CN101423854A - 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法 - Google Patents

一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101423854A
CN101423854A CNA2008102377736A CN200810237773A CN101423854A CN 101423854 A CN101423854 A CN 101423854A CN A2008102377736 A CNA2008102377736 A CN A2008102377736A CN 200810237773 A CN200810237773 A CN 200810237773A CN 101423854 A CN101423854 A CN 101423854A
Authority
CN
China
Prior art keywords
algin
powder
ykw
agarivorans
oligosaccharide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2008102377736A
Other languages
English (en)
Inventor
付晓婷
许加超
金相武
王永昌
王经佐
高昕
李来好
杨贤庆
林洪
薛长湖
徐杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CNA2008102377736A priority Critical patent/CN101423854A/zh
Publication of CN101423854A publication Critical patent/CN101423854A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Abstract

一种用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是先制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34酶液,另将褐藻胶溶解于水中,加入制备的酶液,于20-55℃水浴中,分解2-180小时,升温60-100℃灭活,膜过滤,浓缩,冷冻干燥,得褐藻胶寡糖。本发明的优点是制备褐藻胶裂解酶用的培养基组成经济简单,褐藻胶裂解酶酶产量高,具有独特的Na+/K+离子依赖性,优良的温度和pH的稳定性,高的比活力,能同时降解褐藻胶的甘露糖醛酸和古罗糖醛酸片段,生产的聚合度为2-12的褐藻胶寡糖具有良好的应用前景。

Description

一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法
技术领域
本发明涉及一种用褐藻胶裂解酶Agari vorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法。
背景技术
褐藻胶是褐藻细胞壁的重要结构多糖,是由β-D-甘露糖醛酸和α-L-古罗糖醛酸两种单体组成的线性无分支多糖。褐藻胶裂解酶是一类催化褐藻胶降解反应的酶类,根据其底物专一性可分为甘露糖醛酸裂解酶和古罗糖醛酸裂解酶。褐藻胶裂解酶具有广泛的应用。首先,它可催化褐藻胶降解为具有特殊活性的褐藻胶寡糖(AOS)。AOS可以显著提高植物的发芽和芽的生长,具有清除自由基和抗癌活性,可提高巨噬细胞的白细胞吞噬活性以提高人体免疫力,能有效促进人角化细胞的扩增用于人工皮肤的制造,能促进肠道有益菌如双歧杆菌和乳酸菌的生长,因此可广泛用于农业、食品及制药等领域。相对酸解方法,酶解方法反应条件温和,设备简单,能耗低,污染小的优势。其次,褐藻胶裂解酶可用于降解褐藻细胞壁,而这种酶在人体内是缺乏的。褐藻的细胞壁破损后,其细胞内部的营养物质可以被人或动物获得,海藻的营养价值得到进一步提高。此外,褐藻胶裂解酶还是重要藻类学和分子生物学的工具酶用于海藻原生质体的制备。
近几十年以来,国内外的许多工作者开展了褐藻胶裂解酶的分离纯化方面的研究工作。海洋微生物是此类酶的重要来源。一些褐藻胶裂解酶相继从弧菌、交替单胞菌、假单胞菌、交替假单胞菌中分离出来。但是由于海洋环境的特殊性如较低的温度,导致海洋微生物产生的海藻多糖降解酶热稳定性不好或活性有限。寻找性状稳定、高活力的海藻多糖降解酶仍然是研究工作者的追求。
Agarivorans属是2004年建立的新属,检索niProtKB/TrEMBL数据库,目前仅有四个Agarivorans属微生物产生的琼胶酶的记录,该属微生物能产生琼胶酶,在琼胶平板上生成凹陷的菌圈,其命名依据即是鉴于其琼胶降解(agar-devoring)能力。除琼胶酶外,没有检索到关于Agarivorans产褐藻胶裂解酶的报道。本发明人于2005年从蝾螺肠道中筛选获得的菌株Agarivorans albus YKW-34既能产生琼胶酶,又能产生褐藻胶裂解酶。目前尚未见用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,以弥补现有技术的上述不足。
一种用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是先制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34酶液,另将褐藻胶溶解于水中,加入制备的酶液,于20-55℃水浴中,分解2-180小时,升温60-100℃灭活,膜过滤,浓缩,冷冻干燥,得褐藻胶寡糖。
本发明制备褐藻胶裂解酶时用的培养基组成经济简单,酶产量高,制得的褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34具有独特的Na+/K+离子依赖性,优良的温度和pH的稳定性,高的比活力,能同时降解褐藻胶的甘露糖醛酸和古罗糖醛酸片段,生产的聚合度为2-12的褐藻胶寡糖具有良好的应用前景。
具体实施方式
本发明用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是先制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34酶液,另将褐藻胶溶解于水中,加入制备的酶液,于20-55℃水浴中,分解2-180小时,升温60-100℃灭活,膜过滤,浓缩,冷冻干燥,得褐藻胶寡糖。
制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34酶液时,取海水1000ml,加入50g海带粉和10g硝酸钾,以NaOH水溶液调节初始pH值为7.0,灭菌并冷却至室温,加入100ml 12h种龄的Agarivorans albus YKW-34菌种,在25℃ 110rpm振荡培养48h,取培养液,离心取上清液,加入10g聚醚酰亚胺除掉多糖及褐藻胶的降解产物,离心除掉絮状沉淀。将上清液上样至DEAE-Sepharose FF色谱柱,线性升梯度法洗脱,将酶活组分合并。酶液上样至Phenol Sepharose 6FF色谱柱,线性降梯度法洗脱,将酶活组分合并。酶液上样至Sephacryl S-100HR色谱柱,洗脱得单一酶峰。得到活力为3731U/mg的褐藻胶裂解酶纯酶液50ml,纯化倍数为20倍。
用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖时,取10g褐藻胶溶解于1000ml水中,加入5ml Agarivorans albus YKW-34褐藻胶裂解酶纯酶液,于35℃水浴中,分解16小时,升温90℃,灭活1小时,膜过滤,浓缩,冷冻干燥,得7.8g聚合度为2-12的褐藻胶寡糖成品。
本发明制备的褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34的基本酶学性质如下:SDS-PAGE和凝胶过滤色谱表明此酶由单一肽链组成,分子量为60kDa。等电聚焦实验表明其等电点为5.5-5.7。此酶的最适pH为7.0,最适温度为30-40℃,低于50℃时稳定。此酶具有钠/钾离子依赖性。透析除去反应体系中钠/钾离子后,酶活力丧失;添加钠/钾离子后,酶活力可完全恢复。此酶对还原剂如β-巯基乙醇和DTT、金属离子络合剂如EDTA和EGTA具有耐受性;变性剂如SDS和尿素可使酶活力提高30%。底物专一性实验表明,此酶能同时降解甘露糖醛酸和古罗糖醛酸片断。该酶优良的酶学性质使得其具有良好的应用前景。
本发明制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34时,所用的培养基由海水、海藻粉及硝酸钾所组成,海带粉的重量百分数范围为0.001-10%,硝酸钾的重量百分数范围为0.01-20%,其余为海水,培养基初始pH值范围为6.5-10.0;所述的海藻粉为海带粉、马尾藻粉、江蓠粉、麒麟菜粉、紫菜粉、裙带菜粉、浒苔粉、角叉菜粉、凝花菜粉、螺旋藻粉或羊栖菜粉;所述的制备褐藻胶裂解酶分离纯化方法为在海水培养基中,以重量百分数范围为1-20%的接种量,接种12h种龄的Agarivorans albus YKW-34菌种,在25℃,振荡培养2-180小时,上清液,加入重量百分数范围为0.0001-5%的絮凝剂聚醚酰亚胺,上清液依次经DEAE-Sepharose FF色谱柱、Phenol Sepharose 6FF色谱柱和Sephacryl S-100HR色谱柱线性升梯度法洗脱,洗脱得单一酶峰,为Agarivorans albusYKW-34的褐藻胶裂解酶;所述的褐藻胶在水中的重量百分数范围为0.001-30%的溶液,褐藻胶裂解酶在水中的重量百分数范围为0.001-20%,上述的褐藻胶寡糖的聚合度范围为2-12。

Claims (3)

1.一种用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是先制备褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34酶液,另将褐藻胶溶解于水中,加入制备的酶液,于20-55℃水浴中,分解2-180小时,升温60-100℃灭活,膜过滤,浓缩,冷冻干燥,得褐藻胶寡糖。2.如权利要求1所述的用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是所述褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34的培养基由海水、海藻粉及硝酸钾所组成,海带粉的重量百分数范围为0.001-10%,硝酸钾的重量百分数范围为0.01-20%,其余为海水,培养基初始pH值范围为6.5-10.0;所述的海藻粉为海带粉、马尾藻粉、江蓠粉、麒麟菜粉、紫菜粉、裙带菜粉、浒苔粉、角叉菜粉、凝花菜粉、螺旋藻粉或羊栖菜粉。
3、如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是所述的制备藻胶裂解酶Agarivorans albusYKW-34酶液时,在海水培养基中,以重量百分数范围为1-20%的接种量,接种12h种龄的Agarivorans albus YKW-34菌种,在25℃,振荡培养2-180小时,上清液,加入重量百分数范围为0.0001-5%的絮凝剂聚醚酰亚胺,上清液依次经DEAE-Sepharose FF色谱柱、Phenol Sepharose 6FF色谱柱和Sephacryl S-100HR色谱柱线性升梯度法洗脱,洗脱得单一酶峰,为Agarivorans albus YKW-34的褐藻胶裂解酶。
4、如权利要求1所述的用褐藻胶裂解酶Agarivorans albus YKW-34制备褐藻胶寡糖的方法,其特征是所述的褐藻胶在水中的重量百分数范围为0.001-30%,褐藻胶裂解酶在水中的重量百分数范围为0.001-20%,所述的褐藻胶寡糖的聚合度范围为2—12。
CNA2008102377736A 2008-12-02 2008-12-02 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法 Pending CN101423854A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2008102377736A CN101423854A (zh) 2008-12-02 2008-12-02 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2008102377736A CN101423854A (zh) 2008-12-02 2008-12-02 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101423854A true CN101423854A (zh) 2009-05-06

Family

ID=40614733

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2008102377736A Pending CN101423854A (zh) 2008-12-02 2008-12-02 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101423854A (zh)

Cited By (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102391317A (zh) * 2011-08-05 2012-03-28 宁夏万胜生物工程有限公司 一种从褐藻寡糖发酵液中分离褐藻寡糖的方法
CN102643882A (zh) * 2012-04-17 2012-08-22 青岛聚大洋海藻工业有限公司 酶解法从海带中提取褐藻胶寡糖的新工艺
WO2013087043A1 (zh) * 2011-12-16 2013-06-20 中国科学院大连化学物理研究所 黄杆菌属菌株与内切褐藻胶裂解酶编码基因及制备与应用
CN103771918A (zh) * 2014-01-17 2014-05-07 青岛海大生物集团有限公司 一种双海藻肥料及其制备方法
CN103834610A (zh) * 2014-01-28 2014-06-04 大连大学 一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法
CN104099386A (zh) * 2013-04-03 2014-10-15 中国科学院大连化学物理研究所 一种酶解制备褐藻胶寡糖的方法
CN104094933A (zh) * 2013-04-03 2014-10-15 中国科学院大连化学物理研究所 一种广谱的植物抗旱剂及其在作物抗旱中的应用
CN105123929A (zh) * 2015-07-31 2015-12-09 青岛博智汇力生物科技有限公司 一种降低胆固醇的褐藻寡糖乳制品
CN105483183A (zh) * 2016-01-07 2016-04-13 福建农林大学 一种马尾藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用
CN105996043A (zh) * 2016-05-31 2016-10-12 福建省恒祥渔业有限公司 一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法
CN106432535A (zh) * 2016-09-18 2017-02-22 青岛悦海医药科技有限公司 一种联产医药级褐藻胶和褐藻胶寡糖的工艺方法
CN106478244A (zh) * 2016-10-10 2017-03-08 五洲丰农业科技有限公司 一种含褐藻寡糖的聚氨酯包膜肥料的制备方法
CN107058423A (zh) * 2017-06-09 2017-08-18 中国海洋大学 一种均一性褐藻寡糖的制备方法
CN107236772A (zh) * 2017-06-16 2017-10-10 陈艺燕 一种制备褐藻寡糖的方法
CN107488687A (zh) * 2017-09-13 2017-12-19 北京雷力海洋生物新产业股份有限公司 一种酶解法制备的褐藻酸寡糖及其组合物和制备方法
CN109294950A (zh) * 2018-10-11 2019-02-01 浙江理工大学 高活性结冷胶寡糖产生菌及其应用
CN110403197A (zh) * 2019-07-31 2019-11-05 浙江海洋大学 一种褐藻胶口服液的应用
CN111763649A (zh) * 2020-07-31 2020-10-13 自然资源部第一海洋研究所 一种交替单胞菌及其应用
CN112167268A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 青岛苏贝尔作物营养有限公司 物理生物联合法生产农用海藻提取液的方法及海藻提取液
CN112500202A (zh) * 2019-09-16 2021-03-16 广东岩志生物科技有限公司 褐藻提取物用于制备农业肥料的用途
CN113773990A (zh) * 2021-09-08 2021-12-10 山东大学 一株白色食藻菌及其应用
CN114634583A (zh) * 2022-03-02 2022-06-17 华南理工大学 一种具有显著抗光老化活性的海藻酸及其制备方法与应用

Cited By (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102391317A (zh) * 2011-08-05 2012-03-28 宁夏万胜生物工程有限公司 一种从褐藻寡糖发酵液中分离褐藻寡糖的方法
WO2013087043A1 (zh) * 2011-12-16 2013-06-20 中国科学院大连化学物理研究所 黄杆菌属菌株与内切褐藻胶裂解酶编码基因及制备与应用
CN102643882B (zh) * 2012-04-17 2015-12-09 青岛聚大洋藻业集团有限公司 酶解法从海带中提取褐藻胶寡糖的新工艺
CN102643882A (zh) * 2012-04-17 2012-08-22 青岛聚大洋海藻工业有限公司 酶解法从海带中提取褐藻胶寡糖的新工艺
CN104099386A (zh) * 2013-04-03 2014-10-15 中国科学院大连化学物理研究所 一种酶解制备褐藻胶寡糖的方法
CN104094933A (zh) * 2013-04-03 2014-10-15 中国科学院大连化学物理研究所 一种广谱的植物抗旱剂及其在作物抗旱中的应用
CN103771918A (zh) * 2014-01-17 2014-05-07 青岛海大生物集团有限公司 一种双海藻肥料及其制备方法
CN103771918B (zh) * 2014-01-17 2015-10-07 青岛海大生物集团有限公司 一种双海藻肥料及其制备方法
CN103834610B (zh) * 2014-01-28 2016-03-02 大连大学 一种单细胞海带粉及海带寡糖的制备方法
CN103834610A (zh) * 2014-01-28 2014-06-04 大连大学 一种单细跑海带粉及海带寡糖的制备方法
CN105123929A (zh) * 2015-07-31 2015-12-09 青岛博智汇力生物科技有限公司 一种降低胆固醇的褐藻寡糖乳制品
CN105123929B (zh) * 2015-07-31 2019-07-02 青岛博智汇力生物科技有限公司 一种降低胆固醇的褐藻寡糖乳制品
CN105483183A (zh) * 2016-01-07 2016-04-13 福建农林大学 一种马尾藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用
CN105483183B (zh) * 2016-01-07 2019-05-10 福建农林大学 一种马尾藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用
CN105996043A (zh) * 2016-05-31 2016-10-12 福建省恒祥渔业有限公司 一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法
CN105996043B (zh) * 2016-05-31 2019-07-09 福建省恒祥渔业有限公司 一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法
CN106432535B (zh) * 2016-09-18 2019-06-14 青岛悦海医药科技有限公司 一种联产医药级褐藻胶和褐藻胶寡糖的工艺方法
CN106432535A (zh) * 2016-09-18 2017-02-22 青岛悦海医药科技有限公司 一种联产医药级褐藻胶和褐藻胶寡糖的工艺方法
CN106478244A (zh) * 2016-10-10 2017-03-08 五洲丰农业科技有限公司 一种含褐藻寡糖的聚氨酯包膜肥料的制备方法
CN107058423A (zh) * 2017-06-09 2017-08-18 中国海洋大学 一种均一性褐藻寡糖的制备方法
CN107058423B (zh) * 2017-06-09 2018-08-24 中国海洋大学 一种均一性褐藻寡糖的制备方法
CN107236772A (zh) * 2017-06-16 2017-10-10 陈艺燕 一种制备褐藻寡糖的方法
CN107236772B (zh) * 2017-06-16 2020-11-03 福建好日子食品有限公司 一种制备褐藻寡糖的方法
CN107488687A (zh) * 2017-09-13 2017-12-19 北京雷力海洋生物新产业股份有限公司 一种酶解法制备的褐藻酸寡糖及其组合物和制备方法
CN109294950A (zh) * 2018-10-11 2019-02-01 浙江理工大学 高活性结冷胶寡糖产生菌及其应用
CN109294950B (zh) * 2018-10-11 2021-03-30 浙江理工大学 高活性结冷胶寡糖产生菌及其应用
CN112167268A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 青岛苏贝尔作物营养有限公司 物理生物联合法生产农用海藻提取液的方法及海藻提取液
CN112167268B (zh) * 2019-07-02 2021-12-10 青岛苏贝尔作物营养有限公司 物理生物联合法生产农用海藻提取液的方法及海藻提取液
CN110403197A (zh) * 2019-07-31 2019-11-05 浙江海洋大学 一种褐藻胶口服液的应用
CN112500202A (zh) * 2019-09-16 2021-03-16 广东岩志生物科技有限公司 褐藻提取物用于制备农业肥料的用途
CN111763649A (zh) * 2020-07-31 2020-10-13 自然资源部第一海洋研究所 一种交替单胞菌及其应用
CN113773990A (zh) * 2021-09-08 2021-12-10 山东大学 一株白色食藻菌及其应用
CN114634583A (zh) * 2022-03-02 2022-06-17 华南理工大学 一种具有显著抗光老化活性的海藻酸及其制备方法与应用
CN114634583B (zh) * 2022-03-02 2022-12-16 华南理工大学 一种具有显著抗光老化活性的海藻酸及其制备方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101423854A (zh) 一种用褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的方法
Cheng et al. Pullulan: biosynthesis, production, and applications
CN104195080B (zh) 一株产褐藻胶裂解酶的芽孢杆菌及其应用
Rupert et al. Carrageenan from Kappaphycus alvarezii (Rhodophyta, Solieriaceae): metabolism, structure, production, and application
CN104911125B (zh) 一种壳聚糖酶生产菌及其应用
CN103451119B (zh) 一种交替单胞菌及其用它生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法
Dharani et al. Recent progress on engineering microbial alginate lyases towards their versatile role in biotechnological applications
CN104846035A (zh) 一种田菁酶法制备半乳甘露低聚糖的方法
CN108624638B (zh) 一种发酵生产氨基葡萄糖的方法
CN102286414B (zh) 一株几丁质降解菌株及其制备几丁寡糖的方法
CN107736373A (zh) 一种用于提高黄瓜幼苗的抗氧化酶的活性的方法
JPH0691819B2 (ja) デアセチラーゼの製造方法
CN112592914A (zh) 一种专用绿藻多糖裂解酶及其生产工艺
CN114989984B (zh) 一种用酶解方法制备海藻精的方法
CN111876453A (zh) 一种海藻寡糖的制备方法
CN103789241B (zh) 一株ι-卡拉胶降解菌及其发酵方法和应用
Razak et al. Biotechnological production of fungal biopolymers chitin and chitosan: their potential biomedical and industrial applications
CN101705359B (zh) 生物法回收含银废水中银的方法
CN104450832A (zh) 一种利用嗜热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)酶高效脱乙酰基降解甲壳素的技术
CN106348884A (zh) 含有巨大芽孢杆菌和腐植酸的液体水溶肥的生产方法
Aung et al. Enzymes for production of chitin, chitosan, and chitooligosaccharide and determination of activities of enzymes using chitinous substrates
CN110656140A (zh) 一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法
Singh et al. Production of pullulan from a high yielding strain of Aureobasidium pullulans isolated from Jabalpur region of Madhya Pradesh in Central India
CN104498412A (zh) 一种能降解琼脂的柯恩氏菌
CN116555094B (zh) 一株溶藻弧菌属多糖降解菌及其培养方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20090506