CN101372506B - 一种纯化制备爱啡肽的新工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种纯化制备爱啡肽的新工艺。目前人们采用反相高压液相色谱法分离纯化生产爱啡肽。但不易实现大规模生产，设备昂贵。本发明是应用互不相溶的两溶剂体系在色谱柱管中作高速行星运动的方式下进行分离纯化，工艺步骤为：a、将人工合成的爱啡肽粗品用溶剂溶解；b、将溶解好的爱啡肽粗品经过高速离心分离色谱(FCPC)分离纯化，紫外检测器于230nm处监测，分段收集目的峰；c、将收集的馏分用HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步处理，纯度小于98％的馏分再次回收纯化；d、将纯度合格的馏分经过离子交换，去除三氟乙酸(TFA)，转换成醋酸爱啡肽。没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、快速高效和适合大规模生产的优点。

Description

一种纯化制备爱啡肽的新工艺

技术领域

本发明涉及医药化工领域，具体涉及一种应用高速离心分离色谱法(FCPC)制备高纯度爱啡肽的新工艺。

背景技术

爱啡肽(Eptifibatide)是一种含有巯基丙酰及六个氨基酸残基的环状多肽，分子式为C₃₂H₄₉N₁₁O₉S₂，是血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受体拮抗剂，可阻断由各种激活剂引起的血小板聚集反应，是已知最强的特异性血小板聚集抑制剂，主要用于防止心肌供氧动脉闭塞，心脏病发作，不稳定性心绞痛、无Q波心肌梗塞、冠脉介入治疗引起的猝死。

该多肽经过多步合成、氧化、裂解工序，带有大量的难溶性杂质，使得该产品粗品前处理非常的困难，人工合成粗品的溶解性非常差，制约了反相纯化时的上样量，合成的裂解工艺中使用了大量的TFA，在纯化中必须去除，在样品前处理时如果加入大量的有机溶剂，反相纯化多肽样品难于吸附上固定相，达不到分离的目的。

目前采用的纯化制备方法是用反相高压液相色谱法分离纯化得到的。该方法优点是简单、通用，适合于大多数的多肽纯化，但缺点是不容易实现大规模生产，且生产设备十分昂贵，投入非常的大。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种应用高速离心分离色谱法(FCPC)制备高纯度爱啡肽的新工艺，不需要固体填料，采用两相互不混溶的溶剂体系在色谱柱管中的接触，由于离心力的作用，其中一相停留在色谱柱内，成为固定相，另一相被泵到色谱柱中，称之为流动相。待分离的组分由于在两相里不同的分配系数K′，达到分离的目的。由于不使用类似反相HPLC的固体硅胶填料，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失，无污染，快速高效和适合大规模生产的优点。

本发明的实现方法是：在样品前处理时可加入多种的有机溶剂，其溶剂体系由A、B、C三个组分组成，A组分可以是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、石油醚；B组分可以为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮；C组分为水，体积比为2-4：1-3：2-6。经过一次分离，有70％的目标肽色谱纯度大于98％，剩下纯度不够的经再次回收纯化。

经过高速离心分离色谱法(FCPC)制备的爱啡肽以TFA盐的形式存在，还需要将其转换成醋酸，TFA在经过离子交换树脂时得以去除。其工艺步骤为：

a、将人工合成的爱啡肽粗品用选定的溶剂溶解；

b、将溶解好的爱啡肽粗品经过高速离心分离色谱(FCPC)分离纯化，紫外检测器于230nm处监测，分段收集目的峰；

c、将收集的馏分用HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步处理，纯度小于98％的馏分再次回收纯化；

d、将纯度合格的馏分经过离子交换，去除三氟乙酸(TFA)，转换成醋酸爱啡肽，达到药用级标准。

本发明的优点在于：

1、用高速离心分离色谱法(FCPC)分离纯化爱啡肽，由于没有使用小颗粒的反相硅胶填料，溶解样品可以加入有机溶剂，降低了样品前处理难度，更有利于工业化规模生产。

2、由于没有硅胶的吸附，减少了样品的损失及被污染的几率。

3、应用离子交换树脂去除TFA的同时转换成了醋酸盐，方便，快捷，TFA的残留低于0.25％。

具体实施方式

下面以实例对本发明做进一步详细说明：

实施例一：

采用Pi1ot-Scale制备型高速离心分离色谱仪(FCPC)，溶剂选用二氯甲烷-乙腈-水体系制备爱啡肽。首先以2：1：3的体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。将上下层分开，取上相为固定相，下相为流动相。取爱啡肽粗品100克，溶解在1升上述混合体系中，用0.45um的有机相滤膜过滤，待纯化。采用法国Kromaton制备型高速离心分离色谱仪，转子体积5升，先用固定相充满整个柱子，调节主机转速到1000rpm，以150ml的流速将流动相泵入柱内。待整个体系平衡后，通过泵将溶解好的样品注入色谱柱内，然后根据检测器紫外谱图分段接收目标成分。收集馏分经过HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步处理，纯度小于98％的馏分需要再次回收处理。

将纯度合格的爱啡肽馏分用醋酸调节pH为4-5，经过离子交换柱处理，TFA的残留量可以控制在0.25％以下。将经过离子交换层析的爱啡肽溶液减压浓缩，冷冻干燥，得到合格的爱啡肽产品。

实施例二：

采用Pilot-Scale制备型高速离心分离色谱仪(FCPC)，溶剂选用乙酸乙酯-乙腈-水(3：1：3)体系制备爱啡肽。上样量为150克，方法同实施例一。

实施例三：

采用Pilot-Scale制备型高速离心分离色谱仪(FCPC)，溶剂选用乙酸乙酯-甲醇-水(3：1：3)体系制备爱啡肽。上样量为150克，方法同实施例一。

Claims (1)

1.一种纯化制备爱啡肽的新工艺，其特征在于它包括以下步骤：

A、将人工合成的爱啡肽粗品用选定的A、B、C三个组分的溶剂溶解；其中A是二氯甲烷，B是乙腈，C是水，A∶B∶C的体积比为2∶1∶3；或A是乙酸乙酯，B是乙腈，C是水，A∶B∶C的体积比为3∶1∶3；或A是乙酸乙酯，B是甲醇，C是水，A∶B∶C的体积比为3∶1∶3；

B 、将溶解好的爱啡肽粗品经过高速离心分离色谱(Fast Centrifugal Partition Chromatograph，即：FCPC)分离纯化，紫外检测器于230nm处监测，分段收集目的峰；

C、将收集的馏分用HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步处理，纯度小于98％的馏分再次回收纯化；

D、将纯度合格的馏分经过离子交换，去除三氟乙酸(TFA)，转换成醋酸爱啡肽，达到药用级标准。