CN100494216C - 20(s)-原人参二醇糖基化衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
20(s)-原人参二醇糖基化衍生物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种20(S)-原人参二醇糖基化衍生物，即以20(S)-原人参二醇为母核的3位、12位分别糖基化的衍生物以及3位和12位均糖基化衍生物。本发明还涉及20(S)-原人参二醇糖基化衍生物的制备方法。药理实验结果表明，20(S)-原人参二醇糖基化衍生物具有良好的抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体的说，涉及一种20(s)-原人参二醇糖基化衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
人参是公认的滋补强身的贵重中药，人参的主要有效成分是人参皂苷。已经发现的人参皂苷有60种，人参皂苷根据皂苷元可分为达玛烷型人参皂苷和齐墩果烷皂苷。达玛烷型人参皂苷是人参、三七、和西洋参等药材中的重要活性成分，近十几年来国内外对其药效进行了很多的研究，取得了很大的进展。达玛烷型人参皂苷属于四环三萜，其皂苷元主要有20(S)-原人参二醇和20(S)-原人参三醇两种，药材中的人参皂苷主要是以葡萄糖为结构单元的三糖或四糖的多糖链皂苷，也有部分以葡萄糖为结构单元的单糖链皂苷，本发明所要求的20(S)-原人参二醇糖基化衍生物属于3位、12位以及3位、12位均糖基修饰的20(S)-原人参二醇类皂甙，在结构上类似天然人参皂苷，但是为天然所不存在的新化合物。
有关一些20(S)-人参皂苷文献报道的制备方法，主要有以下几种：
(1)酶解法(中国专利：CN1105781C；金东史等，《大连轻工业院学报》，2001，20(2)：99-104)。采用皂甙-葡萄糖苷酶或-阿拉伯糖苷酶等皂甙酶，对于人参属的所有种类参的人参皂甙进行水解处理，使皂甙分子甙元上的部分糖基被水解掉，从而得到Rh2。
这种方法虽然是利用了生物技术，但所需的皂甙糖苷酶的培养时间较长，水解后得到的也多是混合皂甙，故Rh2单体的得率不高，此方法的成本较高。
(2)以人参皂苷二醇组作为半合成原料合成20(S)-人参皂苷Rh2
a.中国专利：CN1091448C
将原人参二醇组分皂苷的水溶液与碱金属低醇化物或金属氢氧化物的醇溶液混合，或将原人参二醇组分皂苷的低级醇溶液与碱金属醇化物的低级醇溶液混合，于高温、高压下反应后用低级醇萃取，再经低压硅胶柱层析法层析纯化，收集洗脱物从甲醇/水中重结晶，得到20(S)-人参皂苷Rh2。
该方法主要缺陷在于起始原料需要原人参二醇组皂苷，且反应需要在高温高压下进行，条件比较苛刻，运行成本较高，且目标产物20(S)-人参皂苷Rh2得率不高。
b.韩国人参烟草研究所公开了从人参成分中制备20(R&S)-人参皂苷Rh2的方法，其特征在于首先得到原人参二醇皂苷组分，再经酸水解处理得20(R&S)-人参皂苷Rg3，然后将人参皂苷Rg3处理得人参皂苷Rh2。
该方法的起始原料也需要原人参二醇组皂苷，使得反应步骤较繁琐，原料损失较大，操作麻烦，从而导致成本增加，且难以提高产率，而水解后得到的是(R&S)构型的混合皂甙。
(3)以原人参二醇作为半合成原料合成20(S)-人参皂苷Rh2
a.日本专利：特开平8-208688，1996年
该方法线性合成路线为六步，且在糖苷化反应中使用了当量的碳酸银作为催化剂，价格贵重，使得该方法成本较高，且该催化剂的反应产物立体选择性不好。故从成本和收率两方面来考虑，均不利于大规模生产。
b.韩国人参烟草研究所公开了用强碱的醇溶液水解人参叶和根的干燥粉末，得到20(S)-人参皂甙甙元，然后再在碳酸银等催化剂存在下与葡萄糖缩合以制备20(S)-人参皂苷Rh2。
该方法也是使用了碳酸银作为催化剂，价格贵重，使该方法成本较高，且使用碳酸银做催化剂的反应产物为α、β两种糖苷键构型的混合物。
c.Atopkina，L N.，Denisenko，V.A.，Novikov，V.L.，Uvarova，N.I.，CHNCA8，Chem.Nat.Compd.(Engl.Transl.)，1986，22(3)，279-288
Atopkina，L.N.等在Chem.Nat.Compd.(天然产物化学)上报道了原人参二醇和乙酰溴代葡萄糖在氧化银的作用下缩合以制备20(S)-人参皂苷Rh2。
该方法由于原人参二醇的12位及20位的羟基都未被保护，则很容易被葡萄糖基单取代和多取代，得到的是3位、12位及20位葡萄糖基单取代的原人参二醇和3位及12位、3位及20位葡萄糖基双取代的原人参二醇的五种产物的混合物(其中3位葡萄糖基单取代的原人参二醇含量仅为27％)，造成目标产物20(S)-人参皂苷Rh2难以分离，得率很低。
d.中国专利ZL2004100532692
首先选择性保护原人参二醇，得到单取代的原人参二醇，再由葡萄糖基给体和单取代的原人参二醇在路易斯酸的催化作用下进行糖苷化反应，脱去保护基，经分离纯化得到20(S)-人参皂苷Rh2。
该方法反应条件温和，成本低，反应产物立体选择性高，产率高，纯度高，因此本发明合成方法是适宜于工业化大规模生产的方法。
本发明所要求的是20(S)-原人参二醇的3位、12位以及3位和12位均用鼠李糖基、阿拉伯糖基、木糖基、半乳糖基、纤维二糖基、葡萄糖基等糖基修饰的20(S)-原人参二醇糖基化衍生物。这些20(S)-原人参二醇糖基化衍生物的研究还未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种20(s)-原人参二醇糖基化衍生物。
本发明的目的还提供一种20(s)-原人参二醇糖基化衍生物的制备方法。
本发明的目的还提供一种20(s)-原人参二醇糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
为了实现本发明的目的，本发明提供了一种20(s)-原人参二醇糖基化衍生物，其结构通式如下所示：
其中：R1优选为氢、结构式为
的鼠李糖基、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基、结构式为
的吡喃型的木糖基、结构式为
的吡喃型的半乳糖基、结构式为
的纤维二糖基或结构式为
的葡萄糖基。
R优选为氢、结构式为
的鼠李糖基、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基、结构式为
的吡喃型的木糖基、结构式为
的吡喃型的半乳糖基、结构式为
的纤维二糖基或结构式为
的葡萄糖基。
并且，当R1为氢或结构式为
的葡萄糖基时，R不为氢或结构式为
的葡萄糖基。
上述结构式中的R2优选为氢、C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基。
本发明还提供了一种20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
a)选择性保护20(S)-原人参二醇，得到结构式为下式的单取代的20(S)-原人参二醇，
式中R3优选为芳香烃类酰基、烷烃取代的芳香烃类酰基或C3-C6的烷基取代酰基，在反应中20(S)-原人参二醇和含保护基团反应物的摩尔比优选为1∶3.0-5.0，反应温度优选为-10-25℃，反应时间优选为1.5-12小时，反应有机溶剂优选为C2-C4的氯代烷烃、三乙胺、吡啶或N，N-二甲基甲酰胺中一种或一种以上的混合物，用量优选为1mol原人参二醇用6.5-10升有机溶剂。
b)单取代的20(S)-原人参二醇、糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行糖苷化反应，其中单取代的20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比优选为1∶0.8-5.0∶0.01-1.0，单取代的20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比优选为1∶0.1-7.0，反应温度优选为-20-40℃，反应时间优选为0.5-4.5小时，反应溶剂用量优选为1mol单取代的原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化。
c)将步骤b)中纯化后的产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱保护基反应生成20(S)-原人参二醇的3位糖基化衍生物。其中，步骤b)纯化后的产物和一价碱金属化物的摩尔比优选为1∶4-10，反应温度优选为40-100℃，反应时间优选为10-18小时，极性溶剂的用量优选为1mol步骤b)纯化后的产物用10-30升极性溶剂，本步生成的产物经重结晶纯化。
本发明还提供了一种20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
d)20(S)-原人参二醇、糖基给体???、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行选择性糖苷化反应，选择性得到20(S)-原人参二醇的12位单糖基化而3位羟基裸露的产物。其中20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比优选为1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比优选为1∶0.1-7.0，反应温度优选为-50-0℃，反应时间优选为0.5-4.5小时，反应溶剂用量优选为1mol20(S)-原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化。
e)将上述步骤d)中纯化后的产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱酰基保护基反应生成20(S)-原人参二醇的12位糖基化衍生物。其中，纯化后的产物和一价碱金属化物的摩尔比优选为1∶4-10，反应温度优选为40-100℃，反应时间优选为10-18小时，极性溶剂的用量优选为1mol纯化后的反应物用10-30升极性溶剂，生成的产物经重结晶纯化。
步骤e)中脱酰基保护基反应是除去糖基给体中的C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基。
本发明还提供了一种20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
f)20(S)-原人参二醇、糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行选择性糖苷化反应，选择性得到20(S)-原人参二醇的12位单糖基化而3位羟基裸露的产物，其中20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比优选为1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比优选为1∶0.1-7.0，反应温度优选为-50-0℃，反应时间优选为0.5-4.5小时，反应溶剂用量优选为1mol20(S)-原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化。
g)将上述步骤f)中纯化后的产物与糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行糖苷化反应，纯化后的产物、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶1.0-2.0∶0.01-1.0，纯化后的产物和分子筛的重量比为1∶0.1-7.0，反应温度是-20-50℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol纯化后的产物用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化；
h)将上述步骤g)中纯化后产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱酰基保护基反应生成20(S)-原人参二醇的3和12位糖基化衍生物，其中，纯化后的反应物和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10，反应温度是40-100℃，反应时间是10-18小时，极性溶剂的用量是1mol纯化后的反应物用10-30升极性溶剂，生成的产物经重结晶纯化。
步骤h)中脱酰基保护基反应是除去糖基给体中的C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基。
所述糖基给体是结构式为
的鼠李糖基给体、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基给体、结构式为
的吡喃型的木糖基给体、结构式为
的吡喃型的半乳糖基给体、结构式为
的纤维二糖基给体或结构式为
的葡萄糖基给体；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基；X为OC(NH)CCl3或SEt或Br。
所述路易斯酸催化剂优选为C3-C9的卤代酰胺、C1-C6的氟代烃基磺酸、C2-C8的硅基氟代烃基磺酸酯、C1-C6的氟代烃基磺酸银、三氟化硼-乙醚络合物或三氟化硼-乙醚混合物。
所述的惰性保护气体优选为氮气、氩气或氦气。
所述糖苷化反应中的有机溶剂优选为C2-C4的氯代烷烃或甲苯。
所述淬灭剂优选为三甲胺、三乙胺或硫代硫酸钠。
所述的分子筛优选为
型硅铝酸盐分子筛。
柱层析所用的填充剂优选为硅胶、氧化铝或大孔树脂。
所述柱层析纯化中洗脱用的溶剂优选为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或环己烷中一种或多种的混合物。
所述一价碱金属化物优选为氢氧化钠、甲醇钠、氢氧化钾或氢氧化锂。
所述脱保护基反应中的极性溶剂优选为四氢呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、水中的一种或多种的混合物。
所述重结晶纯化中的溶剂优选为三氯甲烷、C1-C4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一种或多种的混合物。
实验结果表明，20(S)-原人参二醇糖基化衍生物具有良好的抗肿瘤效果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 单取代的20(S)-原人参二醇
，即12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇的合成。
合成反应式为：
20(S)-原人参二醇(按中国发明专利CN1569882公开方法制备)40g(0.087mol)溶于二氯甲烷(700ml)和三乙胺(85ml)的混合溶剂中，加入特戊酰氯36.5ml(0.298mol)，冷至-8℃，反应1.5h，薄层层析检测至反应完全。加入甲醇终止反应，饱和NaCl水液洗涤，此水液用二氯甲烷提取，合并有机相，再用饱和NaCl水液洗至中性，干燥。硅胶柱过滤后浓缩，得单取代的20(S)-原人参二醇42.5g，收率89.8％，纯度为99.6％。
12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇的物化数据与中国专利ZL2004100532692中所述一致。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ5.28(d，1H)，3.6(m，1H)，3.2(s，1H)，2.2-1.8(m，6H)，1.72-1.38(m，14H)，1.28-1.14(m，22H)，1.1(s，3H)，0.98-0.72(m，9H)。
实施例2 20(S)-原人参二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷
化合物(12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇，A2)44g(0.081mol，纯度99.6％)和化合物(D1)约82g(0.132mol)溶于850ml无水二氯甲烷中，加入4
分子筛80g，在氩气保护下搅拌0.5小时，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.47ml(0.0081mol)，室温搅拌反应0.5小时。反应结束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比6∶1
纯化，得结构式为
的白色固体，即化合物(3A’)67.5g，收率83％，HPLC测定纯度为93％。
化合物(3A’)的物化数据如下：
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.09-7.25(m，15H，3C6H5)，5.84(dd，1H)，5.71-5.65(m，2H)，5.19-5.16(m，1H)，5.09(s，1H)，4.85-4.78(td，1H)，4.31-4.08(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.30(d，3H)，1.22(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.11(s，3H)，1.04(s，3H)，1.03(s，3H)，0.96(s，3H)，0.94(s，3H)，0.91(s，3H)。
脱保护基反应
化合物(3A’)5.66g(0.0056mol.HPLC:93％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml甲醇的混合溶剂中，搅拌下滴加5.72g(50％，0.055mol)甲醇钠10ml甲醇溶液，80℃反应10小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(3A)3.09g，收率91％，HPLC测定纯度为99.2％。
化合物(3A)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z)：606.6[M]+。
1H NMR(300MHz，C5D5N).5.33(m，1H)，4.54(m，1H)，4.28-4.23(m，1H)，4.31-4.27(m，2H)，3.95-3.88(td，1H)，3.17(dd，1H)，1.65(s，3H)，1.62(s，3H)，1.42(s，3H)，0.98(s，3H)，0.95(s，3H)，0.92(s，3H)，0.82(s，3H)，0.80(s，3H)。
实施例3 20(S)-原人参二醇-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷
化合物(12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC：99.48％)和化合物(D2)约37.8g(0.0625mol)溶于390ml甲苯中，加入分子筛260g，在氩气保护下搅拌1小时，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯14.16ml(0.078mol)，0℃搅拌反应4.5小时。反应结束后加入三乙胺2.0ml(0.0143mol)淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚与三氯甲烷的体积比4:1]纯化，得结构式为
的白色固体，即化合物(3B’)58.2g，收率75.8％，HPLC测定纯度为96％。
化合物(3B’)的物化数据如下：
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.08-7.25(m，15H，3C6H5)，5.78(dd，1H)，5.68-5.64(m，1H)，5.60(dd，1H)，5.18(m，1H)，4.85-4.75(m，2H)，4.28(dd，1H)，3.88(d，1H)，3.16(dd，1H)，1.69(s，3H)，1.62(s，3H)，1.20(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.12(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)，0.81(s，3H)，0.76(s，3H)，0.65(s，5H)。
脱保护基反应
化合物(3B’)3.95g(0.004mol，HPLC:96％)溶解于13.5ml四氢呋喃和27ml乙醇的混合溶剂中，搅拌下加0.016mol氢氧化钾，40℃反应18小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(3B)2.12g，收率89.7％，HPLC测定纯度为99.1％。
化合物(3B)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z):644.6[M+Na]+
1H NMR(300MHz，C5D5N)：5.31(t，1H)，4.77(d，1H)，4.47(t，1H)，4.33-4.29(m，1H)，4.19(dd，1H)，3.94-3.79(m，2H)，3.32(dd，1H)，1.65(s，3H)，1.62(s，3H)，1.47(s，1H)，1.28(s，3H)，0.96(s，3H)，0.95(s，3H)，0.94(s，3H)，0.83(s，3H)。
实施例4 20(S)-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷
化合物(12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC：99.48％)和化合物(D3)约236.7g(0.39mol)溶于620ml四氯甲烷中，加入
分子筛125g，在氮气保护下搅拌2.5小时，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯7.08ml(0.039mol)，-20℃搅拌反应2.5小时。反应结束后加入硫代硫酸钠0.0086mol淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：环己烷与石油醚的体积比1：1]纯化，得结构式为
的白色固体，即化合物(3C’)57.5g，收率74.5％，HPLC测定纯度为92％。
化合物(3C’)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z):990.6[M+H]+
脱保护基反应
化合物(3C’)3.98g(0.004mol，HPLC：92％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶剂中，搅拌下0.028mol氢氧化钠，100℃反应14小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(3C)2.22g，收率93.1％，HPLC测定纯度为99.6％.
化合物(3C)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z):644.6[M+Na]+
1H NMR(300MHz，C5D5N)：5.33(t，1H)，4.90(d，1H)，4.37(dd，1H)，4.22-4.11(m，2H)，4.00(t，1H)，3.95(dd，1H)，3.97-3.86(m，1H)，3.75(t，1H)，3.35(dd，1H)，1.66(s，3H)，1.64(s，3H)，1.44(s，3H)，1.32(s，3H)，1.01(s，3H)，0.99(s，3H)，0.98(s，3H)，0.85(s，3H)。
实施例5 20(S)-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷
化合物(12-特戊酰基-20(S)-原人参二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC：99.48％)和化合物(D4)约74.8g(0.112mol)溶于850ml无水二氯甲烷中，加入
分子筛80g，在氩气保护下搅拌0.5小时，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，室温搅拌反应2小时。反应结束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比5：2]纯化，得结构式为
的白色固体，即化合物(3D’)78.5g，收率89.6％，HPLC测定纯度为91.94％。
化合物(3D’)的物化数据如下：
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.1-7.2(m，20H，4C6H5)，5.92(t，1H)，5.86(dd，1H)，5.60(dd，1H)，5.16(t，1H)，4.82(d，2H)，4.60-4.51(m，2H)，4.32(m，1H)，3.0-3.12(dd，1H)，3.10(dd，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.22(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.12(s，3H)，0.91(s，3H)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H)，0.68(s，3H)，0.66(s，3H)。
脱保护基反应
化合物(3D’)4.66g(0.004mol，HPLC：92.8％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶剂中，搅拌下滴加4.32g(50％，0.04mol)甲醇钠10ml甲醇溶液，80℃反应10小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(3D)2.13g，收率82.4％，HPLC测定纯度为99.16％。
化合物(3D)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z)：645.3(M++Na)。
13C NMR(300MHz，C5D5N)：130.73，126.30，107.54，107.53，88.75，76.84，75.45，75.43，73.14，72.93，70.95，70.28，62.45，62.44，56.37，54.77，51.68，50.38，48.56，40.0，39.64，39.12，36.95，35.85，35.14，32.03，31.32，28.13，27.07，26.84，26.80，25.81，22.98，18.43，17.68，17.02，16.74，16.37，15.82。
实施例6 20(S)-原人参二醇-12-O-α-L-吡喃鼠李糖苷
化合物20(S)-原人参二醇(Al???)42.5g(0.078mol，HPLC：98.48％)和化合物(D1)约46.8g(0.101mol)溶于850ml无水二氯甲烷中，加入4
分子筛80g，在氩气保护下搅拌0.5小时，降温至-15℃，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，搅拌反应3小时。反应结束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比6∶1]纯化，得结构式为
的白色固体，即化合物(12A’)52.4g，收率67％，HPLC测定纯度为90.9％。
化合物(12A’)的物化数据如下：
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.09-7.25(m，15H，3C6H5)，5.84(dd，1H)，5.71-5.65(m，2H)，5.29-5.23(m，1H)，5.21(d，1H)，4.43-4.38(m，1H)，4.26(brs，1H)，3.88-3.80(td，1H)，3.22(dd，1H)，1.71(s，3H)，1.67(s，3H)，1.37(d，3H)，1.06(s，3H)，0.98(s，3H)，0.94(s，3H)，0.91(s，3H)，0.79(s，3H)。
脱保护基反应
化合物(12A’)5.66g(0.0056mol，HPLC：90.9％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶剂中，搅拌下滴加6.24g(50％，0.06mol)甲醇钠10ml甲醇溶液，60℃反应14小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(12A)3.12g，收率91％，HPLC测定纯度为98.4％。
化合物(12A)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z)：629.4[M+Na+]
1H NMR(300MHz，CD3OD)：5.15-5.11(m，1H)，5.02(s，1H)，3.76-3.57(m，3H)，3.37-3.30(m，1H)，3.28-3.12(m，1H)，1.68(s，3H)，1.62(s，3H)，1.27(d，3H)，1.16(s，3H)，1.02(s，3H)，0.96(s，3H)，0.94(s，3H)，0.92(s，3H)，0.77(s，3H)。
实施例7、20(S)-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-12-O-α-L-吡喃鼠李糖苷
化合物(12A’)77.9g(0.0777mol，HPLC：98.48％)和化合物(D6)约74.8g(0.112mol)溶于850ml无水二氯甲烷中，加入
分子筛80g，在氩气保护下搅拌0.5小时，降温至-5℃，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，室温搅拌反应0.5小时。反应结束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬灭反应。过滤，滤液浓缩后，经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比6：1]纯化，得结构式为的白色固体，即化合物(3，12A’)78.5g，收率82.7％，HPLC测定纯度为91.94％。
化合物(3，12A’)的物化数据如下：
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.13-7.21(m，35H，7C6H5)，5.94-5.84(m，2H)，5.78-5.67(m，2H)，5.58-5.52(m，2H)，5.29-5.22(m，2H)，4.85(d，1H)，4.55(d，2H)，4.44-4.39(m，1H)，4.30-4.07(m，1H)，3.83-3.80(m，1H)，3.09(dd，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.12(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)，0.78(s，3H)，0.66(s，3H)，0.63(s，3H)
脱保护基反应
化合物(3，12A’)6.47g(0.004mol，HPLC：92.8％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶剂中，搅拌下滴加4.32g(50％，0.04mol)甲醇钠10ml甲醇溶液，90℃反应16小时，薄层层析检测，反应完毕。反应液浓缩得白色固体，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到化合物(3，12A)2.68g，收率85.4％，HPLC测定纯度为99.16％。
化合物(3，12A)的物化数据如下：
ESI-MS(m/z)：1559.3(2M+Na+)。
1H NMR(300MHz，C5D5N)：5.70(s，1H)，5.39(s，1H)，5.33(t，1H)，5.00(d，1H)，4.97(dd，1H)，4.77(dd，1H)，4.57(d，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.09-4.04(m，2H)，4.00(m，2H)。
实验例1
1受试药物：
1.1名称：20(S)-原人参二醇糖基化五个衍生物分别为3A、3B、3C、12A、3，12A。
1.2提供单位：上海中药创新研究中心。
1.3配制方法：分别称取各样品后，加入少量吐温80助溶，再加入0.5％CMC-Na溶液逐渐稀释至4mg/ml即可。溶液呈混悬状，给药前充分摇匀。
2实验材料：
2.1溶剂：0.5％CMC-Na溶液。
2.2阳性对照品：注射用顺铂，购自上海齐鲁制药有限公司。
2.3瘤源：小鼠H22肝癌模型由上海医药工业研究院药理室传代维持。
3实验动物：
3.1来源：昆明种小鼠由上海中科院实验动物中心提供，合格证号：沪动合证字第107号。
3.2体重：20-22克。
3.3性别：雄性。
3.4动物数：试验组及阳性对照组每组10只小鼠，阴性对照两组。
4剂量设置：20(S)-原人参二醇糖基化五个衍生物每次给药剂量采用同一种剂量，100mg/kg。
5给药方案：灌胃给药，每天1次，连续10天，共给药10次。
6试验对照：阴性对照给以与试验组高剂量等体积等浓度的相应溶剂，阳性对照顺铂DDP2mg/kg，每天一次，连续腹腔给药七天。
7试验主要步骤：
腋皮下接种模型：无菌条件下取生长旺盛的瘤源，以匀浆法制备成约1×107/ml细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.2ml/每鼠，次日按实验设计方案给药，两周左右处死各组动物，剖取肿瘤称重，按下列公式计算肿瘤抑制率：
肿瘤抑制率％＝[(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重)]×100％
8实验结果：20(S)-原人参二醇糖基化衍生物3A、3B、3C、12A、3，12A均以100mg/kg，ig×10qd方案对小鼠皮下接种的H22肝癌模型的抗肿瘤疗效分别为40.42％、36.59％、39.37％、35.89％及42.86％，结果件见表1。
表1 20(S)-原人参二醇糖基化对小鼠肝癌H22(皮下接种)疗效试验
*P值<0.01与阴性对照组相比。
9实验小结：20(S)-原人参二醇糖基化五个衍生物采用相同的给药方案，体内均对小鼠皮下接种的H22肝癌模型均具有一定的抗肿瘤疗效。
Claims (7)
1、一种20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物，其结构通式如下所示：
其特征在于：R1为氢、结构式为
的鼠李糖基、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基、结构式为
的吡喃型的木糖基、结构式为
的吡喃型的半乳糖基或结构式为
的葡萄糖基；
R为氢、结构式为
的鼠李糖基、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基、结构式为的吡喃型的木糖基、结构式为
的吡喃型的半乳糖基或结构式为的葡萄糖基；
其中，R1为氢或结构式为
的葡萄糖基时，R不为氢或结构式为
的葡萄糖基；
上述结构式中的R2为氢、C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基。
2、如权利要求1所述的20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
a)选择性保护20(S)-原人参二醇，得到结构式如下的单取代20(S)-原人参二醇，
式中R3为芳香烃类酰基、烷烃取代的芳香烃类酰基或C3-C6的烷基取代酰基，在反应中20(S)-原人参二醇和含保护基团反应物的摩尔比是1∶3.0-5.0，所述含保护基团反应物为含有芳香烃类酰基、烷烃取代的芳香烃类酰基或C3-C6的烷基取代酰基的化合物，反应温度是-10-25℃，反应时间是1.5-12小时，反应有机溶剂是C2-C4的氯代烷烃、三乙胺、吡啶或N，N-二甲基甲酰胺中一种或一种以上的混合物，用量是1mol原人参二醇用6.5-10升有机溶剂；
b)单取代20(S)-原人参二醇、糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行糖苷化反应，其中单取代20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶0.8-5.0∶0.01-1.0，所述糖基给体是结构式为
的鼠李糖基给体、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基给体、结构式为
的吡喃型的木糖基给体、结构式为
的吡喃型的半乳糖基给体或结构式为
的葡萄糖基给体；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基；X为OC(NH)CCl3或SEt或Br，单取代20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比为1∶0.1-7.0，反应温度是-20-40℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol单取代原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化；
c)将步骤b)中纯化后的产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱保护基反应生成20(S)-原人参二醇的3位糖基化衍生物，其中，步骤b)纯化后的产物和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10，反应温度是40-100℃，反应时间是10-18小时，极性溶剂的用量是1mol步骤b)纯化后的产物用10-30升极性溶剂，本步生成的产物经重结晶纯化。
3、如权利要求1所述的20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
d)20(S)-原人参二醇、糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行选择性糖苷化反应，选择性得到20(S)-原人参二醇的12位单糖基化而3位羟基裸露的产物，其中20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比为1∶0.1-7.0，所述糖基给体是结构式为
的鼠李糖基给体、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基给体、结构式为
的吡喃型的木糖基给体、结构式为
的吡喃型的半乳糖基给体或结构式为
的葡萄糖基给体；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基；X为OC(NH)CCl3或SEt或Br，反应温度是-50-0℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol20(S)-原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化；
e)将上述步骤d)中纯化后的产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱酰基保护基反应生成20(S)-原人参二醇的12位糖基化衍生物，其中，纯化后的产物和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10，反应温度是40-100℃，反应时间是10-18小时，极性溶剂的用量是1mol纯化后的反应物用10-30升极性溶剂，生成的产物经重结晶纯化。
4、如权利要求1所述的20(S)-原人参二醇的糖基化衍生物的制备方法，包括如下步骤：
f)20(S)-原人参二醇、糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行选择性糖苷化反应，选择性得到20(S)-原人参二醇的12位单糖基化而3位羟基裸露的产物，其中20(S)-原人参二醇、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，所述糖基给体是结构式为
的鼠李糖基给体、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基给体、结构式为
的吡喃型的木糖基给体、结构式为
的吡喃型的半乳糖基给体或结构式为
的葡萄糖基给体；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基；X为OC(NH)CCl3或SEt或Br，20(S)-原人参二醇和分子筛的重量比为1∶0.1-7.0，反应温度是-50-0℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol20(S)-原人参二醇用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化；
g)将上述步骤f)中纯化后的产物与糖基给体、路易斯酸催化剂和分子筛在惰性气体保护下，在有机溶剂中进行糖苷化反应，纯化后的产物、糖基给体和路易斯酸催化剂的摩尔比是1∶1.0-2.0∶0.01-1.0，所述糖基给体是结构式为
的鼠李糖基给体、结构式为
的吡喃型的阿拉伯糖基给体、结构式为
的吡喃型的木糖基给体、结构式为的吡喃型的半乳糖基给体或结构式为
的葡萄糖基给体；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲酰基；X为OC(NH)CCl3或SEt或Br，纯化后的产物和分子筛的重量比为1∶0.1-7.0，反应温度是-20-50℃，反应时间是0.5-4.5小时，反应溶剂用量是1mol纯化后的产物用4-12升有机溶剂，反应结束时加入淬灭剂淬灭反应，产物用柱层析或重结晶纯化；
h)将上述步骤g)中纯化后产物和一价碱金属化物在极性溶剂中进行脱酰基保护基反应生成20(S)-原人参二醇的3和12位糖基化衍生物，其中，纯化后的反应物和一价碱金属化物的摩尔比是1∶4-10，反应温度是40-100℃，反应时间是10-18小时，极性溶剂的用量是1mol纯化后的反应物用10-30升极性溶剂，生成的产物经重结晶纯化。
5、如权利要求2～4任一所述的制备方法，其特征在于所述路易斯酸催化剂是C3-C9的卤代酰胺、C1-C6的氟代烃基磺酸、C2-C8的硅基氟代烃基磺酸酯、C1-C6的氟代烃基磺酸银、三氟化硼-乙醚络合物或三氟化硼-乙醚混合物；所述的惰性保护气体是氮气、氩气或氦气；所述糖苷化反应中的有机溶剂是C2-C4的氯代烷烃或甲苯；所述淬灭剂是三甲胺、三乙胺或硫代硫酸钠；所述的分子筛是
型硅铝酸盐分子筛；柱层析所用的填充剂是硅胶、氧化铝或大孔树脂；所述柱层析纯化中洗脱用的溶剂是石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或环己烷中一种或多种的混合物。
6、如权利要求2～4任一所述的制备方法，其特征在于所述一价碱金属化物是氢氧化钠、甲醇钠、氢氧化钾或氢氧化锂；所述脱保护基反应中的极性溶剂是四氢呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、水中的一种或多种的混合物；所述重结晶纯化中的溶剂是三氯甲烷、C1-C4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一种或多种的混合物。
7、如权利要求1所述的20(S)-原人参二醇糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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