CN101968452A - 一种快速检测三聚氰胺的试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速检测三聚氰胺的试剂盒及其应用，所述的试剂盒包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C和显示剂D。所述的应用包括：以三聚氰胺含量为2.0mg/L的原料乳或者加工后纯牛奶为标准样品，将待测样品盒标准样品分别在相同条件下依次经步骤(1)～(3)处理后，利用化学浊度法判断待测样品中三聚氰胺含量是否超过2.0mg/L：(1)原料乳或者加工后纯牛奶加入蛋白沉淀剂A除去蛋白，得到滤液；(2)滤液过SCX+C8固相萃取柱，经过淋洗试剂B除杂净化，然后用洗脱试剂C进行洗脱，所得洗脱液蒸干；(3)在蒸干残留物中加入显示剂D，混匀后得到的显示后溶液吸入酶标板内。本发明检测方法具有快速、特异、准确的特点，操作简便易行、检测成本低。

Description

一种快速检测三聚氰胺的试剂盒及其应用

(一)技术领域

本发明涉及原料乳及其加工后袋装纯牛奶中三聚氰胺的快速检测方法及试剂盒。

(二)背景技术

2008年9月我国发生了婴幼儿食用奶粉中毒甚至死亡的重大食品安全事故，追究原因是来自牛奶收购站违规添加“蛋白精”-三聚氰胺所致，这起食品安全事故使我国的奶制品以及相关行业导致重大打击，消费者对奶制品的安全信任下降到最低点，后续波及的相关行业同样受到很大影响，影响到国际贸易以及国家名声。在三鹿奶粉事件之前，我国未曾建立有食品中三聚氰胺测定方法，很少有三聚氰胺快速检测技术。在国家质检总局的主持下，2008年10月7日国家标准委员会发布GB/T22388-2008原料乳和乳制品中三聚氰胺检测方法，规定了液相色谱、气相色谱质谱法、液相色谱质谱法三种标准测定方法，但是三种方法均需要大型精密仪器、熟练操作人员，复杂的样品前处理，目前检测部门收费一般为200元/份-1000元/份，目前我国已经规定对液态乳制品进行批批检测，上述方法显然不能满足乳制品行业生产检测要求，开发快速、简便的测定方法非常重要。目前针对液态奶中三聚氰胺快速检测方法，国外除了ELISA法外，还没见其他方法，国内还没有三聚氰胺抗体生产报道，且ELISA需要一定的仪器设备和较熟练的操作人员，对样品数量少的检测(同样需要制定标准曲线)，且成本较高，时间需要1.0小时以上。

国家科技部于2008年9月28日向社会公开征集液态奶中三聚氰胺快速检测技术和产品。国内10月10日由国家质检总局的主持的现场盲样考试中，使用的方法原理主要有离子色谱、ELISA、毛细管电泳、显微镜目视法、显色法等等。在结果公示中存在以下问题：有些方法需要大型仪器设备，至少几十万，仪器维护使用成本高；有些方法定性不准确，特异性差等缺点。

本发明采用化学浊度法开发原料奶及其加工后袋装纯牛奶中三聚氰胺快速检测试剂盒，优化各种条件，使各种指标满足科技部招标要求，同时使用者不需要增加大型仪器设备投入，以及特殊要求的操作人员，该产品的开发成功为促进奶制品的行业的健康发展以及打击三聚氰胺的违法使用保障食品安全具有非常重要意义。

(三)发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一种三聚氰胺检测试剂盒。

一种三聚氰胺检测试剂盒，包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A选自下列之一：甲醇、乙腈、1wt％三氯乙酸水溶液、2wt％乙酸铅水溶液、1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶0.5～2混合得到的混合溶液、1wt％亚铁氰化钾水溶液与2wt％乙酸锌水溶液按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为30～60mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为3～6vol％氨化甲醇；所述的显示剂D选自下列之一：0.5wt％苦味酸水溶液、0.5wt％氯化汞水溶液、0.5wt％三聚氰酸水溶液、体积比为1∶0.5～1.2的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

进一步，所述的蛋白沉淀剂A优选为1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶0.5～2混合得到的混合溶液；更优选1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液。

进一步，所述的显示剂D优选为体积比为1∶0.5～1.2的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液；更优选体积比为1∶1的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

本发明所述的淋洗试剂B和洗脱试剂C是SCX+C8固相萃取柱对应的淋洗试剂和洗脱试剂，其中淋洗试剂B优选50mmol/L盐酸溶液，洗脱试剂C优选5vol％氨化甲醇。本发明中氨化甲醇的浓度为体积浓度，由25～28wt％氨水和甲醇配制得到，比如5％氨化甲醇中25～28wt％氨水与甲醇体积比为5∶95。

更进一步，本发明优选所述的试剂盒包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A为1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为50mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为5vol％氨化甲醇；所述的显示剂D为体积比为1∶1的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

本发明要解决的第二个技术问题是提供一种上述三聚氰胺检测试剂盒在快速检测三聚氰胺中的应用。

一种快速检测三聚氰胺的方法，其特征在于所述的方法包括：以三聚氰胺含量为2.0mg/L的原料乳或者加工后纯牛奶为标准样品，以待测的原料乳或者加工后纯牛奶为样品，分别在相同条件下依次经步骤(1)～(3)处理后，利用化学浊度法判断待测的样品中三聚氰胺含量是否超过2.0mg/L：

1)原料乳或者加工后纯牛奶中加入蛋白沉淀剂A，经过滤除去蛋白，得到滤液；所述原料乳或者加工后纯牛奶与蛋白沉淀剂A的投料体积比为1∶0.8～1.2；

2)取SCX+C8固相萃取柱，活化后使步骤1)所得滤液过SCX+C8固相萃取柱，经过淋洗试剂B除杂净化，然后用洗脱试剂C进行洗脱，所得洗脱液蒸干；

3)在步骤2)得到的蒸干残留物中加入显示剂D，混匀后得到的显示后溶液吸入酶标板内，利用化学浊度法测定三聚氰胺含量。

进一步，本发明步骤(1)中所述原料乳或者加工后纯牛奶与蛋白沉淀剂A的投料体积比优选为1∶1。

进一步，本发明步骤(2)使用的SCX+C8固相萃取柱可有不同规格，优选使用300mg/6mL、500/6mL或1000/6mL规格的SCX+C8固相萃取柱，更优选使用300mg/6mL规格的SCX+C8固相萃取柱。

一般来说，对于SCX+C8固相萃取柱的使用，包括活化、上样、淋洗、洗脱四个步骤，本领域技术人员可以采用常规操作。其中活化步骤可依次用甲醇、水、淋洗试剂B活化柱子；样品、活化用试剂、淋洗试剂、洗脱试剂的用量可以根据柱子的规格而定，如300mg/6mL、500/6mL、1000/6mL规格的SCX+C8固相萃取柱，样品、活化用试剂、淋洗试剂、洗脱试剂的体积用量可选择在2～3mL。

进一步，本发明步骤(3)中，所述显示剂D的加入量以蒸干残留物的质量计为2～5mL/g。所述蒸干残留物中除了三聚氰胺，还含有其他杂质。一般而言，当步骤(2)中样品、活化用试剂、淋洗试剂、洗脱试剂的体积用量选择在2～3mL时，可在其所得的蒸干残留物中加入0.1～0.5mL的显示剂D，优选加入0.2mL的显示剂D。

更进一步，本发明优选步骤(1)～(3)具体如下：

(1)取原料奶或者加工后袋装纯牛奶加入蛋白沉淀剂A，混匀后过滤，收集滤液待用；所述原料奶或者加工后袋装纯牛奶与蛋白沉淀剂A的投料体积比为1∶1。

(2)取SCX+C8混合固相萃取柱，先用甲醇2～3mL、水2～3mL、淋洗试剂B 2～3mL润洗活化柱子，然后加2～3mL步骤(1)所得滤液过柱，先用2～3mL淋洗试剂B、2～3mL甲醇淋洗除杂，最后用2～3mL洗脱试剂C洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液在沸水浴中蒸干备用；所述的SCX+C8混合固相萃取柱的规格为300mg/6mL。

(3)在上述蒸发残留物管中加显示剂D 0.1～0.5mL，涡旋混合器混匀，并移入酶标板。

本发明所述的化学浊度法包括目视比浊度法和浊度计法，本发明可采用其中一种或者两种结合使用。

进一步，所述的目视比浊度法为：经步骤(3)处理后，如果样品所得溶液显示乳白色浑浊，则样品中三聚氰胺含量大于2.0mg/L。具体含量可结合仪器法进一步定量。

进一步，所述的浊度计法为：将步骤(3)所得溶液使用浊度计以与步骤(3)相同体积用量的显示剂D为空白测量浊度值，如果样品浊度值大于标准样品浊度值，则样品中三聚氰胺含量大于2.0mg/L。

更进一步，所述的浊度计法采用单波长检测，优选在405nm或450nm的单波长条件下测定浊度值。

更进一步，为提高浊度计法的精确度，标准样品的浊度值优选采用多次测量进行确定。

本发明所述方法适用于原料乳或者加工后袋装纯牛奶中的三聚氰胺的测定，具有快速、特异、准确的特点，其检出限达2.0mg/L，方法操作简便易行、检测成本低，有利于在液态奶、奶粉生产企业中推广和应用，也为政府部门检测原料乳或者加工后袋装纯牛奶中的三聚氰胺提供了快速有效的检测方法。

(四)附图说明

图1为实施例1得到的各种蛋白质沉淀剂对浊度测定的影响。

图2为实施例1得到的1％三氯乙酸和乙腈混合比例对浊度测定的影响。

图3为实施例2得到的各种规格固相萃取柱对测定结果的影响，注：A、B和C代表300mg/6mL、500mg/6mL和1000mg/6mL规格萃取柱。

图4为实施例3得到的三种显色剂与三聚氰胺的反应结果。

图5为本发明使用的便携式浊度仪。

图6为实施例4得到的不同波长对于测定结果的影响。

图7为实施例4得到的三聚氰胺标准曲线。

图8为实施例4得到的国产固相萃取柱对液态奶测定结果。

图9为实施例4得到的进口固相萃取柱对液态奶测定结果。

图10为进口与国产固相萃取柱对液态奶空白测定结果。

图11为进口与国产固相萃取柱对液态奶加标2.0mg/L测定结果。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

本发明实施例使用的国产SCX+C8混合固相萃取柱，购自杭州福裕科技服务有限公司；进口SCX+C8混合固相萃取柱购自德国Dr.E公司。

实施例1：原料乳中蛋白质的去除以及蛋白沉淀剂A的选择

由于本方法采用浊度法，最后所采用的各种显示试剂均可以与蛋白质、小肽等形成沉淀反应，因此本部分需要尽可能去除蛋白质，同时要便于下一步三聚氰胺的分离和净化。

实施例实验步骤如下：

1)取5mL不含三聚氰胺的鲜牛奶(样品空白)加入5mL蛋白沉淀剂，混匀后用滤纸过滤，弃去前面10滴，收集后面4mL待用。

2)取300mg/6mL的国产SCX+C8混合固相萃取柱，先用甲醇3mL、水3mL、50mmol/mL盐酸溶液(淋洗试剂B)3mL润洗活化柱子，然后加上述3mL滤液过柱，先用3mL淋洗试剂B、3mL甲醇淋洗除杂，最后用3mL5％氨化甲醇(洗脱试剂C)洗脱，并用10mL锥形玻璃管收集，将收集的滤液在沸水浴中蒸干备用。

3)在上述蒸发残留物管中加0.5wt％氯化汞+0.5wt％三聚氰酸(1∶1 v∶v)(显示剂D)0.2mL，涡旋混合器混匀，并移入酶标板，放置5min后以0.2mL显示剂D作空白校零，用便携式比浊计在450nm波长下测定吸光度值。

取5mL添加有三聚氰胺的鲜牛奶(三聚氰胺添加量为2mg/L)为加标样品，实验条件同上。

每一组平行试验3次，取平均值作为测定结果。

各种蛋白质沉淀剂最后测定结果见表1、图1。

表1各种蛋白质沉淀剂对浊度测定的影响(n＝3)

由表1、图1从知，虽然甲醇、乙腈沉淀蛋白后样品空白吸光度最低，但样品加标(2.0mg/L)吸光度A同样比较低，主要是下面的固相萃取柱选择的阳离子交换柱，需要在酸性条件下进行，A-A0值以1％三氯乙酸加乙腈作为蛋白沉淀剂最高，说明样品加标回收率相对最好，对1％三氯乙酸和乙腈混合比例进行优化结果见表2、图2。

表21％三氯乙酸和乙腈混合比例对结果的影响(n＝6)

从表2、图2结果可知，以1％三氯乙酸和乙腈混合比例1∶1效果最好，因此将试剂混合后形成试剂盒蛋白沉淀剂A。

实施例2：样品净化方法的选择和优化

本部分主要考虑尽可能的除去小肽以及其他干扰物质，同时对液态奶中的三聚氰胺起到浓缩、净化作用。目前用于三聚氰胺固相萃取的柱子主要有MCX、PCX、SCX、WCX、SCX+C8、CARB/SCX等等，由于很多方法均采用混合性阳离子交换固相萃取柱MCX，同时考虑柱子的国产化、价格、快速程度、回收率、解吸溶剂去除，选择SCX+C8作为研究对象，比较进口(购自德国Dr.E公司)以及国产(购自杭州福裕科技服务有限公司)的各种规格的柱子净化、回收效果。

以1％三氯乙酸和乙腈(1∶1 v∶v)为蛋白沉淀剂，选用下表中所列不同规格的SCX+C8固相萃取柱净化，其他实验条件同实施例1。

每一组平行试验3次，取平均值作为测定结果。实验结果见表3、图3。

表3各种不同规格的SCX+C8固相萃取柱对测定结果的影响(N＝3)

同样从空白样品、样品加标考虑，从表3、图3选择国产的300mg/6mL的SCX+C8混合型固相萃取柱，制备成三聚氰胺特异性净化柱。参考SCX+C8混合型固相萃取柱的使用方法，将其淋洗试剂以及洗脱试剂配制包装形成淋洗试剂B、洗脱试剂C。

实施例3：显示剂的优化

与三聚氰胺能进行特异性化学反应的试剂主要有苦味酸、氯化汞、三聚氰酸，首先比较上述三种试剂与三聚氰胺反应的灵敏度，按照方法要求2.0mg/L灵敏度。

取一定量的三聚氰胺标准品，加入0.1mL0.5wt％浓度的上述显示剂，涡旋混合器混匀，并移入酶标板，放置5min后用便携式比浊计进行测定来确定合适的显示剂。结果见表4和图4

表4三种显示剂与三聚氰胺反应结果

注：测定结果均以响应的显示剂进行空白校零

由表4、图4可知，以0.5wt％氯化汞+0.5wt％三聚氰酸(1∶1 V∶V)混合显示剂灵敏度最好。同样将0.5wt％氯化汞+0.5wt％三聚氰酸(1∶1 V∶V)混合显示剂配制包装形成显示剂D。4种检测需要的试剂组合成三聚氰胺检测试剂盒。实施例4：便携式浊度计的应用

由于方法采用的浊度法，显示剂与三聚氰胺形成的化合物可以通过肉眼目视定性半定量分析，联合便携式浊度计(见图5)。

4.1检测波长的选择

实验步骤如下：

1)取5mL鲜牛奶(样品空白)加入5mL 1wt％三氯乙酸和乙腈(1∶1 v∶v)(蛋白沉淀剂A)，混匀后用滤纸过滤，弃去前面10滴，收集后面4mL待用。

2)取300mg/6mL国产SCX+C8混合固相萃取柱，先用甲醇3mL、水3mL、50mmol/L盐酸溶液(淋洗试剂B)3mL润洗活化柱子，然后加上述3mL滤液过柱，先用3mL淋洗试剂B、3mL甲醇淋洗除杂，最后用3mL5％氨化甲醇(洗脱试剂C)洗脱，并用10mL锥形玻璃管收集，将收集的滤液在沸水浴中蒸干备用。

3)在上述蒸发残留物管中加0.2mL0.5wt％氯化汞+0.5wt％三聚氰酸(1∶1 V∶V)(显示剂D)，涡旋混合器混匀，并移入酶标板，放置5min后以0.2mL显示剂D作空白校零，用便携式比浊计分别在405nm、450nm、492nm、630nm下测定吸光度值。

在5mL鲜牛奶中添加25μg三聚氰胺，实验步骤同上，用便携式比浊计分别在405nm、450nm、492nm、630nm下测定吸光度值。测定结果见表5、图6。

表5不同波长下测定结果

波长(nm)	405	450	492	630
					样品空白吸光值A0	0.014	0.006	0.004	0.002
25μg三聚氰胺吸光值A	0.076	0.062	0.047	0.034
					A-A0	0.062	0.056	0.043	0.032

从表5、图6可知，在405nm、450nm下测定仪器灵敏度最高，另外考虑仪器的制备，采用450nm波长进行检测。

4.2检测标准曲线

在5mL鲜牛奶中分别添加0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、10.0、20.0、25μg三聚氰胺，实验步骤同上，用便携式比浊计在450nm测定吸光度值，制定标准曲线，结果见表6、图7。

表6不同含量三聚氰胺吸光值(扣除样品空白值)

按照标准曲线，方法三聚氰胺最低检出量为0.5μg，但考虑到样品回收、样品平均空白值(样品平均空白值为0.058)以及目视检测(3.0μg比较明显)，将方法检出限确定为2.0mg/L。

4.3三聚氰胺检测包

根据快速检测需要，将4种检测需要的试剂组合成三聚氰胺检测试剂盒，另外加上便携式浊度仪、固相萃取柱、简便式固相萃取装置以及试管组合成三聚氰胺检测包。

4.4原料奶及其加工后袋装纯牛奶测定结果分析

按照优化的方法，对液态奶进行空白、加标2.0mg/L进行测定。

实验步骤如下：

1)取5mL不含三聚氰胺的鲜牛奶(样品空白)或者5mL添加三聚氰胺至2.0mg/L的鲜牛奶(样品加标)分别加入5mL 1％三氯乙酸和乙腈(1∶1 v∶v)(蛋白沉淀剂A)，混匀后用滤纸过滤，弃去前面10滴，收集后面4mL待用。

2)取300mg/6mL SCX+C8混合固相萃取柱，先用甲醇3mL、水3mL、50mmol/L盐酸溶液(淋洗试剂B)3mL润洗活化柱子，然后加上述3mL滤液过柱，先用3mL淋洗试剂B、3mL甲醇淋洗除杂，最后用3mL5％氨化甲醇(洗脱试剂C)洗脱，并用10mL锥形玻璃管收集，将收集的滤液在沸水浴中蒸干备用。

3)在上述蒸发残留物管中加0.2mL0.5％氯化汞+0.5％三聚氰酸(1∶1 V∶V)(显示剂D)，涡旋混合器混匀，并移入酶标板，放置5min后目测定性或以0.2mL显示剂D作空白校零，用便携式比浊计分别在450nm测定吸光度值。

同时对国产(杭州福裕科技服务有限公司)和进口(德国Dr.E)的SCX+C8固相萃取柱进化效果进行比较，结果见表7-表10、图8-图11；

表7国产固相萃取柱对液态奶测定结果

	液态奶空白	液态奶加标2.0mg/L
			样品数(份)	46	39
平均吸光值	0.058	0.104
			最小值	0.029	0.069
最大值	0.085	0.144
			95％可信区间	0.054-0.062	0.097-0.109

注：t检验P＜0.001

表8进口固相萃取柱对液态奶测定结果

	液态奶空白	液态奶加标2.0mg/L
			样品数(份)	69	80
平均吸光值	0.054	0.094
			最小值	0.031	0.065
最大值	0.076	0.157
			95％可信区间	0.051-0.056	0.090-0.098

注：t检验P＜0.001

表9进口与国产固相萃取柱对液态奶空白测定结果

	国产	进口
			样品数(份)	46	69
平均吸光值	0.058	0.054
			最小值	0.029	0.031
最大值	0.085	0.076
			95％可信区间	0.054-0.062	0.051-0.056

注：t检验P＞0.05

表10进口与国产固相萃取柱对液态奶加标2.0mg/L测定结果

	国产	进口
			样品数(份)	39	80
平均吸光值	0.104	0.094
			最小值	0.069	0.065
最大值	0.144	0.157
			95％可信区间	0.097-0.109	0.090-0.098

注：t检验P＞0.05

由上述表7-表10、图10-图13可知，液态奶空白样品与加标2.0mg/L测定均有显著差异(p＜0.001)，进口与国产固相萃取柱对液态奶空白样品与加标2.0mg/L测定均无差异(p＞0.05)，用便携式比浊计测定读数大于0.060即判定液态奶中三聚氰胺阳性，含量可能大于2.0mg/L，同时结合目视方法进一步确定。

4.5液态奶测定结果目视分析

在上述优化条件的基础上，采用目视浊度法，对液态奶空白与加标2.0mg/L进行目视测定，测定样品150多份，结果吻合性为100％，因此确定本方法原料奶及其加工后袋装纯牛奶中三聚氰胺的检测限为2.0mg/L。

实施例5：实际样品检测

采用本发明研制的试剂盒通过目视比浊度法和浊度计法对市场购买的液态奶进行快速筛选，目视比浊度法测定三聚氰胺含量超过2.0mg/L，则为阳极，否则为阴性；浊度计法采用国产的SCX+C8固相萃取柱，检测步骤同实施例4的4.4；同时按照GB/T22388-2008方法用GC/MS测定液态奶中三聚氰胺含量，将两种方法进行结果对照，见表11：

表11本方法与GB/T22388-2008方法结果比较

由表11可知，通过上述样品结果比较，采用本发明的试剂盒，对于目视以及便携式比浊仪测定判断阴性的液态奶，采用GB/T22388-2008方法经过GC/MS测定液态奶中三聚氰胺含量均小于2.0mg/L，而目视以及便携式比浊仪测定判断阳性的液态奶，采用GB/T22388-2008方法经过GC/MS测定液态奶中三聚氰胺含量均大于2.0mg/L，可以说明本试剂盒方法与实际样品按照GB/T22388-2008测定结果具有较好的吻合性。

Claims (10)

1.一种三聚氰胺检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A选自下列之一：甲醇、乙腈、1wt％三氯乙酸水溶液、2wt％乙酸铅水溶液、1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶0.5～2混合得到的混合溶液、1wt％亚铁氰化钾水溶液与2wt％乙酸锌水溶液按照体积比1∶1混合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为30～60mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为3～6vol％氨化甲醇，所述的显示剂D选自下列之一：0.5wt％苦味酸水溶液、0.5wt％氯化汞水溶液、0.5wt％三聚氰酸水溶液、体积比为1∶0.5～1.2的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

2.如权利要求1所述的三聚氰胺检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A为1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为50mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为5vol％氨化甲醇；所述的显示剂D为体积比为1∶1的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

3.如权利要求1或2所述的三聚氰胺检测试剂盒在快速检测三聚氰胺中的应用，其特征在于所述的应用具体包括：以三聚氰胺含量为2.0mg/L的原料乳或者加工后纯牛奶为标准样品，以待测的原料乳或者加工后纯牛奶为样品，分别在相同条件下依次经步骤(1)～(3)处理后，利用化学浊度法判断待测的样品中三聚氰胺含量是否超过2.0mg/L：

(1)原料乳或者加工后纯牛奶中加入蛋白沉淀剂A，经过滤除去蛋白，得到滤液；所述原料乳或者加工后纯牛奶与蛋白沉淀剂A的投料体积比为1∶0.8～1.2；

(2)取SCX+C8固相萃取柱，活化后使步骤1)所得滤液过SCX+C8固相萃取柱，经过淋洗试剂B除杂净化，然后用洗脱试剂C进行洗脱，所得洗脱液蒸干；

(3)在步骤(2)得到的蒸干残留物中加入显示剂D，混匀后得到的显示后溶液吸入酶标板内。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的化学浊度法采用目视比浊度法和/或浊度计法，所述的目视比浊度法为：经步骤(3)处理后，如果样品所得溶液显示乳白色浑浊，则样品中三聚氰胺含量大于2.0mg/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的化学浊度法采用目视比浊度法和/或浊度计法，所述的浊度计法为：将步骤(3)所得溶液使用浊度计以与步骤(3)相同体积用量的显示剂D为空白测量浊度值，如果样品的浊度值大于标准样品的浊度值，则样品中三聚氰胺含量大于2.0mg/L。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于标准样品的浊度值采用多次测量进行确定。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的浊度计法采用单波长检测，在405nm或450nm的单波长条件下测定浊度值。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的SCX+C8固相萃取柱的规格为300mg/6mL、500/6mL或1000/6mL。

9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述显示剂D的加入量以蒸干残留物的质量计为2～5mL/g。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的步骤(1)～步骤(3)具体如下：

(1)取原料奶或者加工后袋装纯牛奶加入蛋白沉淀剂A，混匀后过滤，收集滤液待用；所述原料奶或者加工后袋装纯牛奶与蛋白沉淀剂A的投料体积比为1∶1；

(2)取SCX+C8混合固相萃取柱，先用甲醇2～3mL、水2～3mL、淋洗试剂B2～3mL润洗活化柱子，然后加上述2～3mL滤液过柱，先用2～3mL淋洗试剂B、2～3mL甲醇淋洗除杂，最后用2～3mL洗脱试剂C洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液在沸水浴中蒸干备用；所述的SCX+C8混合固相萃取柱的规格为300mg/6mL；

7(3)在上述蒸发残留物管中加显示剂D 0.1～0.5mL，涡旋混合器混匀，并移入酶标板。

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