comparada com a proteína príon normal, de modo que a proteína príon variante tem uma elevada hidrofobicidade, forma facilmente um multímero, e tem resistência a protease K.

Em anos recentes, alguns relatos revelaram que CJD variante ocorreu principalmente no Reino Unido, sendo causada por consumo de carne bovina de uma vaca infectada com BSE (documentos não patente 1 e 2). Foi sugerido que CJD variante pode ser transmitido por consumo de carne bovina e transmitido de humano para humano por transfusão de produto de sangue ou por transmissão de uma proteína príon variante presente em um enxerto de um tecido. Sob as circunstância, em 2004, dois casos foram relatados, onde os recipientes transfundidos com sangue de um doador, que desenvolveram CJD variante após a doação de sangue, foram infectados com CJD variante e, em 2006, o terceiro caso foi relatado, de modo que se tem uma possibilidade muito forte de que a transmissão de CJD variante pode ocorrer por transfusão. Existem vários humanos que estão infectados com CJD variante mas não desenvolvem a doença, e produtos de sangue derivados destes humanos podem espalhar a infecção. Assim, um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue é requerido.

No campo de uma transfusão de sangue, uma assim chamada transfusão de sangue com remoção de leucócitos foi difundida, pelo que um produto de sangue é transfundido após a remoção dos leucócitos contidos no produto de sangue. Isto é porque foi esclarecido que os efeitos laterais como dor de cabeça, náusea, calafrios, e reação febril não hemolítica, que acompanham a transfusão de sangue; efeitos laterais graves como sensitização a aloantígenos, doença de enxerto-versus-hospedeiro pós-transfusão (GVHD) e infecção viral, que afetam seriamente o recipiente, são causados principalmente pelos leucócitos misturados no produto de sangue usado na transfusão de sangue. Um método de filtro tem tais vantagens como excelente capacidade de remoção de leucócitos, operação simples e baixo custo, de modo que o método de filtração tem sido amplamente usado como um método de remoção de leucócitos de um produto de sangue. No processamento de um produto de sangue, sangue tem sido geralmente filtrado no banco de sangue, ' 25 em anos recentes, antes do armazenamento para passar através de controle de qualidade de um produto de sangue com remoção de leucócitos pelo método de filtro, isto é, usando um filtro de remoção de leucócitos. Em geral, no caso onde o sangue é filtrado usando um filtro de remoção de leucócitos no banco de sangue, uma bolsa de sangue contendo um produto de sangue a ser filtrado é colocada em uma posição superior à de uma bolsa de recuperação para a pós-filtração do produto de sangue em 70 cm a 150 cm, e o produto de sangue é filtrado com base em ação de gravidade.

Como conjuntos para preparar um produto de sangue com remoção de leucócitos, dois conjuntos (conjuntos tipo SCD e tipo em linha) são amplamente usados. No conjunto tipo SCD, uma bolsa contendo um produto de sangue destinado à remoção de leucócitos é assepticamente conectado ao conjunto para remover os leucócitos. Assim, somente o filtro de remoção de leucócitos e a bolsa de sangue para recuperar um produto de sangue após filtração estão conectados. No conjunto de tipo em linha, o processo de recuperação de sangue de um doador para a preparação de um produto de sangue é realizado em um sistema integrado, de modo que a bolsa de sangue geralmente contém uma solução de conservante ou anticoagulante. Para esterilizar o conjunto de tipo SCD, esterilização por radiação é geralmente empregada devido ao custo baixo. No entanto, a esterilização por radiação pode causar decomposição da solução conservante e anticoagulante, assim a esterilização por autoclave é geralmente empregada para o conjunto de tipo em linha.

O grau de hemólise está entre os índices de qualidade de um produto de sangue contendo eritrócitos. Para fornecer um produto de sangue com remoção de leucócitos de alta qualidade contendo eritrócitos, o nível de hemólise deve ser menor do que 0,8% (documento não patente 3).

De um ponto de vista de operatividade no banco de sangue, custo e perda de um produto de sangue, um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue é preferivelmente um método de remoção de uma proteína príon anormal e leucócitos simultaneamente.

Documento de patente 1 descreve um polímero para revestir um material de filtro para remoção de leucócitos incluindo uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico, uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica como um material tendo uma elevada capacidade de remoção de leucócitos, mas não descreve nem sugere remoção de uma proteína príon anormal. A filtração de sangue com remoção de leucócitos antes do armazenamento inclui, em muitos casos, tanto filtração em temperatura ambiente em que o sangue é filtrado em temperatura ambiente em um dia de coleta do sangue e filtração em baixa temperatura, em que o sangue é filtrado após o armazenamento do sangue em um refrigerador durante cerca de 1 a 3 dias. No caso da filtração em temperatura ambiente, mais leucócitos vazam do que o sangue refrigerado, apesar do tempo de filtração ser curto, enquanto no caso de filtração em baixa temperatura, o tempo de filtração é longo, e vazamento de leucócitos pode ser relativamente evitado. No entanto, no documento de patente 1, não foi feito nenhum estudo sobre o tempo de filtração na filtração em baixa temperatura.

Documento de patente 2 descreve um método de formação de um complexo de uma proteína príon em um fluido biológico e uma matriz de polímero tendo um grupo funcional hidrofílico, hidrofóbico ou anfifílico ou uma substância de ligação a príon, incluindo alumina ou sílica. No entanto, o complexo não pode remover leucócitos apesar do grupo funcional ser ligado a uma resina em exemplo, e é necessário usar um filtro de remoção de leucócitos em uso real no banco de sangue. Se a remoção de leucócitos e a remoção de proteínas príons anormais forem realizadas separadamente, perda de um produto de sangue, mão de obra do banco de sangue, e custos, podem aumentar. Além disso, alumina e sílica são conhecidas como induzindo a ativação de um sistema de coagulação e mostram uma adsorção não seletiva elevada para proteínas e, assim, as substâncias não são apropriadas para um produto de sangue.

Documento de patente 3 descreve um método de remoção de príons de uma amostra de líquido arbitrária por uso de um aparelho como uma coluna de passagem de fluxo e glóbulos de polímeros esféricos, cujas superfícies são revestidas com um agente complexante de príons, como um sal de metal (como sódio) de ácido fosfotungstíco. No entanto, é necessário expor a amostra ao agente complexante durante tempo suficiente para formar complexos do agente complexante de príons e substancialmente todas as proteínas príons anormais na amostra. Por exemplo, a amostra é incubada a cerca de 30°C a 45°C (preferivelmente 37°C) durante cerca de 1 h a 16 h. No entanto, a temperatura de 37°C não é apropriada como uma temperatura para armazenar um produto de sangue, e em um método convencional de usar um filtro de remoção de leucócitos, a filtração em temperatura ou temperatura baixa é geralmente empregada. Além disso, em tal método, a filtração é realizada com base em ação de gravidade, de modo que o método não é apropriado para a remoção de proteínas príons anormais ou leucócitos de um produto de sangue.

Documento de patente 4 descreve um método de formação de um complexo de uma proteína príon e uma matriz de polímero tendo um grupo funcional hidrofílico, hidrofóbico ou anfifílico para remover ou detectar um príon, ou uma substância de ligação de príons incluindo alumina ou sílica. No entanto, a substância de ligação de príons usada nos exemplos não pode remover leucócitos e se a remoção de leucócitos e remoção de proteínas príons anormais forem realizadas separadamente, ocorrem problemas como a perda de um produto de sangue, mão de obra no banco de sangue e custos podem aumentar. Além disso, alumina e sílica são conhecidas para induzir ativação de um sistema de coagulação e tem adsorbabilidade não seletiva elevada para proteínas e, assim, as substâncias não são apropriadas um produto de sangue.

Deste modo, a fim de remover uma proteína príon anormal de um produto de sangue, um método de remoção eficiente e fácil de uma proteína príon anormal é necessário, e o método é ainda desejado para remover a proteína príon anormal e simultaneamente leucócitos.

[Documento não patente 1] G. Chazot, et al., (1996) Lancet 347:

1181

[Documento não patente 2] R. G. Will, et al., (1996) Lancet 347:

921 -25

[Documento não patente 3] Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components 9a edição/Council of Europe Publishing

[Documento de patente 1] WO 03/011924 [Documento de patente 2] US 2005/0014196A

[Documento de patente 3] JP 2002-53908IA

[Documento de patente 4] JP 2006-522344A

Descrição da invenção

Problemas A Serem Resolvidos Pela Invenção Em vista dos problemas acima mencionados de tecnologias

convencionais, um objeto da presente invenção consiste em prover um método para a remoção fácil e eficiente de proteína príon anormal de um produto de sangue e um método de remoção simultânea de uma proteína príon anormal e leucócito. Meios Para Resolver os Problemas

Os inventores da presente invenção realizaram estudos extensivos, com o resultado de que os inventores verificaram que uma proteína príon anormal pode ser removida de modo muito fácil e eficiente de um produto de sangue por um filtro revestido com um terpolímero incluindo um monômero polimerizável hidrofóbico, um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica (não um polímero incluindo qualquer um dos monômeros), assim completaram a presente invenção. Isto é, a presente invenção refere-se a:

(1) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue, caracterizado por incluir: filtrar um produto de sangue através de um filtro compactado com um veículo revestido com um polímero, que é formado de três unidades incluindo 20% em mols ou mais e 40% em mols ou menos de uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico; 5% em mols ou mais e 13% em mols ou menos de uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica como o resto; e recuperar o produto de sangue filtrado;

(2) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com o item acima mencionado (1), caracterizado em que o produto de sangue é um produto de sangue total, e o filtro é submetido à esterilização por radiação e, então, esterilização por autoclave;

(3) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com o item acima mencionado (2), caracterizado em que a radiação é de raios-γ ou feixes de elétrons;

(4) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (1) a (3), caracterizado em que o polímero é um polímero de tipo vinila;

(5) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (1) a (4), caracterizado em que o monômero polimerizável hidrofóbico, monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica são derivados de ácido acrílico e/ou derivados de ácido metacrílico;

(6) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (1) a (5), caracterizado em que a parte contendo nitrogênio básico é um grupo amino terciário;

(7) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (1) a (6), caracterizado em que a parte hidrofílica neutra protônica é um grupo hidroxila;

(8) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (1) a (7), caracterizado em que o filtro é um filtro de remoção de leucócitos;

(9) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com o item acima mencionado (8), caracterizado em que o veículo revestido com o polímero é um meio fibroso ou um material estrutural de tipo esponja;

(10) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com o item acima mencionado (8) ou (9),

caracterizado em que uma área de superfície específica do veículo revestido

2 2 com o polímero é 1,0 m /g ou mais e 5,0 m /g ou menos;

(11) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (8) a (10), caracterizado em que um diâmetro médio de poro do veículo revestido com o polímero é 1 μιτι ou mais e 60 μπι ou menos;

(12) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (8) a (11), caracterizado em que uma densidade de enchimento do veículo revestido com o polímero é 0,1 g/cm3 ou mais e 0,5 g/cm3 ou menos;

(13) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (8) a (12), caracterizado em que a porosidade do veículo revestido com o polímero é 60% ou mais e 90% ou menos;

(14) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer um dos itens acima mencionados (8) a (13), caracterizado em que o veículo revestido com o polímero é um pano não tecido; e

(15) um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com o item acima mencionado (14), caracterizado em que um diâmetro de fibra do pano não tecido é 0,3 μηι ou mais e 3,0 μιη ou menos.

Efeito da Invenção

De acordo com a presente invenção, é possível remover de modo fácil e eficiente uma proteína príon anormal de um produto de sangue e remover simultaneamente uma proteína príon anormal e leucócito. Além disso, o método da presente invenção pode ser usado para produzir um produto de sangue de alta qualidade e tendo uma elevada capacidade de fluxo e contém menos células hemolisadas.

Breve Descrição Dos Desenhos

A figura 1 é uma vista esquemática ilustrando um sistema para realizar a presente invenção.

Descrição dos Números de Referência

1: bolsa de produto de sangue 2: linha 3: filtro

4: bolsa para recuperar o produto de sangue após filtração Melhor Modo para Realizar a Invenção A seguir, a presente invenção é descrita em maiores detalhes. O termo "polímero" na presente invenção significa polímero(s) incluindo uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico, uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica.

O termo "unidade" na presente invenção significa uma unidade de repetição mínima se originando de cada monômero polimerizável em uma molécula de polímero. Por exemplo, no caso da polimerização de adição de um monômero polimerizável de composto de vinila com a fórmula CH2 = CXY (X: H ou um substituinte diferente de Η, Y: um substituinte diferente de X) por simples abertura da ligação dupla, a unidade de repetição mínima é - (CH2-CXY)-. No caso onde o polímero é sintetizado por policondensação de um precursor de polímero da fórmula A-(R)-B, (R: uma parte não liberável por polimerização, A e B: partes liberáveis durante a reação de polimerização), -(R)- pode ser dado como a unidade de repetição mínima quando AeB são liberados e polimerizados.

Exemplos do monômero polimerizável hidrofóbico, especificamente do ponto de vista de facilidade de disponibilidade e manipulação, incluem: estireno; metilestireno; acrilatos e metacrilatos como acrilato de metila, metacrilato de metila, acrilato de etila, metacrilato de etila, acrilato de butila, metacrilato de butila, acrilato de fenila, metacrilato de fenila, acrilato de etilhexila, metacrilato de etilhexila, acrilato de tricloroetila, e metacrilato de tricloroetila; alquenos como penteno, hexeno, hepteno, e octeno; compostos de silício orgânicos como silicone e siloxano; e monômeros polimerizáveis de flúor orgânico tendo pelo menos um átomo de hidrogênio de etileno substituído com um átomo de flúor. No entanto, o monômero polimerizável hidrofóbico não é limitado às substâncias acima. Dentre os mesmos, do ponto de vista de fácil disponibilidade e fácil manipulação, monômeros tendo um grupo vinila como uma parte polimerizável que pode produzir um polímero do tipo vinila por polimerização de adição (polimerização de vinila) são preferíveis. Além disso, monômeros polimerizáveis hidrofóbicos preferíveis são derivados de ácido acrílico e derivados de ácido metacrílico. Acrilatos e metacrilatos são os monômeros polimerizáveis hidrofóbicos mais preferíveis.

Materiais tendo um grupo funcional contendo nitrogênio básico têm cargas positivas na superfície em um fluído fisiológico, o que provê o efeito de melhorar a capacidade de remoção de proteína príon anormal. O termo "monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico" na presente invenção significa um monômero polimerizável que tem uma parte contendo nitrogênio básico a ser descrita abaixo. Um grupo amino primário, um grupo amino secundário, um grupo amino terciário, um grupo amino quaternário, um grupo piridila, um grupo imidazolila, e outros podem ser dados como a parte contendo nitrogênio básico. O grupo amino terciário é particularmente preferido como a parte contendo nitrogênio básico. O monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico inclui, do ponto de vista de fácil disponibilidade e fácil manipulação, derivados de vinila de um composto aromático contendo nitrogênio como vinilamina, 2-vinilpiridina, 4-vinilpiridina, 2-metil-5-vinilpiridina, 4- vinilimidazol, N-vinil-2-etilimidazol, e N-vinil-2-metilimidazol; acrilatos e metacrilatos como acrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de dimetilaminoetila, acrilato de dietilaminoetila, metacrilato de dietilaminoetila, acrilato de 3-dimetilamino-2-hidroxipropila, e metacrilato de 3-dimetilamino- 2-hidroxipropila; amida de ácido acrílico e derivados de amida de ácido metacrílico como amida de ácido Ν,Ν-dimetilaminoetila acrílico, amida de ácido N-dimetilaminoetila metacrílico, amida de ácido N,N-dietilaminoetila acrílico, amida de ácido Ν,Ν-dietilaminoetila metacrílico, e amida de ácido Ν,Ν-dimetilaminopropila acrílico; derivados de estireno como p- dimetilaminometilestireno e p-dietilaminoetilestireno; e derivados como sais de amônio quaternário preparados por reagir o monômero polimerizável com um grupo halogeneto de alquila. No entanto, o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico não é limitada às substâncias. Dentre os mesmos, do ponto de vista de fácil disponibilidade e fácil manipulação, monômeros tendo um grupo vinila como uma parte polimerizável que pode produzir um polímero do tipo vinila por polimerização de adição (polimerização de vinila) são preferíveis. Os derivados de ácido acrílico e derivados de ácido metacrílico são preferíveis para o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico. Os acrilatos e metacrilatos são mais preferíveis para o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico. Dentre estes, acrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de dimetilaminoetila, acrilato de dietilaminoetila, e metacrilato de dietilaminoetila são particularmente preferíveis.

O termo "monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica" na presente invenção significa um monômero do qual a parte não polimerizável se dissocia para liberar prótons (H+), e o monômero não demonstra uma acidez extrema ou basicidade extrema como um ácido carboxílico ou um grupo básico amino apresentam. O monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica demonstra propriedades hidrofílicas superiores como comparado com um monômero tendo uma parte hidrofílica neutra não protônica e é excelente em propriedades de iniciação e propriedades preventivas de canalização do sangue do produto de sangue. Exemplos da parte hidrofílica neutra protônica incluem um grupo hidroxila, um grupo aldeído tendo um próton na α-posição e um grupo amida tendo um próton na α-posição, e um grupo 1,3-dicarbonila. Como a parte hidrofílica neutra protônica não polimerizável, um grupo hidroxila é particularmente preferível. Exemplos de monômeros polimerizáveis contendo uma parte hidrofílica neutra protônica incluem metacrilato de 2-hidroxietila, metacrilato de hidroxipropila, acrilato de hidroxibutila, acrilamida, e metacrilamida. No entanto, os monômeros polimerizáveis contendo uma parte hidrofílica neutra protônica não são limitados às substâncias acima. Dentre os mesmos, do ponto de vista de fácil disponibilidade e fácil manipulação, monômeros tendo um grupo vinila como uma parte polimerizável que pode produzir um polímero do tipo vinila por polimerização de adição (polimerização de vinila) são preferíveis. Dentre estes, como monômeros polimerizáveis contendo uma parte hidrofílica neutra protônica, derivados de ácido acrílico e derivados de ácido metacrílico são preferíveis. Os acrilatos e metacrilatos são os mais preferíveis para os monômeros polimerizáveis contendo uma parte hidrofílica neutra protônica. O termo "polímero do tipo vinila" na presente invenção significa um polímero do tipo vinila em um sentido amplo tendo cadeia não cíclica principal. Exemplos específicos incluem ácido poliacrílico α-substituídos e derivados dos mesmos, éter polivinílico, álcool polivinílico, éster polivinílico, - 25 poliestireno, e derivados dos mesmos, assim como copolímeros incluindo os polímeros, como descrito em "J Brandrup; Ε. H. Immergut. 1989. "Polymer Hand book terceira edição" A Willey-interscience Publication, pVII-5 a VII- 18". Para remover uma proteína príon anormal em um produto de sangue contendo um componente de plasma, é necessário usar o polímero acima mencionado contendo três unidades incluindo uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico, uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica. Mesmo se um polímero incluindo somente uma das unidades for usado, é impossível remover uma proteína príon anormal em um nível elevado e impossível proporcionar a capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada particularmente de um produto de sangue contendo um componente de plasma.

A proteína príon anormal tem três regiões de ligação distintas que ligam aos grupos funcionais positivamente carregados, grupos funcionais negativamente carregados, e grupos funcionais hidrofóbicos. Entrementes, o ponto isoelétrico da proteína príon anormal foi registrado como sendo pH 4,6, e pH de um produto de sangue está na faixa de cerca de 5 a 7,5, de modo que a proteína príon anormal em um produto de sangue é negativamente carregada. Deste modo, o monômero contendo uma parte contendo nitrogênio básico e monômero polimerizável hidrofóbico podem remover a proteína príon anormal do produto de sangue em um nível elevado. Além disso, sabe- se que um contato entre um material tendo cargas negativas e um produto de sangue pode causar a produção de bradiquinina que induz anafilaxia como uma diminuição na pressão sangüínea, rubor facial, hiperemia conjuntival, • 25 contração de músculo liso, ou geração de dor, e este polímero tendo cargas negativas não é apropriado para revestir a superfície de um veículo a ser usado para filtração do produto de sangue.

Por outro lado, a filtração do produto de sangue usando um filtro é requerida para prover um produto de sangue tendo a mesma qualidade que um produto de sangue obtido por filtração usando um filtro de remoção de leucócitos convencional. A parte hidrofílica neutra protônica do polímero é uma parte essencial para manter a umectabilidade necessária para o espalhamento do produto de sangue em todo o filtro, em particular, para realizar a "iniciação" suave que é o procedimento de encher o filtro com o produto de sangue no estágio inicial de filtração. Se as composições do monômero contendo uma parte contendo nitrogênio básico e monômero polimerizável hidrofóbico no polímero excederem determinados níveis, redução em qualidade é causada, resultando em hemólise ou tempo de filtração prolongado. Deste modo, para produzir um produto de sangue onde uma proteína príon anormal foi removida em um nível elevado, é necessário ajustar a composição do monômero polimerizável hidrofóbico, monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica em faixas apropriadas.

O termo "monômero polimerizável hidrofóbico" na presente invenção significa um monômero polimerizável tendo afinidade muito baixa para água e tendo solubilidade em água de 12 (g/100 g de água) ou menos a 20°C, e significa um monômero não contendo nem uma parte contendo nitrogênio básico nem uma parte hidrofílica neutra protônica em sua molécula. Se a solubilidade for maior do que 12 (g/100 g de água), a capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada, disponível na presente invenção, não pode ser obtida. A faixa mais preferível de solubilidade é 2 (g/100 g de água) ou menos. A solubilidade pode ser determinada por um método conhecido, como um método de ponto de orvalho, análise térmica, método elétrico compreendendo medir uma força eletromotiva ou condutividade elétrica da solução, análise de cromatografia a gás, e método traçador, no caso onde o monômero polimerizável é um sólido. No caso onde o monômero polimerizável é um líquido, a solubilidade pode ser determinada pelos mesmos métodos como aplicados em um monômero polimerizável sólido e, além disso, por um método conhecido como um método de capacitância, método de dispersão de luz, ou método de pressão de vapor, todos sendo conhecidos na arte. Como um método mais simples, quando o monômero polimerizável tem um ponto de ebulição suficientemente maior do que o ponto de ebulição de água, pode ser usado um método, em que água é vaporizada de uma solução aquosa saturada do monômero polimerizável e o peso do resíduo é medido.

Para alcançar uma capacidade de remoção de proteína príon anormal superior e a capacidade de remoção de leucócitos, o polímero preferivelmente inclui os monômeros acima mencionados nas seguintes concentrações (percentagem em mol): o monômero polimerizável hidrofóbico, 20% em mols ou mais e 40% em mols ou menos; o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, 5% em mols ou mais e 13% em mols ou menos; o monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica, uma concentração calculada por subtração da soma da concentração (% em mols) do monômero polimerizável hidrofóbico no polímero e a concentração (% em mols) do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico de 100% em mols. Se a concentração do monômero polimerizável hidrofóbico no polímero for menor do que 20% em mols, ou se a concentração do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico é menor que 5% em mols, indesejável a capacidade de remoção de proteína príon anormal não pode ser melhorada. Se a concentração do monômero polimerizável hidrofóbico no polímero excede 40% em mols, indesejável, umectabilidade para um produto de sangue armazenado em um refrigerador pode ser afetada, resultando em uma diminuição em uma taxa de filtração do produto de sangue quando filtrando o produto de sangue usando um filtro compactado com um veículo revestido com um polímero da presente invenção. Se a concentração do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico no polímero excede 13% em mols, hemólise pode indesejavelmente ocorrer no produto de sangue armazenado em um refrigerador. Para alcançar outra capacidade de remoção de proteína príon anormal superior e a capacidade de remoção de leucócito, o polímero preferivelmente inclui os monômeros acima mencionados nas seguintes concentrações (percentagem em mol): o monômero polimerizável hidrofóbico, 25% em mols ou mais e 35% em mols ou menos; o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, 7% em mols ou mais e 12% em mols ou menos; o monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica, uma concentração calculada por subtração da soma da concentração (% em mols) do monômero polimerizável hidrofóbico no polímero e a concentração (% em mols) do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico de 100% mol. Mais preferivelmente, o polímero inclui o monômero polimerizável hidrofóbico em uma concentração de 27% em mols ou mais e 33% em mols ou menos, o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico em uma composição de copolimerização de 8%> em mols ou mais e 11% em mols ou menos, e o monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica como o resto.

A composição de monômero nos polímeros pode ser determinada de acordo com uma técnica físico-químico comum. Exemplos da técnica físico-química para determinar as composições de copolimerização incluem métodos conhecidos como a espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN, —1H, —13C) e o método GC/MS de pirólise. Ela também pode ser determinada se a polimerização for realizada como pretendido com a composição de monômero carregado ou se ocorrer uma variação lote-a-lote. Também é possível dissolver e extrair o polímero revestido em um veículo por uso de um solvente no polímero sendo possível analisar a composição de monômero no polímero extraído no mesmo modo como descrito acima.

Também é possível aplicar um método de dissolver o veículo e o polímero presente sobre a superfície em um solvente deuterado e determinar a composição por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN, —1H, —13C) como um método para determinar a composição de copolimerização. O peso molecular do polímero pode ser medido pela cromatografia de permeação em gel conhecida. O peso molecular médio ponderai (Mw) está na faixa de preferivelmente 50.000 ou mais e 3.000.000 ou menos, mais preferivelmente 100.000 ou mais e 2.000.000 ou menos, e o mais preferivelmente 150.000 ou mais e 1.500.000 ou menos. Se o peso molecular médio ponderai (Mw) é menos que 50.000, a eluição do polímero no produto de sangue pode ocorrer de modo indesejável durante um processo de remoção de proteína príon anormal e de leucócitos usando um produto de sangue. Se o peso molecular médio ponderai (Mw) for maior do que 3.000.000, indesejavelmente a solubilidade do polímero no solvente usado para o revestimento diminui. Além disso, este pode ser o caso onde o polímero não pode ser produzido em um modo estável quando da polimerização. O polímero pode ser ou um copolímero aleatório ou um copolímero em bloco. O copolímero aleatório é, no entanto, mais preferível porque o copolímero em bloco pode ter uma tendência a diminuir a solubilidade em um solvente quando usado para o revestimento e pode ter uma tendência de afetar a uniformidade do revestimento devido à formação de micelas na solução. O polímero pode ser ou um polímero linear ou um polímero ramificado. A cadeia de polímero linear é, no entanto, mais preferível porque a cadeia de polímero ramificada pode ter uma tendência a diminuir a solubilidade em um solvente quando usada para revestimento e pode ter uma tendência de afetar a uniformidade de revestimento do revestimento devido à formação de micelas na solução. Um método de polimerização comum pode ser empregado para sintetizar o polímero. A polimerização de adição (polimerização de vinila) que é uma reação de cadeia; polimerização de isomerização; e reação de eliminação, poliadição, policondensação, policondensação de adição, e outros que são reações consecutivas podem ser empregados. Radicais ou íons podem ser usados como veículos de cadeia na produção do polímero. Como o tipo de polimerização, polimerização em solução, polimerização em massa, polimerização de deposição, polimerização em emulsão e outros podem ser relatados como exemplos. Dentre os mesmos, a polimerização em solução é preferível.

Um exemplo do método de polimerização é dado abaixo.

Etanol é usado como um solvente de polimerização, e uma solução de etanol em que monômeros e um iniciador de tipo diazo foram dissolvidos é adicionada em gotas deixar a reação ocorrer, enquanto a solução é agitada em uma temperatura constante igual em ou menor do que o ponto de ebulição de etanol em uma atmosfera de nitrogênio. Um estabilizador ou outro pode ser adicionado como apropriado. O rendimento da reação é medido e confirmado por uso de um método conhecido como cromatografia de gás. A mistura de reação pode ser purificada por um método de purificação químico comum para remover impurezas como componentes de peso molecular baixo e os materiais não reagidos que estão contidos no polímero ou a solução de reação contendo o polímero e que se receia seja eluída durante o tratamento de um produto. Como o método de purificação, um método incluindo despejar a mistura de reação em um solvente que dissolve as impurezas, mas não dissolve o polímero, para separar o precipitado por filtração ou decantação pode ser indicado. Alternativamente, um método em que, como requerido, o precipitado é lavado com um solvente com solubilidade levemente maior do que a do solvente de precipitação (uma mistura do solvente de precipitação e o solvente, por exemplo) e o precipitado é secado sob pressão reduzida até o peso do precipitado se tornar constante de modo a obter um polímero sólido, pode ser indicado.

Não se notam limitações específicas ao tipo do veículo desde que o material tenha poros através dos quais o sangue pode ser filtrado. Dentre as várias conformações do veículo que pode ser usado, meio fibroso como fibras naturais, fibras de vidro, malha, tecido, pano não tecido, membrana porosa, e um material estrutural de tipo esponja tendo uma rede tri-dimensional de poros contínuos são particularmente preferíveis. Vários veículos como materiais de polímero orgânico, materiais de polímero inorgânico, e metais podem ser usados sem quaisquer limitações específicas desde que as células sangüíneas não seja facilmente prejudicadas. Dentre estes, os materiais de polímero orgânico são materiais preferíveis devido à sua excelente processabilidade como corte. Por exemplo, poliéster, poliolefina, poliacrilonitrila, poliamida, poliestireno, metacrilato de polimetila, fluoreto de polivinila, poliuretano, álcool polivinílico, polivinil acetal, polisulfona, fluoreto de poli vinilideno, politrifluoroclorovinila, vinilideno, copolímero de fluoreto-tetrafluoroetileno, poliétersulfona, poliacrilato, copolímero de butadieno-acrilonitrila, copolímero em bloco de poliéter-poliamida, copolímero de etileno - álcool vinílico, celulose, e acetato de celulose. No entanto, o veículo da presente invenção não é limitado aos exemplos acima mencionados. Poliéster e poliolefina são preferíveis, e poliéster é particularmente preferível.

O termo "veículo revestido com um polímero" na presente invenção significa um veículo obtido por fixação do polímero na superfície do veículo em tal modo que o polímero não seja facilmente eluído no produto durante o processamento. Como o método para fixar o polímero na superfície do veículo, ou um método químico de uso de uma ligação covalente ou um método físico-químico de uso de ligação não covalente pode ser empregado.

A quantidade do polímero é preferivelmente 0,6 mg/m2 ou mais e 83 mg/m2 ou menos. Se a quantidade do polímero for menor que 0,6 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do veículo, indesejavelmente, a capacidade de remoção de proteína príon anormal e a capacidade de remoção de leucócitos tendem a diminuir; se a quantidade exceder 83 mg/m2, indesejavelmente, o desempenho do filtro pode flutuar devido a um

revestimento irregular. Uma quantidade mais preferível do polímero é de 5

2 * 2 mg/m ou mais e 50 mg/m ou menos por área unitária sobre a área de

superfície completa do veículo, com uma quantidade particularmente

preferível sendo de 10 mg/m2 ou mais e 40 mg/m2 ou menos. A quantidade do

polímero na superfície do veículo pode ser determinada de acordo com uma

técnica físico-química comum. Como o método de medir a abundância do

polímero sobre a superfície do veículo, um método de dissolver o veículo

revestido e o polímero presente na superfície em um solvente deuterado e

determinar a quantidade pelo método de ressonância magnética nuclear

(RMN, —1H, —13C) pode ser indicado. Na presente invenção, um veículo

revestido com um polímero é referido como "veículo revestido" em alguns

casos.

Como o método de revestir o polímero sobre o veículo na presente invenção, métodos conhecidos como um método de fixar os monômeros polimerizáveis acima mencionados ou o polímero sobre o veículo por ligação química covalente (por exemplo, enxerto), um método de fixação por uma ligação não covalente físico-química (ligação iônica, força de Van der Waals, etc.) (por exemplo, revestimento), e um método de incrustação o polímero pode ser indicado. Mais especificamente, um método de enxertar diretamente os monômeros polimerizáveis ou o polímero na superfície do veículo por método de polimerização de enxerto como enxerto por radiação ou enxerto por plasma ou um método de revestir um polímero sobre a superfície de um veículo por impregnação do veículo com uma solução de polímero ou por aplicação sobre um rolo e transcrição do polímero na superfície do veículo é preferível tendo em vista um processo de fabricação comparativamente fácil que pode produzir produtos com excelente desempenho em um modo estável. Vários métodos podem ser usados para revestir o polímero da presente invenção sobre o veículo sem quaisquer limitações específicas, desde que a superfície do veículo possa ser revestida com um certo grau de uniformidade sem obstruir indevidamente os poros no veículo. Exemplos do método de revestimento do polímero sobre o veículo incluem, mas não são limitados a, um método de impregnar o veículo com uma solução de polímero, um método de pulverizar a solução de polímero no veículo, e um método de aplicar ou transcrever a solução de polímero para o veículo usando um rolete de fotogravura. Dentre estes métodos, o método de impregnar o veículo com uma solução de polímero e comprimir o veículo e o método de aplicar ou transcrever a solução de polímero no veículo usando um rolete de fotogravura são preferíveis devido à produtividade contínua excelente e um custo baixo. Os tipos de solventes que podem ser usados como os solventes que dissolvem o polímero não são particularmente limitados desde que eles sejam os que não dissolvem o veículo. Exemplos dos mesmos incluem: soluções contendo água e sais inorgânicos; álcoois como metanol, etanol, propanol, e butanol; cetonas como acetona e metiletil cetona; ésteres como acetato de metila e acetato de etila; hidrocarbonetos como benzeno e ciclohexano; hidrocarbonetos halogenados como clorofórmio e diclorometano; solventes contendo enxofre como sulfóxido de dimetila; amidas como dimetilformamida e dimetilacetamida; e misturas de vários tipos dos solventes acima mencionados na faixa em que eles são solúveis. No entanto, os solventes que podem ser usados como os solventes que dissolvem o polímero da presente invenção não são particularmente limitados aos exemplos acima mencionados. Para secar a solução de polímero após o revestimento, pode ser empregado um método incluindo remover o excesso de solvente por compressão mecânica ou por injeção de gás, como ar ou nitrogênio, e deixar o veículo revestido em ar seco ou sob pressão reduzida em temperatura atmosférica ou com aquecimento. Para aumentar a adesão do polímero da presente invenção ao veículo, a superfície do veículo pode ser tratada com um agente apropriado como um ácido ou álcali ou pode ser irradiada com plasma antes do revestimento. A adesão do polímero sobre o veículo pode ser ainda aumentada por um tratamento a quente após o revestimento com o polímero ou por pós-tratamento de irradiação da superfície revestida com radiação como raios-γ ou feixes de elétrons. A operação de revestimento pode ser realizada ou durante a fabricação do veículo ou após a fabricação do veículo.

A estrutura física do veículo revestido é conhecida para contribuir muito para remover uma proteína príon anormal e leucócito. Para melhorar a capacidade de remoção de proteína príon anormal e de leucócito, a seleção do veículo revestido também é um fator importante. Com relação a

uma estrutura física do veículo revestido, a área de superfície específica é de

2 2 2 1,0 m /g ou mais e 5,0 m /g ou menos, preferivelmente 1,1 m /g ou mais e 3,0

2 2 2 m /g ou menos, e mais preferivelmente 1,3 m /g ou mais e 2,0 m /g ou menos.

Se a área de superfície específica do veículo revestido for menor que 1,0

m2/g, é difícil remover leucócitos em uma eficiência elevada. Se a área de

superfície específica do veículo revestido exceder 5,0 m2/g, é impossível

produzir de modo uniforme um veículo revestido. No processamento de um produto usando um filtro de sangue na prática, dois ou mais veículos revestidos com uma área de superfície específica diferente são preferivelmente dispostos em tal modo que a área de superfície específica do veículo aumenta para o lado de abertura da saída.

Com relação a uma estrutura física do veículo revestido, a

porosidade é preferivelmente 65% ou mais e 90% ou menos, mais preferivelmente 75% ou mais e 88% ou menos. Se a porosidade for menor do que 65%, a taxa de filtração de sangue é diminuída, e é requerido um tempo mais longo para remover uma proteína príon anormal e leucócito. Entrementes, se a porosidade exceder 90%, o número de sítios de interseção entre as fibras, que podem aderir às proteínas príons anormais e leucócitos, é pequeno, resultando em baixas capacidade de remoção de proteína príon anormal e capacidade de remoção de leucócito. Quando um meio fibroso como um pano não tecido como o veículo revestido é usado, o diâmetro médio de fibra é de 0,3 μπι ou mais e 3,0 μηι ou menos, preferivelmente 0,5 μηι ou mais e 2,5 μηι ou menos, mais preferivelmente 1 μιη ou mais e 2 μηι ou menos. No processamento de um produto de sangue usando um filtro de sangue na prática, dois ou mais veículos revestidos com diâmetros médios de fibra diferentes são preferíveis dispostos de modo que o diâmetro médio de fibra dos veículos diminui para o lado de abertura da saída. No processamento de um produto de sangue usando um filtro de sangue na prática, um veículo com um diâmetro médio de fibra de 10 μηι ou mais e 40 μπι ou menos pode ser opcionalmente disposto sobre o lado de abertura da entrada do veículo revestido com um objetivo principal de remover os agregados finos.

- 25 O diâmetro médio de poro é um valor (tamanho de poro de fluxo

médio: MFP) obtido por medida para uma amostra de cerca de 50 mg usando porômetro Coulter R fabricado por Coulter Electronics. O diâmetro médio de poro é 1 μηι ou mais e 60 μηι ou menos, preferivelmente 1 μηι ou mais e 30 μπι ou menos, mais preferivelmente 1 μπι ou mais e 20 μιη ou menos. Se o diâmetro médio de poro for menor que 1 μπι, indesejavelmente, se torna difícil o produto de sangue total fluir, enquanto se o diâmetro médio de poro exceder 60 μπι, indesejavelmente, a capacidade de remoção de leucócito pode ser comprometida. No processamento de um produto de sangue usando um filtro de sangue na prática, dois ou mais veículos revestidos com diâmetros médios de poros diferentes são preferíveis, dispostos de modo que o diâmetro médio de poro dos veículos diminui para o lado de abertura da saída. No processamento de um produto de sangue usando um filtro de sangue na prática, um veículo com diâmetros médios de poro de 50 μπι ou mais e 200 μπι ou menos pode ser opcionalmente disposto sobre o lado de abertura da entrada do material de filtro com um objetivo principal de remover os agregados finos.

No processamento de um produto usando um filtro de sangue na prática, um veículo com um diâmetro médio de poro de 50 μπι ou mais e 200 μπι ou menos pode ser opcionalmente disposto sobre o lado de abertura da saída do veículo revestido com um objetivo principal de evitar um fluxo tortuoso.

Quando o meio fibroso é colocado em um recipiente para remover proteínas príons anormais e leucócitos, a densidade de enchimento é preferivelmente de 0,1 g/cm3 ou mais e 0,5 g/cm3 ou menos, e mais preferivelmente 0,1 g/cm3 ou mais e 0,3 g/cm3 ou menos. Um método de medir a densidade de enchimento é descrito a título de um exemplo. Um pano não tecido a ser carregado é cortado em pedaços com tamanho de enchimento (cm ), e pesos (g) dos pedaços sendo medidos. A densidade pode ser determinada a partir da distância (cm) do material comprimido no recipiente real.

Se o diâmetro médio de fibra for menor que 0,3 μπι, o diâmetro médio de poro é menor que 1 μπι, ou a densidade de enchimento é maior que 0,5 g/cm , o filtro pode ser obstruído com células sangüíneas ou a perda da pressão pode ser aumentada. Se o diâmetro médio de fibra for maior que 3,0 μιτι, o diâmetro médio de poro é maior que 60 μηι, ou a densidade de enchimento é menor que 0,1 g/cm3, indesejavelmente, a capacidade de remoção de proteína príon anormal e de leucócito pode ser diminuída.

Uma membrana porosa ou um material estrutural de tipo esponja tendo uma rede tri-dimensional de poros contínuos usados como um veículo revestido preferivelmente tem um diâmetro médio de poro de 1 μιτι ou mais e 60 μιη ou menos, preferivelmente 5 μιτι ou mais e 50 μιη ou menos, mais preferivelmente 10 μιτι ou mais e 40 μιτι ou menos. Se o diâmetro médio de poro for menor do que 1 μιτι, o filtro pode ser obstruído com células sangüíneas ou a perda da pressão pode ser indesejavelmente provocada. Se o diâmetro médio de poro for maior do que 60 μιη, a capacidade de remoção de leucócito declina indesejavelmente.

O termo "proteína príon anormal" na presente invenção significa uma proteína príon anormal variante que é conhecida como causando uma doença chamada encefalopatia espongiforme em humanos e animais. A proteína príon anormal tem a mesma seqüência de aminoácido que a de um príon normal, mas tem uma conformação rica em β-folha e é resistente à digestão com protease K. As proteínas príons anormais podem infectar animais de modo a causar paraplexia enzoótica que é uma doença degenerativa infecciosa do sistema nervoso de ovelhas e cabras e BSE em gado. No caso de humano, as proteínas príons anormais podem causar doença de Creutzfeldt-Jakob esporádica (sCJD), doença de Creutzfeldt-Jakob iatrogênica, síndrome de Gerstmann-Straeussler-Scheinker (GSS), insônia familiar fatal (FFI), Kuru, e CJD variante conhecida como sendo transmitida através de carne com BSE. As proteínas príons anormais a serem usadas na presente invenção incluem todos os tipos de proteínas príons anormais que podem causar qualquer uma ou todas as doenças acima mencionadas em qualquer animal, particularmente em humano e animais domésticos. De fato, de acordo com o relatório por Samuel Coker in Cambridge Healthtech Institufs IOth Annual Transmissible Spongiform Encephalopathies - The Definitive American TSE Meeting - em março de 2006, as proteínas príons anormais derivadas de CJD variante de paraplexia enzoótica e CJD esporádico são removidas no mesmo grau usando um filtro (LAPRF, fabricado por Pall), e não se nota uma diferença significante nas relações de remoção. Isto sugere que as estruturas da proteína das proteínas príons anormais com relação à capacidade de remoção do filtro são quase iguais mesmo se as espécies de animais ou doenças forem diferentes, e que a relação de remoção de uma proteína príon anormal derivada de humano pode ser estimada com base na relação de remoção de uma proteína príon anormal derivada de um animal.

O termo "filtro" na presente invenção significa um produto obtido por enchimento de um recipiente para um produto de sangue tendo uma abertura de entrada e uma abertura de saída com o veículo revestido da presente invenção, e se pode dispor um veículo para capturar agregados diminutos no lado a montante do produto de sangue ou no lado a jusante.

O material do recipiente pode ser ou uma resina dura ou uma resina flexível. No caso da resina dura, exemplos podem incluir uma resina fenol, uma resina acrílica, uma resina epóxi, uma resina formaldeído, uma resina uréia, uma resina de silício (silicone), uma resina ABS, náilon, um - 25 poliuretano duro, policarbonato, cloreto de vinila, polietileno, polipropileno, e poliéster etc. No caso da resina flexível, materiais obtidos por formação de uma abertura de entrada e uma abertura de saída de um produto de sangue em folhas formadas de uma resina sintética flexível, então soldando as partes resultantes nas partes periféricas, ou um produto moldado cilíndrico tendo uma abertura de entrada e uma abertura de saída de um produto de sangue pode ser usado. No caso onde o material é aderido ao recipiente com o veículo de revestimento, os tendo propriedades elétricas, térmicas, similares, são preferidos. Exemplos de materiais apropriados incluem poliolefinas como cloreto de polivinila macio, poliuretano, copolímero de etileno - acetato de vinila, polietileno e polipropileno, elastômeros termoplástico como copolímero de estireno hidrogenado -butadieno-estireno, copolímero de estireno-isopreno-estireno ou produtos hidrogenados dos mesmos, e misturas do elastômero termoplástico e um agente de amolecimento como poliolefina ou etileno- acrilato de etila, ou outros. Dentre estes, cloreto de polivinila macio, poliuretano, copolímero de etileno - acetato de vinila, poliolefina, e o elastômero termoplástico contendo os mesmos como o componente principal são mais preferíveis, com cloreto de polivinila macio e poliolefina sendo particularmente preferíveis.

Não se notam limitações específicas no tipo da forma do recipiente desde que o recipiente tenha uma forma com uma abertura de entrada de um produto de sangue e uma abertura de saída de um produto de sangue do qual a proteína príon anormal e leucócito são removidos, mas a forma preferivelmente depende da forma do veículo. Por exemplo, no caso de usar um veículo na forma de uma placa, o recipiente pode ter uma forma plana incluindo uma forma poligonal como forma quadrilátera ou hexagonal, ou uma curva, como uma forma redonda ou uma forma oval. Mais especificamente, o recipiente inclui um recipiente no lado da abertura de - 25 entrada, tendo uma abertura de entrada de um produto de sangue, e um recipiente no lado de abertura de saída, tendo uma abertura de saída de um produto de sangue e tendo uma forma onde ambos os recipientes ensanduícham o veículo diretamente ou via um corpo de suporte para dividir o interior do veículo em duas partes, assim formando um filtro plano. Alternativamente, no caso de usar um veículo na forma cilíndrica, o recipiente tem preferivelmente a forma cilíndrica. Mais especificamente, o recipiente inclui um corpo cilíndrico onde o veículo é compactado, um coletor no lado da abertura de entrada tendo uma abertura de entrada de um produto de sangue, e um coletor no lado de abertura de saída tendo uma abertura de saída de um produto de sangue. O recipiente tem uma forma, cujo interior é dividido em duas partes por processamento do envoltório de modo que um líquido introduzido a partir da abertura de entrada flui a partir da periferia externa para dentro da periferia interna (ou da periferia interna para fora para a periferia externa) do veículo cilíndrico, assim formando um filtro cilíndrico.

O termo "produto de sangue" na presente invenção genericamente significa um líquido incluindo sangue total que pode conter uma proteína príon anormal ou um ou mais componentes de sangue preparados a partir do sangue total, ou um líquido obtido por adição de um anticoagulante ou solução de conservante no líquido. Exemplos específicos dos mesmos incluem, mas não são limitados para, um produto de sangue total, produto de eritrócitos, produto de plaquetas, produto de plasma, suspensão de eritrócitos lavados, solução de eritrócitos concentrados descongelados, sangue sintético, plasmas ricos em plaquetas, e a fração de uma amostra de sangue anticoagulado ("bufíy coat").

O termo "produto de sangue total" na presente invenção significa um produto de sangue obtido por adição de uma solução de conservante ou anticoagulante como citrato fosfato dextrose (CPD), citrato fosfato dextrose - 25 adenina-1 (CPDA-1), citrato fosfato -2-dextrose (CP2D), fórmula A ácido citrato dextrose (ACD-A), fórmula B ácido citrato dextrose (ACD-B), ou heparina para sangue total coletado de um doador.

Abaixo, um método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue da presente invenção é descrito, focalizando nos procedimentos. Primeiro, uma forma de realização de um método de preparação de vários produtos de sangue é descrito, o que não se destina a limitar a presente invenção.

(Preparação de produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal)

Uma solução de conservante ou anticoagulante como CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A, ACD-B, ou heparina é adicionada a um sangue total coletado, e a solução é filtrada usando um filtro da presente invenção para remover uma proteína príon anormal do sangue total, para assim preparar um produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal.

O produto de sangue total é filtrado usando um sistema incluindo pelo menos uma bolsa contendo sangue total, um filtro, e uma bolsa para recuperar um produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, que são assepticamente conectados via linhas nesta ordem (FIG. 1). O sistema pode ser conectado a uma agulha de coleta de sangue, uma bolsa de coleta de sangue, uma bolsa para separar os componentes após centrifugação, ou uma linha para recuperação de um produto de sangue permanecendo no filtro. Uma proteína príon anormal pode ser removida por filtração realizada por passagem de um produto de sangue por um filtro via um tubo de uma bolsa contendo o produto de sangue localizado na posição superior à de um filtro por força de gravidade, ou por passagem do produto de sangue usando um aparelho como uma bomba do lado de abertura de entrada do filtro sob pressão aumentada e/ou do lado de saída do filtro sob pressão reduzida. O método de filtração pode ser aplicado não somente aos produtos de sangue total, mas também a outros produtos de sangue.

No caso onde uma proteína príon anormal é removida antes do armazenamento para preparar um produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, uma proteína príon anormal é removida usando o filtro da presente invenção em temperatura ambiente ou em refrigeração preferivelmente no prazo de 72 horas, mais preferivelmente no prazo de 24 horas, particularmente preferivelmente no prazo de 12 horas, o mais preferivelmente no prazo de 8 horas após coleta de sangue total que é então armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração. No caso onde uma proteína príon anormal é removida após armazenamento para preparar um produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, uma proteína príon anormal é removida usando o filtro no prazo de preferivelmente 24 horas antes do uso. Na presente invenção, um produto de sangue total não contendo nem proteína príon anormal nem leucócitos pode ser preparado.

(Preparação de produto de eritrócitos com remoção de proteína príon anormal)

Uma solução de conservante ou anticoagulante como CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A, ACD-B, ou heparina é adicionada a um sangue total coletado. Exemplos do método de separação seqüencial em componentes incluem: um método incluindo remover uma proteína príon anormal de sangue total e então realizar a centrifugação; e um método incluindo a centrifugação do sangue total e então removendo uma proteína príon anormal do eritrócito ou eritrócito e fração de uma amostra de sangue anticoagulado ("buffy coat", a seguir referido como "BC").

No caso onde a centrifugação é realizada após remoção de uma proteína príon anormal de sangue total, um produto de eritrócitos com remoção de proteína príon anormal é obtido por preparação de um sangue - 25 total com remoção de proteína príon anormal, do mesmo modo como na preparação do produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, centrifugação de sangue total com remoção de proteína príon anormal e recuperação de um eritrócito concentrado na camada inferior. No caso onde sangue total é centrifugado antes da remoção de uma proteína príon anormal, podem ser empregadas duas condições de centrifugação: condições de centrifugação suaves para separar o sangue em eritrócitos e plasma rico em plaquetas (PRP) e condições de centrifugação fortes para separar o sangue em eritrócitos, BC, e plasma pobre em plaquetas (PPP). Se necessário, uma solução de conservante como solução salina de adenina glucose manitol (SAGM), solução de aditivo 1 (AS-1), solução de aditivo 3 (AS-3), solução de aditivo 5 (AS-5), ou manitol adenina fosfato (MAP) é adicionada para eritrócitos separados e recuperados do sangue total, ou eritrócitos contendo BC, e um produto de eritrócitos pode ser filtrado usando o filtro da presente invenção, para assim preparar um produto de eritrócitos com remoção de proteína príon anormal.

Na preparação de um produto de eritrócitos com remoção de proteína príon anormal, a centrifugação é realizada no prazo de preferivelmente 72 horas, mais preferivelmente 48 horas, particularmente preferivelmente 24 horas, o mais preferivelmente 12 horas de coleta of sangue total em temperatura ambiente ou em refrigeração. No caso onde uma proteína príon anormal é removida antes do armazenamento, um produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal é preparado por remoção de uma proteína príon anormal usando um filtro no prazo de preferivelmente 120 horas, mais preferivelmente 72 horas, particularmente preferivelmente 24 horas, o mais preferivelmente 12 horas de coleta de sangue de um produto de eritrócitos armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração. No caso onde uma proteína príon anormal é removida após armazenamento, a proteína • 25 príon anormal é removida de um produto de eritrócitos armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração no prazo de preferivelmente 24 horas antes do uso, para assim preparar um produto de eritrócitos com remoção de proteína príon anormal. (Preparação do produto de plaquetas com remoção de proteína príon anormal)

Uma solução de conservante ou anticoagulante como CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A, ACD-B, ou heparina é adicionada para um sangue total coletado.

Exemplos do método de separação seqüencial em componentes incluem: um método incluindo remover uma proteína príon anormal de sangue total e então realizar a centrifügação; e um método incluindo centrifugar sangue total e então remover uma proteína príon anormal de PRP ou plaqueta.

No caso onde a centrifügação é realizada após remoção de uma proteína príon anormal de sangue total, um produto de plaqueta com remoção de proteína príon anormal é obtido por preparação de sangue total com remoção de proteína príon anormal, do mesmo modo como na preparação do produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, centrifügação de sangue total com remoção de proteína príon anormal, recuperação de PRP na camada superior, centrifügação da camada superior, e recuperação de plaqueta concentrada (PC) na camada inferior.

No caso onde sangue total é centrifugado antes da remoção de uma proteína príon anormal, podem ser empregadas duas condições de centrifügação: condições de centrifügação suaves para separar o sangue em eritrócitos e PRP e condições de centrifügação fortes para separar o sangue em eritrócitos, BC, e PPP. No caso das condições de centrifügação suaves, um produto de plaqueta com remoção de proteína príon anormal é preparado por filtração de PRP separado de sangue total usando um filtro para remover uma proteína príon anormal, centrifügação do filtrado novamente, e recuperação de PC na camada inferior, ou por centrifügação de PRP para separar plaqueta e PPP e filtrar PC na camada inferior usando um filtro para remover uma proteína príon anormal. No caso da centrifugação forte, um produto de plaqueta com remoção de proteína príon anormal é preparado por, se necessário, adição de uma solução de conservante ou plasma para BC que foi separado do sangue total e coletado em uma quantidade de uma a várias dezenas de unidades, centrifugação da solução, recuperação da camada superior para preparar uma plaqueta concentrada, e filtração da plaqueta usando um filtro para remover uma proteína príon anormal.

Na preparação de um produto de plaqueta com remoção de proteína príon anormal, sangue total armazenado em temperatura ambiente é coletado no prazo de preferivelmente 24 horas, mais preferivelmente 12 horas, particularmente preferivelmente 8 horas de coleta de sangue total. No caso onde uma proteína príon anormal é removida, um produto de sangue total de plaqueta com remoção de proteína príon anormal é preparado por remoção de uma proteína príon anormal usando um filtro no prazo de preferivelmente 120 horas, mais preferivelmente 78 horas, particularmente preferivelmente 24 horas, o mais preferivelmente 12 horas de coleta de um produto de plaqueta que é então armazenado em temperatura ambiente. No caso onde uma proteína príon anormal é removida após armazenamento, a proteína príon anormal é removida por um filtro de um produto de plaqueta sendo armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração no prazo de preferivelmente 24 horas antes do uso, para assim preparar um produto de plaqueta com remoção de proteína príon anormal.

(Preparação de produto de plasma com remoção de proteína príon anormal)

Uma solução de conservante ou anticoagulante como CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A, ACD-B, ou heparina é adicionada a um sangue total coletado.

Exemplos do método de separação subsequente nos componentes incluem: um método incluindo remover uma proteína príon anormal do sangue total e então realizar a centrifugação; e um método incluindo centrifugar sangue total e então remover uma proteína príon anormal de PPP ou PRP.

No caso onde a centrifugação é realizada após remoção de uma

proteína príon anormal de sangue total, um produto de plasma com remoção de leucócitos é obtido por preparação de um sangue total com remoção de proteína príon anormal, do mesmo modo como na preparação do produto de sangue total com remoção de proteína príon anormal, centrifugação de sangue total com remoção de proteína príon anormal, e recuperação do plasma na camada superior.

No caso onde sangue total é centrifugado antes da remoção de uma proteína príon anormal, podem ser empregadas duas condições de centrifugação: condições de centrifugação suaves para separar o sangue em eritrócitos e PRP e condições de centrifugação fortes para separar o sangue em eritrócitos, BC, e PPP. No caso das condições de centrifugação suaves, um produto de plasma com remoção de proteína príon anormal é preparado por filtração de PRP usando um filtro para remover uma proteína príon anormal, após filtração de PRP, centrifugação do filtrado novamente, e recuperação de PPP no sobrenadante, ou por separação de PRP em PPP e plaqueta por centrifugação e filtração de PPP usando um filtro para remover uma proteína príon anormal. No caso da condições de centrifugação fortes, um produto de plasma com remoção de proteína príon anormal é preparado por filtração de PPP usando um filtro para remover uma proteína príon anormal. Na preparação de um produto de plasma com remoção de

proteína príon anormal, sangue total armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração é centrifugado no prazo de preferivelmente 72 horas, mais preferivelmente 48 horas, particularmente preferivelmente 24 horas, o mais preferivelmente 12 horas de coleta de sangue total. Alternativamente, um produto de plasma com remoção de proteína príon anormal é preparado por remoção de uma proteína príon anormal usando um filtro no prazo de preferivelmente 120 horas, mais preferivelmente 72 horas, particularmente preferivelmente 24 horas, o mais preferivelmente 12 horas de coleta de sangue de um produto de plasma que é então armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração. No caso onde uma proteína príon anormal é removida após armazenamento, a proteína príon anormal é removida por um filtro de um produto de plasma armazenado em temperatura ambiente ou em refrigeração no prazo de preferivelmente 24 horas antes do uso, para assim preparar um produto de plasma com remoção de proteína príon anormal.

O termo "filtro de remoção de leucócitos" na presente invenção significa um filtro capaz de remover leucócitos por filtração de um produto de sangue em uma taxa de 99% ou mais, preferivelmente 99,9% ou mais, mais preferivelmente 99,99% ou mais. No caso onde a capacidade do filtro é reformulada como a capacidade de remoção de leucócitos, o filtro mostra um valor calculado de acordo com a seguinte fórmula (1). Isto é, o filtro tem capacidade de remoção de leucócitos de 2 ou mais, preferivelmente 3 ou mais, mais preferivelmente 4 ou mais.

Capacidade de remoção de leucócitos = -Logi0 {[Concentração de leucócito (células/^L) (sangue após filtração)]

/[Concentração de leucócito (células/μΐ) (sangue antes da filtração)]} (1)

O método de esterilizar o filtro da presente invenção inclui: esterilização com gás de óxido de etileno; esterilização por radiação como esterilização com raios-γ ou esterilização com feixe de elétrons; e esterilização em autoclave. A esterilização por radiação ou esterilização em autoclave é mais preferível. Para prover a capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada de um produto de sangue total, um filtro é preferivelmente submetido a tanto a esterilização por radiação como a esterilização em autoclave. Não existe uma ordem entre a esterilização por radiação e esterilização em autoclave mas, mais preferivelmente, a esterilização em autoclave é realizada após a esterilização por radiação. Uso de um veículo revestido com polímero submetido à esterilização em autoclave pode diminuir a quantidade de uma proteína príon anormal adsorvida no veículo revestido com o polímero em um produto de sangue total. Isto é provavelmente causado por adsorção competitiva com proteínas no produto de sangue total porque a esterilização em autoclave não induz mudanças em propriedades químicas do polímero sobre a superfície do veículo. Por outro lado, no caso da esterilização por radiação, a capacidade de remoção de príon elevada pode ser proporcionado mesmo em um produto de sangue total. A razão não é clara, mas é concebível que a esterilização por radiação para o filtro cause mudanças nas propriedades químicas do polímero sobre a superfície do veículo, resultando em estado de carga preferível e equilíbrio da composição das três unidades no polímero para adsorção da proteína príon anormal. No entanto, surpreendentemente, os inventores da presente invenção verificaram que a capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada pode ser provida em um produto de sangue total mesmo se a esterilização em autoclave for realizada, se esta ocorrer após a esterilização por radiação. Estima-se que, se a esterilização em autoclave for realizada após a esterilização por radiação, especificidade de adsorção para uma proteína príon anormal é mantida de modo a proporcionar uma capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada, sem levar em conta a esterilização em - 25 autoclave. No caso de usar um conjunto de tipo em linha, se somente um filtro for submetido a esterilização por radiação antes, a capacidade de remoção de proteína príon anormal elevada pode ser proporcionada mesmo após a esterilização em autoclave. [Exemplos]

A presente invenção é descrita em maiores detalhes por exemplos, que não se destinam a limitar a da presente invenção.

Os valores numéricos usados nos exemplos e exemplos comparativos foram medidos pelos seguintes métodos.

r

(Area de superfície específica de material de filtro)

O termo "área de superfície específica" (m2/g)" na presente invenção significa uma área de superfície por peso unitário de um pano não tecido, que é determinado por um método de adsorção de gás (método BET) usando "Accusorb 2100" (fabricado por Shimadzu Corp.) ou um equivalente. A área de superfície específica é determinada por: enchimento de um tubo de amostra com 0,50 g a 0,55 g de um veículo; desaeração do tubo em um nível de pressão reduzida de IxlO"4 mmHg (em temperatura ambiente) durante 20 horas no aparelho Accusorb; adsorção de gás krypton tendo uma área de adsorção conhecida como um gás de adsorção na superfície de um pano não tecido em uma temperatura equivalente à temperatura de nitrogênio líquido; cálculo da área de superfície total no pano não tecido com base na quantidade adsorvida; e divisão da área de superfície total pelo peso do pano não tecido.

(Medida de diâmetro médio de fibra)

As fotografias microscópicas eletrônicas foram tomadas em cinco pontos aleatoriamente de um pano não tecido. Uma folha transparente em que uma grade foi desenhada foi colocada em camadas sobre cada fotografia. O diâmetro do fio nos pontos de cruzamento da grade foi medido (n = 100), e o diâmetro médio foi determinado por conversão do diâmetro medido usando, como uma escala, látex de poliestireno do qual se conhece o diâmetro.

(Quantidade de polímero por área de unidade da área de superfície total de material) O termo "área de superfície total" (m2) do material" na presente invenção refere-se a um valor obtido por multiplicação do peso (g) do material pela área de superfície específica (m2/g) do material. A quantidade de polímero (mg/m2) por área unitária (m2) da área de superfície total do material da presente invenção é determinada por análise de RMN de uma solução de uma determinada área (peso) do material dissolvido em um solvente deuterado comum ao veículo e agente de revestimento. Por exemplo, uma quantidade prescrita de um material incluindo um pano não tecido de poliéster revestido com um polímero contendo metacrilato de metila, metacrilato de dimetilaminoetila, e metacrilato de 2-hidróxi foi dissolvida em 1,1,1,3,3,3- hexafluoro-2-propanol deuterado. A relação de intensidade dos sinais claramente pertencendo no pano não tecido (por exemplo, próton em anel benzeno) e os sinais claramente pertencendo ao material de revestimento (por exemplo, próton no grupo metila adjacente a metacrilato de metila) foi determinada. Então, a quantidade de polímero por peso unitário do pano não tecido foi determinada a partir da relação de intensidade e uma composição de copolimerização determinada separadamente do material de revestimento. A quantidade de polímero por peso unitário do pano não tecido pode ser convertida na quantidade de polímero pela área de superfície total do material usando uma área de superfície específica do material carregado no filtro.

(Teste de filtração de sangue: Exemplos 1 a 13 e exemplos comparativos 1 a 9)

Produtos de eritrócitos foram usados como produtos de sangue para avaliação do sangue, e cada produto foi obtido por: adicionar 14 mL de uma solução CPD servindo como um anticoagulante a 100 mL de sangue imediatamente após coletar o sangue; misturar a mistura; armazenar a mistura em refrigeração durante 72 horas; centrifugar a mistura; adicionar SAGM nos eritrócitos separados contendo BC; e deixar a mistura permanecer durante 1 hora (abaixo, referido como "sangue antes da filtração").

O filtro usado para avaliação foi obtido por enchimento de um recipiente com um pano não tecido de poliéster C (diâmetro médio de fibra: 1,2 μπι, peso do substrato por área unitária: 40 g/m2, área de superfície específica: 1,47 m2/g) revestido com um polímero preparado em cada um dos exemplos e exemplos comparativos (sem revestimento em exemplo comparativo 6). Uma coluna (área de filtração efetiva: 1,3 cm2) foi carregada com oito panos não tecidos revestidos, e uma seringa cheia com sangue antes da filtração foi conectada na entrada da coluna via um tubo de cloreto de vinila (diâmetro interno: 3 mm, diâmetro externo: 4,2 mm). Então, o sangue foi passado através da coluna em uma taxa de fluxo de 0,175 mL/min usando uma bomba de seringa em um refrigerador e recuperado em uma quantidade de 3 mL (abaixo, referido como "sangue após filtração"). Os panos não tecidos revestidos (sem revestimento no exemplo comparativo 6) foram submetidos a: esterilização por raios-γ a 25 KGy nos exemplos 1 a 5 e 11 e exemplos comparativos 1 a 9; esterilização com feixe de elétrons a 30 KGy nos exemplos 8 e 12; esterilização em autoclave a 115°C durante 59 minutos nos exemplos 6, 7, 10, e 13; esterilização com feixe de elétrons a 30 KGy e então esterilização em autoclave a 115°C durante 59 minutos no exemplo 9; e sem esterilização no exemplo comparativo 10.

[Capacidade de remoção de leucócitos]

A capacidade de remoção de leucócitos foi calculada pela fórmula (1) acima com base nas concentrações de leucócitos antes e após a filtração. As concentrações de leucócito foram medidas por um método de citometria de fluxo (aparelho: FACSCalibur fabricado por BECTON DICKINSON) para 100 μΐ de cada amostra sangüínea usando um kit Leucocount contendo glóbulos (fabricado por Nippon Becton Dickinson Company, Ltd.). [Pressão de processamento do sangue]

A pressão de processamento do sangue foi medida no final de filtração usando um indicador de pressão conectado ao tubo no lado da entrada da coluna.

[Nível de hemólise de sangue após filtração]

O nível de hemólise de sangue após filtração foi calculado com base em um nível de hemoglobina livre no plasma com relação ao nível de hemoglobina total em um produto de eritrócitos após um lapso de 42 dias da filtração.

O método específico de calcular o nível de hemólise é como a

seguir.

(1)O teor de hemoglobina total (g/dL) e nível de hematócritos (%) em um produto de eritrócitos após filtração são determinados usando um contador automático de células sangüíneas.

(2) Uma amostra de um produto de eritrócitos após filtração é recuperado em uma quantidade de 2 mL e centrifugado a 1.750 χ g durante 10 minutos.

(3) Absorbâncias do sobrenadante são medidas por varredura em comprimentos de onda entre 630 nm e 500 nm usando um espectrofotômetro.

(4) A concentração de hemoglobina livre no plasma é calculada de acordo com um método descrito em Clin. Biochem. 8, 96 - 102 (1975).

(5) O nível de hemólise é calculado pela fórmula (2) abaixo.

Nível de hemólise (%) = (100 - nível hematócritos (%))

χ (concentração de hemoglobina livre (g/dL))/concentração de hemoglobina total (g/dL) (2)

(Avaliação de capacidade de remoção de proteína príon anormal: Exemplos 1 a 13 e Exemplos Comparativos 1, 3, 5 a 8, e 10)

[Preparação de filtro] Um pano não tecido de poliéster P (diâmetro médio de fibra: 12 μηι, peso do substrato por área unitária: 30 g/m2, área de superfície específica: 0,24

m /g), um pano não tecido de poliéster A (diâmetro médio de fibra: 2,5 μιη, peso do substrato por área unitária: 60 g/m2, área de superfície específica: 0,8

m /g), um pano não tecido de poliéster B (diâmetro médio de fibra: 1,8

μιη, peso do substrato por área unitária: 60 g/m2, área de superfície específica:

1,1 m /g), e um pano não tecido de poliéster C (diâmetro médio de fibra: 1,2

μιη, peso do substrato por área unitária: 40 g/m2, área de superfície específica: 2 β

1,47 m /g) revestido com um polímero preparado em cada um dos exemplos e exemplos comparativos (sem revestimento no exemplo comparativo 6) foram usados como meios de filtro. Os meios de filtro Ρ, A, B, e C foram laminados na ordem de P-A-B-C do lado a montante, e B' (o mesmo meio de filtro como B), A' (o mesmo meio de filtro como A), e P' (o mesmo meio de filtro como P) foram ainda laminados no lado a jusante, para assim preparar um meio de filtro tendo uma estrutura simétrica de P-A-B-C-B'-A'-P'. O meio de filtro resultante foi ensanduichado entre folhas de resina de cloreto de vinila flexível com aberturas servindo como uma entrada ou saída de sangue, e a borda periférica entre o meio de filtro e a folha flexível foi aderida e integrada usando um dispositivo de solda de alta freqüência, para assim preparar um filtro com uma área de fíltração efetiva de 56 cm2.

Os filtros resultantes foram submetidos a: esterilização com raios-γ a 25 KGy nos exemplos 1 a 5 e 11 e exemplos comparativos 1 a 9; esterilização com feixe de elétrons a 30 KGy nos exemplos 8 e 12; esterilização em autoclave a 115°C durante 59 minutos nos exemplos 6, 7, 10, e 13; esterilização com feixe de elétrons a 30 KGy e então a esterilização em autoclave a 115°C durante 59 minutos no exemplo 9; e sem esterilização no exemplo comparativo 10.

[Preparação de cérebro de hamster infectado com paraplexia enzoótica ("scrapie")]

Uma proteína príon anormal chamada Sc237, derivada de uma passagem do hamster 263K a ser usado para desenvolver paraplexia enzoótica foi inoculada em um hamster, e após um lapso de 65 dias a 70 dias, o cérebro do hamster foi removido e usado como um cérebro de hamster infectado com paraplexia enzoótica dos ovinos.

[Preparação de homogenado]

O cérebro de hamster infectado com paraplexia enzoótica foi sonicado em 320 mM de sacarose para preparar um homogenado a 10 % em peso (g)/volume (100 ml) (abaixo, referido como um "% P/V"). O homogenado foi centrifugado a 4°C e 80 χ g durante 1 minuto e usado como um homogenado a ser adicionado (abaixo, abreviado como "homogenado").

[Preparação de fração microssômica]

O homogenado foi centrifugado a 5.000 χ g durante 20 minutos, e o sobrenadante foi ainda centrifugado a 100.000 χ g durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em uma solução (150 mM de NaCl, 20 mM de Tris-HCl, pH 7,4), e a suspensão foi centrifugada a 100.000 χ g durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em pH 7,4 PBS (solução salina de fosfato tamponado) para preparar uma fração microssômica a ser adicionada (abaixo, abreviada como "fração microssômica").

[Método de determinação de concentração de protease K 1: Exemplos 1, 2, 4, e 13] (Amostra não tratada com protease K)

50 μΐ. do homogenado e 50 μί de um produto de eritrócitos contendo o homogenado foram separadamente misturados em 450 μΐ, cada de um tampão de amostra, e as misturas resultantes foram incubadas a IOO0C ± 50C durante 5 a 10 minutos ou a 70°C a 80°C durante 10 a 15 minutos.

(Amostra tratada com protease K) 50 μί do homogenado e 50 μΐ, de um produto de eritrócitos contendo o homogenado foram separadamente misturados em soluções com concentrações diferentes de protease K e 0,6 a 1% Sarkosyl, e as misturas foram incubadas a 37°C ± 4°C durante 1 hora ± 5 minutos. 300 μΐ, do tampão de amostra foram adicionados ai, e as misturas foram separadamente incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos ou a 70°C a 80°C durante 10 a 15 minutos.

As amostras sem tratamento com protease K e as amostras com tratamento com protease K foram analisadas por Western blotting para determinar as concentrações mínimas de protease K de modo que proteínas capazes de reagir não especificamente com um anticorpo e a proteína príon anormal foram completamente decompostas por protease K e assim não detectadas, todavia uma proteína príon anormal foi detectada.

[Método de determinação de concentração de protease K 2: Exemplos 3 e 6 e Exemplos Comparativos 5, 6, e 10]

(Amostra não tratada com protease K)

mL de um produto de sangue contendo a fração microssômica e mL de um produto de sangue contendo uma proteína príon anormal foram separadamente centrifugados a 4.000 χ g durante 20 minutos. Então, 3 mL dos sobrenadantes foram centrifugados a 100.000 χ g e 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μί de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

(Amostra tratada com protease K)

mL de um produto de sangue contendo a fração cromossômica e 5 mL de um produto de sangue contendo um príon normal foram separadamente centrifugados a 4.000 χ g durante 20 minutos. Soluções com concentrações diferentes de protease K foram misturadas em 3 mL dos sobrenadantes, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μί do tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a 1OO0C ± 50C durante 5 a 10 minutos.

As amostras sem tratamento com protease K e as amostras com tratamento com protease K foram analisadas por Western blotting para determinar as concentrações mínimas de protease K de modo que proteínas capazes de reagir não especificamente com um anticorpo e príon normal foram completamente decompostas por protease K e assim não detectadas, todavia uma proteína príon anormal foi detectada.

[Método de determinação de concentração de protease K 3: Exemplo 5 e Exemplos Comparativos 1, 3, 7, e 8]

(Amostra não tratada com protease K)

50 \\L de plasma contendo uma fração microssômica e 50 μι de plasma foram separadamente misturados em 50 μΙ. de um tampão de amostra, e as misturas foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

(Amostra tratada com protease K)

Soluções com concentrações diferentes de protease K foram misturadas em 3 mL de plasma contendo um homogenado preparado a partir do cérebro de um hamster não infectado com paraplexia enzoótica e 3 mL de plasma contendo uma fração microssômica preparada a partir do cérebro de um hamster infectado com paraplexia enzoótica, e as misturas foram centrifugadas a 20.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Após centrifugação, 100 μΐ, de um tampão de amostra foram adicionados aos precipitados resultantes e deixados reagir a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

[Método de determinação de concentração de protease K 4: Exemplos 7 a 9]

Um produto de sangue total após remoção de leucócitos foi centrifugado a 4.000 χ g durante 30 minutos, e 1,3 ml de uma fração microssômica foi adicionado a 11,7 ml do sobrenadante resultante (abaixo, referido como um "sangue de pré-filtração suplementado"), enquanto nenhum composto foi adicionado a 12 ml do sobrenadante (abaixo, referido como "sangue de pré-filtração não suplementado").

(Amostra não tratada com protease K)

3 mL de sangue de pré-filtração suplementado e 3 mL de sangue de pré-filtração não suplementado foram separadamente centrifugados a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μΙ. de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

(Amostra tratada com protease K)

1 a 2% (p/v) Sarkosyl e soluções com concentrações diferentes de protease K foram misturados em 3 mL do sangue de pré-filtração suplementado ou 3 mL do sangue de pré-filtração não suplementado, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μL do tampão de amostra, e as suspensões foram separadamente incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

As amostras sem tratamento com protease K e as amostra com tratamento com protease K foram analisadas por Western blotting para determinar as concentrações mínimas de protease K de modo que proteínas capazes de reagir não especificamente com um anticorpo e proteína príon anormal foram completamente não detectáveis devido à protease K, todavia uma proteína príon anormal foi detectada.

[Método de determinação de concentração de protease K 5: Exemplos IOa 12]

Um produto de eritrócitos após remoção de leucócitos foi centrifugado a 4.000 χ g durante 30 minutos, e 1,3 ml de uma fração microssômica foram adicionados a 11,7 ml do sobrenadante resultante (abaixo, referido como "sangue de pré-filtração suplementado"), enquanto nenhum composto foi adicionado a 12 ml do sobrenadante (abaixo, referido como sangue de pré-filtração não suplementado").

(Amostra não tratada com protease K)

3 mL de sangue de pré-filtração suplementado e 3 mL de sangue de pré-filtração não suplementado foram separadamente centrifugados a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μί de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

(Amostra tratada com protease K)

1 a 2% (p/v) Sarkosyl e soluções com concentrações diferentes de protease K foram misturados em 3 mL do sangue de pré-filtração suplementado ou 3 mL do sangue de pré-filtração não suplementado, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados resultantes foram recolocados em suspensão em 100 μί do tampão de amostra, e as suspensões foram separadamente incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

As amostras sem tratamento com protease K e as amostras com tratamento com protease K foram analisadas por Western blotting para determinar as concentrações mínimas de protease K de modo que proteínas capazes de reagir não especificamente com um anticorpo e uma proteína príon normal foram completamente não detectáveis devido à protease K, todavia uma proteína príon anormal foi detectada.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 1: Exemplos 1, 2, 4, e 13]

Um produto de eritrócitos fabricado sob um padrão europeu foi adquirido e usado. Um homogenado foi adicionado ao produto de eritrócitos em uma quantidade de 13 mL com relação a 1 unidade do produto de eritrócitos em temperatura ambiente, para assim preparar sangue de pré- filtração suplementado. A solução resultante foi filtrada usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster C revestido com os polímeros, preparado em cada um dos exemplos 1, 2, 4, e 13 por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado para preparar um sangue de pós- filtração suplementado. Primeiro, cada um dentre o sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foi dissolvido em um lisado celular (preparado por dissolução de 11,45 g de oxalato de amônio, 433 mg de fosfato de di-hidrogênio de potássio, e 567 mg de fosfato de mono- hidrogênio dissódico em 1 L de água destilada para injeção). Cada um dentre o sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foi misturado com o lisado celular em uma relação de volume de 1:3, e a mistura foi dissolvida em temperatura ambiente durante 30 minutos. Após dissolução, sonicação (15 ± 5 segundos cada tempo, 50 ± 10% força) foi realizada três vezes com pausas de 30 ± 10 segundos. Uma solução de protease K com uma concentração determinada no método 1 de - 25 determinação de concentração de protease K e 0,6 a 1% Sarkosyl foram adicionados em cada um dentre o sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado, e a decomposição com protease K foi realizada a 37°C ± 3°C durante 1 hora ± 5 minutos e então parada por adição de 10 mM Pefabloc. A seguir, a mistura resultante foi centrifugada a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora, e 500 μΐ de um tampão de amostra foi adicionado nos precipitados resultantes, seguido por incubação a 1OO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos ou a 70 a 80°C durante 10 a 15 minutos.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 2: Exemplo 3 e Exemplos Comparativos 5 e 6]

Um produto de eritrócitos com remoção de leucócitos fabricado sob um padrão europeu foi adquirido e usado. O produto foi armazenado durante um ou dois dias em um refrigerado a 4°C, e 12 mL de uma fração microssômica foram adicionados a 1 unidade do produto de eritrócitos com remoção de leucócitos em temperatura ambiente, para assim preparar um sangue de pré-filtração suplementado. A solução resultante foi filtrada usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster C revestido com o polímero preparado em cada um dos exemplo 3 e exemplos comparativos 5 e 6 (revestido sem polímero em exemplo comparativo 6) por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado para preparação de um sangue de pós-filtração suplementado. O sangue de pré-filtração suplementado e sangue de pós-filtração suplementado foram centrifugados a 4.000 χ g durante 30 minutos, e os sobrenadantes foram divididos em alíquotas. Protease K foi adicionada nos sobrenadantes em uma concentração de 1.000 μg/mL, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 xge 4°C ± 2°C durante 1 hora. Após centrifugação, os precipitados foram recolocados em suspensão em 100 μΐ^ de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3: Exemplo 5 e Exemplos Comparativos 1, 3, 7, e 8]

Plasma novo congelado, fabricado sob um padrão europeu, foi comprado e dissolvido no dia de filtração a 37°C, e uma fração microssômica foi adicionada em um volume de 8,6% com relação ao peso do plasma, para assim preparar um sangue de pré-filtração suplementado. O sangue de pré- filtração suplementado (150 g ± 2 g) foi filtrado usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster revestido com o polímero preparado em cada de exemplo 5 e exemplos comparativos 1, 3, 7, e 8 por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado para preparar um sangue de pós- filtração suplementado. A 100 μί de cada um dentre o sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foi adicionada protease K em uma concentração de 600 μg/mL, e as misturas foram centrifugadas a 20.000 χ g e 4°C ± 2°C durante 1 hora. Os precipitados foram recolocados em suspensão em 100 μΐ. de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 4: Exemplo 6 e Exemplo Comparativo 10]

Um produto de sangue total com remoção dos leucócitos fabricado sob um padrão europeu foi adquirido e usado. O produto de sangue total assim obtido após remoção de leucócitos foi armazenado durante um dia em um refrigerador a 4°C, e 28 mL de uma fração microssômica foram adicionados a 1 unidade do produto de sangue total com remoção de leucócitos em temperatura ambiente, para assim preparar um sangue de pré- filtração suplementado. A solução resultante foi filtrada usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster revestido com o polímero preparado no exemplo 6 e o filtro de exemplo comparativo 10 por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado para preparar um sangue de pós- filtração suplementado. O sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foram centrifugados a 4.000 χ g durante 30 minutos, e os sobrenadantes foram divididos em alíquotas. Protease K foi adicionada aos sobrenadantes em uma concentração de 1.000 μg/mL, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 χ g e 4°C ± 2°C durante 1 hora. Após centrifugação, os precipitados foram recolocados em suspensão em 100 μΐ^ de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 5:

Exemplo 7, 8, e 9]

Um produto de célula de sangue total com remoção de leucócitos fabricado sob padrões europeus foi adquirido e usado. O produto foi armazenado durante 1 a 3 dias em um refrigerador a 4°C, e três unidades do produto de eritrócitos com remoção de leucócitos foram colocadas em uma bolsa de sangue. Então, 84 mL de uma fração microssômica foram adicionados em temperatura ambiente para preparar um sangue de pré- filtração suplementado. O sangue de pré-filtração suplementado foi dividido em três partes, e o sangue de pré-filtração suplementado resultante foi filtrado usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster C revestido com o polímero preparado em cada um dos exemplos 7, 8, e 9 por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado, para assim preparar um sangue de pós-filtração suplementado. O sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foram centrifugados a 4.000 χ g durante 30 minutos, e os sobrenadantes foram divididos em alíquotas. Protease K foi adicionada aos sobrenadantes de modo a ter uma concentração de 25 U/mL, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 χ g e 4°C ± 2°C durante 1 hora. Após centrifugação, os precipitados foram recolocados em suspensão em 100 μΕ de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5°C durante 5 a 10 minutos.

[Teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 6: Exemplos 10, 11 e 12]

Um produto de eritrócitos com remoção de leucócitos fabricado sob padrões europeus foi adquirido e usado. O produto foi armazenado durante dois a quatro dias em um refrigerador a 4°C, e 9,5 mL de uma fração microssômica foram adicionados em 1 unidade do produto de eritrócitos com remoção de leucócitos em temperatura ambiente, para assim preparar um sangue de pré-filtração suplementado. A solução resultante foi filtrada usando um filtro incluindo o pano não tecido de poliéster C revestido com o polímero preparado em cada de exemplos 10, 11, e 12 por gravidade de uma altura de 100 cm, e o sangue foi recuperado para preparar um sangue de pós-filtração suplementado. O sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós- filtração suplementado foram centrifugados a 4.000 χ g durante 30 minutos, e os sobrenadantes foram divididos em alíquotas. Protease K foi adicionada aos sobrenadantes de modo a ter uma concentração de 25 U/mL, e as misturas foram centrifugadas a 100.000 χ g e 4°C ± 2°C durante 1 hora. Após centrifugação, os precipitados foram recolocados em suspensão em 100 μΙ. de um tampão de amostra, e as suspensões foram incubadas a IOO0C ± 5 0C durante 5 a 10 minutos.

[Análise de titulação de proteína príon anormal] Os produtos de sangue do sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foram adicionados ao tampão de amostra, e as misturas foram aquecidas, seguido por detecção de uma proteína príon anormal por um método geral Western blot usando 3F4 capaz de ligar especificamente a uma proteína príon como um anticorpo primário. Detecção para todo o sangue de pré-filtração suplementado e o sangue de pós-filtração suplementado foi repetida várias vezes em uma série de diluição contínua de três vezes, e ED50 foi determinado pelo método de Spearman (Brit. J. of Psychology 1908; 2: 227 ff.) e Kaerber (Naunyn Schmiedeberg's Arhc. Exp. Path. Pharmak. 1931; 152: 380 ff.). Então, cada valor foi convertido em ED50 por volume unitário (1 mL), e o logaritmo do valor foi calculado como um título. O método de calcular ED50 é como a seguir. [Fórmula 1]

ED50 = 10"F0 d/2 + d. Σγί

YO:: expoente positivo da maior diluição de amostra com resultados de teste positivo em todas as diluições paralelas D:: Logaritmo de etapa de diluição

ΣΥΐ:: soma de percentagem de amostra onde príon anormal foi detectado quando a amostra foi diluída YO:- vezes ou mais

[Capacidade de remoção de proteína príon anormal] A capacidade de remoção de proteína príon anormal é determinada pela seguinte fórmula (4).

Capacidade de remoção de proteína príon anormal = Título de proteína príon anormal (sangue de pré-filtração suplementado)

- Título de proteína príon anormal (Sangue de pós-filtração suplementado) (4)

[Exemplo 1]

A polimerização foi realizada por adição em gotas uma solução de etanol obtido por dissolução dos monômeros polimerizáveis e um iniciador de tipo diazo para etanol usado como um solvente de polimerização enquanto agitando a 78°C em atmosfera de nitrogênio. Os monômeros polimerizáveis carregados incluem 20% em mols de metacrilato de metila (abaixo, abreviado como "MMA") usado como um monômero polimerizável hidrofóbico, 5% em mols de metacrilato de dimetilaminoetila (abaixo, abreviado como "DM") usado como um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, 75% em mols de metacrilato de 2-hidroxietila (abaixo, abreviado como "HEMA") usado como um monômero contendo uma parte hidrofílica neutra protônica. A solução de polímero foi purificada usando uma quantidade excessiva de água e secada sob pressão reduzida. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. Os resultados

estavam quase de acordo com a composição de monômero polimerizável

carregado, com as composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA

no polímero sendo 20% em mols, 5% em mols, e 75% em mols,

respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000.

Etanol foi usado como um solvente de revestimento, e a concentração de

polímero de 0,8% P/V foi empregada. A solução de polímero com a

concentração acima foi revestida em um pano não tecido de poliéster C usado

2 · ' *

como um material. A quantidade revestida foi de 21 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 1 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,12, 9,8 kPa, 0,2%, e 2,0 ou mais, respectivamente. [Exemplo 2]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no

mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de

monômero de 20% em mols de MMA, 13% em mols de DM, e 67% em mols

de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por

1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no

polímero foram de 20% em mols, 13% em mols, e 67% em mols,

respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 250.000. A

solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em

etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não

2 r

tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 1 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,68, 8,1 kPa, 0,5%, e 2,0 ou mais, respectivamente.

[Exemplo 3]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 2 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e capacidade de remoção de proteína príon anormal foram - 25 verificados como sendo 5,68, 11,4 kPa, 0,4%, e 3,8, respectivamente.

[Exemplo 4]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 40% em mols de MMA, 5% em mols de DM, e 55% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 40% em mols, 5% em mols, e 55% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 170.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 1 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,17, 12,5 kPa, 0,3%, e 2,0 ou mais, respectivamente.

[Exemplo 5]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 40% em mols de MMA, 13% em mols de DM, e 47% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 40% em mols, 13% em mols, e 47% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 180.000. A . 25 solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,68, 10,9 kPa, 0,5%, e 2,4, respectivamente.

[Exemplo 6]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 4 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,86, 13,2 kPa, 0,4%, e 1,5, respectivamente.

. 25 [Exemplo 7]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 5 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,12, 11,5 kPa, 0,3%, e 1,2, respectivamente. [Exemplo 8]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não - 25 tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 5 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,68, 12,0 kPa, 0,3%, e 1,6, respectivamente.

[Exemplo 9]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no

mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de

monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols

de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por

1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no

polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols,

respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 210.000. A

solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em

etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não

2 r

tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m por area unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 5 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,43, 11,8 kPa, 0,2%, e 1,7, respectivamente.

[Exemplo 10]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de metacrilato de etila (abaixo, abreviado como "EMA"), 10% em mols de DM, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de EMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 220.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 19 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 6 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,22, 10,5 kPa, 0,3%), e 4,1, respectivamente.

[Exemplo 11 ]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, metacrilato de dietilaminoetila (abaixo, abreviado como "DE") 10% em mols, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de EMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 200.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 6 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,58, 12,3 kPa, 0,4%, e 4,1 ou mais, respectivamente.

[Exemplo 12]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 60% em mols de metacrilato de hidroxipropila (abaixo, abreviado como "HPMA"). A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HPMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 280.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 6 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,83, 15,0 kPa, 0,2%, e 4,1 ou mais, respectivamente.

[Exemplo 13]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 40% em mols de acrilato de butila (abaixo, abreviado como "BA") usado como o monômero polimerizável hidrofóbico, 10% em mols de acrilato de dietilaminoetila (abaixo, abreviado como "DEA") usado como o monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e 50% em mols de acrilato de hidroxibutila (abaixo, abreviado como "HBA") usado como o monômero contendo uma parte hidrofílica neutra protônica. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de BA, DEA, e HPA no polímero foram de 40% em mols, 10% em mols, e 50% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 150.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 21 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 1 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,75, 11,5 kPa, 0,3%, e 2,0 ou mais, respectivamente.

[Exemplo comparativo 1] Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no

mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 3% em mols de DM, e 67% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 3% em mols, e 67% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 200.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 19 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,88, 10,2 kPa, 0,2%, e 0,5, respectivamente. No caso onde a composição de polimerização do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico era menos do que 5% em mols, adsorção da proteína príon anormal foi reduzida, resultando em diminuição da capacidade de remoção de uma proteína príon anormal.

[Exemplo comparativo 2]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 16% em mols de DM, e 54% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 16% em mols, e 54% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 190.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 21 mg/m por area unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo . 25 como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, e um teste de hemólise após filtração foram realizados. A pressão de processamento do sangue e nível de hemólise foram verificados como sendo 11,8 kPa e 2,3%, respectivamente. No caso de filtração sob uma condição fria, hemólise ocorreu com um aumento na composição de polimerização do monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e o nível de hemólise não atendeu ao padrão (0,8%).

[Exemplo comparativo 3]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 15% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 75% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 15% em mols, 10% em mols, e 75% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 220.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 20 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,11, 7,8 kPa, 0,3%, e 0,5, respectivamente.

[Exemplo comparativo 4]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 45% em mols de MMA, 10% em mols de DM, e 45% em mols de EEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, DM, e HEMA no polímero foram de 45% em mols, 10% em mols, e 45% em mols,

respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 180.000. A

solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em

etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não

2 f

tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, e um teste de hemólise após filtração foram realizados. No entanto, o teste foi parado por causa da baixa capacidade de fluxo do produto de sangue, elevada pressão de processamento do sangue (mais do que 60 kPa), e um receio de quebra do tubo e seringa, de modo que foi impossível medir a capacidade de remoção de leucócito e hemólise.

[Exemplo comparativo 5]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 3% em mols de DM e 97% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de DM e HEMA no polímero foram de 3% em mols e 97% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 550.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C com uma área de superfície específica de 1,47

9 2

m /g, diâmetro médio de fibra de 1,2 μιη, e peso por área unitária de 40 g/m . A quantidade revestida foi de 7 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 2 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,92, 6,8 kPa, 0,2%, e 0,2, respectivamente.

[Exemplo comparativo 6]

Um pano não tecido de poliéster C com uma área de superfície específica de 1,47 m2/g, diâmetro médio de fibra de 1,2 μιη, e peso por área

Λ

unitária de 40 g/m foi usado sem revestimento com um polímero. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 2 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 4,55, 20,3 kPa, 0,2%, e 0,0, respectivamente.

[Exemplo comparativo 7]

Ácido metacrílico tendo um grupo carboxila (abaixo, abreviado como "MAA") foi usado como um monômero acídico.

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 30% em mols de MMA, 10% em mols de MAA, e 60% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA, MAA, e HEMA no polímero foram de 30% em mols, 10% em mols, e 60% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 230.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C. A quantidade revestida foi de 22 mg/m por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 5,36, 10,0 kPa, 0,4%, e 0,0, respectivamente. O polímero tendo um monômero acídico foi verificado como não apresentando capacidade para remover uma proteína príon anormal.

[Exemplo comparativo 8]

Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 10% em mols de DM e 90% em mols de HEMA. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de DM e HEMA no polímero foram de 10% em mols e 90% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 500.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no pano não tecido de poliéster C com uma área de superfície específica de 1,47 m2/g, diâmetro médio de fibra de 1,2 μηι, e peso por área unitária de 40 g/m2 como um material. A quantidade revestida foi de 18 mg/m2 por área unitária sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão durante recuperação, um teste de hemólise após filtração, e um teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 3 foram realizados. A capacidade de remoção de leucócito, pressão de processamento do sangue, nível de hemólise, e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foram verificados como sendo 3,75, 15,0 kPa, 0,3%, e 0,5, respectivamente.

[Exemplo comparativo 9] Polimerização, purificação, e secagem foram realizados no mesmo modo como no exemplo 1, exceto por uso de uma relação de carga de monômero de 90% em mols de MMA e 10% em mols de DM. A composição de copolimerização do polímero foi analisada por 1H-RMN. As composições de copolimerização de MMA e DM no polímero foram de 90% em mols e 10% em mols, respectivamente. O peso molecular médio ponderai (Mw) foi de 240.000. A solução de polímero com uma concentração de polímero de 0,8% P/V em etanol usado como um solvente de revestimento foi revestida no

pano não tecido de poliéster C com uma área de superfície específica de 1,47

0 2 m /g, diâmetro médio de fibra de 1,2 μιτι, e peso por área unitária de 40 g/m

como um material. A quantidade revestida foi de 21 mg/m2 por área unitária

sobre a área de superfície completa do material. Do mesmo modo como

acima, um teste de capacidade de remoção de leucócito, um teste de pressão

durante recuperação, um teste de hemólise após filtração foram realizados. No

entanto, o teste foi parado devido à baixa capacidade de fluxo do produto de

sangue, elevada pressão de processamento do sangue (mais do que 60 kPa), e

um receio de quebra do tubo e seringa, assim foi impossível medir a

capacidade de remoção de leucócito e hemólise.

[Exemplo comparativo 10]

O teste de capacidade de remoção de proteína príon anormal 4 foi realizado usando um filtro de remoção de leucócito comercialmente disponível para produto de sangue total (WBF2, fabricado por Pall), e a capacidade de remoção de proteína príon anormal foi verificada como 0,4.

Tabela 1 mostra os resultados de exemplos e exemplos comparativos. Na tabela 1, a esterilização com feixe de elétrons e a esterilização em autoclave foram abreviadas como E.B. e A.C., respectivamente. [Tabelai]

Hidrofóbico Básico HidrofTlico Ácido (1) (2) (3) (4) (5) % mol monô mero % mol monô mero % mol monô mero % mol mon ômer (kPa) (%) Ex. 1 20 5 75 0 - raio γ >2,0 4,12 9,8 0,2 Ex. 2 20 13 67 0 - raio y >2,0 5,68 8,1 0,5 Ex. 3 30 10 60 0 - raio γ 3,8 5,68 11,4 0,4 Ex. 4 40 5 55 0 raio γ >2,0 5,17 12,5 0,3 Ex. 5 40 MM 13 47 HEM A 0 - raio γ 2,4 5,68 10,9 0,5 Ex. 6 30 A 10 60 0 - AC. 1,5 5,86 13,2 0,4 Ex. 7 30 10 60 0 - AC. 1,2 5,12 11,5 0,3 Ex. 8 30 10 DM 60 0 - EB. 1,6 4,68 12,0 0,3 Ex. 9 30 10 60 0 - EB. +AC. 1,7 5,43 11,8 0,2 Ex. 10 30 EM A 10 60 0 AC. >4,1 5,22 10,5 0,3 Ex. 11 30 10 DE 60 0 - raio γ >4,1 4,58 12,3 0,4 Ex. 12 30 MM A 10 DM 60 HPM A 0 - EB. >4,1 4,83 15,0 0,2 Ex. 13 40 BA 10 DEA 50 HBA 0 - AC. >2,0 4,75 11,5 0,3 Ex. cp. 1 30 3 67 0 - raio γ 0,5 4,88 10,2 0,2 Ex. cp. 2 30 16 54 0 - raio γ - - 11,8 2,3 Ex. cp. 3 15 10 75 0 - raio γ 0,5 5,11 7,8 0,3 Ex. cp. 4 45 MM A 10 DM 45 HEM A 0 raio γ >60 Ex. cp. 5 0 - 3 97 0 - raio γ 0,2 4,92 6,8 0,2 Ex.cp. 6 0 - 0 - 0 - 0 - raio γ 0 4,55 20,3 0,2 Ex. cp. 7 30 MM A 0 - 60 HEM A 10 MA A raio γ 0 5,36 10,0 0,4 Ex. cp. 8 0 - 10 90 0 - raio γ 0,5 3,75 15,0 0,3 Ex. cp. 9 90 MM A 10 DM 0 0 - raio γ - - >60 - Ex. cp. 10 0,4

(1) Método de esterilização

(2) Capacidade de remoção de príons

(3) Capacidade de remoção de leucócito

(4) pressão de processamento de sangue

(5) Nível de hemólise

TAplicabilidade Industrial]

O método de remover uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a presente invenção é utilizável para prevenir uma transfiisão-transmissão de encefalopatia espongiforme transmissível (TSE) causada por uma proteína príon anormal no campo clínico de transfusão e para prevenir os efeitos laterais da transfusão causados por leucócitos.

Claims

1. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue, caracterizado por compreender: filtrar um produto de sangue através de um filtro compactado com um veículo revestido com um polímero, que é formado de três unidades incluindo 20% em mols ou mais e 40% em mols ou menos de uma unidade se originando de um monômero polimerizável hidrofóbico; 5% em mols ou mais e 13% em mols ou menos de uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e uma unidade se originando de um monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica como o resto; e recuperar o produto de sangue filtrado.

2. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a reivindicação 1, caracterizado em que o produto de sangue é um produto de sangue total, e o filtro é submetido à esterilização por radiação e, então, esterilização por autoclave.

3. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a reivindicação 2, caracterizado em que a radiação é de raios-γ ou feixes de elétrons.

4. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado em que o polímero é um polímero de tipo vinila.

5. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado em que o monômero polimerizável hidrofóbico, monômero polimerizável contendo uma parte contendo nitrogênio básico, e monômero polimerizável contendo uma parte hidrofílica neutra protônica são derivados de ácido acrílico e/ou derivados de ácido metacrílico.

6. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado em que a parte contendo nitrogênio básico é um grupo amino terciário.

7. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado em que a parte hidrofílica neutra protônica é um grupo hidroxila.

8. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado em que o filtro é um filtro de remoção de leucócitos.

9. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a reivindicação 8, caracterizado em que o veículo revestido com o polímero é um meio fibroso ou um material estrutural de tipo esponja.

10. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado em que uma área de superfície específica do veículo revestido com o polímero é fJ 7 1,0 m /g ou mais e 5,0 m /g ou menos.

11. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 10, caracterizado em que um diâmetro médio de poro do veículo revestido com o polímero é 1 μηι ou mais e 60 μιη ou menos.

12. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 11, caracterizado em que uma densidade de enchimento do veículo revestido com 3 3 o polímero é 0,1 g/cm ou mais e 0,5 g/cm ou menos.

13. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 12, caracterizado em que a porosidade do veículo revestido com o polímero é 60% ou mais e 90% ou menos.

14. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 13, caracterizado em que o veículo revestido com o polímero é um pano não tecido.

15. Método de remoção de uma proteína príon anormal de um produto de sangue de acordo com a reivindicação 14, caracterizado em que um diâmetro de fibra do pano não tecido é 0,3 μπι ou mais e 3,0 μιη ou menos.