CN101370820A - 用于抑制细胞凋亡的化合物 - Google Patents

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A·梅塞古尔佩波克
A·莫尔弗南德茨
G·桑克里门斯佩雷茨德罗扎
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Abstract

本发明涉及起细胞凋亡抑制剂作用的式(I)化合物以及基于式(I)化合物的药物结合物，以及它们的制备方法和含有它们的药物组合物和其在医学中的用途。

Description

用于抑制细胞凋亡的化合物
本发明涉及起细胞凋亡抑制剂作用的化合物，以及它们的制备方法和含有它们的药物组合物和其在医学中的用途。
背景技术
因细胞凋亡在多种生物系统包括正常细胞更新、免疫系统和胚胎发育中的重要作用和其与不同疾病有联系，其为令人感兴趣的生物学过程。不适当的细胞凋亡涉及很多人类病理学，包括神经变性性疾病，例如阿尔茨海默病和亨廷顿舞蹈病、局部缺血、自身免疫性疾病和多种癌症(Reed J.C.，Trends Mol.Med.2001，7：314-319)。
多种凋亡刺激物，包括细胞表面死亡受体的激活、抗癌药物、辐射、缺乏存活因子和局部缺血(在Strasser A.等，Annu.Rev.Biochem.2000，69：217-245中综述)，诱导信号级联放大，它们都激活被称作胱天蛋白酶的半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶家族。这些蛋白酶执行凋亡过程。
某些凋亡信号激活用胱天蛋白酶-9作为其起始子的线粒体介导的途径或固有的途径。称作凋亡体的大分子复合物的形成是该途径的关键事件。
凋亡体是全酶多蛋白复合物，其由细胞色素c激活的Apaf-1(凋亡蛋白酶的激活因子)、dATP和胱天蛋白酶原-9(Li P.等，Cell 1997，91：479-489；Acehan D等，Mol.Cell 2002，9：423-432；Rodriguez J.等，Genes Dev.1999，13：3179-3184；Srinivasula S.M.等，Mol.Cell 1998，1：949-957)形成。在该大分子复合物中，与胱天蛋白酶-9相关的凋亡体被激活，然后继而激活效应物胱天蛋白酶。为了鉴别能改善与疾病相关的细胞凋亡的分子，药物研发的最初目标为胱天蛋白酶的活性，并由此寻找特异性酶激活剂或抑制剂(Scott C.W.等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2003，304：433-440；Garcia-Calvo M，J.Biol.Chem.1998，273：32608-32613)，而不是上游激活级联/途径中的调节子。
然而，胱天蛋白酶活化上游蛋白质-蛋白质的相互作用也是干涉细胞凋亡途径调节子发展的相关点。具体而言，最近的资料提议，将凋亡体的形成作为凋亡调节子进展的感兴趣的目标。
因此，存在发现抑制凋亡体介导的激活细胞凋亡的分子的重要性。
发明说明
本发明的一方面涉及提供通式I的新化合物、其立体异构体和其混合物、其多晶型和其混合物和其药学上可接受的溶剂化物和加成盐，
其中：
R1代表(C1-C5)烷基、(C2-C5)烯基、-(CH2)1-3-NHCO-(C1-C3)烷基、-(CH2)1-3-CONRaRb、-(CH2)0-3-(3-6)Cy、-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)2-CH(苯基)2、-(CH2)2-CH(苯基)[(5-6)Hetar]或-(CH2)2-CH[(5-6)Hetar]2；
R2代表-(CH2)0-3-(3-6)Cy、-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)2-CH(苯基)2、-(CH2)2-CH(苯基)[(5-6)Hetar]或-(CH2)2-CH[(5-6)Hetar]2；
R3代表-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)或-(CH2)1-3-(5-6)Hetar；
(C1-C5)烷基和-(C2-C5)烯基可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：-O-(C1-C2)烷基、-S-(C1-C2)烷基、-NH2、-NH-(C1-C2)烷基和-N[(C1-C2)烷基]2；
(C1-C3)烷基可任选被一个或多个卤素原子取代；
Ra和Rb独立代表-H或-(C1-C3)烷基；
(3-6)Cy代表3-6元的部分不饱和或饱和碳环基团；
(5-6)Hetcy代表C-或N-基团的5或6元环，其为含有一个或两个独立选自O、S和N的杂原子的部分不饱和或饱和碳环；
Cy和Hetcy可任选被一个或多个选自卤素、-CF3和-OH的取代基取代；
(5-6)Hetar和(5-10)Hetar分别代表C-或N-基团的芳族5元或6元和5-10元环；其含有1-4个独立选自O、S和N的杂原子；
苯基、1-萘基、2-萘基、(5-6)Hetar和(5-10)Hetar可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-CF3、-OH、-O-(C1-C3)烷基、-CO-(C1-C3)烷基、-(C1-C5)烷基-NRaRb、-NRaRb和-SO2NH2；
附带条件为R2不代表2-(4-氟苯基)乙基。
本发明另一方面涉及一种化合物，所述化合物为包含与聚谷氨酸聚合物结合的式II基团、其立体异构体和其混合物和其药学上可接受的溶剂化物和加成盐的药物结合物，
Figure A200680051639D00081
其中R1、R2和R3具有如式I的化合物所定义的含义，但对R2没有附带条件；每一R4独立代表得自20种天然存在的氨基酸的任一种的侧链，n为0、1、2或3。
因此，式II化合物包含不同部分：与n个L-氨基酸的肽链形成酰胺键的式I基团，和酰胺型L-赖氨酸衍生物，其中其侧链上的N与聚谷氨酸聚合物连接。
在前述定义中，术语(C1-C3)烷基和(C1-C5)烷基分别代表含有1-3个和1-5个碳原子的直链或支链饱和烃链。(C1-C3)烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基。(C1-C5)烷基的实例另外包括但不限于丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基和2，2-二甲基丙基。
术语(C2-C5)烯基代表含有2-5个碳原子和一个或多个双键的不饱和直链或支链烃链，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基和1，3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-2-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、1，1-二甲基-2-丙烯基和1，2-二甲基-1-丙烯基。
按照本说明书，只要从化学观点看适合，基团(C1-C3)烷基、(C1-C5)烷基和(C2-C5)烯基可任选被取代。
术语(3-6)Cy代表3-6元的部分不饱和或饱和碳环基团。如上所述，其可任选被一个或多个取代基取代，可将取代基置于该环的任何可用的位置。(3-6)Cy的实例包括但不限于如下基团：环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、1-环丁烯、2-环丁烯、1-环戊烯、2-环戊烯、1-环己烯、2-环己烯和3-环己烯。
术语(5-6)Hetcy代表含有1个或2个独立选自O、S和N的杂原子的部分不饱和或饱和C-或N-基团的5-6元碳环，其可按照本说明书在环上任何可用的位置被取代。(5-6)Hetcy的实例包括但不限于以下基团：二氢呋喃、吡咯啉、吡唑啉、咪唑啉、异噻唑烷、异噁唑烷、噁唑烷、吡唑烷、吡咯烷、噻唑烷、二噁烷、吗啉、哌嗪、哌啶、吡喃、四氢吡喃、噁嗪、噁唑啉、吡咯啉、噻唑啉、吡唑啉、咪唑啉、异噁唑啉和异噻唑啉。
术语(5-6)Hetar和(5-10)Hetar分别代表C-或N-基团的芳族5元或6元和5-10元环；其含有1-4个独立选自O、S和N的杂原子，其可按照本说明书在环上任何可用的位置被取代。(5-6)Hetar的实例包括但不限于以下基团：吡咯、呋喃、噻吩(tiophene)、咪唑、异噁唑、异噻唑、噁唑、1，2，4-噁二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-噁二唑、1，3，4-噻二唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、吡啶、嘧啶、哒嗪和吡嗪。(5-10)Hetar的实例还包括但不限于以下基团：苯并咪唑、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻吩、咪唑并吡嗪、咪唑并哒嗪、咪唑并吡啶、咪唑并嘧啶、吲唑、吲哚、异吲哚、异喹啉、吡唑并吡嗪、吡唑并吡啶、吡唑并嘧啶、嘌呤、喹唑啉、喹啉和喹喔啉。
表述“任选被一个或多个取代基取代”意即基团可不被取代，或被一个或多个、优选被1、2、3或4个取代基取代，附带条件为该基团具有1、2、3或4个易于被取代的位置。
在整个本说明书和附加权利要求中的措辞“包含”和该措辞的变体例如“包括”并非意欲排除其他添加剂、成分、元素或步骤。
本文所用术语“治疗”包括这样的病症的治疗、预防和控制。本文所用术语“药学上可接受的”，是指在合理医疗判断范围内适于与人类和动物的组织接触、没有过多的毒性、刺激、变态反应或其他问题或并发症、且具有相称的合理利益/风险比率的那些化合物、组合物和/或剂型。
在本发明的一个特别的实施方案中，R1代表(C1-C5)烷基、-(CH2)1-3-CONRaRb、-(CH2)0-3-(3-6)Cy；-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy；-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)或-(CH2)1-3-(2-萘基)，它们中的所有都任选被取代。
在本发明的一个特别的实施方案中，R1代表-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)或-(CH2)1-3-(2-萘基)，它们中的所有都任选被取代。
在另一实施方案中，R1代表任选被一个或多个选自卤素的取代基取代的-(CH2)2-苯基。在另一实施方案中，R1代表2，4-二氯苯基。
在另一实施方案中，R2代表任选被取代的-(CH2)1-3-芳基或任选被取代的-(CH2)2-CH(Ph)2，附带条件为R2不代表2-(4-氟苯基)乙基-。在另一实施方案中，R2代表3，3-二苯基丙基，附带条件为R2不代表2-(4-氟苯基)乙基-。
在另一实施方案中，R3代表任选被取代的-(CH2)1-3-(5-6)Hetar或任选被取代的-(CH2)2-苯基。在另一实施方案中，R3代表任选被一个或多个选自卤素的取代基取代的-(CH2)2-苯基。在另一实施方案中，R3代表2，4-二氯苯基。
在另一实施方案中，R2代表3，3-二苯基丙基，R1和R3二者都代表2，4-二氯苯基。
本发明另一实施方案涉及一种为药物结合物的化合物，所述药物结合物包含如前所述的与聚谷氨酸聚合物结合的式II化合物，其中所述聚合物具有20-60kDa的分子量。
本发明另一实施方案涉及为聚合物-药物结合物的式III化合物，
Figure A200680051639D00111
其中R1、R2、R3和R4具有在通式II中所述含义，y与x的比例按重量算为25-30％到75-70％。
在另一实施方案中，式III化合物中的n代表0。在另一实施方案中，n代表2，R4代表甘氨酸侧链。在另一实施方案中，n代表3，R4代表甘氨酸侧链、精氨酸侧链和苯丙氨酸侧链。在另一实施方案中，n代表3，R4代表缬氨酸侧链、精氨酸侧链和苯丙氨酸侧链。
在所述药物结合物聚合物中，聚谷氨酸可为聚(L-谷氨酸)、聚(D-谷氨酸)或聚(DL-谷氨酸)。在本发明一个实施方案中，聚谷氨酸为聚(L-谷氨酸)。
此外，上述实施方案的所有可能组合也形成本发明的一部分。
式I的化合物包含至少一个手性中心。本发明包括式I的化合物的外消旋化合物和对映体，对映体即其中连接到R1的手性碳的构象为(S)的化合物和其中连接到R1的手性碳的构象为(R)的化合物，其如下所示。
Figure A200680051639D00121
式II化合物包含至少两个手性中心。本发明还包括式II的立体异构体混合物和分离的立体异构体二者。
本发明化合物可含有一个或多个碱性氮原子，因此，它们可与酸形成盐，这也构成了本发明的一部分。其中药学上可接受的盐的实例包括无机酸的加成盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、高氯酸、硫酸和磷酸，以及有机酸的加成盐，有机酸例如乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、扁桃酸、草酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸和马来酸。同样地，本发明化合物可含有一个或多个酸性质子，因此，它们可与碱形成盐，这也构成本发明的一部分，这些盐的实例包括与金属阳离子的盐，金属阳离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；或者，其可与有机碱或无机碱配位。其中可接受的有机碱包括二乙胺和三乙胺。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠。根据带电荷的官能团的数目和阳离子和阴离子的化合价可有不止一个阳离子或阴离子。
源自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括如下碱的盐：伯胺、仲胺和叔胺、包括天然存在的取代的胺在内的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N，N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
可使用的盐的类型没有限制，只要当将它们用于治疗目的时是药学上可接受的盐即可。通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物可合成盐。一般而言，通过使这些化合物的游离酸或碱形式与存于水或有机溶剂(例如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或)或二者的混合物中的化学计量量的合适碱或酸反应，可制备这样的盐。式I或式III化合物和他们的盐在某些物理性质上不同，但它们对于本发明目的是等价物。
某些本发明式I或式III化合物可以非溶剂化物以及溶剂化物形式例如水合物存在。本发明包括具有药物活性的所有上述这样的形式。
某些通式I的化合物可表现多晶现象，其包括本发明所有可能的多晶型和其混合物。通过在不同条件下结晶，或通过加热或熔融化合物接着逐步或快速冷却，可制备各种多晶型。通过固态NMR波谱学、IR光谱学、差示扫描量热法、粉末X射线衍射或其他这样的技术，可测定多晶型的存在。
本发明式I的化合物包含至少一个手性中心。此外，它们可具有另外的手性中心。本发明包括可能立体异构体中的每一个和其混合物，尤其是其外消旋混合物。通过任何常用方法，例如通过在固定手性相上色谱分离外消旋混合物，通过非对映异构体盐的分级结晶技术来拆分外消旋混合物、通过手性合成、通过酶拆分或通过生物转化，可制备单个对映体。可对任何手性合成中间体或对通式I产物实施该拆分。或者，通过用旋光纯原料或已知构象的试剂对映选择性合成，可得到通式I的化合物的任何对映体。
式I或式III化合物可以多种非对映异构体存在，可通过常规技术例如色谱或分级结晶来分离。某些本发明化合物可存在顺式/反式异构体。本发明包括各个几何异构体和其混合物。本发明包括所有异构体和其混合物(例如外消旋混合物)，无论其是通过合成还是通过将其物理混合得到。
本发明涉及用于制备上述新化合物、其衍生物、其类似物、其互变体形式、其立体异构体、其多晶型或其药学上可接受的盐和溶剂化物的方法。
用下述方法以及通过有机合成领域已知的其他方法可合成本发明化合物。优选的方法包括但不限于在所附流程中所示的通用方法。除非另外指出，否则基团R1、R2、R3、R4、n、x和y具有通式I、II和III中所述的含义。
用以下方法可得到式I的化合物：
方法A
Figure A200680051639D00151
根据方法A，在芴基甲氧羰基去保护后，用酰化剂V酰化固体支持体胺IV，其中X代表离去基团，例如卤素，Y代表-OH或卤素。当Y代表卤素(例如为氯乙酰氯)时，可在叔碱例如三乙胺存在下进行反应。当Y代表-OH(例如为溴乙酸)时，可在合适的偶联剂例如N，N’-二异丙基碳二亚胺存在下进行反应。在这两种情况中，反应都可在能够恰当溶胀树脂的惰性溶剂(例如N，N’-二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中和室温下或用微波照射实施，这些条件可缩短反应时间。然后，用叔胺作为碱来偶联胺VIa。通过加热例如在60℃或通过微波照射可实施反应。
用偶联剂例如N，N’-二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑组合，使羧酸VIII(其中PG代表保护基团例如烯丙基)与胺VII反应以产生酰胺IX。接下来，用碱和溶剂例如N，N’-二甲基甲酰胺或二甲亚砜通过Michael反应引入胺VIb，以得到中间体X。在用与中间体VII所述相同的方法重复酰化和胺化后，得到XI。用在作为溶剂的二氯甲烷中的PhSiH3和Pd(PPh3)4(Tetrahedron Lett 1999，40：2505-2508；Tetrahedron Lett 1997，38：7275-7278)或用在二噁烷中的KOH水溶液实施去保护，得到XII。采用用于固相肽键合程序的标准偶联试剂(例如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三-(吡咯烷-1-基)鏻和1-羟基苯并三唑的组合)通过酰胺形成来促使环化，该反应在叔碱例如N，N-二异丙基乙胺存在下实施。可用三氟乙酸、二氯甲烷和水的混合物从树脂释放最终化合物I。
得到式I的化合物的可供选择的策略涉及分别用式XIIIa和XIIIb的氨基酸使胺IV和X酰化(方法B)。
Figure A200680051639D00161
方法B
本领域技术人员将很明白，为得到式I的化合物，可能要将方法A的某些步骤和方法B的某些步骤结合。
起始伯胺VIa、VIb和VIc可市购，或可通过已知方法(March，Advanced Organic Chemistry，1991，John Wiley & Sons编)或用例如以下所示流程得到。
流程1
在例如在作为溶剂的四氢呋喃中的偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)和三苯基膦存在下，通过首先由醇和邻苯二甲酰亚胺钾的Mitsunobu反应并进一步用水合肼解离，可得到胺(Mitsunobu，J.Am.Chem.Soc.1972，94，679-680)。
通过以下所示的各种方法可合成N-取代的甘氨酸XIIIa和XIIIb，所述方法或者通过用还原剂例如NaBH4、NaBH3CN或NaBH(AcO)3用合适的醛使相应的甘氨酸还原胺化(流程2)，或者通过用合适的胺E-NH2对酯进行亲核取代(流程3)来实施。
流程2
Figure A200680051639D00172
流程3
用与上述类似的反应可得到式II化合物。
Figure A200680051639D00181
因此，为了得到式I相应的羧酸，也就是式Ia化合物，除了起始固体支持体(IVa)含有代替氨基的活性卤素原子外，采用与合成式I的化合物相同的次序(用方法A和/或B)。
用合成肽的标准反应也得到待键合到化合物Ia的肽XVI。因此，首先使固体支持体胺IV与受保护的赖氨酸(XIVa)反应，任选随后与另一受保护的氨基酸(XIVb)反应。偶联后除去保护基团。可重复该次序至多三次。
Figure A200680051639D00182
然后使羧酸Ia与胺XVI反应，去保护后得到化合物IIa。IIa和聚谷氨酸XVIIa(从相应的盐XVII得到)之间的酰胺偶联得到药物结合物III。
Figure A200680051639D00191
本发明化合物为apaf-1抑制剂。因此，它们用于治疗或预防与细胞凋亡过度有关的病症。
在成年人中，有丝分裂期后细胞例如神经细胞和心肌细胞很少更新。因此，其损伤可引起神经疾病和心脏疾病。在多种急性和慢性退化性疾病中，这些细胞经历程序化细胞死亡。同样地，在多种器官中，脓毒性休克、局部缺血和中毒可引起大量的细胞凋亡。感染可导致特定细胞类型(例如AIDS中的淋巴细胞，或幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染中的胃黏膜细胞)的高凋亡性代谢。细胞凋亡事件在缺血和器官移植中的保存-再灌注过程中也很重要。因此，这些疾病是治疗性抑制细胞死亡的候选病种。
与细胞凋亡有关的其他病症或疾病包括但不限于中风、创伤病、脑损伤、脊髓损伤、脑膜炎、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病、肯尼迪病、多发性硬化、朊病毒相关病(prion-related Diseases)以及其他急性或慢性心血管病、酒精相关病和秃头(allopecia)治疗。
因此，本发明涉及这些化合物在制备用于治疗或预防上述疾病或病症的药物中的用途。
本发明另一方面涉及对R2没有附带条件的式I的化合物或为如前述定义的聚合物-药物结合物的化合物在制备用于治疗或预防与细胞凋亡相关的疾病或病症的药物中的用途。
本发明另一方面涉及用于治疗或预防与抑制细胞凋亡相关的病症的方法，所述方法包括给予对R2没有附带条件的式I的化合物或为如前述定义的聚合物-药物结合物的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明另一方面涉及用于治疗或预防以下疾病的方法：中风、创伤病、脑损伤、脊髓损伤、脑膜炎、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病、肯尼迪病、多发性硬化、朊病毒相关病、心肌缺血以及其他急性或慢性心血管病、器官移植、酒精相关病和秃头治疗，所述方法包括给予对R2没有附带条件的式I的化合物或为如前述定义的聚合物-药物结合物的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含单剂量或多剂量的式I的化合物或为如前述定义的聚合物-药物结合物的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。给出下述赋形剂实例仅为了阐明，不能解释为限制本发明范围。
可以任何药物制剂形式给予本发明化合物。药物制剂将视活性化合物特性和其给药途径而定。可使用任何给药途径，例如口服给药、口腔含化给药、经肺给药、局部给药、胃肠外(包括皮下、肌肉内和静脉内)给药、透皮给药、经眼给药、吸入给药、鼻内给药、经耳给药、透过粘膜给药、植入给药或直肠给药。然而，优选口服给药、局部给药或胃肠外给药。
其中用于口服给药的固态组合物包括片剂、颗粒剂和硬胶囊，既可调配为即释制剂又可调配为缓释制剂。
或者，可将本发明化合物掺入口服液态制剂中，例如乳剂、溶液剂、分散剂、混悬液、糖浆剂、酏剂或呈明胶胶囊形式。它们可含有常用的惰性稀释剂，例如纯水、乙醇、山梨醇、丙三醇、聚乙二醇和丙二醇。辅助组分还可含有共辅料(coadjuvant)，例如湿润剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、缓冲剂、螯合剂和抗氧化剂。
用于胃肠外给药的注射剂包括在油性或水性溶媒中的无菌溶液剂、混悬液或乳剂，可含有共辅料，例如助悬剂、稳定剂、渗透压调节剂或分散剂。
还可将所述化合物调配用于其局部施用。制剂包括霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、洗发剂、口服糊剂、漱口剂和贴剂，其中该化合物分散于或溶解于合适的赋形剂中。
在本发明一个实施方案中，药物组合物呈纳米球、微米颗粒和纳米颗粒的形式。
活性组分的有效剂量可视给予的特定化合物、给药途径、待治疗疾病的性质和严重程度以及患者年龄、一般健康状况和体重等而变化。合适的剂量范围的代表性实例为每天约0.001-约100mg/Kg体重，其可以单剂量或分次剂量给予。然而，给予的剂量通常将由医生决定。
通过MTT分析测定毒性和细胞恢复
MTT分析测定细胞增殖以及当代谢事件导致细胞凋亡或坏死时细胞生存力的还原。其也可用于评估当特定细胞系在存在生物异源物质时温育时的存活率。公认四氮唑盐的还原为分析细胞增殖的可靠方法。用代谢活性细胞还原黄色四氮唑盐MTT(溴化3-(4，5-二甲基噻唑基-2)-2，5-二苯基四氮唑)，结果在细胞内形成紫色甲
Figure A200680051639D0022092824QIETU
，该物质用DMSO溶解后可采用分光光度测定。
本发明中使用MTT分析评估不同浓度化合物的毒性。为了分析对细胞生存力可能的损害，将化合物以不同浓度加入到Saos-2和U937细胞系，温育不同时间。结果以细胞生存力百分比来表示。
Figure A200680051639D00231
Figure A200680051639D00232
Figure A200680051639D00233
通过将化合物加入到诱导细胞凋亡的细胞系中，也采用MTT测定来评估细胞恢复。对于Saos-2细胞系，通过加入2μM多西环素(doxycyclin)来诱导细胞凋亡；
Figure A200680051639D0023092848QIETU
对于U937、HeLa、U2-OS，分别通过0.25μM、1.5μM、2μM多柔比星(doxorubicin)来诱导细胞凋亡。结果以％细胞生存力来表示，认为加入多西环素和多柔比星在Saos-2和HeLa、U2-OS或U937中分别诱导100％的细胞死亡和0％的细胞恢复率。
Figure A200680051639D00241
Figure A200680051639D00242
ND：未测定
胱天蛋白酶抑制分析
分析了由本发明所述化合物诱导的胱天蛋白酶抑制随时间的变化。细胞系在存在或不存在化合物(50μM)时生长不同时间。用Saos-2或U937细胞抽提物和作为底物的Ac-DEVD-afc(N-乙酰基-Asp-Glu-Val-Asp-afc(7-氨基-4-三氟甲基香豆素))(20μM)测定胱天蛋白酶活性。用Cytofluor 4000荧光计(激发波长400nm；发射波长508nm)通过释放的荧光afc来连续1小时监测胱天蛋白酶活性。该化合物对胱天蛋白酶活性的影响以处理细胞对未处理细胞(对照)的荧光信号的抑制百分比来表示。
Figure A200680051639D00251
Figure A200680051639D00252
ND：未测定
Figure A200680051639D00261
ND：未测定
Figure A200680051639D00262
Figure A200680051639D00263
Apaf-1-诱导的细胞凋亡的抑制
评估了所述化合物在凋亡机制中对于其特异性靶的活性。Apaf-1寡聚化为导致激发凋亡体形成的分子事件，其以诱导细胞凋亡结束。这些实验通过无细胞测定和细胞测定来进行。
对于无细胞测定，如前所述制备Hek-293细胞质抽提物(Malet等，2005)，将全部细胞抽提物分成多份(partition)。同时按Malet等，2005纯化重组Apaf-1。在不同浓度化合物存在下与重组Apaf-1一起温育FT部分(含有胱天蛋白酶-3和-9但不含Apaf-1)(参见图1)。通过胱天蛋白酶活性的抑制分析所述化合物活性(参见上文)。
对于细胞测定，用凋亡体激活剂处理Saos-2和U937细胞(Nguyen和Wells，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2003，100：7533-7538)，其特异性诱导Apaf-1寡聚化。然后，将化合物加入细胞中(50μM)，温育24或48小时。通过胱天蛋白酶活性的抑制分析所述化合物抑制Apaf-1诱导的细胞凋亡的能力(参见上文)。
Figure A200680051639D00271
IIa.1与Apaf-1 CARD域的结合：荧光偏振测定
用Victor2V 1420 Multilabel HTS Counter进行荧光偏振测定。用浓缩蛋白溶液滴定在缓冲液A中的60nM的5’-6’-羧基荧光素标记的IIa.1(称作CF-IIA.1；激发波长＝480nm；发射波长＝535nm)的溶液(总反应体积为200μl)。用Wallac 1420工作站软件记录数据。用两态模型计算Kd值(参见图2)。
为了初始表征拟肽和凋亡体的结合位点，我们合成了IIa.1的荧光类似物(CF-IIa.1)。CF-IIa.1结合到Apaf-1 CARD域而不是细胞色素c和其他控制蛋白(Malet等，2005)，且采用荧光偏振测定测定60nM下的解离常数(Kd)(图2)。然而，结合常数值与在我们的测定中抑制50％胱天蛋白酶活性所需要的IIa.1浓度形成对照(IC50≈30μM，图1)。使这些数据一致的假定解释为用于体外翻译胱天蛋白酶原-9的网状细胞溶解产物含有降低IIa.1有效浓度的成分。
实施例
在实施例中使用以下缩写词：
Boc：叔丁氧基羰基
DCM：二氯甲烷
DIC：N，N’-二异丙基碳二亚胺
DIPEA：二异丙基乙胺
DMF：N，N′-二甲基甲酰胺
eq：摩尔当量
EtOAc：乙酸乙酯
Fmoc：芴基甲氧羰基
甘氨酸：G
HATU：六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓
HOBT：1-羟基苯并三唑
赖氨酸：K
PGA：聚(L-谷氨酸)
苯丙氨酸：F
PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三-(吡咯烷-1-基)鏻
R：精氨酸
rt：保留时间
TFA：三氟乙酸
缬氨酸：V
本发明将进一步由以下实施例来阐明。给出实施例仅为了阐明，不能认为对本发明范围加以限制。
聚苯乙烯AM RAM树脂(0.75mmol/g)购自Rapp Polymere GmbH(德国)。2-氯三苯甲基氯树脂(1.4mmol/g)购自Novabiochem。在Waters(Milford，马萨诸塞州，美国)系统中用X-Terra C18(19×25cm，5μm)柱进行半制备RP-HPLC；洗脱液：A＝0.1％ TFA/水，B＝0.1％TFA/乙腈，梯度：0分钟20％B-20分钟0％B。高分辨率质谱(HRMS-FAB)已登记在Santiago de Compostela大学的质谱中心(西班牙)。
中间体VIII
VIII：(Z)-丁-2-烯二酸单烯丙酯
向2g马来酐(20mmol)在氯仿中的溶液中加入1.8ml烯丙醇(26mmol，1.3eq.)。于60℃在微波照射下将反应混合物搅拌50分钟。用1N HCl处理得到的溶液，用氯仿萃取。用盐水洗涤有机萃取物，然后经无水硫酸镁干燥并过滤。减压下蒸发溶剂，通过色谱柱纯化得到的残留物，得到油状中间体VIII(纯度为95％，产率85％)。
式I的化合物
I.1：N-{氨基甲酰基甲基-[2-(2，4-二氯苯基)-乙基]}-1-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-4-(3，3-二苯基丙基)-3，7-二氧代[1，4]-二氮杂环庚烷-5-甲酰胺
用3mL 20％哌啶/DMF处理Rink酰胺树脂(500mg，0.4mmol)，于60℃在微波反应器中将该混合物搅拌2分钟。过滤树脂，用DMF(3x3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。用溴乙酸(V，275mg，5eq.)和DIC(306μL，5eq.)的DMF(3mL)溶液处理树脂。于60℃在微波反应器中将该反应混合物搅拌2分钟。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。将2，4-二氯苯乙胺(VIa，300μL，5eq.)和三乙胺(275μL，5eq.)的DMF(3mL)溶液加入到树脂中，于90℃在微波活化下将悬浮液搅拌2分钟。除去上清液，排出残留物，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。然后，用(Z)-丁-2-烯二酸单烯丙酯(VIII，310mg，5eq.)、HOBT(267mg，5eq.)和DIC(306μL，5eq.)的DCM：DMF(2:1，3mL)溶液处理树脂。于室温将反应混合物搅拌30分钟，过滤，在同样条件下重复该反应。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。然后，将3，3-二苯基丙基胺(VIb，418mg，5eq.)和三乙胺(275μL，5eq.)的DMF(3mL)溶液加入到树脂中，于室温将该悬浮液搅拌3小时。在同样的温度下重复该反应过夜。除去上清液，排出残留物，用DMF(3x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。然后，用溴乙酸(V，275mg，5eq.)和DIC(306μL，5eq.)的DMF(3mL)溶液处理树脂。于60℃在微波反应器中将该反应混合物搅拌2分钟。排出树脂，用DCM(3x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。将2，4-二氯苯乙胺(VIc，200μL，5eq.)和三乙胺(210μL，5eq.)的DMF(3mL)溶液加入到树脂中，于90℃在微波活化下将悬浮液搅拌2分钟。除去上清液，排出树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。然后，于室温下在氩气中用在无水DCM中的四(三苯基膦)合钯(0)(46mg，0.1eq.)和苯基硅烷(490μL，10eq.)处理树脂15分钟。将该过程重复三次(by triplicate)。除去上清液，排出树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。通过用在DMF(3mL)中的PyBOP(308mg，1.5eq.)、HOBT(80mg，1.5eq.)和DIPEA(203μL，3eq.)处理来促进环化。在室温下将该反应混合物搅拌16小时并过滤。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。最后，用60:40:2的TFA/DCM/水混合物处理树脂，释放含有标题化合物I.1的粗反应混合物，将其过滤。通过减压蒸发、冻干除去滤液中的溶剂。通过半制备RP-HPLC用乙腈水溶液梯度洗脱(42％乙腈→80％乙腈，35分钟)来纯化得到的残留物，得到91mg所需产物(产率30％，纯度≥98％)。
HRMS(M+H)+：C39H38Cl4N4O4的计算值为767.1647；实测值为767.1720。
按照实施例I.1所阐述的类似程序但用不同的胺，得到以下产物：
Figure A200680051639D00301
Figure A200680051639D00311
中间体Ia
Ia：{[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-[1-[2-(2，4-二氯苯基)乙基]-4-(3，3-双-苯基丙基)-3，7-二氧代[1，4]二氮杂环庚烷-5-羰基]氨基}乙酸
用氯乙酸(V，463mg，5eq.)和DIPEA(840μL，5eq.)的DCM(4mL)溶液处理2-氯三苯甲基氯树脂(IVa，700mg，0.98mmol)。在室温下将该混合物搅拌1小时，用甲醇(550μL)猝灭该反应，再搅拌10分钟。除去上清液，排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。将2，4-二氯苯乙胺(VIa，740μL，5eq.)和DIPEA(840μL，5eq.)的DMF(4mL)溶液加入到树脂中，在室温下将该悬浮液搅拌3小时。除去上清液，排出树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。然后，用(Z)-丁-2-烯二酸单烯丙酯(VIII)(765mg，5eq.)、HOBT(662mg，5eq.)和DIC(760μL，5eq.)的2:1的DCM:DMF(4mL)溶液处理树脂。在室温下将该反应混合物搅拌30分钟，过滤，在同样条件下重复。然后，将3，3-二苯基丙基胺(VIb，1.0g，5eq.)和DIPEA(840μL，5eq.)的DMF(4mL)溶液加入到树脂中，室温下将该悬浮液搅拌3小时。在同样温度下再重复搅拌该反应物16小时。除去上清液，排出树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x3mL)洗涤。然后，用氯乙酸(V，463mg，5eq.)和DIC(760μL，5eq.)的2:1的DCM:DMF(4mL)溶液处理树脂。室温下将反应混合物搅拌30分钟。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。将2，4-二氯苯乙胺(VIc，740μL，5eq.)和DIPEA(840μL，5eq.)的DMF(4mL)溶液加入到树脂中，在室温将该悬浮液搅拌3小时。除去上清液，排出树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。然后，用在无水DCM中的四(三苯基膦)合钯(O)(114mg，0.1eq.)和苯基硅烷(1.2mL，10eq.)于室温下在氩气中处理树脂15分钟。重复三次该合成步骤。除去上清液，排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。用在DMF(4mL)中的PyBOP(765mg，1.5eq.)、HOBT(199mg，1.5eq.)和DIPEA(505μL，3eq.)处理来促进环化。在室温下将该混合物搅拌48小时并过滤。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。最后，用5:95的TFA/DCM混合物处理树脂，释放粗反应混合物，过滤。减压除去滤液的溶剂、冻干，得到无色固体状的化合物Ia(460mg，产率61％，纯度≥55％)。
中间体IIa
用3mL 20％哌啶/DMF使Rink酰胺树脂(IV，505mg，0.4mmol)去保护。在微波反应器中于60℃将该混合物搅拌2分钟。过滤树脂，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤。用HOBT(108mg，2eq.)和DIC(125μL，2eq.)将Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(XIVa，2eq)连接到树脂。于室温下将混合物搅拌1小时。排出树脂，用DCM(3x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。一旦用3mL 20％哌啶/DMF除去Fmoc基团(30分钟)，用DMF(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DCM(3 x 3mL)洗涤树脂。若需要，在如上所述同样条件下偶联另一个氨基酸(XIVb)，得到中间体XVI。
在HATU(228mg，1.5eq.)和DIPEA(205μL，3eq.)的DMF(3mL)溶液存在下，将酸Ia(460mg，1.5eq.)加入到溶胀在DMF中的中间体XVI中。于室温下将该反应混合物搅拌16小时并过滤。排出树脂，用DCM(3 x 3mL)、异丙醇(3 x 3mL)和DMF(3 x 3mL)洗涤。用80:20:2.5:2.5的TFA/DCM/水/三异丙基硅烷混合物处理树脂，释放出含有化合物IIa的粗反应混合物，过滤。减压除去滤液的溶剂、冻干。通过半制备RP-HPLC用水-乙腈混合物梯度洗脱来纯化得到的残留物。
Figure A200680051639D00331
Figure A200680051639D00341
式III化合物
III.1：PGA-IIa.1
向分子量(Mw)介于17000-43000 Da的PGA钠盐(XVII，0.1g，0.5mmol)的水溶液中加入0.2M HCl，直到将该溶液的pH调整到2.0。收集沉淀物，用水渗析析并冻干。然后，将呈其质子形式(protinic form)的PGA(XVIIa)溶解于无水DMF(7.5mL)中，加入DIC(3eq)和HOBt(3eq)，搅拌15分钟。然后，加入中间体IIa.1(0.052mmol(12mol％)1eq)，用DIPEA(1.5mL)将pH调整到8。让反应在室温继续进行36小时。薄层色谱(TLC，硅胶)显示IIa.1(Rf＝0.5)完全转化为聚合物结合物(Rf＝0，MeOH:H2O:AcOH＝85:10:5)。为了停止该反应，将混合物倒入CHCl3中。收集得到的沉淀物并真空干燥。通过将该产物溶于1.0M NaHCO3，得到PGA-拟肽结合物III.1的钠盐。用蒸馏水渗析该水溶液(MWCO 6,000-8000 Da)。冻干渗析液得到白色粉末产物。按照UV(λ＝282nm)所测定聚合物中总拟肽含量介于25-30％(w/w)(10-12mol％功能化(functionalization))，游离药物含量<1％重量总药物。
通过尺寸排阻色谱(SEC)和分析用超速离心机(AUC)分析了溶液中III.1和对照XVII的分子量(Mw)的平均值、多分散性(Mw/Mn)和特性。两种技术都显示III.1比XVII(III.1的tr＝12.5分钟，S＝3.5±0.4秒，而XVII的tr＝11.6分钟，S＝1.9±0.1秒)作为更紧凑的构象结构具有更小的流体力学体积和更大的沉降系数(S)。通过沉降平衡测得XVII的Mw为26700 Da，III.1的Mw为58600 Da，然而，通过GPC用PEG标准物测定XVII和III.1的Mw分别为36000 Da(Mw/Mn＝1.8)和38000Da(Mw/Mn＝1.5)。
通过UV光谱法测定总药物含量
制备IIa的MeOH储液(1mg/mL)。为得到校准曲线，用MeOH稀释样品，以得到0-1mg/mL的浓度范围。通过测定在H2O中于272nm和281nm处的光密度，来测定结合物中的药物总负载。用在H2O中与所分析的III结合物同样浓度范围(0-5mg/mL)的PGA作空白。发现在室温下在MeOH中的IIa在281nm处的消光系数
Figure A200680051639D0035133037QIETU
通过HPLC测定游离药物含量
制备III.1水溶液(1mg/mL)，将等份试样(100μL)加入到聚丙烯试管中，用水补足到1mL。用甲酸铵缓冲液(100μL，1M，pH 8.5)将样品pH调整到8，然后，加入CHCl3(5mL)。然后，通过漩涡振荡(3 x 10秒)充分萃取样品。仔细除去上面水层，在N2下蒸发溶剂。将干残留物溶解于200μL HPLC级乙腈中。平行对母体化合物IIa.1(用200μL 1mg/mL含水储液)实施同样过程。加入1mL乙腈重新溶解产物，得到200μg/mL储液，由此制备各种浓度范围(2-100μg/mL)。通过HPLC用
Figure A200680051639D00361
 C18(150 x 3.9mm)柱测定结合物中游离药物的含量。用0.1％ TFA水溶液/乙腈梯度洗脱(20分钟内20-100％乙腈)，流速1mL/分钟。IIa.1保留时间tr＝14.3分钟(λ＝220nm)。
按照与III.1的这些程序，得到以下实施例：
a通过尺寸排阻色谱(SEC)测定
附图说明
图1：在不同浓度化合物IIa.1存在下，用Hek-293 FT细胞质部分与重组Apaf-1温育，无细胞胱天蛋白酶的抑制测定。
图2：分析CARD/IIa.1的相互作用。用浓度依次升高的CARD-Apaf滴定240nM的CF-IIa.1/PBS缓冲液溶液，在30℃测定荧光偏振。以毫偏振(mP)为单位记录数据(平均s.d.；n＝3)。

Claims (13)

1.一种通式I的化合物、其立体异构体和其混合物、其多晶型和其混合物和其药学上可接受的溶剂化物和加成盐，
Figure A200680051639C00021
其中：
R1代表(C1-C5)烷基、(C2-C5)烯基、-(CH2)1-3-NHCO-(C1-C3)烷基、-(CH2)1-3-COMRaRb、-(CH2)0-3-(3-6)Cy、-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)2-CH(苯基)2、-(CH2)2-CH(苯基)[(5-6)Hetar]或-(CH2)2-CH[(5-6)Hetar]2；
R2代表-(CH2)0-3-(3-6)Cy、-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)2-CH(苯基)2、-(CH2)2-CH(苯基)[(5-6)Hetar]或-(CH2)2-CH[(5-6)Hetar]2；
R3代表-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)或-(CH2)1-3-(5-6)Hetar；
(C1-C5)烷基和-(C2-C5)烯基可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：-O-(C1-C2)烷基、-S-(C1-C2)烷基、-NH2、-NH-(C1-C2)烷基和-N[(C1-C2)烷基]2；
(C1-C3)烷基可任选被一个或多个卤素原子取代；
Ra和Rb独立代表-H或-(C1-C3)烷基；
(3-6)Cy代表3-6元的部分不饱和或饱和碳环基团；
(5-6)Hetcy代表C-或N-基团的5或6元环，其为含有一个或两个独立选自O、S和N的杂原子的部分不饱和或饱和碳环；
Cy和Hetcy可任选被一个或多个选自卤素、-CF3和-OH的取代基取代；
(5-6)Hetar和(5-10)Hetar分别代表C-或N-基团的芳族5元或6元和5-10元环；其含有1-4个独立选自O、S和N的杂原子；
苯基、1-萘基、2-萘基、(5-6)Hetar和(5-10)Hetar可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-CF3、-OH、-O-(C1-C3)烷基、-CO-(C1-C3)烷基、-(C1-C5)烷基-NRaRb、-NRaRb和-SO2NH2；
附带条件为R2不代表2-(4-氟苯基)乙基。
2.权利要求1的化合物，其中R1代表-(CH2)0-3-(5-6)Hetcy、-(CH2)1-3-(5-10)Hetar、-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)或-(CH2)1-3-(2-萘基)，它们中的所有都任选被取代。
3.权利要求1或2的化合物，其中R2代表-(CH2)1-3-苯基、-(CH2)1-3-(1-萘基)、-(CH2)1-3-(2-萘基)或-(CH2)2-CH(苯基)2，它们中的所有都任选被取代，附带条件为R2不代表2-(4-氟苯基)乙基。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R3代表-(CH2)1-3-(5-6)Hetar或-(CH2)2-苯基，二者都任选被取代。
5.一种化合物，所述化合物为包含与聚谷氨酸聚合物结合的式II基团、其立体异构体和其混合物和其药学上可接受的溶剂化物和加成盐的药物结合物，
Figure A200680051639C00031
其中R1、R2和R3具有如权利要求1所定义的含义，但对R2没有附带条件；每一R4独立代表得自20种天然存在的氨基酸的任一种的侧链，n为0、1、2或3。
6.一种式III化合物，所述化合物为根据权利要求2的药物结合物
Figure A200680051639C00041
其中y与x的比例按重量算为25-30％到75-70％。
7.权利要求5或6的化合物，其中所述聚谷氨酸为聚(L-谷氨酸)；n代表2，R4代表甘氨酸侧链。
8.对R2没有附带条件的权利要求1所定义的化合物或权利要求5所定义的化合物在制备用于治疗或预防与抑制细胞凋亡相关的病症的药物中的用途。
9.权利要求8的用途，其中所述病症选自中风、创伤病、脑损伤、脊髓损伤、脑膜炎、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病、肯尼迪病、多发性硬化、朊病毒相关病、心肌缺血以及其他急性或慢性心血管病、器官移植、酒精相关病或秃头治疗。
10.一种用于治疗或预防与抑制细胞凋亡相关的病症的方法，所述方法包括给予对R2没有附带条件的权利要求1所定义的式I的化合物或权利要求5所定义的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
11.权利要求10的方法，其中所述病症选自中风、创伤病、脑损伤、脊髓损伤、脑膜炎、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病、肯尼迪病、多发性硬化、朊病毒相关病、心肌缺血以及其他急性或慢性心血管病、器官移植、酒精相关病或秃头治疗。
12.一种药物组合物，所述组合物包含有效量的权利要求1所定义的式I的化合物或权利要求5所定义的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
13.权利要求12的药物组合物，所述组合物呈纳米球、微米颗粒和纳米颗粒形式。
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