CN101456885A

CN101456885A - 玫瑰红景天中活性成份rosavin的制备方法

Info

Publication number: CN101456885A
Application number: CNA2007100944554A
Authority: CN
Inventors: 惠永正; 杨志奇; 王爱玲
Original assignee: SHANGHAI YAOGU PHARMACY GROUP CO Ltd
Current assignee: SHANGHAI YAOGU PHARMACY GROUP CO Ltd
Priority date: 2007-12-13
Filing date: 2007-12-13
Publication date: 2009-06-17

Abstract

一种β－(E)－肉桂醇基－O－[6′－O－α－L－阿拉伯吡喃糖基]－D－葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法，是由肉桂醇与2，3，4－三－O－苯甲酰基－[6－O－(2’，3’，4’－三－O－乙酰基)－L－呋喃阿拉伯糖基]－D－吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯进行糖苷化反应，再脱去保护基，即得β－(E)－肉桂醇基－O－[6′－O－α－L－阿拉伯吡喃糖基]－D－葡萄吡喃糖苷。该方法原料便宜易得，反应条件温和，所得产物纯度高，未有文献报道，因此本发明合成方法是一个新的人工合成Rosavin的方法。

Description

玫瑰红景天中活性成份rosavin的制备方法

技术领域

本发明涉及一种玫瑰红景天活性成分的合成方法，具体地说是β-(E)-肉桂醇基-O-[6’-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法。

其结构如下所示

背景技术

玫瑰红景天(Rhodiola rosea L.)，亦称“蔷薇红景天”，景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)，多年生草本或亚灌木植物。约70cm高，花呈黄色，药用其根及根茎。主要生长在欧洲和亚洲的海拔约1000-5000米的干旱沙地和高海拔山区，因其新切割的根茎会散发出类似于玫瑰的芳香而得名。玫瑰红景天以其具有消除疲劳、抗缺氧、抗忧郁、抗微波辐射和延缓衰老等功效而闻名，是一种传统草药，素有“高原人参”之称。药理实验研究证实，玫瑰红景天的主要活性成分为红景天苷(salidroside)和三种它特有的肉桂醇苷rosavins(rosavin，rosin和rosarin)。国外现将玫瑰红景天的提取物作为一种精神刺激剂(psychostimulant)及保健品，主要用于抗疲劳、抗缺氧、缓解压力、提高工作效率和治疗神经系统的功能型疾病，如抑郁症(depression)。

目前市场上的rosavin产品均为天然植物的提取物，多为混合物，很难得到纯度高的rosavin，目前尚未见有关rosavin的化学合成报道。已有文献报道由植物细胞培养获取rosavin，但成本较高，不适于大批量生产。由于研究的需要，我们对它们进行了化学合成的尝试。

发明内容

本发明的目的在于提供一种β-(E)-肉桂醇基-O-[6’-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的化学合成方法，该方法得到的产物纯度高，反应条件温和，操作简便。

本发明的方法可以用下述的反应式表示：

为此，本发明的目的在于提供Rosavin，即β-(E)-肉桂醇基-O-[6′-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷的合成方法。该合成路线共有11步。以D-葡萄糖计算得到二糖，合成步骤为七步，总收率为11.4％，二糖给体与肉桂醇的糖苷化反应及最终的脱保护基反应总收率为13％。

本发明的合成方法中，采用肉桂醇(化合物(D))为原料，与由葡萄糖和L-阿拉伯糖经过反应合成的糖基配体，即2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(化合物(C2))进行糖苷化反应，得到化合物(F)，再脱去保护基，即可得到Rosavin。

本发明的合成方法包括如下步骤：

1.选择性保护D-葡萄糖得到产物(A1)，得到结构式为

的产品，R为Tr、H取代基，R1为保护集团，C₂-C₆的烷基取代酰基、苯甲酰基或苄基。

在反应中，化合物(A1)中剩余-OH进行全保护(A2)，将6位的-OH释放出来，得到结构为

(A3)的产品。化合物(A1)和含保护基团反应物的摩尔比是1∶3.0-5.0，反应温度是-10—80℃，反应时间是1.5-12小时，反应有机溶剂是C₂-C₄的氯代烷烃、吡啶、DMAP或一种以上的混合物，用量是1mol化合物(A1)用6.5-10升有机溶剂，反应收率为40-50％。

R为Tr、H取代基，R1为保护集团，C₂-C₆的烷基取代酰基、苯甲酰基或苄基。

2.结构式为

的化合物(A3)、结构式为

的L-阿拉伯糖给体[化合物(B1)]、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行糖苷化反应生成结构式为

的[化合物(C1)]，在糖苷化反应中，化合物(A3)、化合物(B1)和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶0.8-5.0∶0.01-1.0，化合物(A3)和分子筛的重量比为1∶0-7.0，反应温度是-20—40℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol化合物(A3)用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化，

结构式中R₂为-OH保护集团，R₂包括C₂-C₆的烷基取代酰基、苯甲酰基或苄基；X为OC(NH)CCl₃或SEt；

3.在惰性气体保护下，结构式为

化合物(D)、结构式为

的葡萄糖基给体(化合物C2)、路易斯酸催化剂和分子筛，在有机溶剂中进行糖苷化反应生成结构式为

的化合物(F)。在糖苷化反应中，化合物(D)、化合物(C2)和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶0.8-5.0∶0.01-1.0。较好的是1∶1.05-1.8∶0.01-0.2。路易斯酸催化剂是C₃-C₉的碘代酰胺、C₁-C₆的氟代烃基磺酸、C₂-C₈的硅基氟代烃基磺酸酯、C₁-C₆的氟代烃基磺酸银、三氟化硼-乙醚络合物或它们的混合物，例如N-碘代丁二酰亚胺(NIS)、N-碘代丁二酰亚胺(NIS)-三氟甲磺酸银(AgOTf)混合物、N-碘代丁二酰亚胺(NIS)-三氟甲磺酸(TfOH)混合物、三氟甲磺酸银(AgOTf)、三氟甲磺酸三甲基硅基酯(TMSOTf)等，较好的是三氟甲磺酸银(AgOTf)、三氟甲磺酸三甲基硅基酯(TMSOTf)和三氟化硼-乙醚络合物。化合物(D)和分子筛的重量比为1∶1.0-7.0，分子筛较好的是4

、5

球形分子筛的粉末。反应溶剂是C_1-4的氯代烷烃、二氧六环或甲苯，较好的是二氯甲烷或三氯甲烷，溶剂用量是1mol化合物(V)用10-40升溶剂。反应温度是-78—40℃，较好的是-35-25℃。反应时间是0.2—4小时，较好的是1.0-2.0小时。反应温度是-35—25℃，反应时间是0.5-4.5小时。惰性保护气体是氮气、氩气或氦气。反应结束时加入弱碱淬灭反应，弱碱是三甲胺、三乙胺，促进剂与弱碱的摩尔比是1∶1-3，较好的是1∶1-1.2。

产物用柱层析纯化，柱层析用的填充剂是硅胶，氧化铝或大孔树脂等，较佳是硅胶，硅胶与产物的重量比为20-10∶1，硅胶的粒度较好的是300-400目，洗脱用的溶剂是石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或环己烷中一种或一种以上的混合物。反应的收率为70-80％。

结构式中R₁和R₂为-OH保护集团，包括C₂-C₆的烷基取代酰基、苯甲酰基或苄基；X为OC(NH)CCl₃或SEt；

4.上面得到的化合物(F)和一价碱金属化物的水溶液在极性溶剂中进行脱保护基反应，生成Rosavin。一价碱金属化物是氢氧化钠、甲醇钠、氢氧化钾或氢氧化锂，化合物(F)和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10。极性溶剂是四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、石油醚的混合物，溶剂用量是1mol化合物(F)用10-30升溶剂。反应温度是40-100℃。反应时间是10-18小时。反应产物经重结晶，可得到高纯度的(G)，重结晶纯化所用的溶剂是三氯甲烷、C₁-C₄的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚的混合物。反应的收率为50-70％。

通以下述实施例将有助于理解本发明，但不限制本发明的内容。

实施例1 6-O-三苯基甲基-葡萄糖(A1)的合成

(R为Tr R1为H)

取D-葡萄糖(180.16g，1.0mol)溶解于吡啶(1800ml)中，加入TrCl(362g，1.3mol)和DMAP(1.833g，0.015mol)，80℃搅拌过夜，TLC(乙酸乙酯：甲醇＝8：1)检测反应完全，直接用于下步反应。

实施例2 1，2，3，4-四-O-苯甲酰基-6-O-三苯基甲基-D-吡喃葡萄糖(A2)的合成

化合物A1溶液在冰水浴下，滴加苯甲酰氯(521ml)，室温搅拌过夜，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)检测反应完全，滴加甲醇(140.86ml)淬灭反应，用乙酸乙酯(4000ml)稀释，依次用3％HCl溶液(1500ml*4)、饱和NaHCO₃溶液(1500ml*1)、饱和食盐水(1500ml*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得褐色糖浆状产物约900g。。

实施例3 1，2，3，4-四-O-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(A3)的合成

取A2(900g)溶于二氯甲烷(2000ml)，加入甲醇(1000ml)，加对甲苯磺酸调节反应液pH至2，室温搅拌过夜，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)检测反应完全，加入三乙胺调节反应液pH至7，浓缩，柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得淡黄色固体381.8g，HPLC：87.73％。

实施例4 1，2，3，4-三-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖三氯乙酰亚胺酯(B1)的合成

a)四-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖

取L-阿拉伯糖(100g，0.6mol)溶于醋酸酐(400ml)，加入醋酸钠(52g)，160度油浴回流。沸腾五分钟后倾入2L冰水中。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测反应完全。油层用300mL无水乙醇稀释，用活性碳脱色。水相用二氯甲烷萃取，旋干。得油状物258g，产率约90％。

b)2，3，4-三-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖

取上步反应产物(128g，1e)溶于DMF(177mL)/乙酸乙酯(327mL)搅拌，冰水浴下，滴加醋酸/水合肼溶液[冰醋酸51.2mL(2.2e)/水合肼43.5mL(1.8e)/DMF(150mL)]，室温搅拌4h，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应完全。将反应液倒入冰稀盐酸中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用饱和NaHCO₃溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色油状物。柱层析：将其溶于二氯甲烷，加入一倍量100-200目硅胶拌为干样；硅胶量(300—400目)为上样量三倍量；洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝2：1(出原料)/石油醚：乙酸乙酯＝1：1(出产物)。得油状产物45g。收率：64％.

c).2，3，4-三-O-乙酰基-L-呋喃阿拉伯糖三氯乙酰亚胺酯

取上步反应产物(63g，1e)溶于无水处理的二氯甲烷(315ml)，氩气保护下，室温搅拌，加入三氯乙腈(43.2ml，1.8e)，再滴加DBU(1.89ml，0.05e)，反应1小时，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应完全，快速短柱柱层析，用二氯甲烷淋洗，洗脱液直接用于下步反应。

实施例5 1，2，3，4-四-O-苯甲酰基-[6-O-(2′，3′，4′-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖的合成

1，2，3，4-四-O-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(108.7g，0.8e)溶于上述亚胺酯二氯甲烷溶液(约1L)、再加入活化过的4

分子筛(69g)。氩气保护下，冰-盐浴(—20℃)，慢慢滴加0.05mlTMSOTf/ml二氯甲烷溶液(75.6ml)。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应进程，1.0小时后反应完全。过滤，滤液旋蒸浓缩。加入约十倍量丙酮溶剂，加热至60℃全溶，自然冷却。析出白色晶体，过滤。母液回收柱层析。收率70％。

实例6 2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2′，3′，4′-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖的合成

取上步反应产物(5g，1e)溶于DMF(30ml)，室温搅拌下加入冰醋酸(0.8ml，2.4e)，冰水浴，滴加85％水合肼(0.7ml，2e)，室温搅拌，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应进程，5小时后反应完全。反应液用乙酸乙酯稀释后，依次用饱和NaHCO₃溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩.尝试用乙酸乙酯重结晶，有白色固体析出，但原料点无法结去(粗品、结晶物均有留样)。柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。收率：73％。

实例7 2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2′，3′，4′-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(F)的合成

取上步反应产物(11g，0.015mol)溶于无水处理的二氯甲烷(50ml)，氩气保护下，室温搅拌，加入三氯乙腈(19.9ml)，再滴加DBU(0.12ml)，反应2小时，TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应完全，快速短柱柱层析，用无水处理的二氯甲烷淋洗，洗脱液直接用于下步反应。

实例8 2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖肉桂醇的合成

将肉桂醇(1.287g，9.608mol)溶于上述亚胺酯无水处理的二氯甲烷(约80ml)溶液，再加入活化过的4

分子筛(6g)。氩气保护下，室温搅拌30min后，冰-盐浴(—20℃)，慢慢滴加慢慢滴加0.005mlTMSOTf/ml二氯甲烷溶液(1.58ml)。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应进程，0.5小时后反应完全。过滤，滤液旋蒸浓缩，柱层析得到白色固体6.7g，收率70％。此步后处理尝试用乙醇/二氯甲烷重结晶，有白色固体析出，能结去大部分杂点。方法为将粗品溶于0.5倍量二氯甲烷中至全溶，加入五倍量无水乙醇静置1-2日。过滤，烘干。

实例9 β-(E)-肉桂醇基-O-[6′-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷的合成

取上步反应产物(5g，5.875mol)，溶于甲醇和二氯甲烷的混合溶液中(90ml，V/V＝3:1)，加入甲醇钠(0.6g)，TLC(氯仿：甲醇：水＝8：1：1)检测反应进程，4小时后反应完全。搅拌下加入酸性树脂调节至pH＝7，过滤，滤液旋蒸浓缩，柱层析(洗脱剂：氯仿：甲醇＝4：1)得白色固体2.1g。产物用乙醇重结晶，乙醇量为200倍，加热回流，热熔冷析，收率：60％，HPLC：99％。

其物化数据如下：

¹H NMR(300MHz，CD₃OD)：δ 7.2-7.5(m，5H)，6.68(d，1H)，6.4(m，1H)，4.5(dd，1H)，4.3-4.4(m，3H)，4.2(dd，1H)，3.8-3.2(m，14H)¹³C NMR(300MHz，CD₃OD)：137.08，132.58，128.41，127.52，126.37，125.58，103.99，102.29，76.80，75.74，73.92，73.03，71.23，70.53，69.74，68.37，68.28，65.49

ESI-MS(m/z)：451.0(M+Na)。

Claims

1、玫瑰红景天中活性成份rosavin的制备方法即一种β-(E)-肉桂醇基-O-[6’-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基]-D-葡萄吡喃糖苷(Rosavin)的合成方法，其特征是包括如下步骤：

(a)由肉桂醇(化合物(D))、2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(化合物(C2))、三甲基硅基三氟甲磺酸酯和分子筛在惰性气体保护下，在溶剂中进行糖苷化反应生成2，3，4-三-O-苯甲酰基-[6-O-(2’，3’，4’-三-O-乙酰基)-L-呋喃阿拉伯糖基]-D-吡喃葡萄糖肉桂醇(化合物F)，在糖苷化反应中，化合物(D)、化合物(C2)和三甲基硅基三氟甲磺酸酯的摩尔比是1∶1.05-1.8∶0.01-0.2，化合物(D)和分子筛的重量比为1∶2.0-4.0，反应温度是-35—25℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol化合物(D)用4-12升溶剂，反应结束时加入弱碱淬灭反应，产物(化合物(F))用柱层析或重结晶纯化；

(b)化合物(F)和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱保护基反应生成Rosavin(化合物G)，在脱保护基反应中，化合物(F)和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10，反应温度是20-50℃，反应时间是4-10小时，极性溶剂的用量是1mol化合物(F)用10-30升溶剂，生成的产物Rosavin经柱层析、重结晶纯化。

2、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的糖苷化反应中所述的惰性保护气体是氮气、氩气或氦气。

3、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的糖苷化反应中所述的

有机溶剂是C₁-C₄的氯代烷烃。

4、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反应中加入的弱碱淬灭反应的弱碱是三甲胺或三乙胺。

5、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反应中所用的分子筛是

型硅铝酸盐分子筛或它们的粉末。

6、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反应中柱层析所用的填充剂是硅胶、氧化铝或大孔树脂。

7、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述糖苷化反应中所述柱层析纯化中洗脱用的溶剂是石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或环己烷中一种或一种以上的混合物。

8、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述脱保护基反应中所述的一价碱金属化物是氢氧化钠、甲醇钠、氢氧化钾或氢氧化锂。

9、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述脱保护基反应中所述的极性溶剂是四氢呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、水中的一种或一种以上的混合物。

10、如权利要求1所述的合成方法，其特征是在所述的脱保护基反应后重结晶纯化所用的溶剂是三氯甲烷、C₁-C₄的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一种或一种以上的混合物。