CN101387609B

CN101387609B - 一种快速检测三聚氰胺的方法

Info

Publication number: CN101387609B
Application number: CN2008102243801A
Authority: CN
Inventors: 胡小松; 陈芳; 刘洁; 戴玉子; 赵君; 张慧; 姜冰; 李蕾
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2008-10-20
Filing date: 2008-10-20
Publication date: 2010-09-15
Anticipated expiration: 2028-10-20
Also published as: CN101387609A

Abstract

本发明公开了一种三聚氰胺的检测方法，属于食品和饲料中掺伪成分的快速检测方法。技术方案包括如下步骤：1)对待测样品进行除杂前处理，得到滤出液；2)将5-10％醋酸或1-5％三聚氰酸或5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液滴加入滤出液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。本方法用于检测乳品和饲料中的三聚氰胺，具有特异、高效、快速、准确、稳定的特点；且本方法操作简便易行、检测成本低，有利于实际推广和应用，能够满足液态奶、奶粉以及饲料等企业的实际需要，也为政府部门监管饲料和食品中的三聚氰胺提供了快速有效的检测方法。

Description

一种快速检测三聚氰胺的方法

技术领域

本发明涉及一种三聚氰胺的检测方法，属于食品和饲料中掺伪成分的快速检测方法。

背景技术

三聚氰胺(Melamine)简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，分子式为C₃N₆H₆，相对分子量为126.12，是氮杂环化合物的一种。三聚氰胺能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱碱性。三聚氰胺是一种用途广泛的具有均匀结构的有机化工中间产品，最主要的用途是作为生产三聚氰胺-甲醛树脂(MF)的原料。三聚氰胺-甲醛树脂原料再经过加工处理，应用于装饰贴面板、装饰涂料漆、蜜胺塑料等产品。实验证明，动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，导致膀胱、肾部结石等。

快速检测技术是近年来发展起来的新型技术，具有检测方法简便易行、检测时间短、仪器设备简单等特点。目前，快速检测技术在食品工业中主要应用于营养成分、有害物质、微生物的检测。但有关三聚氰胺的快速检测技术，通过化学方法定性检测液态奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺在国内外还未见报道。

近年来，由于蛋白质含量的测定方法存在缺陷，不法分子将三聚氰胺添加于原料奶和饲料等产品中，利用三聚氰胺含氮量高的性质，使检测结果表现出蛋白质含量虚高的假象。1990年前后国外已报道采用拉曼光谱、近红外、中红外技术用于检测三聚氰胺，但这三种方法均需要高级精密仪器、技术性强、难以普及，不适用于现场三聚氰胺的快速检测。虽然已有报道采用酶联免疫试剂盒进行检测，但检测成本高，假阳性率较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测三聚氰胺的方法，采用简单的前处理方法除去液态奶、奶粉和饲料中的脂肪、蛋白质等干扰成分，利用特异性化学反应产生肉眼可见浑浊达到检测三聚氰胺的目的。该方法具有特异、高效、快速、准确、稳定的特点；此外，该方法操作简便易行、检测成本低，有利于实际推广和应用，能够满足液态奶、奶粉以及饲料等企业的实际需要，也为政府部门监管饲料和食品中的三聚氰胺提供了快速有效的检测方法。

本发明是以如下技术方案实现的：

1、对待测样品进行除杂前处理，得到滤出液；

2、将5-10％醋酸或1-5％三聚氰酸或5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液滴加入滤出液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，将步骤1得到的滤出液加热浓缩得浓缩液，将5-10％醋酸或1-5％三聚氰酸或5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液以1:1-3:2的体积比滴加入浓缩液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的除杂是除去待测样品中所含的脂肪、蛋白质和碳水化合物。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的除杂前处理包括向液态奶或奶粉加入石油醚或乙醚或正己烷，去除样品中的脂肪；向液态奶或奶粉加入硫酸铜或氯化锌或醋酸铅或硫酸汞蛋白沉淀剂，将液态奶或奶粉中的蛋白质有效沉淀；向液态奶或奶粉加入活性炭或大孔树脂，去除液态奶或奶粉中的碳水化合物；或直接利用甲醇或乙醇或乙腈或水作为溶剂将三聚氰胺从饲料中提取出来达到除杂的目的。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的待测样品包括液态奶或奶粉或饲料。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的待测样品为液态奶，其除杂前处理为：向液态奶中按照2∶1-1∶1的体积比加入石油醚或乙醚或正己烷，于5000转/分钟离心10-20分钟，除去上层脂肪。以体积比1∶1加入蛋白沉淀剂，然后按照0.5-1％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集得滤出液。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的待测样品为奶粉，其除杂前处理为：向奶粉中加入4-8倍的水稀释后，按照2∶1-1∶1的体积比加入石油醚或乙醚或正己烷，于5000转/分钟离心10-20分钟，除去上层脂肪。以1∶1的体积比加入蛋白沉淀剂，然后按照0.5-1％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集得滤出液。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，所述的待测样品为饲料，其除杂前处理为：将饲料粉碎后过80-120目筛，筛下物按1∶4-1∶8的重量体积比例加入10-20％甲醇或乙醇或乙腈，或加入水，充分振荡5-15min，真空抽滤，收集滤出液。

上述的快速检测三聚氰胺的方法中，将步骤1得到的滤出液加热浓缩至滤出液体积的十分之一得所述的浓缩液。

本发明首先对待测样品包括液态奶、奶粉或饲料进行前处理，除去其中所含的脂肪、蛋白质和碳水化合物，所以我们首先选择合适的试剂将牛奶中干扰物除去。试剂应该具有如下特点：(1)不与三聚氰胺反应；(2)除杂效率高；(3)价格低廉而且容易得到；(4)毒性小。

通过筛选和比较各种试剂的前处理效果，结果表明，采用石油醚、正己烷等非极性溶剂可以有效去除样品中的脂肪；而采用重金属盐(即硫酸铜或氯化锌或醋酸铅或硫酸汞)作为蛋白沉淀剂可以将样品中的蛋白质有效沉淀；采用活性炭或大孔树脂出去乳制品中的碳水化合物去除。此外，也可以利用甲醇、乙醇、乙腈或水等溶剂将三聚氰胺从待测样品中提取出来达到除杂的目的。

本发明的关键步骤：对经过除杂前处理后的待测样品进行三聚氰胺的定性检测。

为了便于显色反应的观察，将前处理后得到的滤出液加热浓缩至滤出液体积的十分之一，将浓缩液冷却至室温。将5-10％醋酸、1-5％三聚氰酸、5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液以1:1-3:2的比例滴加入浓缩液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。

本方法通过对样品除杂前处理获得三聚氰胺浓缩液；通过筛选出能够特异性地与三聚氰胺结合的化合物5-10％醋酸、1-5％三聚氰酸、5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液，使二者混合后能出现明显的混浊，用于检测乳品和饲料中的三聚氰胺，具有特异、高效、快速、准确、稳定的特点；此外，本方法操作简便易行、检测成本低，有利于实际推广和应用，能够满足液态奶、奶粉以及饲料等企业的实际需要，也为政府部门监管饲料和食品中的三聚氰胺提供了快速有效的检测方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

实施例1

在20mL液态奶中按照1：1的体积比加入石油醚，于5000转/分钟离心10分钟，除去上层脂肪。以体积比1：1加入5％硫酸汞水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照0.5％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。接着将滤出液加热浓缩10倍后冷却至室温。以1:1的体积比滴加5％醋酸1.5mL入浓缩液中，混匀，静置1min，观察溶液发生混浊，可判定该液态奶样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例2

在20mL液态奶中按照2：1的体积比加入乙醚，于5000转/分钟离心10分钟，除去上层脂肪。以体积比1：1加入5％氯化锌水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照0.75％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。接着将滤出液加热浓缩10倍后冷却至室温。以3:2的体积比滴加5％草酸1.5mL入浓缩液中，加入混匀，静置1min，观察溶液发生混浊，可判定该液态奶样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例3

在10mL液态奶中按照2：1的体积比加入正己烷，于5000转/分钟离心10分钟，除去上层脂肪。以体积比1：1加入5％醋酸铅水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照1％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。接着将滤出液加热浓缩10倍后冷却至室温。以1:1体积比滴加5％单宁酸1.5mL入浓缩液中，混匀，静置1min，观察溶液发生混浊，可判定该液态奶样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例4

称取5g奶粉充分溶解于20mL水中，按照2：1的体积比加入乙醚，振荡5min，除去上层乙醚相，以体积比1：1加入5％硫酸汞水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照1％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。将滤出液加热浓缩10倍后，冷却至室温。以1:1的体积比滴加5％三聚氰酸入浓缩液中，混匀后，静置2min，观察溶液发生混浊，可判定该奶粉样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例5

称取5g奶粉充分溶解于20mL水中，按照2：1的体积比加入正己烷，振荡5min，除去上层正己烷相，以体积比1：1加入5％醋酸铅水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照0.5％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。将滤出液加热浓缩10倍后，冷却至室温。以3：2的体积比滴加7.5％醋酸入浓缩液中，混匀后，静置2min，观察溶液发生混浊，可判定该奶粉样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例6

称取4g奶粉充分溶解于20mL水中，按照2：1的体积比加入石油醚，振荡5min，除去上层石油醚相，以体积比1：1加入5％硫酸铜水溶液，充分搅拌。搅拌后的液态奶按照1％的重量体积比加入活性炭吸附10分钟后真空抽滤，收集澄清的滤出液。将滤出液加热浓缩10倍后，冷却至室温。以1:1的体积比滴加10％草酸入浓缩液中，混匀后，静置2min，观察溶液发生混浊，可判定该奶粉样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例7

奶牛配合颗粒饲料粉碎过100目筛后，称取20g筛下物，加入80mL20％甲醇水溶液，充分振荡15min，真空抽滤，收集滤出液。将滤出液加热浓缩10倍，冷却至室温。以1:1的体积比滴加5％醋酸入浓缩液中，混匀后，静置3min，溶液显混浊，可判定该饲料样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例8

奶牛配合颗粒饲料粉碎过100目筛后，称取10g筛下物，加入60mL20％乙腈水溶液，充分振荡10min，真空抽滤，收集滤出液。将滤出液加热浓缩10倍，冷却至室温。以1:1的体积比滴加10％草酸入浓缩液中，混匀后，静置3min，溶液显混浊，可判定该饲料样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例9

奶牛配合颗粒饲料粉碎过100目筛后，称取5g筛下物，加入40mL20％乙醇水溶液，充分振荡12min，真空抽滤，收集滤出液。将滤出液加热浓缩10倍，冷却至室温。以1:1的体积比滴加7％三聚氰酸入浓缩液中，混匀后，静置3min，溶液显混浊，可判定该饲料样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

实施例10

奶牛配合颗粒饲料粉碎过100目筛后，称取5g筛下物，加入30mL水，充分振荡15min，真空抽滤，收集滤出液。将滤出液加热浓缩10倍，冷却至室温。以1:1的体积比滴加10％单宁酸入浓缩液中，混匀后，静置3min，溶液显混浊，可判定该饲料样品中三聚氰胺含量大于等于2mg/kg。

说明：本文中的百分比“X-Y％”即为“X％-Y％”。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

1)对待测样品液态奶或奶粉或饲料进行除杂前处理，得到滤出液；所述的除杂是除去待测样品液态奶或奶粉或饲料中所含的脂肪、蛋白质和碳水化合物；

2)将5-10％醋酸或1-5％三聚氰酸或5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液滴加入滤出液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。

2.根据权利要求1所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，将步骤1得到的滤出液加热浓缩得浓缩液，将5-10％醋酸或1-5％三聚氰酸或5-10％草酸或5-10％单宁酸溶液以1∶1-3∶2的体积比滴加入浓缩液中，通过目视观察是否发生混浊，如混浊即可判定该样品中三聚氰胺含量高于2mg/kg。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的除杂前处理包括向液态奶或奶粉加入石油醚或乙醚或正己烷，去除样品中的脂肪；向液态奶或奶粉加入硫酸铜或氯化锌或醋酸铅或硫酸汞蛋白沉淀剂，将液态奶或奶粉中的蛋白质有效沉淀；向液态奶或奶粉加入活性炭或大孔树脂，去除液态奶或奶粉中的碳水化合物；或直接利用甲醇或乙醇或乙腈或水作为溶剂将三聚氰胺从饲料中提取出来达到除杂的目的。

4.根据权利要求1或2所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的待测样品为液态奶，其除杂前处理为：向液态奶中按照2∶1-1∶1的体积比加入石油醚或乙醚或正己烷，于5000转/分钟离心10-20分钟，除去上层脂肪；以体积比1∶1加入蛋白沉淀剂，然后按照0.5-1％的重量体积比加入活性炭后真空抽滤，收集得滤出液。

5.根据权利要求1或2所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的待测样品为奶粉，其除杂前处理为：向奶粉中加入4-8倍的水稀释后，按照2∶1-1∶1的体积比加入石油醚或乙醚或正己烷，于5000转/分钟离心10-20分钟，除去上层脂肪；以1∶1的体积比加入蛋白沉淀剂，然后按照0.5-1％的重量体积比加入活性炭后真空抽滤，收集得滤出液。

6.根据权利要求3所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的待测样品为奶粉，其除杂前处理为：向奶粉中加入4-8倍的水稀释后，按照2∶1-1∶1的体积比加入石油醚或乙醚或正己烷，于5000转/分钟离心10-20分钟，除去上层脂肪；以1∶1的体积比加入蛋白沉淀剂，然后按照0.5-1％的重量体积比加入活性炭后真空抽滤，收集得滤出液。

7.根据权利要求1或2所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的待测样品为饲料，其除杂前处理为：将饲料粉碎后过80-120目筛，筛下物按1∶4-1∶8的重量体积比加入10-20％甲醇或乙醇或乙腈，或加入水，充分振荡5-15min，真空抽滤，收集滤出液。

8.根据权利要求3所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的待测样品为饲料，其除杂前处理为：将饲料粉碎后过80-120目筛，筛下物按1∶4-1∶8的重量体积比加入10-20％甲醇或乙醇或乙腈，或加入水，充分振荡5-15min，真空抽滤，收集滤出液。

9.根据权利要求2所述的快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于，将步骤1得到的滤出液加热浓缩至滤出液体积的十分之一得所述的浓缩液。