CN115124580A - 一种络塞维的晶型及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种络塞维的晶型及其制备方法。具体公开了一种络塞维的制备方法，其包括如下步骤：将络塞维粗品与溶剂混合，进行析晶，得到络塞维的晶体；所述的溶剂为甲醇与“乙酸乙酯和/或二氯甲烷”的混合溶液。本发明的晶型具有良好的稳定性，吸湿性较弱，易于储存，对药物的优化和开发具有重要的价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种络塞维的晶型及其制备方法。
背景技术
络塞维(rosavin)是中药红景天的提取物之一，主要用于抗疲劳、抗缺氧、缓解压力、提高工作效率和治疗神经系统的功能型疾病。
络塞维的化学结构
然而，络塞维的固体大批制备储存一直是没有解决的难题。主要因为络塞维纯品常以无定型固体存在，该形态极易吸湿。例如Msashi K et al.Tetrahedon:Asymmetry.2005:2625-2630.记载了通过柱层析得到的无定型粉末固体，具有吸湿性。按照CN110627845A方法制备的络塞维晶体同样为无定型的晶体。
发明内容
针对现有技术络塞维无定形固体吸湿性过强的缺陷，本发明提供了一种络塞维晶型及其制备方法。本发明的晶型具有良好的稳定性，吸湿性较弱，易于储存，对药物的优化和开发具有重要的价值。
本发明提供了一种络塞维的制备方法，其包括如下步骤：将络塞维粗品与溶剂混合，进行析晶，得到络塞维的晶体；所述的溶剂为甲醇与“乙酸乙酯和/或二氯甲烷”的混合溶液。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一优选实施方案中，某些条件或操作如下定义，未提及的条件和操作同本发明任一方案所述，(简称“在本发明某一方案中”)，所述的络塞维的晶体为晶型I，其X射线粉末衍射图在2θ角为5.45°±0.20°、16.46°±0.20°和16.75°±0.20°处具有特征峰。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的络塞维的晶型I以2θ角表示的XRPD还在7.74°±0.20°、14.84±0.20°、15.53°±0.20°、22.00°±0.20°和29.46°±0.20°处具有特征峰；进一步地，还在9.10°±0.20°、10.90±0.20°、22.67°±0.20°和39.72°±0.20°处具有特征峰。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的络塞维的晶型I以2θ角表示的X射线衍射谱图(XRPD)基本如图1所示。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的络塞维的晶型I的差式扫描热仪图(DSC)基本如图2所示。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的络塞维的晶型I在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，所述晶型I增加的质量不超过0.2％(例如0.15％)。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的析晶的时间可为本领域该类反应的析晶的时间的常规选择，优选10-60分钟，更优选15-40分钟(例如15分钟、30分钟)，最优选25-30分钟。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的析晶的温度可为本领域该类反应的析晶的温度的常规选择，优选20-50℃，更优选25℃。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂为“甲醇和乙酸乙酯的混合溶液”或“甲醇和二氯甲烷的混合溶液”。较佳地，所述的乙酸乙酯与所述的甲醇的体积比为(2-4)：1(例如3:1)；较佳地，所述的二氯甲烷与所述的甲醇的体积比为(2-4)：1(例如2:1或3:1)。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的溶剂与所述的络塞维粗品的体积质量比可为本领域该类反应的常规选择，优选3mL/g-10mL/g。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的络塞维粗品可通过以下方法制得：
溶剂中，在碱的作用下，如式II所示的化合物进行脱保护反应，加入盐酸的甲醇溶液调节pH，浓缩，得所述的络塞维粗品；
其中，R为羟基保护基。
所述的络塞维的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的羟基保护基可为特戊酰基(Piv)、乙酰基(Ac)、苯甲酰基(Bz)或氯乙酰基(CA)，优选为苯甲酰基(Bz)。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述脱保护反应中，所述的有机溶剂可为本领域该类反应的常规溶剂，优选二氯甲烷。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述脱保护反应中，所述的碱可为本领域该类反应的常规碱，优选甲醇钠；所述的甲醇钠优选为以甲醇钠甲醇溶液的形式加入到体系当中；所述甲醇钠甲醇溶液的质量体积浓度优选为(0.02～0.03)g/mL。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述脱保护反应中，所述的碱的用量可为本领域该类反应的常规用量，所述的碱与所述的如式II所示的化合物的摩尔比可为本领域该类反应的常规摩尔比，优选(1.2-2)：1，更优选1.5：1。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护反应中，所述的如式II所示的化合物与所述的有机溶剂的质量体积比可为本领域该类反应的常规质量体积比，优选4g/mL-8g/mL，例如6g/mL。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护反应中，所述的反应的温度可为本领域该类反应的温度的常规选择，优选20-50℃，更优选25℃。
所述的络塞维粗品的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护反应中，所述的调节pH为将pH值调节为7.5-8.5，又例如将pH值调节为7。
在本发明某一方案中，当R为苯甲酰基时，所述的络塞维粗品的制备方法还进一步包括以下步骤：
如式P8所示的化合物与如式A4所示的化合物进行反应，得如式P9所示的化合物；
所述如式P9所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述反应的条件和操作可为本领域此类反应常规的条件和操作。
在本发明某一方案中，所述如式P9所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：
(1)溶剂中，如式P6所示的化合物与BzCl进行羟基保护反应，得如式P7所示的化合物；
(2)溶剂中，在酸的作用下，如式P7所示的化合物进行脱保护反应，得如式P8所示的化合物；
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(1)中，所述溶剂可为本领域此类反应常规的溶剂，优选为吡啶或“吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂”，进一步优选为吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂；所述卤代烷烃类溶剂优选为二氯甲烷；当为吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂时，所述吡啶和所述卤代烷烃类溶剂的体积比优选为1：(2～5)，例如1:3。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(1)中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述溶剂与所述如式P6所示的化合物的体积质量比为(2～10)mL/g，例如3mL/g或8mL/g。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(1)中，BzCl的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，BzCl与如所述式P6所示的化合物的摩尔比为(5～10)：1，例如8:1。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(1)中，所述羟基保护反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(1)中，所述的羟基保护反应的进程可按照本领域常规的检测方法进行监测(例如TLC、HPLC或GC)，一般以如式P6所示的化合物消失时作为反应的终点，所述的羟基保护反应的时间优选为4～10小时(例如7小时)。
在本发明某一方案中，所述如式P8所示的化合物的制备方法的步骤(1)还包括以下后处理步骤：猝灭反应(例如加水猝灭反应)，有机相经洗涤(例如依次经盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤)，浓缩后得P7糖浆，以P7糖浆的形式直接进行下一步反应。步骤(1)的后处理不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述溶剂可为本领域此类反应常规的溶剂，优选为含氮化合物溶剂和/或醚类溶剂，进一步优选为DMF和/或THF(例如DMF)。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述溶剂与所述如式P7所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如5mL/g。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述的酸为可为本领域此类反应常规的酸，优选为盐酸；所述盐酸优选为以盐酸水溶液的形式加入到体系当中，较佳地，所述盐酸水溶液的摩尔浓度为0.8～1.5mol/L(例如1mol/L)。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述酸的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述酸与所述如式P7的化合物的摩尔比为1：(0.5～5)。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述脱保护反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃。
所述如式P8所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，步骤(2)中，所述的脱保护反应的进程可按照本领域常规的检测方法进行监测(例如TLC、HPLC或GC)，一般以如式P7所示的化合物消失时作为反应的终点，所述的脱保护反应的时间优选为0.5～5小时(例如2小时)。
在本发明某一方案中，所述如式P8所示的化合物的制备方法的步骤(2)还包括以下后处理步骤：加入溶剂后析出如式P8所示的化合物的固体，过滤。步骤(2)的后处理不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
在本发明某一方案中，所述如式P8所示的化合物的制备方法步骤(2)的后处理步骤包括以下方法：加饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应，加入乙酸乙酯提取，加入石油醚(石油醚的用量为理论产物质量的2～6倍)后析出如式P8所示的化合物的固体，过滤，即可。
在本发明某一方案中，所述如式P8所示的化合物的制备方法还进一步包括如下步骤：
溶剂中，在缚酸剂的作用下，如式P5所示的化合物与叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)进行羟基保护反应，得如式P6所示的化合物；
所述缚酸剂为咪唑。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂可为本领域此类反应常规的溶剂，优选为含氮化合物溶剂和/或醚类溶剂，进一步优选为DMF和/或THF。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述溶剂与所述如式P5所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如6mL/g。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述缚酸剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述缚酸剂与所述如式P5所示的化合物的摩尔比为(1～4)：1，进一步优选为(2～3)：1，例如2.5：1。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，叔丁基二甲基氯硅烷的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，叔丁基二甲基氯硅烷与所述如式P5所示的化合物的摩尔比为(1～1.8)：1(例如1:1或1.5:1)，进一步优选为(1.2～1.6)：1。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述羟基保护反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃。
所述如式P6所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的羟基保护反应的进程可按照本领域常规的检测方法进行监测(例如TLC、HPLC或GC)，一般以如式P5所示的化合物消失时作为反应的终点，所述的羟基保护反应的时间优选为1-6小时(例如1小时或5小时)。
在本发明某一方案中，所述如式P6所示的化合物的制备方法包括以下步骤：将如式P5所示的化合物、缚酸剂和溶剂混合，再将叔丁基二甲基氯硅烷加入至体系中进行羟基保护反应，得如式P6所示的化合物。
在本发明某一方案中，所述如式P6所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：浓缩得到如式P6所示的化合物的固体后，加入溶剂打浆，过滤，干燥。所述如式P6所示的化合物的制备方法的后处理不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
在本发明某一方案中，所述如式P6所示的化合物的制备方法的后处理步骤包括以下方法：加水猝灭反应，加入乙酸乙酯提取，有机相经饱和食盐水洗、干燥后过滤，浓缩得到如式P6所示的化合物的固体，加入石油醚打浆，过滤，干燥后得如式P6所示的化合物。
在本发明某一方案中，所述如式P6所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：
溶剂中，在碱的作用下，如式P4的化合物进行脱保护反应，得如式P5所示的化合物；
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂可为本领域此类反应常规的溶剂，优选为卤代烃类溶剂，进一步优选为二氯甲烷。
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述溶剂与所述如式P4所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如6mL/g。
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述碱可为本领域此类反应常规的碱，优选为甲醇钠。所述甲醇钠优选为以甲醇钠的甲醇溶液的形式加入到体系当中，其中，甲醇与所述如式P4所示的化合物的体积质量比为(2～5)mL/g，例如3mL/g。
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述碱的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述碱与所述如式P4的化合物的摩尔比为(1～5)：1，例如3:1。
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述脱保护反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃。
所述如式P5所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护反应的进程可按照本领域常规的检测方法进行监测(例如TLC、HPLC或GC)，一般以如式P4所示的化合物消失时作为反应的终点，所述的脱保护反应的时间优选为3～10小时(例如6小时)。
在本发明某一方案中，所述如式P5所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：调节pH至中性(例如加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7)，浓缩，得P5糖浆，以P5糖浆的形式直接进行下一步反应。所述如式P5所示的化合物的制备方法的后处理不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
在本发明某一方案中，所述如式P5所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：如式P3所示的化合物与肉桂醇反应，得如式P4所示的化合物；
在本发明某一方案中，所述如式P4所示的化合物的制备方法中，所述反应的条件和操作可为本领域此类反应常规的条件和操作。
在本发明某一方案中，所述如式P4所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：有机溶剂中，催化剂的作用下，将如式P2所示的化合物与三氯乙腈进行取代反应，得如式P3所示的化合物；
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的有机溶剂可为本领域该类反应的常规有机溶剂，优选二氯甲烷。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的催化剂可为本领域该类反应的常规碱性试剂，优选1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的如式P2所示的化合物与所述的有机溶剂的质量体积比值优选为2mg/mL～8mg/mL。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的催化剂与所述的如式P2所示的化合物的摩尔比在(0.1～1)：1。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的三氯乙腈与所述的如式P2所示的化合物的摩尔比在(1～5):1。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的取代反应的进程可采用本领域常规的检测方式进行监测，如薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、核磁共振波谱(NMR)或高效液相色谱(HPLC)等。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的取代反应的时间以所述的取代反应完全为准，优选为1～5h，例如2h。
所述如式P3所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述取代反应的后处理步骤可为本领域反应常规的后处理步骤，例如打浆，过滤和烘干，即可。不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
在本发明某一方案中，所述如式P3所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：醇类溶剂中，将如式P1所示的化合物与NH3进行脱保护基反应，得到如式P2所示的化合物；
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的醇类溶剂可为本领域该类反应常规溶剂，优选为甲醇。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应的常规的用量，所述的溶剂与所述的P1的体积质量比优选为5mL/g-20mL/g。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的NH3的用量可为本领域此类反应的常规的用量，所述的NH3的用量优选为P1质量的0.05-0.5倍。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的NH3的通入时间可为本领域此类反应的常规的通入时间，所述的NH3的通入时间优选30min-90min。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述脱保护反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃，更优选25℃。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护基反应的压力可视反应温度调整，以反应温度不超过“压力下的沸点”为准，优选80kPa-120kPa，更优选101kPa。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护基反应的进程可以采用本领域中的常规监测方法(例如TLC、HPLC或NMR)进行监测，一般以如式P1所示的化合物不再反应时为反应终点，所述脱保护基反应的时间优选10h～20h，更优选15h。
所述如式P2所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的脱保护基反应的后处理可为本领域该类反应常规的后处理，较佳地，所述的脱保护基反应的后处理包括以下步骤：有机溶剂(例如乙酸乙酯)溶解，水洗，浓缩，得到P2糖浆，以P2糖浆的形式直接进行下一步反应。由于不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
在本发明的某一方案中，所述的如式P2所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：溶剂中，缚酸剂的存在下，将如式1所示的化合物与苯甲酰氯进行反应，得到如式P1所示的化合物；
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂可为本领域此类反应常规的溶剂，优选为卤代烃类溶剂，进一步优选为二氯甲烷。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述缚酸剂可为本领域此类反应常规的缚酸剂，优选为吡啶。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述溶剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述溶剂与所述如式1所示的化合物的体积质量比为(2～10)mL/g，例如5mL/g。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述缚酸剂的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述缚酸剂与如式1所示的化合物的体积质量比为(5～20)mL/g，例如10mL/g。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述苯甲酰氯的用量可为本领域此类反应常规的用量，较佳地，所述苯甲酰氯与如式P1所示的化合物的摩尔比4～10：1，例如8:1。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述反应的温度可为本领域此类反应常规的反应温度，优选为20～40℃。
所述如式P1所示的化合物的制备方法中，在本发明某一方案中，所述的反应的进程可按照本领域常规的检测方法进行监测(例如TLC、HPLC或GC)，一般以如式1所示的化合物消失时作为反应的终点，所述反应的时间优选为1-5小时(例如3小时)。
在本发明某一方案中，所述如式P1所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：调节pH至中性，浓缩，得P1糖浆，以P1糖浆的形式直接进行下一步反应。所述如式P1所示的化合物的制备方法的后处理不包含柱层析步骤，易于操作，适合放大生产。
本发明还提供一种络塞维的晶型I，其X射线粉末衍射图在2θ值如上任一项所述。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种络塞维的晶型及其制备方法。本发明的晶型具有良好的稳定性，几乎无吸湿性，对药物的优化和开发具有重要的价值。
附图说明
图1为络塞维晶型I的X射线衍射谱图
图2络塞维晶型I的差式扫描热仪图。
图3络塞维晶型I的HPLC数据。
图4为无定型络塞维的X射线衍射谱图
图5无定形络塞维HPLC数据。
图6络塞维新晶型与无定型固体-XPRD叠加图对比。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1络塞维晶型I的制备
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆154g。加入甲醇(300ml)、乙酸乙酯(900ml)后析出，过滤得到络塞维晶型I 120g，收率98.6％。HPLC纯度：98.74％。在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，晶型I增加的质量为0.15％，几乎无引湿性。
所得晶型I的X射线衍射谱图如图1所示，其衍射峰、峰宽值、峰高、峰高百分比、峰面积和峰面积百分比如下表1所示：
表1络塞维晶型I以2θ角表示的X射线衍射谱图
络塞维晶型I的差式扫描热仪图如图2所示。
络塞维晶型I的HPLC数据如图3所示，其测试条件如下：液相柱：Agilent 5Tc-C18250×4.6；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：250nm；流动相A：CH3OH；流动相B：10mM磷酸二氢钾水溶液，洗脱程序如下表2所示：
表2
| 分钟 | A％ | B％ |
| 0 | 25 | 75 |
| 5 | 25 | 75 |
| 15 | 35 | 65 |
| 40 | 35 | 65 |
| 41 | 25 | 75 |
| 45 | 25 | 75 |
。
络塞维：1H NMR(400MHz,CDCl3)1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.45–7.41(m,2H),7.35–7.29(m,2H),7.24(ddd,J＝7.3,3.8,1.2Hz,1H),6.72(d,J＝16.0Hz,1H),6.38(ddd,J＝16.0,6.4,5.8Hz,1H),4.53(ddd,J＝12.9,5.6,1.5Hz,1H),4.39(t,J＝5.5Hz,1H),4.38–4.31(m,2H),4.13(dd,J＝11.4,2.2Hz,1H),3.91–3.86(m,1H),3.82(dt,J＝4.9,2.5Hz,1H),3.76(dd,J＝11.4,5.8Hz,1H),3.63(dd,J＝8.8,6.7Hz,1H),3.58–3.52(m,2H),3.48(ddd,J＝8.0,5.7,2.1Hz,1H),3.40–3.35(m,2H),3.28–3.23(m,1H).MS：(M+Na)+451。
实施例2络塞维晶型I的制备
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆160g。加入甲醇(300ml)、二氯甲烷(900ml)，室温搅拌析晶0.5h，过滤得到络塞维晶型117g，经确证，其为络塞维晶型I，收率95.9％，HPLC纯度：94.5％。在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，晶型I增加的质量为0.16％，几乎无引湿性。
实施例3络塞维晶型I的制备
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆152g。加入甲醇(300ml)、二氯甲烷(600ml)，室温搅拌析晶0.5h，过滤得到络塞维晶型I 102g，收率84.5％。纯度：76.2％。在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，所述晶型I增加的质量为0.20％，几乎无引湿性。
实施例4络塞维制备
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆155g。加入甲醇(300ml)、二氯甲烷(900ml)，室温搅拌析晶15min，过滤得到络塞维晶型I 100.5g，收率83.5％。HPLC纯度：79.2％。在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，所述晶型I增加的质量为0.17％，几乎无引湿性。
对比例1无定形络塞维制备
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆154.2g。加入乙酸乙酯(900ml)打浆2小时，过滤得到吸湿的无定型络塞维32.46g，收率80％。HPLC纯度：92.5％。
在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，无定型络塞维增加的质量为15.4％，极具引湿性。
所得无定型络塞维的X射线衍射谱图如图4所示，其衍射峰、峰宽值、峰高、峰高百分比、峰面积和峰面积百分比如下表3所示：
表3无定型络塞维以2θ角表示的X射线衍射谱图
| 编号 | 2θ(±0.2°) | d(A) | 峰高 | 峰高百分比(％) | 峰面积 | 峰面积百分比(％) |
| 1 | 3.518 | 25.0944 | 493 | 51.4 | 2678 | 28.1 |
| 2 | 20.057 | 4.4233 | 496 | 51.7 | 249 | 2.6 |
| 3 | 27.328 | 3.2608 | 362 | 37.7 | 1194 | 12.5 |
| 4 | 31.614 | 2.8278 | 959 | 100.0 | 9534 | 100.0 |
络塞维新晶型与无定型固体-XPRD叠加图对比如图6所示，HPLC数据如图5所示，该方法测试条件与上文中络塞维晶型I的HPLC测试条件相同。
对比例2：水/丙酮体系重结晶。
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇(900ml)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆157.2g。加入丙酮(900ml)、水(300ml)，室温搅拌析晶12h，无法得到产物络塞维固体。
对比例3：甲醇/乙醚体系重结晶。
加入P9(300g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(1800ml)，加入甲醇钠(1.5eq，23g)的甲醇900ml溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸的甲醇溶液调节pH＝7，过滤除盐，浓缩反应液得到络塞维糖浆152.5g。加入乙醚(900ml)、甲醇(300ml)，室温搅拌析晶12h，无法得到产物络塞维固体。
制备例1制备A4
反应釜中加入L-阿拉伯糖500g，加入二氯甲烷(2.5L)搅拌溶解，加入吡啶(2.63kg)。冰浴滴加苯甲酰氯(3.75kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水(1.5L)淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤得到苯甲酰基-L-阿拉伯糖(A1)溶液。
将上述A1溶液加入33％氢溴酸乙酸溶液(816g，3eq)，室温反应2小时后反应完全。加入饱和碳酸氢钠淬灭反应，分液，水洗后浓缩。得到A2糖浆。
将上述A2糖浆加入丙酮(5.24L)、水(1.74L)，加入碘化钠(249g，0.5eq)室温反应2小时后反应完全。加入乙酸乙酯(5.24L)和水(5.24L)提取产物，依次硫代硫酸钠溶液洗、饱和碳酸氢钠洗，浓缩得到A3糖浆。
将上述A3糖浆加入二氯甲烷(7.7L)室温搅拌溶解，加入三氯乙腈(0.962kg，2eq)、DBU(253.7g，0.5eq)，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯(4.6L)搅拌2小时后反应完全，浓缩反应液得到A4糖浆并直接用于下步投料，产物：1.58kg，收率：78.3％。
实施例5制备P3
反应釜中加入无水葡萄糖642.78g，加入二氯甲烷3.21L，搅拌溶解，加入吡啶2.82kg。冰浴滴加苯甲酰氯(4kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水(1.928L)淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到苯甲酰基葡萄糖糖浆(P1)，3.1kg，HPLC纯度：95.5％。
将上述糖浆3.1kg加入无水甲醇(21L)溶清，通入氨气200g至反应液，持续1小时。然后放置室温反应15小时后反应完全。浓缩反应液得到黑色P2糖浆，加入乙酸乙酯8.5L溶解，水洗4.25L洗两遍，浓缩乙酸乙酯相得到黑色P2糖浆2.3kg，HPLC纯度：86.5％。
将上述P2糖浆2.3kg加入二氯甲烷10.6L搅拌溶解，加入三氯乙腈1.03kg、DBU271g，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯7.928L，搅拌2小时后析出P3。过滤烘干得到P3固体1.61kg，三步总收率：60.7％，HPLC纯度：94.5％。
对比例4制备P3，使用乙酸肼
反应釜中加入无水葡萄糖642.78g，加入二氯甲烷3.21L，搅拌溶解，加入吡啶2.82kg。冰浴滴加苯甲酰氯(4kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水1.928L淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到苯甲酰基葡萄糖糖浆(P1)，3.11kg，HPLC纯度：94.5％。
将上述糖浆3.11kg加入无水甲醇21L溶清，加入乙酸肼(330g)。然后放置室温反应15小时后反应完全。浓缩反应液得到黑色P2糖浆，加入乙酸乙酯8.5L溶解，水洗4.25L洗两遍，浓缩乙酸乙酯相得到黑色P2糖浆2.31kg，HPLC纯度：75.7％。
将上述P2糖浆2.31kg加入二氯甲烷10.6L搅拌溶解，加入三氯乙腈1.03kg、DBU271g，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯7.928L搅拌2小时后析出P3。过滤烘干得到P3固体0.95kg，三步收率：35.7％，HPLC纯度：85.5％。
对比例5制备P3，使用甲胺
反应釜中加入无水葡萄糖642.78g，加入二氯甲烷3.21L，搅拌溶解，加入吡啶2.82kg。冰浴滴加苯甲酰氯(4kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水(1.928L)淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到苯甲酰基葡萄糖糖浆(P1)，3.15kg，纯度：94.55％。
将上述糖浆3.15kg加入无水甲醇21L溶清，加入甲胺(110g)至反应液。然后放置室温反应15小时后反应完全。浓缩反应液得到黑色P2糖浆，加入乙酸乙酯8.5L溶解，4.25L水洗两遍，浓缩乙酸乙酯相得到黑色P2糖浆2.3kg，HPLC纯度：68％。在反应规模较大时使用甲胺进行脱保护基反应时副反应明显，副反应为碱性过强导致的D-葡萄糖上其余苯甲酰基脱除，从而导致收率和纯度下降。
将上述P2糖浆2.3kg加入二氯甲烷10.6L搅拌溶解，加入三氯乙腈1.03kg、DBU271g，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯7.928L搅拌2小时后析出P3。过滤烘干得到P3固体0.86kg，三步收率：32.6％，HPLC纯度：83.5％。
对比例6制备P3，(溶剂筛选：四氢呋喃)
反应釜中加入无水葡萄糖642.78g，加入二氯甲烷(3.21L)搅拌溶解，加入吡啶(2.82kg)。冰浴滴加苯甲酰氯(4kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水(1.928L)淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到苯甲酰基葡萄糖糖浆(P1)，3.05kg，HPLC纯度：93.6％。
将上述糖浆3.05kg加入四氢呋喃21L溶清，通入氨气至反应液，持续1小时。然后放置室温反应15小时后反应完全。浓缩反应液得到黑色P2糖浆，加入乙酸乙酯8.5L溶解，4.25L水洗两遍，浓缩乙酸乙酯相得到黑色P2糖浆2.3kg，HPLC纯度：86.5％。
将上述P2糖浆2.3kg加入二氯甲烷10.6L搅拌溶解，加入三氯乙腈1.03kg、DBU271g，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯7.928L搅拌2小时后析出P3。过滤烘干得到P3固体1.12kg，收率：42.2％，HPLC纯度：94.5％。
对比例7制备P3，(溶剂筛选：二氯甲烷)
反应釜中加入无水葡萄糖642.78g，加入二氯甲烷(3.21L)搅拌溶解，加入吡啶(2.82kg)。冰浴滴加苯甲酰氯(4kg，8eq)。室温反应3h后反应完全，滴加水(1.928L)淬灭反应。分液提取有机相，依次1M HCl洗、饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到苯甲酰基葡萄糖糖浆(P1)，3.14kg，HPLC纯度：95.2％。
将上述糖浆3.14kg加入二氯甲烷21L溶清，通入氨气至反应液，持续1小时。然后放置室温反应15小时后反应完全。浓缩反应液得到黑色P2糖浆2.3kg，加入乙酸乙酯8.5L溶解，水洗4.25L洗两遍，浓缩乙酸乙酯相得到黑色P2糖浆2.3kg，HPLC纯度：37.3％。
将上述P2糖浆2.3kg加入二氯甲烷10.6L搅拌溶解，加入三氯乙腈1.03kg、DBU(271g，室温搅拌反应2h后反应完全。浓缩反应液，加入乙酸乙酯7.928L搅拌2小时后析出P3。过滤烘干得到P3固体0.54kg，收率：20.5％，HPLC纯度：86.3％。
实施例6
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆241.6g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：95.20％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加TBDMSCl(142.4g，1.5eq)。滴加完后室温反应1h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6203g，两步收率：78.49％，纯度(HPLC)：95.44％。
P6的核磁质谱数据：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.39(d,J＝7.3Hz,2H),7.34–7.29(m,2H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),6.60(t,J＝17.7Hz,1H),6.30(ddd,J＝22.7,14.5,8.3Hz,1H),4.54–4.45(m,1H),4.37(t,J＝9.9Hz,1H),4.30–4.24(m,1H),3.88(qd,J＝10.8,5.1Hz,2H),3.63–3.56(m,1H),3.53(t,J＝9.1Hz,1H),3.48–3.43(m,1H),3.35(dt,J＝9.7,5.1Hz,1H).
MS：433(M+Na)。
实施例7
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆240g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：95.10％。
将P5糖浆加入无水THF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加叔丁基二甲基氯硅烷TBDMSCl(142.4g，1.5eq)。滴加完后室温反应1h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6 178g，两步收率：68.80％，纯度(HPLC)：93.60％。
实施例8
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆242.8g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：94.40％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加叔丁基二甲基氯硅烷TBDMSCl(94.9g，1eq)。滴加完后室温反应5h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6 156.2g，两步收率：60.40％，纯度(HPLC)：96.21％。
对比例8
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆249g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：93.95％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加叔丁基二苯基氯硅烷TBDPSCl(259g，1.5eq)。滴加完后室温反应12h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6-1固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6-1 144g，两步收率：44.36％，纯度(HPLC)：87.63％。TBDPS基团位阻大，导致反应时间延长、收率和纯度较低。
对比例9
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆247g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：94.60％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加三甲基硅基氯TMSCl(102g，1.5eq)。滴加完后室温反应3h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6-2固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6-2 100.4g，两步收率：43.30％，纯度(HPLC)：83.57％。收率和纯度均较低。
对比例10
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆241g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：95.5％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入吡啶(124g，2.5eq)。滴加叔丁基二甲基氯硅烷TBDMSCl(142.4g，1.5eq)。滴加完后室温反应1h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6 89g，两步收率：34.40％，纯度(HPLC)：86.50％。收率和纯度均较低。
对比例11
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆244g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：94.77％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入三乙胺(160.5g，2.5eq)。滴加叔丁基二甲基氯硅烷TBDMSCl(142.4g，1.5eq)。滴加完后室温反应2h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6 104g，两步收率：40.50％，纯度(HPLC)：83.27％，收率和纯度均较低。
对比例12
加入P4(500g)，加入二氯甲烷搅拌溶解(3L)，加入甲醇钠(113.68g，3eq)的甲醇(1.5L)溶液。室温反应6h后反应完全。加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7，浓缩反应液，得到P5糖浆243.6g(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：95.5％。
将P5糖浆加入无水DMF(1.3L)溶解，加入咪唑(107g，2.5eq)。滴加叔丁基二甲基氯硅烷TBDMSCl(190g，2eq)。滴加完后室温反应1h后反应完全。加水淬灭反应，加入乙酸乙酯提取两次。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P6固体。加入石油醚(1.8L)打浆，过滤烘干得到P6 115g，两步收率：44.00％，纯度(HPLC)：81.70％，过量的TBDMSCl会产生更多的副产物。
实施例9
将P6 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml)溶解。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7糖浆306g，收率：115.9％(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：97.6％。
将上述P7糖浆加入DMF(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl水溶液(150ml)。室温反应2h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍(600ml)。反滴入3倍体积的石油醚(1.8L)中搅拌析出产物。过滤得到P8固体(184.4g)，两步总收率：83.06％，HPLC纯度为97.89％。
实施例10
将P6 150g，加入吡啶(432g，15eq)。这里冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7糖浆324g，收率：123.2％(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：90.40％。
将上述P7糖浆加入DMF(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl水溶液(150ml)。室温反应2h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍(600ml)。反滴入3倍体积的石油醚(1.8L)中搅拌析出产物。过滤得到P8固体(156.4g)，两步总收率：70.46％，HPLC纯度为87.5％。
实施例11
将P6 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml)溶解。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7糖浆304g，收率：115.6％(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：97.5％。
将上述P7糖浆加入THF(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl(150ml)。室温反应12h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍(600ml)。反滴入3倍体积的石油醚(1.8L)中搅拌析出产物177.12g，两步总收率：80.06％，HPLC纯度为97.70％。结果显示，与DMF相比，以THF为溶剂反应时间较长，另外THF价格比DMF高。
对比例13
将P6 150g，加入二氯甲烷(900ml)室温搅拌溶解，加入三乙胺(370g，10eq)。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。使用三乙胺代替吡啶后，原料没有反应，效果不好，没有得到目标产物。
对比例14
将P6-1 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml，5vol)溶解。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应24h后依然没有目标产物生成。
对比例15
将P6 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml)溶解。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7糖浆295g，收率：112.2％(因浓缩残留溶剂超重)，HPLC纯度：95.5％。
将上述P7糖浆加入乙腈(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl(150ml)室温反应12h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入EA提取2遍(600ml)。反滴入3倍体积的石油醚(1.8L)中搅拌析出产物130g两步总收率：59.80％，HPLC纯度为95.40％。结果显示，与DMF相比，以乙腈为溶剂反应不完全。
对比例16
将P6 10g加入吡啶(13.5g，7eq)和二氯甲烷(60ml)溶解。冰浴滴加特戊酰氯(17.6g，6eq)。室温反应15h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，柱层析得到P7-1(9.8g)。收率：64.6％。
P7-1：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41–7.17(m,138H),6.59(t,J＝13.3Hz,1H),6.20(ddd,J＝15.9,6.8,5.5Hz,1H),5.33(t,J＝9.5Hz,1H),5.13–5.01(m,2H),4.63(d,J＝8.0Hz,1H),4.49(ddd,J＝12.8,5.3,1.2Hz,1H),4.26(ddd,J＝13.0,6.9,0.8Hz,1H),3.76–3.50(m,3H)。
将P7-1(2g，1eq)加入DMF(14ml)溶解，冰浴5℃，加入1M HCl(3ml)。室温反应2h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍。浓缩有机相得到P8-1糖浆，柱层析得到P8-1固体(0.84g)，收率：48.55％。
P8-1：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ6.60(d,J＝15.9Hz,1H),6.22(dt,J＝15.9,6.1Hz,2H),5.41(t,J＝9.5Hz,1H),5.10(ddd,J＝12.5,8.9,3.6Hz,2H),4.68(d,J＝8.1Hz,1H),4.51(dd,J＝12.8,4.8Hz,1H),4.29(dd,J＝12.8,6.6Hz,1H),3.77–3.68(m,1H),3.58(q,J＝6.7Hz,2H)。
对比例17
将P6 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml)溶解。冰浴滴加乙酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7-2糖浆。
将上述P7-2糖浆加入DMF(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl(150ml)。室温反应2h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍(600ml)。反滴入3倍体积的石油醚(1.8L)中搅拌析出产物。过滤得到P8-2固体(88.5g)，收率：57.3％，HPLC纯度：93.4％。
对比例18
将P6 150g加入吡啶(288g，10eq)和二氯甲烷(900ml)溶解。冰浴滴加苯甲酰氯(372g，8eq)。室温反应7h后反应完全，加水淬灭反应。有机相依次使用1M HCl洗、饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗，浓缩，得到P7糖浆。
将上述P7糖浆加入DMF(1.58L)溶解，冰浴5℃加入1M HCl(150ml)。室温反应2h后反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯提取2遍(600ml)。将有机相依次饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得到P8粗品。将P8粗品溶于(甲醇：DCM＝1vol:3vol，200ml：600ml)中在25℃下析晶，析晶时间为3h，过滤得到P8固体(100.7g)，两步总收率：45.5％，HPLC纯度：94.6％。
由于P7糖浆中含有大量副产物苯甲酸酐，反应规模较大时，按照先浓缩再重结晶的后处理方式会使苯甲酸酐与P8反应，近半转换为杂质。本发明进行了改进，在水洗后不经浓缩直接反滴入石油醚中析出产物，操作简便，杂质少。
实施例12制备P9
将A4(理论265.5g，1.5eq)糖浆和P8(177.5g，1eq)混合，惰性气体保护下加入二氯甲烷(1L，5vol)溶解。降温滴加TMSOTf(9.07g，0.14eq)的二氯甲烷稀释液。室温反应1小时后反应完全，加入三乙胺淬灭反应。浓缩反应液，使用甲醇体系重结晶得到糖苷化产物P9(297g)，收率96.74％。
Claims (17)
1.一种络塞维的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将络塞维粗品与溶剂混合，进行析晶，得到络塞维的晶体；所述的溶剂为甲醇与“乙酸乙酯和/或二氯甲烷”的混合溶液。
2.如权利要求1所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述的络塞维的制备方法中，所述的络塞维的晶体为晶型I，其X射线粉末衍射图在2θ角为5.45°±0.20°、16.46°±0.20°和16.75°±0.20°处具有特征峰；较佳地，所述的络塞维的晶型I以2θ角表示的X射线粉末衍射图还在7.74°±0.20°、14.84±0.20°、15.53°±0.20°、22.00°±0.20°和29.46°±0.20°处具有特征峰；更佳地，还在9.10°±0.20°、10.90±0.20°、22.67°±0.20°和39.72°±0.20°处具有特征峰；进一步地，所述的络塞维的晶型I以2θ角表示的X射线衍射谱图基本如图1所示；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述的络塞维的晶型I的差式扫描热仪图基本如图2所示；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述的络塞维的晶型I在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，所述晶型I增加的质量不超过0.2％(例如0.15％)；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述的析晶的时间为10-60分钟，优选15-40分钟(例如15分钟、30分钟)，进一步优选25-30分钟；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述的析晶的温度为20-50℃，优选25℃；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述溶剂为“甲醇和乙酸乙酯的混合溶液”或“甲醇和二氯甲烷的混合溶液”，较佳地，所述的乙酸乙酯与所述的甲醇的体积比为(2-4)：1(例如3:1)；较佳地，所述的二氯甲烷与所述的甲醇的体积比为(2-4)：1(例如2:1或3:1)；
和/或，所述的络塞维的制备方法中，所述的溶剂与所述的络塞维粗品的体积质量比为3mL/g-10mL/g。
3.如权利要求1所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述的络塞维粗品通过以下方法制得：
溶剂中，在碱的作用下，如式II所示的化合物进行脱保护反应，加入盐酸的甲醇溶液调节pH，浓缩，得所述的络塞维粗品；
其中，R为羟基保护基。
4.如权利要求3所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述的羟基保护基可为特戊酰基、乙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基，优选为苯甲酰基；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述脱保护反应中，所述的有机溶剂为二氯甲烷；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述的碱为甲醇钠；所述的甲醇钠优选为以甲醇钠甲醇溶液的形式加入到体系当中；所述甲醇钠甲醇溶液的质量体积浓度优选为(0.02～0.03)g/mL；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述的碱与所述的如式II所示的化合物的摩尔比为(1.2-2)：1，优选1.5：1；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述的如式II所示的化合物与所述的有机溶剂的质量体积比为4g/mL-8g/mL，例如6g/mL；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述脱保护反应的温度为20-50℃，优选25℃；
和/或，所述的络塞维粗品的制备方法中，所述的脱保护反应中，所述的调节pH为将pH值调节为7.5-8.5，又例如将pH值调节为7。
5.如权利要求3所述的络塞维的制备方法，其特征在于，当R为苯甲酰基时，所述的络塞维粗品的制备方法还进一步包括以下步骤：
如式P8所示的化合物与如式A4所示的化合物进行反应，得如式P9所示的化合物；
所述如式P9所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：
(1)溶剂中，如式P6所示的化合物与BzCl进行羟基保护反应，得如式P7所示的化合物；
(2)溶剂中，在酸的作用下，如式P7所示的化合物进行脱保护反应，得如式P8所示的化合物；
6.如权利要求5所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(1)中，所述溶剂为吡啶或“吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂”，优选为吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂；所述卤代烷烃类溶剂优选为二氯甲烷；当为吡啶和卤代烷烃类溶剂的混合溶剂时，所述吡啶和所述卤代烷烃类溶剂的体积比优选为1：(2～5)，例如1:3；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(1)中，所述溶剂与所述如式P6所示的化合物的体积质量比为(2～10)mL/g，例如3mL/g或8mL/g；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(1)中，BzCl与所述如式P6所示的化合物的摩尔比为(5～10)：1，例如8:1；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(1)中，所述羟基保护反应的温度为20～40℃；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(1)中，所述的羟基保护反应的时间优选为4～10小时，例如7小时；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法的步骤(1)还包括以下后处理步骤：猝灭反应(例如加水猝灭反应)，有机相经洗涤(例如依次经盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤)，浓缩后得P7糖浆，以P7糖浆的形式直接进行下一步反应；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述溶剂为含氮化合物溶剂和/或醚类溶剂，优选为DMF和/或THF(例如DMF)；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述溶剂与所述如式P7所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如5mL/g；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述的酸为盐酸；所述盐酸优选为以盐酸水溶液的形式加入到体系当中，所述盐酸水溶液的摩尔浓度优选为0.8～1.5mol/L，例如1mol/L；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述酸与所述如式P7的化合物的摩尔比为1：(0.5～5)；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述脱保护反应的温度为20～40℃；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法中，步骤(2)中，所述的脱保护反应的时间为0.5～5小时，例如2小时；
和/或，所述如式P8所示的化合物的制备方法的步骤(2)还包括以下后处理步骤：加入溶剂后析出如式P8所示的化合物的固体，过滤；较佳地，所述如式P8所示的化合物的制备方法步骤(2)的后处理步骤包括以下方法：加饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应，加入乙酸乙酯提取，加入石油醚(石油醚的用量为理论产物质量的2～6倍)后析出如式P8所示的化合物的固体，过滤，即可。
7.如权利要求5所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P8所示的化合物的制备方法还进一步包括如下步骤：
溶剂中，在缚酸剂的作用下，如式P5所示的化合物与叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)进行羟基保护反应，得如式P6所示的化合物；
所述缚酸剂为咪唑。
8.如权利要求7所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，所述溶剂为含氮化合物溶剂和/或醚类溶剂，优选为DMF和/或THF；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，所述溶剂与所述如式P5所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如6mL/g；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，所述缚酸剂与所述如式P5所示的化合物的摩尔比为(1～4)：1，优选为(2～3)：1，例如2.5：1；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，叔丁基二甲基氯硅烷与所述如式P5所示的化合物的摩尔比为(1～1.8)：1(例如1:1或1.5:1)，优选为(1.2～1.6)：1；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，所述羟基保护反应的温度为20～40℃；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法中，所述的羟基保护反应的时间为1-6小时(例如1小时或5小时)；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法包括以下步骤：将如式P5所示的化合物、缚酸剂和溶剂混合，再将叔丁基二甲基氯硅烷加入至体系中进行羟基保护反应，得如式P6所示的化合物；
和/或，所述如式P6所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：浓缩得到如式P6所示的化合物的固体后，加入溶剂打浆，过滤，干燥；较佳地，所述如式P6所示的化合物的制备方法的后处理步骤包括以下方法：加水猝灭反应，加入乙酸乙酯提取，有机相经饱和食盐水洗、干燥后过滤，浓缩得到如式P6所示的化合物的固体，加入石油醚打浆，过滤，干燥后得如式P6所示的化合物。
9.如权利要求7所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P6所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：
溶剂中，在碱的作用下，如式P4的化合物进行脱保护反应，得如式P5所示的化合物；
10.如权利要求9所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述溶剂为卤代烃类溶剂，优选为二氯甲烷；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述溶剂与所述如式P4所示的化合物的体积质量比为(4～10)mL/g，例如6mL/g；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述碱为甲醇钠，所述甲醇钠优选为以甲醇钠的甲醇溶液的形式加入到体系当中，其中，甲醇与所述如式P4所示的化合物的体积质量比优选为(2～5)mL/g，例如3mL/g；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述碱与所述如式P4的化合物的摩尔比为(1～5)：1，例如3:1；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述脱保护反应的温度为20～40℃；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法中，所述的脱保护反应的时间为3～10小时，例如6小时；
和/或，所述如式P5所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：调节pH至中性(例如加入盐酸甲醇溶液调节pH＝7)，浓缩，得P5糖浆，以P5糖浆的形式直接进行下一步反应。
11.如权利要求9所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P5所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：如式P3所示的化合物与肉桂醇反应，得如式P4所示的化合物；
所述如式P4所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：有机溶剂中，催化剂的作用下，将如式P2所示的化合物与三氯乙腈进行取代反应，得如式P3所示的化合物；
12.如权利要求11所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的有机溶剂为二氯甲烷；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的催化剂为碱性试剂，优选1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的如式P2所示的化合物与所述的有机溶剂的质量体积比值为2mg/mL～8mg/mL；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的催化剂与所述的如式P2所示的化合物的摩尔比在(0.1～1)：1；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的三氯乙腈与所述的如式P2所示的化合物的摩尔比在(1～5):1；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述的取代反应的时间为1～5h，例如2h；
和/或，所述如式P3所示的化合物的制备方法中，所述取代反应的后处理步骤可为本领域反应常规的后处理步骤，例如打浆，过滤和烘干，即可。
13.如权利要求11所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P3所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：醇类溶剂中，将如式P1所示的化合物与NH3进行脱保护基反应，得到如式P2所示的化合物；
14.如权利要求13所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的醇类溶剂为甲醇；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的溶剂与所述的P1的体积质量比为5mL/g-20mL/g；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的NH3的用量为P1质量的0.05-0.5倍；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的NH3的通入时间优选30min-90min；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述脱保护反应的温度为20～40℃，优选25℃；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的脱保护基反应的压力视反应温度调整，以反应温度不超过“压力下的沸点”为准，优选80kPa-120kPa，更优选101kPa；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述脱保护基反应的时间为10h～20h，优选15h；
和/或，所述如式P2所示的化合物的制备方法中，所述的脱保护基反应的后处理包括以下步骤：有机溶剂(例如乙酸乙酯)溶解，水洗，浓缩，得到P2糖浆，以P2糖浆的形式直接进行下一步反应。
15.如权利要求13所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述的如式P2所示的化合物的制备方法还进一步包括以下步骤：溶剂中，缚酸剂的存在下，将如式1所示的化合物与苯甲酰氯进行反应，得到如式P1所示的化合物；
16.如权利要求15所述的络塞维的制备方法，其特征在于，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述溶剂为卤代烃类溶剂，优选为二氯甲烷；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述缚酸剂为吡啶；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述溶剂与所述如式1所示的化合物的体积质量比为(2～10)mL/g，例如5mL/g；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述缚酸剂与如式1所示的化合物的体积质量比为(5～20)mL/g，例如10mL/g；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述苯甲酰氯与如式P1所示的化合物的摩尔比4～10：1，例如8:1；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述反应的温度为20～40℃；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法中，所述反应的时间为1-5小时，例如3小时；
和/或，所述如式P1所示的化合物的制备方法还包括以下后处理步骤：调节pH至中性，浓缩，得P1糖浆，以P1糖浆的形式直接进行下一步反应。
17.一种络塞维的晶型I，其X射线粉末衍射图在2θ值如权利要求2任一方案所述；
较佳地，所述的络塞维的晶型I的差式扫描热仪图基本如图2所示；
较佳地，所述的络塞维的晶型I在25℃±1℃，相对湿度为80％±2％的条件下放置24h，相比于初始的质量，所述晶型I增加的质量不超过0.2％(例如0.15％)。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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