CN105996043B - 一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，通过鲍鱼内脏特含的褐藻酸酶和外加蛋白酶分别对废弃海带和鲍鱼内脏分步酶解，工艺简单、合理，变废为宝，节能减排，并且无废弃酸碱产生，有利于保护环境和可持续发展；得到的低聚糖醛酸与多肽复合剂，具有很好的抗氧化功能，同时人体易于吸收，可用作保健食品；利用鲍鱼内脏特有的褐藻酸酶这一天然资源，有效解决了褐藻酸不易降解为低聚糖醛酸的问题。

Description

一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品添加剂和保健品领域，尤其涉及一种低聚糖醛酸与多肽复合剂及其制备方法。

背景技术

低聚糖醛酸和多肽类物质因其具有独特的营养价值，成为近年来食品添加剂和保健品领域十分活跃的研究课题。

海带是一种典型的低热量、低脂肪、高矿物质、高纤维的天然保健食品，在日常饮食中适量摄食，对人体健康十分有益。但在海带加工过程中，大量的边梢和根部无法利用，通常作为废物丢弃，既浪费资源，又造成环境污染。海带中含有丰富的褐藻酸，其组成为甘露糖醛酸和古罗糖醛酸，当其降解为低分子量的低聚糖醛酸时，显示出较高的抗氧化性。

鲍鱼是海洋中的单壳软体动物，它肉质鲜美、营养丰富，是珍贵的海味。但在鲍鱼加工过程中，大约有鲍肉1/3体积的内脏因无法充分利用而被丢弃，导致资源浪费和环境污染。据报道，鲍鱼胰腺是褐藻酸酶的独特来源，褐藻酸酶能将褐藻酸降解为低聚糖醛酸，并且鲍鱼内脏降解后得到的多肽也具有较强的抗氧化性。

胡博旸、聂莹、孙路等(酸降解法制备褐藻寡糖抗氧化性的研究。中国酿造，2016，(9):51-05)从褐藻胶中提取出聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸，利用盐酸降解聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸1h、2h和6h，分别制备了甘露糖醛酸组分(M1、M2和M3)以及古罗糖醛酸组分(G1、G2和G3)，并且以肌肽和甘露糖为对照，评估寡糖对于DPPH自由基、超氧自由基和羟自由基的清除作用。结果表明，甘露糖醛酸以及古罗糖醛酸对于DPPH自由基、超氧自由基具有良好的清除作用，且清除作用随着寡糖中还原糖含量的增加而增加。在DPPH体系中，M3的清除效果要好于肌肽，G3的清除效果与肌肽相近。在超氧自由基体系中，M3的清除作用高于M2和M1，而G3的清除作用于略低于肌肽。在羟自由基体系中，甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的清除效果低于肌肽和甘露醇。实验表明，酸法制备的褐藻寡糖具有较强的抗氧化能力，且抗氧化效果与寡糖的平均聚合度含量有关。

杨慧萍、童圣英、王子臣(皱纹盘鲍淀粉酶和褐藻酸酶的研究。水产学报，1998，2(4)：345-351)利用分光光度计比色法测定了2-3cm的皱纹盘鲍的淀粉酶和褐藻酸酶的最适温度和最适pH以及11种金属离子对其的影响。结果表明：最适温度分别为30℃和35℃，最适pH分别为6.24和7.19，皱纹盘鲍的三种主要消化酶的活性依次为：褐藻酸酶＞蛋白酶＞淀粉酶。Cu²⁺、Hg²⁺、Ag⁺、Pb²⁺对淀粉酶活性具有显著的抑制作用，其他离子则具有促进作用，其中又以Mn²⁺、Ba²⁺、Ca²⁺三种金属离子尤为突出，其促进作用比对照组高一倍以上；而对褐藻酸酶，Zn²⁺、Ag⁺、Hg²⁺、Li⁺、Ba²⁺具显著的抑制作用，其他离子则没有作用。

吴永沛、何碧烟(九孔鲍褐藻酸酶、琼脂酶及纤维素酶的提取纯化。海洋科学，2002，26(3)：4-7)采用(NH₄)₂SO₄分段盐析和葡聚糖凝胶SephadexG-100柱层析纯化技术，从九孔鲍内脏器官中提取纯化褐藻酸酶、琼脂酶及纤维素酶。结果表明，在(NH₄)₂SO₄分段盐析纯化中，褐藻酸酶和纤维素酶的最适分离饱和度为60％，而琼脂酶为70％。分段盐析的提纯倍数为(以粗酶提取液为参照)褐藻酸酶13.3，琼脂酶8.7和纤维素酶10.9。葡聚糖凝胶SephadexG-100层析分离过程中，褐藻酸酶、琼脂酶和纤维素酶的比活力高峰分别出现在洗脱液的64,48和80ml处，提纯倍数分别为褐藻酸酶80.9，琼脂酶68.0及纤维素酶15.2。

李潇(褐藻酸寡糖的分离分析及其抗氧化活性的研究。西北大学硕士论文，2011)以褐藻酸多糖为原料，首先通过不完全酸水解和分级分离的方法获得聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸两个独立的片段，并对其分别进行酶解获得均一的甘露糖醛酸寡糖混合物和均一的古罗糖醛酸寡糖混合物。采用强阴离子交换柱结合梯度洗脱装置对寡糖混合物进行分离，制备了相应的寡糖单体。对得到的不同聚合度的单体进行了分析，并对活性进行了初步探究。

中国发明专利ZL201110405288.7公开了一种鲍鱼脏器自溶的处理方法。该方法得到的成品氨基态氮含量较高，提高了生产效率；而且成品腥苦味较弱，色泽好。它包括以下步骤：①将洗净的鲍鱼脏器斩拌搅碎为匀浆。②将鲍鱼脏器浆在常温下进行高压脉冲电场处理。③加入少量食盐，搅拌混匀。④采用紫外照射法对鲍鱼脏器浆进行处理。⑤采用高温法使鲍鱼脏器进行自溶水解。

中国发明专利ZL200510047409.X公开了一种鲍鱼多糖的提取方法，将鲍鱼去壳取肉(包括内脏)，用组织捣碎机破壁，加水混合均匀于20-80℃浸提2-6h，离心分离，不溶物再次加水重复提取1-2次，上清液合并。浓缩提取液至含糖1.5-3.0％，加3-4倍体积的95％乙醇，0-4℃下醇沉12-16h，离心后真空法或喷雾法干燥得产品。提取还可以用加碱提取、超声波提取、酶提取。酶提取可以用单一酶、双酶、复合酶、自溶酶和复合法提取。酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶等。

中国发明专利ZL201110123164.X公开了一种鲍鱼多糖的制备工艺，它包括以下步骤：①将洗净的鲍鱼肉或脏器打浆得到鲍鱼预处理液，常温下采用高压脉冲电场处理；②采用壳聚糖对PEF处理后的鲍鱼料液进行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖纯度；③采用电渗析技术对预处理液进行处理，有效脱去重金属；④采用乙醇沉淀制备鲍鱼多糖。

中国发明专利ZL201110123172.4公开了一种分离纯化鲍鱼蛋白的方法，它的步骤是：①将洗净后的鲍鱼脏器，打浆后经高压脉冲电场处理，离心去除含有多糖和脂肪的上清液后得到鲍鱼蛋白质沉淀；②将从鲍鱼脏器中分离出的蛋白，在食用酒精中洗涤后,离心取沉淀，重复洗脱多次。所采用的PEF细胞膜电穿孔技术结合乙醇脱色技术可有效提高蛋白质得率和纯度，并使所得到的蛋白质不变性，质量好。该蛋白可进一步水解制备调味品或功能性保健品。

吴靖娜(鲍内脏肽粉的抗氧化活性研究。海南大学学报(自然科学版)，2015，(2)：152-156)建立了酒精诱导的氧化应激小鼠模型，通过检测模型组、对照组和各给药组的小鼠血清和肝脏组织中的丙二醛(MDA)、蛋白质羰基含量(PCO)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的变化来评价鲍鱼内脏肽粉(AVPP)的抗氧化活性。结果表明，长期低浓度的酒精摄入可显著提高小鼠的MDA和PCO含量，降低T-SOD和T-AOC活力(P<0.05)，对小鼠具有一定的氧化损伤作用，建模方式可行。AVPP可显著降低模型小鼠的MDA和PCO含量，提高T-SOD、T-AOC、GSH和GSH-PX活力，对小鼠的氧化损伤可起到保护作用，具有较好的抗氧化活性。

目前这些关于降解褐藻酸或者分离纯化鲍鱼蛋白的报道，其制备过程复杂且制作成本较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种简单经济的技术方法，从废弃海带和鲍鱼内脏中有效提取出一种低聚糖醛酸与多肽复合剂。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将鲍鱼内脏加3-20倍体积的水，在匀浆机中于0-20℃条件下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将加工剩下的海带根茎和碎屑粉碎，放入带搅拌装置的容器中，加入海带原料1％-20％重量分数的碱性物质和5-80倍体积的水，浸泡10-90min，于40-90℃下搅拌0.5-3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所述的匀浆按1:10-1:100的体积比加入容器中混合，调节pH至6-8，升温至30-50℃，反应0.5-12h；

(4)在步骤(3)反应完成后的混合物中加入0.01％-1％重量分数的蛋白酶，于20-70℃条件下继续酶解0.5-12h；

(5)去除残渣，得到酶解液，并将酶解液浓缩干燥，得到粉末状产物。

本发明还提供一种由上述方法制备的低聚糖醛酸与多肽复合剂。

本发明的有益效果在于：

(1)通过鲍鱼内脏特含的褐藻酸酶和外加蛋白酶分别对废弃海带和鲍鱼内脏分步酶解，得到一种低聚糖醛酸与多肽复合剂，工艺简单、合理，变废为宝，节能减排，并且无废弃酸碱产生，有利于保护环境和可持续发展。

(2)得到的低聚糖醛酸与多肽复合剂，具有很好的抗氧化功能，同时人体易于吸收，可用作保健食品。

(3)利用鲍鱼内脏特有的褐藻酸酶这一天然资源，有效解决了褐藻酸不易降解为低聚糖醛酸的问题。

附图说明

图1为本发明反应流程图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：通过鲍鱼内脏特含的褐藻酸酶和外加蛋白酶分别对废弃海带和鲍鱼内脏分步酶解，得到一种低聚糖醛酸与多肽复合剂。该方法工艺简单，无废弃酸碱产生，利用了鲍鱼内脏特有的褐藻酸酶有效解决了褐藻酸不易降解为低聚糖醛酸的问题，并且得到的低聚糖醛酸和多肽复合剂具有很好的抗氧化性，人体易吸收，可用作保健食品。

请参照图1，一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将鲍鱼内脏加3-20倍体积的水，在匀浆机中于0-20℃条件下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将加工剩下的海带根茎和碎屑粉碎，放入带搅拌装置的容器中，加入海带原料1％-20％重量分数的碱性物质和5-80倍体积的水，浸泡10-90min，于40-90℃下搅拌0.5-3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所述的匀浆按1:10-1:100的体积比加入容器中混合，调节pH至6-8，升温至30-50℃，反应0.5-12h；

(4)在步骤(3)反应完成后的混合物中加入0.01％-1％重量分数的蛋白酶，于20-70℃条件下继续酶解0.5-12h；

(5)去除残渣，得到酶解液，并将酶解液浓缩、干燥，得到粉末状产物。

从上述描述可知，本发明的有益效果在于：通过鲍鱼内脏特含的褐藻酸酶和外加蛋白酶分别对废弃海带和鲍鱼内脏分步酶解，得到一种低聚糖醛酸与多肽复合剂。该方法工艺简单，反应过程中无废弃酸碱产生。

进一步的，步骤(2)中所述海带粉碎后的粒径小于等于5mm。

由上述描述可知，将海带粉碎成小粒径颗粒有利于后续反应的进行，使得反应接触面积更大，反应更加迅速充分。

进一步的，步骤(2)中所述碱性物质为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢铵中的一种或多种。

进一步的，步骤(3)中所述调节pH值的酸性物质为盐酸、醋酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸中的一种或多种。

进一步的，步骤(4)中所述蛋白酶为胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或多种。

由上述描述可知，本发明中碱性物质、酸性物质和蛋白酶可以是一种或者多种，选择性较大，我们可以根据实际条件和需要进行相应的选择搭配，灵活性较大。

进一步的，所述步骤(5)中去残渣方法为过滤或离心，所述浓缩方法为直接加热浓缩、真空加热浓缩或膜浓缩，所述干燥方法为冷冻干燥或喷雾干燥。

由上述描述可知，残渣去除方法可根据实际情况选择过滤或者离心，如反应完成后为悬浊液可选离心去除残渣，若较为澄清，则可直接进行过滤。去除残渣后，将澄清的反应液通过相应的浓缩方法除去大部分的水，得到浓缩液。溶液中的多肽远不稳定，所以可将浓缩液进行冷冻干燥，得到粉末状产物，冷干粉可在-20℃或者更低环境中保存几年而很少或无降解。

进一步的，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加5倍体积水，加入匀浆机中，于4℃下匀浆10min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量1％氢氧化钠和10倍体积的水，浸泡30min，于75℃下搅拌1.5h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:10体积比加入容器中，混合，加醋酸调节pH至7，加热，于搅拌下控制温度在45℃，酶解5h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入1％复合蛋白酶，于30℃下继续搅拌酶解，酶解6h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

进一步的，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂也可以通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加3倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量15％碳酸钠和20倍体积的水，浸泡90min，于90℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:50体积比加入容器中，混合，加乳酸调节pH至8，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解12h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入0.01％风味蛋白酶，于20℃下继续搅拌酶解，酶解12h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

进一步的，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂还可以通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加20倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量20％氢氧化钾和5倍体积的水，浸泡10min，于40℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:100体积比加入容器中，混合，加盐酸调节pH至6，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解12h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入0.5％胰蛋白酶，于45℃下继续搅拌酶解，酶解0.5h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

由上述描述可知，反应过程中所使用的碱性物质、酸性物质以及蛋白酶种类不同时，所要求的试剂用量、反应液浓度、反应时间、反应温度等均不一样，我们可根据实际情况选择所要用的试剂和条件，可操作性较强。

本发明还提供一种由上述的制备方法制备的低聚糖醛酸与多肽复合剂。

由上述描述可知，本发明制备的是一种低聚糖醛酸与多肽的复合剂。

实施例一

本发明的实施例一为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加5倍体积水，加入匀浆机中，于4℃下匀浆10min，使其呈浆状。

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量1％氢氧化钠和10倍体积的水，浸泡30min，于75℃下搅拌1.5h，使其呈浆状，冷却至室温。

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:10体积比加入容器中，混合，加醋酸调节pH至7，加热，于搅拌下控制温度在45℃，酶解5h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入1％复合蛋白酶，于30℃下继续搅拌酶解，酶解6h。

(5)酶解结束后，离心，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液；将所得的浓缩液冷冻干燥，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

实施例二

本发明的实施例二为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加3倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的根茎和碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量15％碳酸钠和20倍体积的水，浸泡90min，于90℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:50体积比加入容器中，混合，加乳酸调节pH至8，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解12h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入0.01％风味蛋白酶，于20℃下继续搅拌酶解，酶解12h。

(5)酶解结束后，过滤，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液，将所得的浓缩液喷雾干燥，即得到低分子量的低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

实施例三

本发明的实施例三为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加20倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状。

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的藻类根茎和碎屑混合物粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量20％氢氧化钾和5倍体积的水，浸泡10min，于40℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温。

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:100体积比加入容器中，混合，加盐酸调节pH至6，加热，于搅拌下控制温度在30℃，酶解6h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入0.5％胰蛋白酶，于45℃下继续搅拌酶解，酶解0.5h。

(5)酶解结束后，过滤或离心，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液；将所得的浓缩液干燥，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

实施例四

本发明的实施例四为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加10倍体积水，加入匀浆机中，于20℃下匀浆1min，使其呈浆状。

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量5％氢氧化铵和40倍体积的水，浸泡30min，于70℃下搅拌1.5h，使其呈浆状，冷却至室温。

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:30体积比加入容器中，混合，加柠檬酸调节pH至6.5，加热，于搅拌下控制温度在45℃，酶解6h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入0.5％木瓜蛋白酶，于30℃下继续搅拌酶解，酶解1.5h。

(5)酶解结束后，过滤或离心，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液；将所得的浓缩液干燥，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

实施例五

本发明的实施例五为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加15倍体积水，加入匀浆机中，于0℃下匀浆30min，使其呈浆状。

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的藻类根茎和碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量10％碳酸氢钠和20倍体积的水，浸泡30min，于65℃下搅拌1.5h，使其呈浆状，冷却至室温。

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:40体积比加入容器中，混合，加苹果酸调节pH至7，加热，于搅拌下控制温度在40℃，酶解8h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入1％中性蛋白酶，于40℃下继续搅拌酶解，酶解8h。

(5)酶解结束后，过滤或离心，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液；将所得的浓缩液干燥，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

实施例六

本发明的实施例六为：

(1)鲍鱼内脏匀浆的制备：以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加10倍体积水，加入匀浆机中，于10℃下匀浆20min，使其呈浆状。

(2)海带匀浆的制备：将海带加工过程中产生的藻类根茎和碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量20％氢氧化钾和80倍体积的水，浸泡60min，于90℃下搅拌0.5h，使其呈浆状，冷却至室温。

(3)海带的酶解：将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:20体积比加入容器中，混合，加柠檬酸调节pH至7，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解0.5h。

(4)鲍鱼内脏的酶解：在步骤(3)得到的匀浆中加入1％木瓜蛋白酶，于70℃下继续搅拌酶解，酶解4h。

(5)酶解结束后，过滤或离心，除去残渣，得到酶解液；将所得的酶解液浓缩成粘稠状，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂浓缩液；将所得的浓缩液干燥，即得到低聚糖醛酸和多肽复合剂粉末。

综上所述，本发明提供的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，通过鲍鱼内脏特含的褐藻酸酶和外加蛋白酶分别对废弃海带和鲍鱼内脏分步酶解，工艺简单、合理，变废为宝，节能减排，并且无废弃酸碱产生，有利于保护环境和可持续发展；得到的低聚糖醛酸与多肽复合剂，具有很好的抗氧化功能，同时人体易于吸收，可用作保健食品；利用鲍鱼内脏特有的褐藻酸酶这一天然资源，有效解决了褐藻酸不易降解为低聚糖醛酸的问题。在本发明的反应过程中所用的碱性物质、酸性物质、蛋白酶以及提纯、干燥等方法都可以根据实际需要进行调整，选择范围广，可实施性较强。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将鲍鱼内脏加3-20倍体积的水，在匀浆机中于0-20℃条件下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将加工剩下的海带根茎和碎屑粉碎，放入带搅拌装置的容器中，加入海带原料1％-20％重量分数的碱性物质和5-80倍体积的水，浸泡10-90min，于40-90℃下搅拌0.5-3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所述的匀浆按1:10-1:100的体积比加入容器中混合，调节pH至6-8，升温至30-50℃，反应0.5-12h；

(4)在步骤(3)反应完成后的混合物中加入0.01％-1％重量分数的蛋白酶，于20-70℃条件下继续酶解0.5-12h；

(5)去除残渣，得到酶解液，并将酶解液浓缩干燥，得到粉末状产物。

2.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中海带粉碎后的粒径小于等于5mm。

3.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的碱性物质为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢铵中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中加入酸性物质调节pH，所述酸性物质为盐酸、醋酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的蛋白酶为胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或多种。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中去残渣方法为过滤或离心，浓缩方法为直接加热浓缩、真空加热浓缩、膜浓缩，干燥方法为冷冻干燥或喷雾干燥。

7.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加5倍体积水，加入匀浆机中，于4℃下匀浆10min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量1％氢氧化钠和10倍体积的水，浸泡30min，于75℃下搅拌1.5h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:10体积比加入容器中，混合，加醋酸调节pH至7，加热，于搅拌下控制温度在45℃，酶解5h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入1％复合蛋白酶，于30℃下继续搅拌酶解，酶解6h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

8.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加3倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量15％碳酸钠和20倍体积的水，浸泡90min，于90℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:50体积比加入容器中，混合，加乳酸调节pH至8，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解12h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入0.01％风味蛋白酶，于20℃下继续搅拌酶解，酶解12h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

9.根据权利要求1所述的一种低聚糖醛酸与多肽复合剂的制备方法，其特征在于，所述低聚糖醛酸与多肽复合剂通过以下方法制备：

(1)以鲍鱼加工过程中产生的废弃内脏，加20倍体积水，加入匀浆机中，于0-20℃下匀浆1-30min，使其呈浆状；

(2)将海带加工过程中产生的碎屑粉碎成粒度≤5mm的颗粒，加入带搅拌器的容器中，加入海带原料质量20％氢氧化钾和5倍体积的水，浸泡10min，于40℃下搅拌3h，使其呈浆状，冷却至室温；

(3)将步骤(1)和(2)中所得的匀浆按照1:100体积比加入容器中，混合，加盐酸调节pH至6，加热，于搅拌下控制温度在50℃，酶解12h；

(4)在步骤(3)得到的匀浆中加入0.5％胰蛋白酶，于45℃下继续搅拌酶解，酶解0.5h；

(5)过滤步骤(4)反应完成后的产物，过滤得到酶解液，浓缩成粘稠状后冷冻干燥得到产物。

10.根据权利要求1-9任一项所述的制备方法制备的低聚糖醛酸与多肽复合剂。