CN101474255B

CN101474255B - 苍耳子鼻炎胶囊的检测方法

Info

Publication number: CN101474255B
Application number: CN2008103067120A
Authority: CN
Inventors: 刘文旭; 肖华; 张悦; 宋波; 伍江蓉
Original assignee: SICHUAN HEBANG SUNLIGHT PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Sichuan Hetai Pharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2008-12-31
Filing date: 2008-12-31
Publication date: 2011-11-30
Anticipated expiration: 2028-12-31
Also published as: CN101474255A

Abstract

本发明公开了一种苍耳子鼻炎胶囊的质量控制方法，采用高效液相色谱法对黄芩苷进行含量测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为20∶80的乙腈0.3％磷酸溶液为流动相，流速1ml/min；检测波长为275～276nm；柱温35℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，根据测定结果进行计算，即得苍耳子鼻炎胶囊内容物中黄芩苷的含量。该质量控制方法在原质量标准薄层色谱定性鉴别的基础上，增加了黄芩苷的含量测定方法，使苍耳子鼻炎胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥；并且该含量测定方法操作简单，结果准确，精密度、稳定性、重现性等良好。

Description

苍耳子鼻炎胶囊的检测方法

技术领域

本发明属于药物制剂的质量控制技术领域，特别涉及一种苍耳子鼻炎胶囊的质量控制方法。

背景技术

苍耳子鼻炎胶囊收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册中，具有疏风、清肺热、通鼻窍、止头痛的功效；用于风热型鼻疾，包括急、慢性鼻炎，鼻窦炎，过敏性鼻炎等。

苍耳子鼻炎胶囊是以苍耳子浸膏粉180g、石膏浸膏粉1.76g、白芷浸膏粉62.1g、冰片30g、辛夷花挥发油4ml、薄荷脑15g、辛夷花浸膏粉72.2g、黄芩浸膏粉25.3g为原料制得的胶囊制剂，其制备方法为：除辛夷花挥发油外，冰片、薄荷脑与适量淀粉混合，研成细粉，与上述各浸膏粉混合，喷入辛夷花挥发油，充分混匀，过筛，装入胶囊，制成1000粒,即得。

原质量控制方法中，除应符合胶囊剂项下有关的各项规定外，只对黄芩、白芷、辛夷花、苍耳子、冰片等五味进行了薄层色谱定性鉴别，却没有任何含量测定指标。由于药品质量问题与人类健康紧密相关，如今对药品质量控制的要求也越来越高，安全和疗效同等重要；很显然，原仅限于薄层色谱定性鉴别的质量控制方法对于苍耳子鼻炎胶囊的质量控制是不够准确可靠的，不符合现代医药发展的需要，有待于进一步提高。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种苍耳子鼻炎胶囊的质量控制方法，在原薄层色谱定性鉴别的基础上，增加含量测定方法及相应的含量指标，使苍耳子鼻炎胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

苍耳子鼻炎胶囊的质量控制方法，在传统质量控制方法中的检查项目及对黄芩、白芷、辛夷花、苍耳子、冰片等五味进行薄层色谱定性鉴别基础上，增加采用高效液相色谱法（中国药典2000年版一部附录Ⅵ D）对黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₂)进行含量测定及相应的含量指标，相关条件及操作方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为20:80的乙腈-0.3%磷酸溶液（0.3%磷酸溶液是指100ml溶液中含有0.3ml磷酸）为流动相，流速1ml/min；检测波长为275～276nm；柱温：35℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取50～65℃减压干燥4～6小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇（无水甲醇）制成每1ml含黄芩苷约0.055～0.065mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取苍耳子鼻炎胶囊内容物，研细，取0.095～0.105g，精密称定，置50ml量瓶中，加60～80%甲醇（指甲醇水溶液，体积百分比，下同）30～40ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）30～60分钟，放冷，用同浓度甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，根据测定结果进行计算，即得苍耳子鼻炎胶囊内容物中黄芩苷的含量。

苍耳子鼻炎胶囊内容物中，含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₂)重量百分比为1.7%～6.3%。

苍耳子鼻炎胶囊的各原料药中：苍耳子含苍耳苷(strumaroside，即β谷甾醇葡萄糖苷)等萜类和苷类；白芷含欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯等香豆素类；辛夷花含枸缘醛、丁香油酚、桂皮酚等；黄芩含黄芩苷、黄芩素等黄酮类化合物；石膏主要成分为硫酸钙；冰片主要成分是龙脑；薄荷脑主要成分即为薄荷脑。

通过逐一分析比较及探索性的试验研究，本发明初步筛选出拟对黄芩提取物中的主要有效成分黄芩苷进行含量测定。再通过大量文献分析及试验研究，进一步从薄层层析-紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、超临界流体层析法、胶束动电层析法等黄芩苷的含量测定方法中进行筛选，最终确定了以高效液相色谱法对黄芩提取物中主要有效成分黄芩苷进行含量测定。

为了尽可能准确的测定出黄芩苷在苍耳子鼻炎胶囊中的含量，从而更精确的控制药物质量，保证药物的临床疗效，发明人对药物的前处理方法及色谱条件等进行了大量的试验研究及对比分析，现将一些主要的研究情况略举如下：

在该研究过程中，所用的仪器及试剂等包括：

Waters2690液相色谱仪，PDA996检测器，Millennium色谱工作站； AE240电子天平（感量0.1mg；0.01mg 载量200g；40g）。

对照品：黄芩苷，中国药品生物制品检定所提供（下述试验过程中对照品溶液的制备：精密称取60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得）。

苍耳子鼻炎胶囊样品：均由四川禾邦阳光制药股份有限公司提供，批号为030101和030301。

乙腈为色谱纯(Fisher Chemicals)，重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

一、检测波长的选择

取黄芩苷对照品溶液及供试品溶液在PDA996二极管阵列检测器上对黄芩苷峰进行紫外扫描（200～600nm），所记录光谱图结果表明，对照品黄芩苷峰在275.7nm波长处有最大吸收，供试品黄芩苷峰在275.7nm波长处有最大吸收，故选择275～276nm作为检测波长；下述试验中选择275nm作为检测波长。

二、色谱条件的选择

1．流动相的选择

发明人曾以乙腈-0.3%磷酸溶液（20:80）、甲醇-0.3%磷酸溶液（45:55）为流动相，流速：1ml/min，以Shim-pack CLC-ODS（4.6×150mm，5μ）柱为分析柱，柱温35℃，进行试验研究，结果前者黄芩苷峰与相邻峰分离度大于2，后者黄芩苷峰与相邻峰分离度为1.8。经过对比，最终选用乙腈-0.3%磷酸溶液（20:80）为流动相，流速1ml/min，柱温：35℃。

2．分析柱的选择

发明人曾用Diamonsil^TM（钻石）C18柱（4.6×150mm，5μ）与Shim-pack CLC－ODS（4.6×150mm，5μ）柱，以乙腈-0.3%磷酸溶液（20:80）为流动相，二者均达到满意的分离效果，黄芩苷峰与相邻峰分离度大于2，理论塔板数以黄芩苷峰计算均大于4000。下述试验中选用Shim-pack CLC-ODS（4.6×150mm，5μ）色谱柱。

3．样品前处理方法的选择（供试品溶液的制备）

3.1 提取溶剂的选择

试验以甲醇、70%甲醇、70%乙醇、50%甲醇、水作为提取溶剂进行了考察。

取批号为030101批样品内容物0.1g，五份，精密称定，分别置50ml量瓶中，分别加甲醇、70%甲醇、70%乙醇、50%甲醇、水40ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）45分钟，放冷，分别用相应溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，按前述确定的色谱条件测定，计算，结果见下述表1。

表1 提取溶剂考察结果

提取溶剂	甲醇	70%甲醇	70%乙醇	50%甲醇	水
						黄芩苷含量(mg/g)	50.8	54.6	52.8	53.4	49.4

由表1可见：70%甲醇作为提取溶剂黄芩苷的含量高于其它提取溶剂，因此可选用70%甲醇作为提取溶剂。

此外，发明人采用同样的方法，以50～90%甲醇作为提取溶剂进行考察，结果证实选择60～80%甲醇时提取效率相关不大，故最终选择60～80%甲醇作为提取溶剂。

3.2 提取方法的考察

试验对超声处理、回流提取进行了对比。取030101批样品内容物0.1g，2份，精密称定。一份置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml超声处理（250W，50KHz）45分钟，放冷，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀；另一份置具塞锥型瓶中，精密加70%甲醇50.0ml，置水浴中加热回流45分钟；放冷，用70%甲醇分别补足减失的重量，摇匀；分别滤过，取续滤液离心（10000转/分钟），按前述色谱条件测定，计算含量，结果见下述表2。

表2 提取方法考察结果

提取方法	超声处理	加热回流
			黄芩苷含量(mg/g)	54.6	51.5

由表2可见：超声处理黄芩苷的含量高于加热回流提取方法，故选用超声处理作为提取方法。

3.3 提取时间的考察

取030101批内容物0.1g，4份，精密称定，分别置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，分别超声处理（250W，50KHz）15、30、45、60分钟，放冷，用70%甲醇分别稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心（10000转/分钟），按前述色谱条件测定，计算含量,结果见下述表3。

表3 提取时间考察结果（n=2）

提取时间(分钟)	15	30	45	60
					黄芩苷含量(mg/g)	50.06	51.37	51.57	51.13

由表3可见：超声处理30分钟后含量几无变化，试验选择提取时间为30～60分钟。

综上所述，选择下述供试品溶液制备方法：取苍耳子鼻炎胶囊内容物，研细，取0.095～0.105g，精密称定，置50ml量瓶中，加60～80%甲醇30～40ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）30～60分钟，放冷，用同浓度甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得。

下述试验中采用的供试品溶液制备方法为：取苍耳子鼻炎胶囊内容物，研细，取0.10g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）45分钟，放冷，用70甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得。

缺黄芩提取物阴性溶液的制备采用上述同样的方法。

3.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液(0.05675mg/ml) 10μl及030101批供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按前述色谱条件进行分析，测定5次，测定峰面积，结果见下述表4。

表4 精密度试验结果

	1	2	3	4	5	平均值	RSD(%)
								对照品	1946461	1951581	1951033	1951687	1947366	1949626	0.13
供试品	2084930	2122415	2135713	2110555	2094929	2109708	0.97

由表4可见，对照品峰面积平均值为1949626，RSD为0.13%；供试品峰面积平均值为2109708，RSD为0.97%，表明精密度良好。

3.5 稳定性试验

取批号为030101样品与黄芩苷对照品适量，按前述方法分别制备样品供试品溶液与对照品溶液，室温下保存，于制备完成后放置不同时间分别精密吸取对照品溶液10μl、供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，按前述色谱条件进行测定，记录色谱图，考察其稳定性，结果见下述表5。如表所示，供试品溶液及对照品溶液在配制后16小时内测定，结果稳定。

表5 黄芩苷含量测定稳定性考察结果

放置时间(H)	0	1	2	4	8	16	RSD(%)
								对照品溶液峰面积	1946461	1951687	1945994	1946850	1946461	1949459	0.12
供试品溶液峰面积	2084930	2135713	2094929	2126776	2108411	2110446	0.90

3.6 重现性试验

取批号为030101内容物0.1g，共5份，按前述方法分别制备供试品溶液，按前述色谱条件进行测定，结果见下述表6。如表所示，含量平均值为49.0212，RSD=1.90%,重现性良好。

表6 黄芩苷含量测定重现性试验结果（n=2）

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明在苍耳子鼻炎胶囊原质量标准薄层色谱定性鉴别的基础上，增加了黄芩苷的含量测定方法及相应的含量指标，使苍耳子鼻炎胶囊的质量控制更为准确有效，从而更有利于确保其临床疗效的发挥；并且该含量测定方法操作简单，结果准确，精密度、稳定性、重现性等良好。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

实施例

本实施例为采用本发明方法对10批苍耳子鼻炎胶囊（批号：020801、020901、021001、021201、030101、030201、030301、030302、030303、030401，均由四川禾邦阳光制药股份有限公司提供）进行黄芩苷含量测定，具体方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.3%磷酸溶液（20:80）（体积比）为流动相，流速1ml/min；检测波长为275nm；柱温：35℃。理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取苍耳子鼻炎胶囊内容物，研细，取0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理（功率250W，频率50KHz）45分钟，放冷，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

根据测定结果进行计算，即得苍耳子鼻炎胶囊内容物中黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₂)的含量，结果见下述表7。

表7 样品中黄芩苷含量测定结果表

Claims

1.苍耳子鼻炎胶囊的检测方法，包括对黄芩、白芷、辛夷花、苍耳子、冰片五味进行薄层色谱定性鉴别，其特征在于：还采用高效液相色谱法对黄芩苷进行含量测定，相关条件及操作方法如下：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为20:80的乙腈-0.3%磷酸溶液为流动相，流速1ml/min；检测波长为275～276nm；柱温35℃；

对照品溶液的制备：精密称取50～65℃减压干燥4～6小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含黄芩苷约0.055～0.065mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取苍耳子鼻炎胶囊内容物，研细，取0.095～0.105g，精密称定，置50ml量瓶中，加60～80%甲醇30～40ml，超声处理30～60分钟，放冷，用同浓度甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，根据测定结果进行计算，即得苍耳子鼻炎胶囊内容物中黄芩苷的含量；

所述苍耳子鼻炎胶囊是以苍耳子浸膏粉180g、石膏浸膏粉1.76g、白芷浸膏粉62.1g、冰片30g、辛夷花挥发油4ml、薄荷脑15g、辛夷花浸膏粉72.2g、黄芩浸膏粉25.3g为原料制得的胶囊制剂。

2.根据权利要求1所述的苍耳子鼻炎胶囊的检测方法，其特征在于：

所述的苍耳子鼻炎胶囊内容物中黄芩苷的含量为1.7%～6.3%。