CN101371921A - 一种速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂组合物、制备方法及其用途 - Google Patents
一种速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂组合物、制备方法及其用途 Download PDFInfo
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Landscapes
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Abstract
本发明提供了一种速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂组合物、制备方法及其用途，所述组合物包括按mg/ml计的、各组分浓度为纤维蛋白原35～70、柠檬酸钠9～15、氯化钠7～12、聚山梨酯－80 0.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和谷氨酸3.5～5.5的纤维蛋白原冻干粉和纤维蛋白原溶解液的组合物1和各组分浓度为凝血酶700～1200单位/ml、右旋糖酐203～6、甘氨酸15～25、氯化钠5～7和氯化钙4～7的组合物2。本发明的封闭剂避免了艾滋病病毒等传播的危险；增加药物稳定性、减少干热法灭活病毒过程中变性作用；保护生物活性、避免使用部位的高渗引起的局部蓄液及大量无机盐对组织的刺激性，有利于创伤部位的愈合；最大限度保证产品的安全性、独立包装，不仅增长贮存时间，而且使用方便，满足临床和野外急救的需要。
Description
技术领域
本发明涉及一种冻干纤维蛋白原制剂和凝血酶制剂，具体讲涉及一种纤维蛋白原制剂和凝血酶制剂组合物、制备方法和其用途。
背景技术
纤维蛋白原即凝血因子I，是血浆蛋白的主要成份之一，分子量约为34万，纤维蛋白原在凝血酶的作用下可形成纤维蛋白，进而与血小板等一起形成稳固的纤维蛋白血栓，因而在临床上与凝血酶一起用于急救止血、创口粘合。凝血酶即凝血因子II，是一种快速止血药，直接作用于凝血过程中的最后步骤，在钙离子与凝血因子XIII的共同作用下，最终使纤维蛋白原转变为稳定的纤维蛋白网发挥止血功效。因此纤维蛋白原和凝血酶组合物具有其它止血药无法比拟的止血速度和作用强度。
凝血酶的止血速度，仅需3～5秒钟。纤维蛋白原和凝血酶组合物已被广泛应用于外科手术过程中，使手术创面愈合时间缩短，感染发生率降低。用于血管和神经的显微吻合手术，可以减少甚至完全不用缝合，使手术时间缩短，而且更安全，是一种理想的止血材料。
纤维蛋白原离开机体后在液态时易失活，保存时间短。所以为了延长保存时间，将其制成冻干制剂，使用时用注射用水复溶。但纯度较高的冻干纤维蛋白原很难在室温下溶解，即使在较低浓度1～2％也需在30～37℃下才能彻底溶解，且溶解时间长达20～30分钟，不适应临床手术和急救的需要。本制备工艺采用氨基酸缓冲液快速溶解纤维蛋白原，满足了临床需要。
纤维蛋白原和凝血酶在临床上应用的另一个问题是安全问题。采用人血为原料，若病毒灭活不彻底，就可能引起艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等病毒的传染。若采用猪血或牛血为原料，虽然能够避免以上问题，但由于动物疫情的出现，仍需要彻底灭活病毒。目前用于血液制品大规模生产的病毒灭活方法主要用S/D法和干热法两次灭活。S/D法能破坏脂包膜病毒的外膜结构，因而可有效灭活乙脑等人畜共患脂包膜病毒。由于S/D法灭活病毒时条件比较温和，对纤维蛋白原和凝血酶的结构和活性几无破坏作用，但是S/D法不能灭活非脂包膜病毒。干热处理能有效灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒如乙脑病毒、戊肝病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒等人畜共患病毒。干热灭活可作为纤维蛋白原和凝血酶分装、冻干、真空密封等生产程序的最后一步，不仅可以避免制品的再污染，而且成本低，投资少，便于大规模生产。但干热灭活法会引起纤维蛋白原变性，加入甘露醇可减少干热对纤维蛋白原的变性作用。
ZL98802175.7号专利公开了一种含纤维蛋白原、氨甲环酸和精氨酸或赖氨酸或精氨酸与赖氨酸的混合物，其中氨甲环酸的量为1～20％，精氨酸或赖氨酸的量为0.1～4％。此专利通过添加了氨基酸作为稳定剂，可以减少干热对纤维蛋白的变形作用，但是此发明披露的技术方案中纤维蛋白原和稳定剂组成的制剂仍为液态，所以存在储存时间较短，稳定性较差和生物活性降低的缺点。
ZL03142013.3号专利公开了一种由纤维蛋白原和稳定剂组成的冻干纤维蛋白原制剂，由纤维蛋白原和稳定剂组成，稳定剂由L-精氨酸或L-精氨酸盐类和山梨醇组成，其中纤维蛋白原的浓度为0.5～15％，L-精氨酸或其盐0.1～10％，山梨醇0.1～10％。此专利通过添加稳定剂，缩短了溶解时间，但此专利的不足为：将纤维蛋白原与氨基酸一起制成冻干粉，使用时用注射用水复溶，复溶速度仍然较慢，且在使用过程中量取注射用水复溶，操作不够简单快捷。
发明内容
本发明的目的是提供一种速溶、使用方便、储存时间长、耐干热法处理的冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂的组合物。
本发明提供的冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂包括：含纤维蛋白原冻干粉和纤维蛋白原冻干粉溶解液的组合物1，和含凝血酶冻干粉和凝血酶冻干粉溶解液的组合物2。
本发明分别将纤维蛋白原和凝血酶制成冻干粉，使用时用纤维蛋白原溶解液溶解纤维蛋白原冻干粉，用凝血酶溶解液溶解凝血酶冻干粉，再将溶解后的纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液配合使用。由于纤维蛋白原由α、β、γ三组不同的多肽链所构成，根据相似相容的化学原理，易溶于具有一定离子强度的氨基酸缓冲溶液中。由于缓冲液中的酸基与纤维蛋白原分子中碱性残基的结合成盐反应，缓冲液中的碱基与纤维蛋白原分子酸性残基的结合成盐反应，这些成盐反应加快了纤维蛋白原的溶解，所以纤维蛋白原在氨基酸的缓冲溶液中溶解速度加快。
本发明提供的将纤维蛋白原制成冻干粉的技术方案，解决了纤维蛋白原液态条件下保存时间不长的缺点，同时配制一定浓度的氨基酸缓冲液做为纤维蛋白原溶解液，纤维蛋白原冻干粉可以迅速大量溶解，解决了纤维蛋白原冻干粉在使用时溶解时间长、有效浓度低等缺点，适应了临床的需要。在纤维蛋白原中加入聚山梨酯-80和甘露醇作为稳定剂，使纤维蛋白原冻干粉可以耐干热处理，保护了生物活性。本发明的纤维蛋白原和凝血酶制剂组合物通过S/D法和干热法处理，确保灭活脂包膜和非脂包膜病毒。
本发明采用技术方案为:
一种速溶的冻干纤维蛋白封闭剂组合物包括：
组合物1，所述组合物1含纤维蛋白原冻干粉和纤维蛋白原溶解液；所述纤维蛋白原冻干粉含纤维蛋白原、柠檬酸钠、氯化钠、聚山梨酯-80和甘露醇；所述纤维蛋白原溶解液含精氨酸和谷氨酸；
组合物2，所述的组合物2含凝血酶冻干粉和凝血酶溶解液；所述的凝血酶冻干粉含凝血酶、右旋糖酐20和甘氨酸；所述的凝血酶溶解液含氯化钠和氯化钙；
另有说明除外，本发明中酶浓度用单位/ml表示，其它浓度用mg/ml表示，组合物1中各物质浓度为：维蛋白原35～70、柠檬酸钠9～15、氯化钠7～12、聚山纤梨酯-80 0.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和谷氨酸3.5～5.5；
组合物2中各物质浓度为：
凝血酶700～1200、右旋糖酐20 3～6、甘氨酸15～25、氯化钠5～7和氯化钙4～7。
本发明提供的优选方案为：
组合物1中各组分的浓度为：纤维蛋白原45～70、柠檬酸钠10～12.5、氯化钠8～10、聚山梨酯-80 0.4～0.6、甘露醇10～12、精氨酸5～7和谷氨酸4～5；
组合物2中各组分的浓度为；
凝血酶800～1150、右旋糖酐20 3～6、甘氨酸15～25、氯化钠6～7和氯化钙5～6。
本发明提供的再一优选方案为：
组合物1中各成分的浓度为：纤维蛋白原50、柠檬酸钠12、氯化钠9、聚山梨酯-80 0.5、甘露醇12、精氨酸6和谷氨酸4.8；
组合物2中各成分的浓度为：凝血酶1000、右旋糖酐20 4.5、甘氨酸25、氯化钠6和氯化钙5.5。
本发明提供的组合物的使用方法是：在临床应用时，将组合物1和2注入双筒推液器，再施于手术创面，使用方便快捷。
本发明采取的组合物1、2的制备步骤如下：
(1)组合物1中的纤维蛋白原冻干粉的制备方法：
①猪全血每1ml加入抗凝剂柠檬酸钠3.8mg，3500r/min低温2～5℃离心30分钟，分离血浆，0.2μm微孔滤膜除菌过滤得滤液；
②溶液降温至-2℃时，加入预冷至-20℃乙醇至终浓度为8％，低温沉淀，得蛋白沉淀物；
③取上述纤维蛋白原沉淀1克，加入每毫升含柠檬酸钠30mg和氯化钠9mg的溶液2ml，使其完全溶解，每1ml加入聚山梨酯-80 10mg、磷酸三丁酯3mg，用1％氢氧化钠溶液调至pH 7.0；
④24～28℃搅拌8小时灭活脂包膜病毒；
⑤溶液降温至-2℃时，加入预冷至-20℃乙醇至终浓度为8％，低温沉淀，将蛋白沉淀每克用每毫升含9mg氯化钠和柠檬酸钠12mg溶液1ml溶解后，加入聚山梨酯-80 0.2mg和甘露醇12mg；
⑥0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装、-70℃冷冻1-10pa干燥；
⑦将制得的纤维蛋白原于95～105℃干热灭活30分钟。
(2)组合物1中的纤维蛋白原溶解液的制备方法
①取精氨酸按6mg用无热原蒸馏水1ml溶解；
②再加入谷氨酸4.8mg搅拌溶解，控制谷氨酸加入量使pH值至7.4～7.8，；
③0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装；
④将所制得的纤维蛋白原溶解液于95～105℃干热灭活30分钟；
组合物1中各组分浓度为纤维蛋白原35～70、柠檬酸钠9～15、氯化钠7～12、聚山梨酯-80 0.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和谷氨酸3.5～5.5。
(3)组合物2中的凝血酶冻干粉的制备方法：
①在每ml猪全血中加入草酸钠13.4g，离心分离出抗凝猪血浆；
②按1ml血浆加入硫酸钡0.1g吸附猪凝血酶原，洗涤沉淀；
③按每1g沉淀用1ml的0.3mg/ml柠檬酸钠溶液洗脱凝血酶原，每毫升加入组织凝血活酶5mg和氯化钙3mg激活，离心去沉淀；
④每ml加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg；
⑤24—28℃搅拌8小时S/D灭活病毒，超滤洗涤纯化，浓缩后得凝血酶溶液；
⑥在上述凝血酶溶液中按每ml加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2μm微孔滤膜除菌过滤，-70℃冷冻1-10pa干燥，；
⑦对制得的凝血酶冻干粉95～105℃下干热灭活30分钟；
(4)组合物2中的凝血酶溶解液的制备：
①称取氯化钠、氯化钙，用无热原蒸馏水溶解；用NaOH和HCl控制pH5.8～6.3；
②0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装；
③将分装后凝血酶溶解液于95～105℃干热灭活30分钟。
本发明提供的组合物具有以下有益效果：
1.本发明采用了猪血作为原料，避免了艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)传播的危险；由于采用了S/D和干热灭活病毒工艺，同时也避免了乙脑病毒、戊肝病毒、伪狂犬等人畜共患病毒感染的危险。
2.本发明将纤维蛋白原和凝血酶制成冻干粉，比液态制品保存时间增长，药物的稳定性增加。
3.本发明在纤维蛋白原冻干粉中加入了特定浓度的甘露醇和聚山梨酯-80作为稳定剂，在凝血酶冻干粉中加入了特定浓度的右旋糖酐20和甘氨酸作为稳定剂，从而使得纤维蛋白原和凝血酶稳定性增强，减少了干热法灭活病毒过程中变性作用，保护了生物活性。
4.本发明中的纤维蛋白原溶解液为特定浓度的氨基酸缓冲液，根据相似相容的化学原理，纤维蛋白原冻干粉可以在室温下迅速溶解于氨基酸缓冲液，与无机盐及其缓冲液作为溶解液相比较，溶解速度快，避免了使用部位的高渗引起的局部蓄液以及大量无机盐对组织的刺激性，并且有利于创伤部位的愈合。
5.本发明采用S/D灭活病毒法和干热灭活病毒法同时使用，从而最大限度保证了产品的安全性。
6.本发明采用的冻干粉和溶解液分别配制，独立包装，不仅使贮存时间增长，而且使用方便，满足临床和野外急救的需要。
具体实施方式
下面对本发明所述制备方法做进一步的描述，但不限制本发明。
实施例1
(1)组合物1中的纤维蛋白原的制备方法：
1.猪全血每ml中加入抗凝剂柠檬酸钠3.8mg，4℃下、以3500r/min低温离心30分钟，分离血浆，0.2μm微孔滤膜除菌过滤得滤液；
2.对所得滤液降温至-5℃时，加入预冷-20℃乙醇至8％浓度，3500r/min离心得到富含纤维蛋白原的沉淀；
3.所得纤维蛋白沉淀按每mg加入含柠檬酸钠12mg和氯化钠9mg的溶液2ml，使其完全溶解，每ml加入聚山梨酯-8010mg，磷酸三丁酯3mg，用1％NAOH溶液调至pH值为7.0；
4.24℃搅拌8小时灭活脂包膜病毒；
5.降温至-2℃时，加入预冷至-20℃的乙醇至终浓度8％低温乙醇沉淀，将纤维蛋白沉淀用含氯化钠9mg和柠檬酸钠6mg溶液2ml溶解，加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg；
6.0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装、-70℃冷冻1—10pa真空干燥；
7.对分装冻干后的纤维蛋白原于95℃干热灭活30分钟。
(2)组合物1的纤维蛋白原溶解液的制备
1.取精氨酸5mg用无热原蒸馏水1ml溶解；
2.再加入谷氨酸4mg搅拌溶解，控制pH值至7.4，
3.0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装；
4.对分装后的纤维蛋白原溶解液于95℃干热灭活30分钟。
(3)组合物2的凝血酶冻干粉的制备：
1.在猪全血1ml中加入草酸钠13.5mg，以3500r/min低温离心30分钟，分离出抗凝猪血浆；
2.按1ml血浆加入硫酸钡0.1g吸附猪凝血酶原，使用纯化水洗涤沉淀；
3.按每1g沉淀用1ml的0.3mg/ml柠檬酸钠溶液洗脱凝血酶原，每毫升加入组织凝血活酶5mg和氯化钙3mg激活，将凝血酶原激活成为凝血酶，离心去沉淀，用截流分子量10万虑膜超滤去除大分子蛋白质。
4.每ml溶液中加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg；于24℃搅拌8小时S/D灭活病毒；
5.用截流分子量2万虑膜超滤去出小分子物质，浓缩得凝血酶溶液；
6.在上述每ml凝血酶溶液中加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2μm微孔除菌过滤，-70℃冷冻1pa干燥；
7.对分装后的凝血酶冻干粉95℃干热灭活30分钟。
(4)组合物2的凝血酶溶解液的制备：
1.称取氯化钠6mg、氯化钙55mg，用无热原蒸馏水1ml溶解，使溶液终浓度为：氯化钠5mg/ml、氯化钙4mg/ml；0.2μm微孔滤膜除菌，过滤，分装；
2.将分装后的凝血酶溶解液于95℃干热灭活30分钟。
实施例2
(1)组合物1中的纤维蛋白原的制备：
1.猪全血1ml中加入抗凝剂柠檬酸钠3.8mg，8℃下、以3500r/min低温离心30分钟，分离血浆，0.2μm微孔滤膜除菌过滤得滤液；
2.对所得滤液降温至-5℃时，加入预冷至-20℃乙醇至终浓度8％，低温乙醇沉淀，3500r/min离心得到富含纤维蛋白原的沉淀；
3.所得纤维蛋白原沉淀按每mg加入含柠檬酸钠12mg和氯化钠9mg溶液2ml，使其完全溶解，每ml加入聚山梨酯-80 10mg和磷酸三丁酯3mg，用1％氢氧化钠溶液pH值为7.0；
4.24～28℃搅拌8小时灭活脂包膜病毒，
5.降温至-2℃时，加入预冷至-20℃的乙醇至终浓度8％，低温乙醇沉淀，将纤维蛋白沉淀1g用含氯化钠9mg和柠檬酸钠6mg溶液1ml溶解后，每ml加入聚山梨酯-80 0.2mg和甘露醇12mg；
6.0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装、-70℃冷冻10pa干燥，
7.对分装冻干后的纤维蛋白原于105℃干热灭活30分钟。
(2)组合物1中纤维蛋白原溶解液的制备
1.取精氨酸7mg按用无热原蒸馏水1ml溶解，
2.再加入谷氨酸5mg搅拌溶解，控制pH值至7.8，
3.0.2μm微孔滤膜除菌过滤、分装，
4.对分装后的纤维蛋白原溶解液于105℃干热灭活30分钟。
(3)组合物2中的凝血酶冻干粉的制备：
1.猪全血1ml中加入草酸钠13.5mg，分离出抗凝猪血浆；
2.按1ml血浆加入硫酸钡0.1g吸附猪凝血酶原，使用纯化水洗涤凝血酶原沉淀；
3.按每1g沉淀用1ml的0.3mg/ml柠檬酸钠溶液洗脱凝血酶原，每毫升加入组织凝血活酶5mg和氯化钙3mg激活，将凝血酶原激活成为凝血酶，离心去沉淀，用截流分子量10万虑膜超滤去除大分子蛋白质；
4.每ml溶液中加入聚山梨酯-80 10mg和磷酸三丁酯3mg；于24℃搅拌8小时S/D灭活病毒；
5.用截流分子量2万虑膜超滤去出小分子物质，浓缩得凝血酶溶液；
6.在上述含凝血酶1200单位酶溶液中，加入右旋糖酐20 6mg和甘氨酸25mg，除菌过滤，-70℃冷冻，10pa干燥，
7.对分装后的凝血酶冻干粉105℃干热灭活30分钟。
(4)组合物2中的凝血酶溶解液的制备：
1.称取氯化钠6mg、氯化钙55mg，用无热原蒸馏水1ml溶解，使溶液终浓度为：氯化钠5mg、氯化钙4mg，pH6.3，0.2μm微孔滤膜除菌，过滤，分装；
2.将分装后的凝血酶溶解液于105℃干热灭活30分钟
实施例3：纤维蛋白原溶解液比较试验
将实施例2中制备的纤维蛋白原用以下溶剂系统溶解，观察纤维蛋白原的溶解时间，实验条件统一控制为37℃。
| 编号 | 溶剂系统 | pH值 | 溶解时间(分钟) | 60天溶质性状 | 60天凝固活力 |
| 1 | 蒸馏水 | 6.8 | 10min | 沉淀 | —— |
| 2 | 生理盐水9mg/ml | 6.8 | 8min | 絮状沉淀 | —— |
| 3 | 生理盐水-NaOH9mg/ml | 7.5 | 11min | 絮状沉淀 | —— |
| 4 | NaOH-HCl 2mg/ml | 7.5 | 7min 30second | 絮状沉淀 | —— |
| 5 | NaOH-HCl 6mg/ml | 7.5 | 7min | 絮状沉淀 | —— |
| 6 | NaOH-HCl 12mg/ml | 7.5 | 7min | 絮状沉淀 | —— |
| 7 | 精氨酸-醋酸8mg/ml | 7.5 | 6min | 微浑浊 | 56sec. |
| 8 | 精氨酸-醋酸24mg/ml | 7.5 | 7min | 微浑浊 | 50sec. |
| 9 | 精氨酸-醋酸48mg/ml | 7.5 | 8min | 微浑浊 | 63sec. |
| 10 | 精氨酸-谷氨酸9mg/ml | 7.5 | 4min | 澄清 | 30sec. |
| 11 | 精氨酸-谷氨酸27mg/ml | 7.5 | 5min | 澄清 | 26sec. |
| 12 | 精氨酸-谷氨酸54mg/ml | 7.5 | 11min | 澄清 | 27sec. |
观察结果：氨基酸缓冲液溶解速度较快，而且溶液性质稳定，在室温放置60天保持纤维蛋白原凝固活力基本不变。
(1)NaOH-HCl溶剂、精氨酸-醋酸缓冲液和精氨酸-谷氨酸缓冲液的溶解速度较快，且溶液澄明。
(2)NaOH-HCl溶剂离子浓度增大时，溶解时间不变。
(3)精氨酸-醋酸缓冲液和精氨酸-谷氨酸缓冲液随离子浓度增大，溶解时间延长。
(4)精氨酸-醋酸缓冲液不稳定，高温高压放置后易形成氨基酸-醋酸盐结晶。
结论：在本实验所选用的溶解液系统中，NaOH-HCl溶解液由于晶体渗透压的特性，易形成机体组织局部高渗积液的现象；精氨酸-醋酸溶解液由于易形成精氨酸-醋酸盐结晶；而本发明提供的技术方案中，精氨酸-谷氨酸缓冲液为纤维蛋白原的缓冲系统具有溶解速度快，溶液性质稳定，在20～25℃放置60天，溶液澄清，纤维蛋白原的凝固活力保持不变。
实施例4
将实施例1中组合物1中的纤维蛋白原的制备方法中第4步S/D法处理后的纤维蛋白原用以下溶液溶解后制成冻干品，
| 编号 | 稳定剂配方 |
| 1 | 柠檬酸钠3mg/ml、L-精氨酸盐酸盐25mg/ml、L-亮氨酸8mg/ml、山梨醇25mg/ml |
| 2 | 柠檬酸钠9mg/ml，氯化钠7mg/ml，聚山梨酯-800.3mg/ml，甘氨酸15mg/ml， |
| 3 | 柠檬酸钠12mg/ml，氯化钠9mg/ml，聚山梨酯-800.25mg/ml，甘露醇12mg/ml |
置100℃水浴加热30分钟后，1号使用注射用水复溶，2和3号使用含精氨酸5mg/ml，谷氨酸4mg/ml的溶解液复溶，观察复溶时间、外观、凝固活力，结果见表2：
| 编号 | 复溶时间(min) | 溶液外观 | 凝固活力(s) |
| 1 | 5 | 微黄 | 25 |
| 2 | 4.5 | 轻微乳光 | 23 |
| 3 | 4 | 轻微乳光 | 20 |
上述结果显示：使用亮氨酸和山梨醇为稳定剂的效果没有使用聚山梨酯-80和甘露醇的效果好。
Claims (7)
1.一种速溶冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：所述组合物包括：
组合物1和组合物2；
组合物1包括纤维蛋白原冻干粉和纤维蛋白原溶解液，
组合物2包括凝血酶冻干粉和凝血酶溶解液；按mg/ml计：
组合物1的浓度为：纤维蛋白原35～70、柠檬酸钠9～15、氯化钠7～12、聚山梨酯-80 0.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和谷氨酸3.5～5.5；
组合物2的浓度为：凝血酶700～1200单位/ml，右旋糖酐203～6，甘氨酸15～25、氯化钠5～7和氯化钙4～7。
2.一种如权利要求1所述的速溶的冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：
组合物1的浓度为：纤维蛋白原45～70、柠檬酸钠10～12.5、氯化钠8～10、聚山梨酯-80 0.4～0.6、甘露醇10～12、精氨酸5～7和谷氨酸4～5；
组合物2的浓度为：凝血酶800～1150单位/ml、右旋糖酐203～6、甘氨酸15～25、氯化钠6～7和氯化钙5～6。
3.一种如权利要求1或2所述的速溶的冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：
组合物1的浓度为：纤维蛋白原50，柠檬酸钠12，氯化钠9，聚山梨酯-800.5，甘露醇12、精氨酸6和谷氨酸4.8；
组合物2的浓度为：凝血酶1000单位/ml，右旋糖酐204.5，甘氨酸25、氯化钠6和氯化钙5.5。
4.一种如权利要求3所述的速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶封闭剂组合物，其特征在于：
组合物1的pH值为7.4～7.8。
5.一种如权利要求3所述的速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶封闭剂组合物，其特征在于：
组合物2的pH值为5.8～6.3。
6.上述任一权利要求所说的冻干纤维蛋白原和凝血酶封闭剂的制备方法，其特征在于：
所说组合物1和组合物2的制备方法如下：
(1)组合物1中纤维蛋白原冻干粉的制备方法：
①每ml猪全血中加入抗凝剂柠檬酸钠3.8mg，以3500转/分、0～4℃低温离心30分钟，0.2μm微孔滤膜过滤得滤液；
②所得滤液降温至-2℃，加入预冷至-20℃的低温乙醇分步分离得纤维蛋白原沉淀物；
③按每g所得纤维蛋白原沉淀加入每毫升含柠檬酸钠12mg和氯化钠9mg的溶解液2ml，使其完全溶解，加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg，用1％NaOH调至pH7.0；
④24～28℃下搅拌8小时灭活脂包膜病毒；
⑤降温至-2℃，加入预冷至-20℃的低温乙醇分离沉淀，将纤维蛋白原按每g沉淀用每毫升含氯化钠9mg和柠檬酸钠6mg的溶解液2ml溶解，加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg；
⑥0.2μm微孔滤膜除菌过滤、-70℃冷冻、1-10pa真空干燥；
⑦对所得冻干后的纤维蛋白原于95～105℃干热灭活30分钟；
(2)组合物1的纤维蛋白原溶解液的制备
①取精氨酸5mg用无热原蒸馏水1ml溶解；
②再加入谷氨酸4mg搅拌溶解，溶液应为pH7.4～7.8；
③0.2μm微孔滤膜除菌过滤；
④对所制得的纤维蛋白原溶解液于95～105℃干热灭活30分钟；
(3)组合物2的凝血酶冻干粉的制备
①按1ml猪全血中加入草酸钠13.4mg的比例加入草酸钠，3500r/min离心30min分离出抗凝猪血浆；
②按每ml所得血浆加入硫酸钡0.1g的比例加入硫酸钡吸附凝血酶原，使用纯化水洗涤沉淀；
③每1g沉淀用1ml的0.3mg/ml柠檬酸钠溶液洗脱，每毫升洗脱液加入组织凝血活酶5mg和氯化钙3mg，将凝血酶原激活成为凝血酶，离心去沉淀；截留分子量10万超滤去除大分子蛋白
④在每ml溶液中加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg；
⑤于24～28℃搅拌8小时S/D灭活病毒，截留分子量2万超滤洗涤纯化，浓缩得凝血酶溶液；
⑥在上述每ml凝血酶溶液中加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2μm微孔除菌过滤，-70℃冷冻1-10pa真空干燥；
⑦将冻干后的凝血酶于95～105℃干热灭活30分钟；
(4)组合物2的凝血酶溶解液的制备：
①取氯化钠6mg，氯化钙55mg，用无热原蒸馏水1ml溶解，除菌过滤，分装；
②将分装后凝血酶溶解液于95～105℃干热灭活30分。
7.一种如权利要求1所述的冻干纤维蛋白原和凝血酶封闭剂组合物的使用方法，其特征在于：将组合物1和组合物2注入双筒推液器，喷洒或滴注于手术创面。
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